ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达北大核心CSCD

目的检测ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达情况,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系。方法分别采用免疫组化和Western印迹法检测磷酸化的ERK1/2,JNK及P38MAPK在皮肤黑素瘤、皮内痣组织中的表达情况;用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-PCR)方法定量分析皮内痣和皮肤黑素瘤中ERK1/2,JNK和P38MAPK mRNA的表达情况。结果免疫组化和Western印迹法结果均显示p-ERK1/2,p-JNK及p-P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达高于皮内痣组(P<0.05);Western印迹法显示p-ERK1/2,p-JNK及p-P38MAPK在皮内痣组中的表达高于正常对照组(P<0.05)。ERK1/2,JNK及P38MAPK mRNA在皮肤黑素瘤和皮内痣中的表达均高于正常皮肤组织(P<0.05);皮肤黑素瘤中ERK1/2,P38MAPKmRNA的表达均高于皮内痣(P<0.05);而皮肤黑素瘤中JNK mRNA的表达与皮内痣组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤表达增高,提示MAPK信号通路在皮肤黑素瘤发生、发展中起到重要作用,该信号通路有望成为预防和治疗皮肤黑素瘤的新靶点。     

光线性角化病和鳞状细胞癌表皮生长因子受体与MAPK信号通路的研究

目的 探讨磷酸化ERK1/2、JNK和p38MAPK与其上游因子表皮生长因子受体（EGFR）及下游转录因子Elk-1在光线性角化病（AK）和皮肤鳞状细胞癌（SCC）中的表达。 方法 收集确诊为AK和高、中、低分化SCC患者各30例的病变组织,同时收集30例非癌患者正常皮肤组织作为正常对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-EGFR、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1蛋白在AK和不同分化程度SCC中的表达情况。 结果 p-EGFR在SCC组中的表达高于AK组及正常对照组（P < 0.05）,AK组与正常对照组表达差异无统计学意义;p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p-Elk-1在SCC的表达均高于AK组及正常对照组（P < 0.05）,且在AK中的表达又均高于正常对照组（P < 0.05）。除p-EGFR和p-Elk-1在高分化和中分化SCC中的表达差异无统计学意义,p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK随着SCC分化程度的降低,其表达逐渐增高（P < 0.05）。相关性分析显示,在SCC中p-EGFR的表达与p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK的表达强度呈正相关（r = 0.843、0.819、0.902,均P < 0.01）,且p-Elk-1的表达与p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK的表达强度亦呈正相关（r = 0.874、0.843、0.893,均P < 0.01）;在AK中p-EGFR的表达仅与p-p38MAPK的表达强度呈正相关（r =0.707,P = 0.022）。 结论 p-EGFR、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38MAPK及p- Elk-1蛋白在皮肤SCC中的表达与其病理分级有关。磷酸化EGFR→ERK1/2、JNK、p38MAPK→Elk-1信号转导途径可能在AK和SCC的发生发展中起作用。     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶和P38丝裂原活化蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 探讨磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和P38丝裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）在寻常性银屑病皮损中的表达。 方法 收集30例确诊的寻常性银屑病患者皮损,同时收集30例健康人皮肤组织作为对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-JNK和p-P38MAPK蛋白在寻常性银屑病皮损组织和正常人皮肤中的表达情况。 结果 免疫组化结果显示,寻常性银屑病皮损组织p-JNK和p-P38MAPK表达的平均吸光度（AOD）值分别为0.663 ± 0.016和0.436 ± 0.011,均明显高于对照组（0.333 ± 0.009和0.306 ± 0.010）,差异有统计学意义（t = 44.869、21.913,均P < 0.001）。Western印迹法同样显示,寻常性银屑病皮损p-JNK和p-P38MAPK蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义（t值分别为20.477和165.084,均P < 0.05）。结论 JNK和P38MAPK的活化可能参与了寻常性银屑病表皮细胞的过度增殖。     

MAPK信号通路调控长波紫外线诱导的皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达

【摘要】 目的 研究MAPK信号通路调控长波紫外线（UVA）诱导皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K（CatK）的表达。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞取自儿童包皮。Western印迹检测10 J/cm2 UVA照射前及照射后0.75、1.5、3和6 h皮肤成纤维细胞中磷酸化JNK（p-JNK）、JNK、磷酸化P38（p-P38）、P38蛋白的表达。800 nmol/L SP600125（SP）、10 μmol/L SB203580（SB）分别孵育皮肤成纤维细胞,实验分为无UVA照射的对照组、SP组、SB组及10 J/cm2 UVA照射的对照（UVA）组、UVA-SP组、UVA-SB组。先以Western印迹检测各组UVA照射后1.5 h磷酸化c-Jun（p-c-Jun） 和磷酸化MAPKAPK2（p-MAPKAPK2）表达,再以RT-PCR 和Western印迹检测各组照射后48 h CatK mRNA、蛋白的表达。 结果 皮肤成纤维细胞在UVA照射后0.75、1.5 h,p-JNK表达的灰度值分别为4.77 ± 0.19和4.68 ± 0.09,p-P38分别为2.44 ± 0.13、2.30 ± 0.04,均较照射前（p-JNK为3.2 ± 0.27,p-P38为1.61 ± 0.08）显著升高（均P ＜ 0.05）;而在照射后3、6 h的表达与照射前相比差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。p-c-Jun在UVA-SP组表达（2.55 ± 0.48）、p-MAPKAPK2在UVA-SB组表达（1.16 ± 0.12）均显著低于UVA组（分别为4.85 ± 0.96和2.46 ± 0.09）,均P ＜ 0.05。UVA-SP组、UVA-SB组CatK mRNA、蛋白的表达分别降为UVA组的38.9%、28.7%和55.7%、49.6%（P ＜ 0.05）,UVA-SP组CatK mRNA、蛋白的表达也均显著低于UVA-SB组（P ＜ 0.05）。 结论 JNK和P38信号通路在调控UVA上调的皮肤成纤维细胞CatK表达中起重要作用。     

蛋白激酶B和丝裂原活化蛋白激酶在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗中波紫外线损伤中的作用

目的 探讨烟酸保护由UVB诱导的角质形成细胞损伤的胞内信号传导分子机制。 方法 UVB照射和烟酸处理HaCaT细胞,TUNEL法检测细胞凋亡,Western印迹检测蛋白激酶B（Akt）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白Akt、P38、JNK、ERK1/2的磷酸化水平变化。ELISA检测细胞分泌内皮素1（ET-1）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的水平。结果 Western印迹结果表明,UVB照射和烟酸处理HaCaT细胞后,p-Akt、p-P38、p-JNK、p-ERK1/2蛋白在60 min内都显著激活（P < 0.01）。烟酸预处理后的HaCaT细胞再经UVB照射,可以发现p-Akt、p-P38、p-ERK1/2信号分子在2 h内激活更显著（P < 0.01）。３个抑制剂加UVB照射组较3个单独抑制剂组ET-1、bFGF表达降低,差异均有统计学意义,其中LY294002组、SB203580组ET-1、bFGF水平最低;烟酸预保护的抑制剂处理组HaCaT细胞在UVB照射后,LY294002和U0126组没有出现ET-1、bFGF水平回升,SB203580组bFGF水平出现回升。结论　Akt信号分子在烟酸保护的HaCaT细胞抵抗UVB损伤中起一定的调控作用。     

A型肉毒素下调UVB诱导的HaCaT细胞炎症因子的表达

目的探讨A型肉毒素是否通过MAPK信号通路下调UVB诱导的HaCaT细胞炎症因子的表达。方法培养HaCaT细胞,分为4组:对照组(未做任何处理);UVB组(80 mJ/cm~2);UVB+A型肉毒素组(80 mJ/cm~2+5 IU/mL);A型肉毒素组(5 IU/mL)。采用酶联免疫吸附试验检测HaCaT细胞培养液中的IL-6及IL-8细胞炎症因子的表达情况。通过蛋白免疫印迹法测定细胞内MAPK相关通路蛋白的表达水平。结果与UVB组相比,UVB+A型肉毒素组IL-6及IL-8细胞炎性因子释放减少。与对照组相比,UVB组p-ERK、p-JNK表达水平增加。UVB+A型肉毒素组与UVB组比较,p-ERK、p-JNK表达水平下降,而p-AKT~(Ser473)及p-P38无明显改变。结论 A型肉毒素可能通过p-ERK、p-JNK信号通路下调UVB诱导的HaCaT细胞炎症因子的表达。     

A375细胞外信号调节激酶通路与核因子κB通路的交互作用初探

【摘要】 目的 探讨黑素瘤细胞A375细胞外信号调节激酶（ERK）通路与核因子κB（NF-κB）信号转导通路的交互作用。 方法 将培养的A375细胞分为对照组、选择性ERK信号通路抑制剂U0126（10 μmol/L、5 μmol/L）处理组和选择性NF-κB通路抑制剂BMS-345541（10 μmol/L、5 μmol/L）处理组,分别提取蛋白质和mRNA,用Western 印迹、RT-PCR观察U0126抑制ERK通路后,NF-κB P65、p-IκBα蛋白及NF-κB P65 mRNA的表达,观察BMS-345541抑制NF-κB通路后ERK1/2 、p-ERK1/2蛋白及ERK1 mRNA的表达。 结果 应用10 μmol/L、5 μmol/L U0126抑制ERK通路后,胞核NF-κB P65蛋白表达（分别为0.60 ± 0.04、0.56 ± 0.06）均较对照组（1.54 ± 0.15）减少（P < 0.01）,其表达量与药物浓度无显著相关性（P > 0.01）;p-IκBα蛋白的表达（0.90 ± 0.05、0.70 ± 0.02）均较对照组（0.61 ± 0.03）增加（P < 0.01）,两药物浓度组之间的表达量差异有统计学意义（P < 0.01）;NF-κB P65 mRNA的表达（0.79 ± 0.05,0.75 ± 0.04）均较对照组（0.86 ± 0.05）减少（P < 0.01）。应用10 μmol/L BMS-345541抑制NF-κB通路后,ERK1/2、p-ERK1/2蛋白及ERK1 mRNA的表达（0.73 ± 0.07、0.75 ± 0.09、1.51 ± 0.02）较对照组减少（P < 0.01）,BMS-345541浓度为5 μmol/L时,ERK1/2、p-ERK1/2蛋白和ERK1 mRNA的表达（0.94 ± 0.11、0.99 ± 0.04、1.62 ± 0.03）较对照组的差异无统计学意义（均P > 0.05）。 结论 NF-κB通路和ERK通路在黑素瘤A375细胞中存在交互作用。     

全反式维A酸通过AKT和ERK1/2通路影响IL-22诱导HaCaT细胞中的Cx43和GJIC功能

目的 探索全反式维A酸(RA)通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对IL-22诱导的HaCaT细胞中Cx43表达下调和细胞间隙连接通讯(GJIC)降低的影响。方法 应用细胞划痕试验(SLDT)记录RA、IL-22和信号通路抑制剂处理的HaCaT细胞中GJIC的变化。Western blot检测Cx43、p-JNK、p-AKT、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果 RA以剂量依赖性方式显著增加GJIC功能，并恢复IL-22诱导的HaCaT细胞GJIC功能降低程度。RA显著恢复了IL-22诱导的HaCaT细胞中Cx43表达的下调，但这种作用并非通过抑制IL-22激活的JNK信号通路而发生。RA通过激活AKT和ERK1/2信号通路而不是p38信号通路来抑制IL-22诱导的GJIC降低和Cx43表达下调。此外，研究用AKT抑制剂MK-2206或ERK1/2抑制剂SCH772984处理细胞后显示出相反的结果。结论 RA可抑制IL-22诱导的HaCaT细胞Cx43表达下调和GJIC功能降低，且是通过激活AKT和ERK1/2信号通路而不是JNK和p38信号通路介导的。本研究进一步拓展了维...     

血管瘤组织总ERK1/2及磷酸化ERK1/2的免疫印迹检测

目的检测细胞外信号调节激酶1/2(总ERK1/2)及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在血管瘤组织中的表达并探讨其意义。方法应用免疫印迹法检测10例增生期血管瘤组织和8例退化期血管瘤组织总ERK1/2及p-ERK1/2的蛋白表达。结果增生期血管瘤组织总ERK1/2的蛋白表达(0.87±0.14)与退化期血管瘤组织总ERK1/2的蛋白表达(0.79±0.05)差异无统计学意义(P>0.05);增生期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达(0.44±0.04)明显高于与退化期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达(0.23±0.08),差异有统计学意义(P<0.01)。结论血管瘤增生与ERK活性增高及ERK通路激活有关。     

安石榴苷对中波紫外线诱导HaCaT细胞光损伤的预防作用研究

目的 探讨安石榴苷对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞损伤的保护机制。 方法 培养的HaCaT细胞分为空白对照组、安石榴苷组、UVB组、安石榴苷 + UVB组。噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力,Hoechst/碘化丙锭（PI）染色和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法测定金属基质蛋白酶1（MMP1）及其组织抑制因子1（TIMP1） mRNA表达水平,Western印迹检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白P38、JNK、ERK的磷酸化水平变化。 结果 MTT试验示,10 ～ 40 μmol/L安石榴苷对UVB诱导的HaCaT细胞损伤有较佳的预保护作用。UVB组HaCaT细胞强Hoechst和强PI双染细胞较空白对照组增多,安石榴苷 + UVB组较UVB组减少。流式细胞仪分析,UVB组凋亡细胞百分率（9.82% ± 0.11%）高于空白对照（1.24% ± 0.91%,P < 0.01）,而安石榴苷（10、20、40 μmol/L） + UVB组凋亡细胞百分率（分别为6.38% ± 0.14%、5.24% ± 0.17%、3.77% ± 0.11%）较UVB组低,差异有统计学意义（均P < 0.01）。UVB组MMP1 mRNA相对表达量（12.376 ± 0.602）高于空白对照组（1.007 ± 0.147,P < 0.01）,而TIMP1 mRNA相对表达量（0.103 ± 0.006）低于空白对照组（1.006 ± 0.139,P < 0.01）,安石榴苷组MMP1及TIMP1 mRNA与空白对照组比较,差异无统计学意义（均P > 0.05）。安石榴苷预处理的HaCaT细胞经30 mJ/cm2 UVB照射后MMP1 mRNA相对表达量较UVB组降低（均P < 0.01）,而TIMP1 mRNA较UVB组升高（均P < 0.01）。Western印迹示,经UVB照射后,HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达升高（均P < 0.01）。安石榴苷组HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达没有明显改变（P > 0.05）,而安石榴苷 + UVB组有不同程度下降（均P < 0.01）。 结论 安石榴苷对UVB引起HaCaT细胞损伤有一定的预防作用。     

中波紫外线对体外培养HaCaT细胞MAPK信号通路的影响

目的 探讨中波紫外线照射后不同时间点体外培养的HaCaT细胞MAPK信号通路受调控效应。 方法 1.5、4.5、7.5、10、20、30、50 mJ/cm2中波紫外线照射HaCaT细胞后8 h,对照组细胞除不进行UVB照射外,其他处理同各剂量UVB组,蛋白免疫印迹法测定ERK1/2、JNK和p38蛋白表达及磷酸化水平;50 mJ/cm2中波紫外线照射HaCaT细胞,蛋白免疫印迹法测定照射后2、4、8、12 h 4个时间点,细胞ERK1/2、JNK和p38蛋白表达及磷酸化水平。使用Quantity One软件计算目的条带吸光度,以相应蛋白条带的吸光度值与GAPDH蛋白内参条带吸光度值的比值表示相对蛋白含量。 结果 7.5、10、20、30、50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后8 h,ERK1/2、JNK磷酸化水平明显上调（P < 0.05）,20、30、50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后p38磷酸化水平上调显著（P < 0.05）,且都在50 mJ/cm2照射后效应最为显著（P < 0.05）。50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后8 h,ERK1/2磷酸化产物水平出现上调,在处理后的12 h,与对照组（10.277 ± 0.320）比较,差异有统计学意义（44.844 ± 2.023,P < 0.05）,而p38和JNK磷酸化产物水平在照射后2 h即开始上调（P < 0.05）,4、8、12 h,p38和JNK与对照相比,UVB照射后虽存在着显著地磷酸化水平差异（P < 0.05）,但随时间推移JNK磷酸化产物水平这种上调的趋势逐渐弱化（P < 0.05）。 结论 在50 mJ/cm2中波紫外线照射后的HaCaT细胞中,ERK1/2、p38、JNK这3种MAPK信号通路产生了活化效应,具有一定的时间效应差异。     

曲克芦丁对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的研究曲克芦丁对中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用及机制。方法将培养的HaCaT细胞分为空白对照组、UVB组、曲克芦丁组、曲克芦丁+UVB组。其中UVB组、曲克芦丁+UVB组予50m J/cm~2的UVB照射,曲克芦丁组、曲克芦丁+UVB组分别加入不同浓度的曲克芦丁干预。用CCK-8法检测细胞增殖能力。Hoechst染色法检测细胞凋亡。Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白p-P38,p-JNK,p-ERK,以及激活蛋白-1(AP-1)的组件c-Fos,c-Jun的表达情况。结果 CCK-8法提示,5~10μmol/L的曲克芦丁对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有较好的保护作用(P0.05)。Hoechst染色显示,UVB组凋亡细胞较空白对照组增多,曲克芦丁+UVB组凋亡细胞较UVB组减少。Western blot法提示UVB照射后HaCaT细胞p-P38,p-ERK,p-JNK,p-c-Jun及c-Fos水平升高,曲克芦丁+UVB组有不同程度下降。结论曲克芦丁对UVB诱导的HaCaT细胞光损伤有一定的保护作用。     

MEK/ERK通路阻断剂对黑素瘤细胞增殖的影响

目的研究MEK/ERK通路阻断剂U0126对黑素瘤细胞A375增殖的影响,并探讨其作用机制。方法噻唑蓝法(MTT)测定U0126和传统抗癌药物达卡巴嗪(DTIC)分别及联合作用时对黑素瘤细胞A375的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同药物处理组的细胞周期及凋亡情况;Western blot检测U0126处理后细胞p-ERK1/2的表达。结果药物作用24h时U0126单一用药组对细胞的增殖抑制率高于DTIC单一用药组(P<0.01);联合应用U0126和DTIC对细胞的增殖抑制率明显高于DTIC用药组(P<0.01);U0126组与对照组相比,G1期细胞比例数提高了21.83%(P<0.01),凋亡率提高了13.96%(P<0.01),联合用药组与对照组相比G1期比例增加了26.64%(P<0.01),凋亡率亦明显提高了25.20%(P<0.01);不同浓度U0126处理细胞后,细胞的p-ERK1/2均明显降低(P<0.01)。结论 MEK/ERK通路阻断剂U0126可显著抑制黑素瘤细胞的增殖,其机制可能与降低p-ERK1/2的表达从而参与细胞周期调控有关;联合U0126用药有望成为治疗黑素瘤新的有效途径。     

ERK在黑素瘤细胞和人正常黑色素细胞中的表达

目的:研究ERK1/2和P-ERK1/2在人正常黑色素细胞和黑素瘤细胞A375中表达强度的差异,并分析其意义。方法:从健康青年人阴茎包皮中分离并培养原代黑色素细胞;传代培养黑素瘤细胞A375;Western-blot检测两种细胞中ERK1/2和P-ERK1/2的表达强度,并进行统计比较。结果:ERK1/2、P-ERK1/2在黑素瘤细胞A375的表达强度均明显高于人正常黑色素细胞,差异均具有统计学意义(t值分别为17.75、104.39,P值均<0.01)。结论:黑素瘤的发生、发展可能与MAPK/ERK通路有关。     

环氧合酶-2和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶在扁平苔藓皮损中的表达

目的：检测环氧合酶-2（COX-2）及其上游调控蛋白磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）在扁平苔藓皮损中的表达，探讨其在发病中的意义。方法：采用免疫组化技术检测20例扁平苔藓皮损标本中COX-2和p-P38MAPK的表达情况，20例正常皮肤组织作为对照。结果：20例扁平苔藓皮损标本中COX-2和p-P38MAPK的积分光密度值（IOD）分别为（8.46±1.79）×10³和（11.54±2.85）×103，均明显高于对照组(3.14±2.35)×103和(6.26±3.12)×10³，差别具有统计学意义（均P＜0.01），同时COX-2与p-P38MAPK的表达强度呈正相关（r=0.62，P＜0.01）。结论：扁平苔藓皮损中COX-2表达上调，可能与上游P38MAPK的活化有关，可能是引起扁平苔藓发病的环节之一。     

双氢睾酮对HaCaT细胞SREBP-1c表达的影响

目的 探讨双氢睾酮（DHT）在HaCaT细胞固醇调控元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）表达中的作用。 方法 体外培养HaCaT细胞,分为4组,对照组不加任何刺激因素,DHT组分别加入3种不同浓度的DHT,LY294002 + DHT组在加入50 μmol/L PI3K抑制剂（LY294002）预处理40 min后加入100 nmol/L DHT,PD98059 + DHT组即在加入50 μmol/L MEK抑制剂（PD98059）预处理40 min后加入100 nmol/L DHT。用实时定量PCR和Western印迹法检测DHT对HaCaT细胞SREBP-1c mRNA和蛋白表达的影响。Western印迹法检测DHT作用于HaCaT细胞后蛋白激酶B（AKT）、胞外信号调控激酶（ERK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化情况。 结果 DHT可呈浓度依赖性上调HaCaT细胞SREBP-1c mRNA和蛋白的表达,并诱导AKT、ERK的磷酸化,但对p38、JNK的磷酸化无明显激活作用。LY294002预处理后HaCaT细胞SREBP-1c mRNA的表达较单纯DHT组明显降低（t = 9.406,P < 0.05）;SREBP-1蛋白水平降为0.7113 ± 0.0313,与单纯DHT组2.2577 ± 0.0601比较,差异有统计学意义（t = 39.498,P < 0.05）。而PD98059预处理后,SREBP-1c mRNA和蛋白的表达与单纯DHT组比较,差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 DHT可诱导HaCaT细胞SREBP-1c mRNA和蛋白的表达。     

肉桂醛对UVA照射后体外成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和MAPK信号的影响

目的探讨肉桂醛对UVA照射后体外皮肤成纤维细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)的影响。方法皮肤成纤维细胞在体外培养后,在培养基中加入不同浓度(0,5,10,20和40μM)肉桂醛,24h后MTT法检测细胞活性。皮肤成纤维细胞经肉桂醛预处理24h后再予UVA照射,Western blot法检测MMP-1,MMP-3,ERK,JNK,p38磷酸化蛋白水平。结果 0~40μM肉桂醛对成纤维细胞的活性无明显影响(P均>0.05)。肉桂醛能抑制UVA照射后成纤维细胞MAPK信号蛋白ERK,JNK,p38的活化,其也能抑制成纤维细胞表达MMP-1和MMP-3,且各浓度间作用差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论肉桂醛可能通过抑制UVA照射后成纤维细胞MAPK信号蛋白的活化来抑制MMP-1和MMP-3的表达,减少胶原降解,延缓皮肤光老化。     

5-氨基酮戊酸联合IPL 光动力疗法对成纤维细胞分泌MMP-1、TGF-β1的影响及信号机制研究

目的:研究观察5-氨基酮戊酸(5-ALA)联合强脉冲光(IPL)光动力疗法(5-ALA-IPL-PDT)对成纤维细胞分泌表型的影响及其信号通路机制.方法:成纤维细胞接种至培养板,采用不同浓度的5-ALA处理细胞2 h后给予不同剂量的IPL辐照.免疫印迹法(Western-blot)观察有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)相关家族成员[细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、P38]的蛋白磷酸化水平.ELISA法检测转化生长因子(TGF)-β1、基质金属蛋白酶(MMP)-1水平的变化.结果:①与空白组比较,IPL+ALA(0.5 mmol/L)组、IPL+ALA(1.0 mmol/L)组,MMP-1浓度分别增加94.7%和111.4%,而TGF-β1浓度分别降低34.8%和39.1%(P < 0.05);②IPL+ALA(0.5 mmol/L)组与IPL组比较,ERK、P38和JNK分别增加113.1%、36.1%和67.3%(P < 0.05).结论:5-ALA-IPL-PDT可刺激MAPK家族分子(ERK、P38、JNK)的活化,诱导成纤维细胞MMP-1的分泌,而抑制TGF-β1的分泌.     

环氧合酶2在人恶性黑素瘤中高表达

目的 探讨恶性黑素瘤组织及黑素瘤细胞系中环氧合酶2(COX-2)的表达及意义.方法 免疫组化法比较性研究25例皮内痣、45例恶性黑素瘤COX-2蛋白的表达情况.并结合患者的临床资料进行分析.同时,免疫印迹法检测正常黑素细胞及3种黑素瘤细胞系中COX-2蛋白的表达情况.结果 在恶性黑素瘤中,COX-2蛋白阳性表达率为80%(36/45),显著高于皮内痣组0%(0/25)(P<0.05);肿瘤组织中COX-2蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05).正常黑素细胞COX-2阴性表达,3种恶性黑素瘤细胞系中A375、1585细胞COX-2表达水平明显升高,而Libr细胞未见阳性表达.结论 COX-2在恶性黑素瘤组织及细胞系中表达率显著升高,可能在恶性黑素瘤发生发展中具有一定作用.     

尖锐湿疣患者角质形成细胞中活化型细胞外信号调控蛋白激酶和活化型p38的检测

目的 探讨尖锐湿疣皮损角质形成细胞中活化型细胞外信号调控蛋白激酶(p-ERK)和活化型p38(p-p38)的表达。方法 采用原位杂交方法诊断HPV6/11相关尖锐湿疣50例;采用免疫组化EnVision二步法检测50例尖锐湿疣皮损中p-ERK和p-p38的表达及分布,并以25例正常人皮肤(包皮)作为对照。结果 ①p-ERK和p-p38在尖锐湿疣角质形成细胞中的表达较正常人上皮中均有不同程度的增强,前者u=4.113,P<0.01;后者u=4.497,P<0.01,其表达主要分布于棘细胞层,阳性信号均定位于胞核。②尖锐湿疣皮损中,p-ERK与p-p38的表达呈显著正相关(r=0.42,P<0.01)。结论 HPV6/11阳性尖锐湿疣患者中,p-ERK和p-p38的表达较正常人皮肤明显增强,提示在HPV6/11感染时,角质形成细胞中激酶ERK和p38的激活增加,可能通过ERK和p38MAPK通路起作用。