氯化甲基汞对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响

本文用Hewish和Burgoyne法分离纯化大鼠脑细胞核,采用脑细胞核缺口翻译分析法,探讨孕鼠于妊娠器官发生期,经腹腔连续给予5天氯化甲基汞(2mg/kg体重)后,对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响。实验结果表明,接触氯化甲基汞组大鼠脑细胞核,分别经DNase 1和EcoR 1核酸内切酶消解后,进行核缺口翻译测定,生后3天大鼠脑细胞核,分别经两种酶处理后,其~3H—dAMP掺入量均明显低于相应未接触氯化甲基汞对照组。氯化甲基汞对大鼠发育过程中脑染色质结构的影响,可能与胎、幼鼠对甲基汞神经毒性的易感有密切关系。     

长期接触氯化甲基汞对大鼠不同发育阶段仔鼠海马NMDA受体2A亚单位表达的影响

目的：探讨氯化甲基汞(MMC)对不同发育阶段大鼠幼仔海马组织N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2A亚基(NR2A)表达的影响。方法：体重为(120±20)g雌性大鼠随机分为对照组和实验组,连续90 d每天分别进食含不同剂量MMC(0.75、1.50和3.0 mg•kg^-1)的饲料后,取其生后7、14、21和28 d的仔鼠海马组织提取NR2A蛋白,采用Western blotting法观察MMC对不同发育阶段大鼠幼仔海马组织NR2A表达的影响。 结果：对照组和实验组各发育阶段仔鼠海马组织都有NR2A的表达,生后14 d达到高峰。实验组大鼠幼仔在生后7、14、21和28 d海马组织NR2A表达与对照组相比均有不同程度的减少。结论：NMDA受体参与中枢神经系统发育的调节;甲基汞所致发育阶段脑损伤可能与其引起NMDA受体表达降低有关。     

氯化甲基汞对发育阶段大鼠小脑转录因子CREB DNA结合活性的影响

目的 :探讨氯化甲基汞 ( MMC)对发育大鼠小脑组织转录因子 CREB DNA结合活性的影响。方法 :将妊娠大鼠于妊娠 7～ 1 0 d连续 4d每日灌胃给予氯化甲基汞 4mg· kg-1,取生后 1、3、7、1 4d大鼠小脑组织提取核蛋白。采用凝胶移位法观察 MMC对发育阶段大鼠小脑转录因子CREB DNA结合活性的影响。结果 :对照组和实验组各发育阶段小脑组织 CREB在凝胶移位电泳中均呈现两条迟滞带 ;对照组和实验组 P1 - 7大鼠幼仔小脑 CREB DNA结合活性随生后发育时间延长呈下降趋势 ;实验组大鼠幼仔小脑 CREB DNA结合活性均高于相应对照组。结论 :CREB参与大鼠脑发育的调节 ;甲基汞所致发育脑组织损伤可能与其引起 CREB DNA结合活性升高有关。     

锌对甲基汞染毒大鼠肝、脑金属硫蛋白含量和超微结构的影响

目的 观察锌对甲基汞染毒大鼠肝、脑中金属硫蛋白含量和细胞超微结构的影响.方法 将大鼠随机分为硫酸锌＋甲基汞实验组、甲基汞染毒组和空白组,取大鼠部分肝、脑分别测定金属硫蛋白（MT）含量,并做细胞超微结构观察.结果 锌能增强甲基汞染毒大鼠肝、脑中金属硫蛋白含量;超微结构观察甲基汞实验组肝、脑细胞出现细胞间隙增宽,细胞质中线粒体致密、核糖体增多、内质网肿胀、有空泡化、染色质聚集等现象,而硫酸锌＋甲基汞实验组肝、脑细胞与对照组相比无明显差异.结论 锌能有效抑制甲基汞对细胞造成的损伤.     

抗衰延寿方对青,老年大鼠肝细胞核转录活性的影响

本文研究抗衰延寿方对青、老年大鼠肝细胞核转录活性、染色质DNaseI消化敏感性及染色质化学组分的影响。结果证明:青年大鼠肝细胞核染色质DNaseI消化敏感性和肝细胞核非组蛋白染色体蛋白含量均明显的高于老年大鼠(P<0.01)。青年大鼠转录活性高于老年大鼠9.7％。服用抗衰延寿方后,青、老年大鼠肝细胞核转录活性、肝细胞核染色质DNasI消化敏感性均明显提高,而非组蛋白染色体蛋白含量无改变。     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

甲基汞对大鼠生长发育的影响及脂质过氧化作用的研究

目的 :通过对SD大鼠进行腹腔注射氯化甲基汞的暴露方式 ,研究亚急性条件下氯化甲基汞对大鼠生长发育的影响和对大鼠脑组织造成的氧化损伤。方法 :将SD大鼠暴露于不同剂量甲基汞下 ,暴露时间 7天 ,记录大鼠的体重变化情况。 7天后处死 ,测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -px)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛 (MDA)含量。结果 :各指标在暴露组与对照组均表现出极显著的差异 (P <0 0 1 )。大鼠的体重呈现不同的变化趋势 ,其中暴露组体重明显受到抑制。结论 :大鼠暴露 7天后产生了明显的脂质过氧化 ,表明自由基尤其是活性氧自由基(ROS)在体内有过量积累。ROS的过量产生会降低脑中神经生长因子 (NGF)的水平 ,从而抑制大鼠的生长发育。     

母鼠长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸氧化应激状态及生精细胞凋亡的影响

目的 探讨氯化锰长期低剂量染毒对子代大鼠睾丸中氧化应激状态及生精细胞凋亡的影响。方法 健康雌性SD 大鼠32 只随机分为对照组,低、中、高剂量组,每组8 只。锰染毒组分别腹腔注射2、4 和8 mg/kg MnCl2·4H2O,对照组腹腔注射等容生理盐水,1 次/d,5 d/ 周,共8 周。与正常雄性SD 大鼠交配受孕后,雌 鼠在妊娠期和哺乳期继续染毒。每组随机取8 只12 周龄子代雄性大鼠断头处死后取材,HE 染色观察睾丸生精小 管结构;qRT-PCR、免疫组织化学、Western blot 分别检测叉头蛋白转录因子O 3a（FoxO3a）、与Bcl-2 相互作 用的细胞死亡调节子（Bim）、半胱天冬酶9（Caspase-9）mRNA 和蛋白的表达;TUNEL 技术检测生精细胞凋 亡。结果 ① HE 染色可见各锰染毒组睾丸生精小管呈现不同程度的形态学改变。随着锰染毒剂量的增加,生精 细胞层数逐渐减少,各级生精细胞排列紊乱、数量减少或缺如,管腔内成熟的精子数目减少;②中、高剂量组 精子密度、精子活动率降低,而精子畸形率上升（P <0.05）;③各锰染毒组大鼠睾丸组织内超氧化物歧化酶 （SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性随锰染毒剂量的增加而降低（P <0.05）; 而睾丸组织内丙二醛（MDA）含量和活性氧（ROS）水平随锰染毒剂量的增加逐渐升高（P <0.05）;④在 mRNA 和蛋白水平,FoxO3a 的表达随锰染毒剂量的增加逐渐上升（P <0.05）;低剂量组Bim mRNA 表达量 未见变化,但在中、高剂量组则降低,而细胞死亡调节因子表达量则随锰染毒剂量的增加逐渐增加（P <0.05）; ⑤ Caspase-9 mRNA 和蛋白表达量在各锰染毒组均升高,且随锰染毒剂量的增加逐渐增加（P <0.05）;⑥各 锰染毒组大鼠均可见生精细胞凋亡,其凋亡指数高于对照组,且随锰染毒剂量的增加而上升（P <0.05）。结论 长期低剂量锰染毒可抑制子代大鼠睾丸内抗氧化酶活性或（和）增加MDA 含量,提高睾丸组织ROS 水平,促 进FoxO3a 和Bim 表达,启动Caspase-9 信号通路,最终导致子代大鼠生精细胞的凋亡。     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

β-七叶皂甙钠对实验性大鼠胰性脑病的治疗

目的:研究β-七叶皂甙钠在大鼠实验型胰性脑病中对脑组织的作用,为胰性脑病的临床治疗提供实验依据.方法:将60只大鼠经颈内动脉注入磷脂酶A2(Phospholipases A2,PLA2)(1000u/100g,1000u/0.1mL)后复制成大鼠胰性脑病模型(n=60).随机分为A(对照)组(n=30)和B(治疗)组(n=30).治疗组腹腔注射β-七叶皂甙钠(1mg/100g)1次/d.分别于造模后1d,3d,7d随机处死对照组及治疗组大鼠各10只.检测脑组织含水量,大鼠脑组织匀浆后,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF- α)、白介素10(IL - 10)的含量,观察脑组织光镜下病理损害表现.结果:治疗组大鼠脑组织较对照组大鼠脑组织含水量减少;大鼠脑组织匀浆TNF -α的含量降低(P＜0.05)、IL - 10的含量升高(P＜0.05);脑组织光镜下脱髓鞘病理损害减轻.结论:在大鼠实验型胰性脑病模型中β-七叶皂甙钠有明显减轻脑组织炎症性反应作用.     

早期惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元Cx36 mRNA表达的远期影响

目的　探讨早期惊厥样放电对发育中大鼠皮层神经元缝隙连接蛋白Cx36mRNA表达的远期影响。方法　以原代培养的大鼠大脑皮层神经元无镁诱导的反复惊厥样放电为模型 ,根据对培养 6d皮层神经元的不同处理分为三组 :正常DMEM培养液组 (CONT1)、正常细胞外液组 (CONT2 )和无镁细胞外液组 (MGF)。神经元分别在上述三种液体中孵育 3h ,然后恢复正常DMEM培养液继续培养 ,在培养 7,12及 17d时测定了发育中大鼠皮层神经元早期惊厥样放电后不同时间Cx36mRNA表达。结果　分别与CONT1和CONT2组相比较 ,MGF组Cx36mRNA表达在培养 7d时无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,培养 12d时明显升高 ,17d时明显降低 (P <0 .0 5 )。结论　早期惊厥样放电可能导致发育中大鼠皮层神经元Cx36mRNA表达的远期影响     

氯化甲基汞对不同发育阶段大鼠脑组织c-Jun表达的影响

目的 :探讨氯化甲基汞 (MMC)对发育脑组织损伤的机理。方法 :将 Wistar系妊娠大鼠于妊娠 7～ 1 0 d连续灌胃给予 MMC 4mg/kg,取 P1 (postnatal day 1 ) ,3,5,7,1 0 ,1 5仔鼠脑组织制备常规组织切片 ,采用免疫组织化学法检测 c- Jun表达。结果 :对照组发育阶段仔鼠大、小脑有c- Jun表达。随着出生后时间延长 ,大、小脑c- Jun阳性细胞数下降 ,并且 c- Jun阳性细胞具有典型凋亡形态。实验组 c- Jun表达有高于对照组的趋势 ,其中 P7,1 0 ,1 5小脑中 c- Jun表达明显高于对照组 (P<0 .0 5)。结论 :c- Jun参与了脑细胞发育中正常的凋亡过程。MMC诱导大鼠脑发育中神经细胞凋亡 ,可能是通过 c- Jun表达实现的。     

实验性汞中毒小脑变性的病理观察

目的: 探讨氯化甲基汞(MMC)中毒大鼠小脑变性的病理改变及机制.方法:本研究在大鼠服用MMC 4 mg/(kg·d)所致的亚急性汞中毒模型上,分别在服用MMC后第11、15、18和21天断头,采用组织和免疫病理技术动态观察小脑的病理演变,并采用TUNEL染色观察细胞凋亡改变,同时在电镜下观察了超微结构改变.结果:在服用MMC第18天,TUNEL染色显示小脑颗粒细胞有散在的凋亡细胞,主要位于脑回深部近白质区的颗粒层.第21天,凋亡细胞明显增加,颗粒细胞减少.MRF-1染色可见大量的小胶质细胞反应,GFAP示胶质细胞增生明显,而Purkinje细胞则保留完整.服用MMC第18天的超微结构观察表明,细胞核皱缩,体积缩小,形态不规则,电子密度增高,可见密集深染的染色质,部分细胞核破碎,呈现为均一深染的泪珠状染色质,符合凋亡改变.结论:本研究结果表明汞中毒的小脑变性的病理机制为细胞凋亡,其病理变化符合人类汞中毒表现.     

补锌对微波辐照大鼠脑组织氧化损伤的影响

目的:探讨锌对微波辐照大鼠脑组织氧化损伤的影响. 方法:40只成年雄性SD大鼠,随机分成4组,对照组(1)、辐照组(2)、补锌组(3)和补锌 辐照组(4),每组10只. 补锌组饮用含锌(0.222 g/L)水3 wk,其他组饮用去离子水. 第15日以功率为30 mW/cm2的微波开始辐照,1 h/d,持续1 wk. 结果:辐照组脑组织中丙二醛(MDA)含量增加,但无统计学意义,补锌组、补锌 辐照组MDA含量与对照组比显著增加(P＜0.05). 脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性各组间没有显著性变化(P＞0.05). 过氧化氢酶(CAT)活性补锌 辐照组与对照组比显著下降(P＜0.05). 单胺氧化酶(MAO)活性辐照组、补锌组、补锌 辐照组与对照组比有显著性增加(P＜0.05). 结论:微波辐照引起大鼠脑脂质过氧化反应,补锌不仅不能抑制氧化应激,反而有加重大鼠脑脂质过氧化损伤作用.     

甲状腺激素对大鼠脑皮质发育期突触体素表达的影响

目的探讨甲状腺激素（TH）对发育关键期大鼠大脑皮质突触体素（syn）表达的作用和影响。方法选用甲巯咪唑（MM）复制甲状腺机能减退大鼠模型,实验分成正常对照组（n=42）和甲减组两组（n=36）,收集出生后第0,4,7,14,21,30,120天的正常、甲减组仔鼠脑组织。采用原位杂交组织化学法检测发育关键期仔鼠大脑皮质突触体素的表达变化情况。结果正常对照组syn mRNA在生后不同发育阶段的表达变化明显且具有层状分布的特点。生后第0天表达很低,在第4天表达最高。以后表达逐渐下降,至第30天表达水平基本接近于成年鼠水平（P120d）。甲减组synmRNA表达在各时点均明显低于正常对照组（P〈0.001）。甲减组syn mRNA表达高峰延迟3d,在出生后第7天达到高峰。结论在脑发育关键期,甲状腺激素水平的异常改变了大脑皮质突触体素的表达,进一步影响了其突触的发生及相关神经回路的建立,出现神经元的旷置或错误神经通路,阻碍了脑发育与其功能的成熟。     

参麦注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后学习及记忆能力的改善作用

目的:探讨中药参麦注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后学习和记忆能力的改善作用.方法:7日龄SD大鼠随机分为参麦注射液干预组、胞二磷胆碱干预组、生理盐水干预组、假手术组和正常对照组5组.前3组均在成模后当日开始每组每只分别给予参麦注射液、胞二磷胆碱和生理盐水腹腔注射干预,1次·d-1,连续14d.其余两组不做处理.应用Y-型电迷宫对各组第60及90日龄实验大鼠测试学习能力,并于24h后(第61、91日龄)复测,检测各实验大鼠24h记忆保持能力.结果:经过参麦注射液和胞二磷胆碱分别干预后,其学习能力及24h记忆能力与生理盐水干预组比较有明显改善(P＜0.05),参麦注射液组与胞二磷胆碱组之间也有统计学差异(P＜0.05).结论:参麦注射液和胞二磷胆碱均可改善大鼠HIBD后的学习和记忆能力,前者优于后者.     

丙泊酚及手术创伤对发育期大鼠神经发育和认知功能的影响

目的探讨丙泊酚及手术创伤对发育期大鼠神经发育和认知功能的影响及相关机制。方法104 只13 日龄SD大鼠随 机分为4组：对照组、丙泊酚组、手术组、丙泊酚+手术组。对照组腹腔注射7.5 mL/kg生理盐水后行假手术,丙泊酚组腹腔注射 75 mg/kg丙泊酚,手术组行局麻下剖腹探查术,丙泊酚+手术组腹腔注射丙泊酚75 mg/kg+局麻剖腹探查术。术后各组随机分为 两个亚组。其中一个亚组术后1 d 检测幼鼠海马TNF-α的浓度,脑组织caspase-3、c-fos 的表达。另一亚组饲养至60 d 时行 Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能后检测大鼠海马TNF-α的浓度以及脑组织caspase-3、c-fos的表达。结果在13日龄幼鼠 中,手术组TNF-α浓度、caspase-3、c-fos的表达较其他3组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组、丙泊酚组、丙泊酚+手术 组3组之间TNF-α浓度、caspase-3、c-fos的表达差异无统计学意义（P>0.05）。在60日龄大鼠中,Morris水迷宫实验、TNF-α浓度、 caspase-3、c-fos的表达,各组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论局麻下手术创伤可导致幼年大鼠海马炎症反应加重,细胞凋 亡增加,但该损伤不会持续至大鼠成年。而单次丙泊酚全麻对幼年大鼠大脑神经元发育无明显影响,且丙泊酚可缓解手术创伤 所造成的幼鼠中枢炎症反应。     

高热惊厥大鼠脑病理变化及超微结构的实验研究

目的：探讨反复高热惊厥（febrile seizure，FS）是否能引起发育期大鼠脑损伤。方法：51只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（NC组，n=14）、高热对照组（HC组，n=19）及高热惊厥组（FS组，n=18）。水浴法建立FS模型，每日诱导2次，共10次。采用HE染色观察FS大鼠海马神经元病理形态，TUNEL染色观察神经元凋亡，电镜观察海马CA1区神经元、突触、穗鞘、胶质细胞、缝隙连接、毛细血管等超微结构变化。结果：HE染色可见FS组海马神经元发生变性和坏死。TUNEL染色可见FS组凋亡指数明显增高。电镜观察可见FS组神经元出现胞膜皱缩，细胞体积缩小，胞浆密度增加，核膜内陷，胞核深染；线柱体肿胀、脊断裂甚至空泡化，粗面内质网、游离核糖体肿胀，密度低；突触间隙增宽；髓鞘松解；胶质细胞水肿；毛细血管周围水肿。结论：频繁的FS发作可导致发育期大鼠海马神经元损伤。     

老年鼠六种组织细胞的细胞核与染色质DNaseⅠ的消化敏感？…

为探讨衰老的机理,作者研究了老年鼠和断奶乳鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮＡ酶Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）的消化敏感性。结果显示：①老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织细胞的细胞核和染色质对ＤＮａｓｅⅠ的消化敏感性均较断奶乳鼠相应的组织低;②老年鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等６种组织的消化敏感性各不相同,脑组织的消化敏感性最低（Ｐ〈０．０１）;③断奶乳鼠脑组织的消化敏感性也较     

通心络治疗缺血再灌注损伤机理的脑片研究

目的 通过器官型脑片研究通心络含药血清对缺血再灌注损伤的治疗作用及机制。方法 制备P3 SD的全脑器官型脑片，随机分为缺血再灌注脑片模型组和正常对照组，各组根据干预方式的不同再分为大剂量含药血清组、小剂量含药血清组、对照血清组、空白组，于干预后不同时间通过倒置显微镜及免疫荧光染色观察通心络对脑片上神经干细胞增殖、迁移、分化的影响。结果 经含药血清干预后室下区、海马齿状回单位区域新生细胞（nestin+）数量增多，正常对照组新生细胞密度高于缺血再灌注脑片模型组（P<0.05）；两组1d、3d、7d时新生细胞数量均按照大剂量含药血清组、小剂量含药血清组、对照血清组、空白组顺序递减（P<0.05）；因新生细胞向外迁移，随着培养时间延长上述区域新生细胞密度逐渐减少；1d时各组均有大量nestin+新生细胞，7d时只有大、小剂量含药血清组有少量nestin+新生细胞。结论 通心络可能通过促进神经干细胞的增殖迁移和分化来治疗缺血再灌注损伤，其效应随剂量增加而增强。