全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系DU—145凋亡的分子机理

克隆全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系ＤＵ－１４５细胞产生凋亡的相关基因，探讨维甲酸诱导前列腺癌细胞产生凋亡的分子机理。方法应用全反式维甲酸诱导前列腺癌细胞系ＤＵ－１４５细胞凋亡，采用基于ＰＣＲ的改良消减杂交技术克隆与凋亡相关的基因。结果在前列腺癌ＤＵ－１４５细胞凋亡过程中，有大量肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的表达，同时，克隆出ｃ－ｅｒｂＢ－２基因。结论ＴＮＦ及ｃ－ｅｒｂ－２基因在由全反式维甲酸诱导的前列腺     

米非司酮诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究

我国前列腺癌发病率呈逐年上升趋势，而且激素非依赖型前列腺癌治疗效果不佳。米非司酮（mifepristone，RU486）是一种类固醇激素受体拮抗剂，近年来有研究表明其具有抗肿瘤的活性，能诱导一些肿瘤细胞凋亡，如乳腺癌、子宫颈癌等，但其诱导肿瘤细胞的凋亡机制还不完全清楚，在激素非依赖型前列腺癌方面的研究较少。本研究旨在探讨米非司酮诱导激素非依赖型前列腺癌PC-3细胞凋亡的作用机制。     

前列腺癌的分子病理学研究

病理学分级及临床分期对前列腺癌的预后评价存在一定的局限性。运用灵敏的诊断方法和特异性的肿瘤标记物对临床早期发现前列腺癌至关重要。近年来,凋亡相关基因和肿瘤抑制基因在前列腺癌发生发展中的作用及其判断预后的价值倍受关注。前列腺癌相关的酶或蛋白以及相关激素受体的作用在前列腺癌研究中也越来越受到人们的重视。     

miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖及凋亡的调控

目的:探讨miR-19a在去势抵抗性前列腺腺癌中的表达及其对去势抵抗性前列腺癌细胞株PC3及DU145的增殖及凋亡的影响。方法:用定量PCR方法检测10例去势抵抗性前列腺癌细胞组织及相关癌旁的miR-19a表达,通过MTT、克隆形成、Western blotting、流式细胞仪检测增殖及凋亡及体内成瘤的方法来研究miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。结果:miR-19a在去势抵抗性前列腺癌组织中的表达相对于癌旁组织显著提高。抑制miR-19a在激素非依赖前列腺癌中的表达,可抑制细胞的增殖及集落形成并增加其凋亡。结论:在激素非依赖性前列腺癌中,miR-19a起着癌基因作用,与前列腺癌的增殖及凋亡相关。     

维甲酸诱导前列腺癌细胞DU-145凋亡有关的基因克隆

目的 克隆维甲酸诱导的前列腺癌细胞ＤＵ－１４５凋亡的未知相关基因。方法 以全反式维甲酸（ａｌｌ－ｔｒａｎｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ）诱导前列腺癌细胞系ＤＵ－１４５细胞凋亡,在此基础上,采用基于ＰＣＲ技术的改良消减杂交方法克前列腺癌凋亡相关基因。结果 成功克隆出一条与凋亡可能有密切关系的未夭基因。结果 成功克隆出一条与凋亡可能有密切关系的未知基因ｐｃａｒ,已被ＧｅｎＢａｎｋ收录,登录号为ＡＦ１７４     

前列腺癌药物治疗新进展

前列腺癌的药物治疗 包括激素治疗及细胞内治疗两方面。前者有延迟激素耐受及加用新类型激素的进展。如内皮素受体拮抗剂,后者包括细胞凋亡激动剂、血管生成抑制剂及树突状细胞的免疫治疗。     

Aurora A表达与人前列腺癌细胞对紫杉醇敏感性的相关性研究

目的 探讨前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性的相关性,明确Aurora A表达是否影响紫杉醇对前列腺癌的治疗效果.方法 以激素非依赖性前列腺癌细胞Du145为研究对象,通过转染Aurora A全长基因得到稳定高表达Aurora A 的细胞系Du145-Aurora A,细胞用不同浓度紫杉醇处理,用MTT细胞增殖实验检测细胞生长抑制率,用流式细胞仪分析细胞凋亡情况,比较Aurora A表达上调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化.同时,用核酶技术使细胞Aurora A表达下调,检测Aurora A表达下调后细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化.结果 Aurora A表达上调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均降低(P＜0.01),而Aurora A表达下调使紫杉醇对细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均增高(P＜0.01).结论 人前列腺癌细胞中Aurora A表达与细胞对紫杉醇敏感性具有相关性,抑制Aurora A可望提高紫杉醇对前列腺癌的治疗效果.     

抑制survivin表达对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响

[目的]研究survivin与前列腺癌的关系,探讨survivin对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响及其机制。 [方法]运用RNA干扰技术阻断survivin在前列腺癌细胞pc-3中的表达,采用流式细胞计数等方法检测survivin 被阻断后,对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响。[结果]阻断survivin在前列腺癌细胞pc-3中的表达后,能够引起 pc-3细胞的凋亡,其机制可能是由于活化了凋亡通路的caspase-3。[结论]Survivin可以做为治疗前列腺癌的一个潜在的基因靶点。     

低频超声增强双氢青蒿素诱导前列腺癌 PC-3细胞凋亡的生物学效应研究

目的研究低频超声能否增强双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞种植瘤的致凋亡作用,并探讨其对DHA诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡增敏作用的机理。方法采用前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠种植瘤模型,20只实验裸鼠随机分为4组:空白对照组、单纯DHA组、单纯超声组和超声+DHA组,经过13d共计7次药物或加超声干预后,采用免疫组织化学法(SP)检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、VEGF、Caspase-3及CHOP的表达水平。结果观察瘤体外形见空白对照组与单纯超声组肿瘤体积稍大,切开瘤体见内部均有明显液化坏死区域,免疫组织化学结果显示超声+DHA组、单纯DHA组和单纯超声组的Bcl-2及VEGF表达均低于空白对照组,超声+DHA组、DHA组和超声组的Bax、Caspase-3及CHOP表达均高于空白组。结论对正常细胞不致明显损伤的低频超声,可致前列腺癌PC-3种植瘤细胞相关凋亡基因的改变,DHA可单独致PC-3细胞凋亡及相关基因的改变,超声能明显增强DHA诱导前列腺癌PC-3种植瘤细胞凋亡作用。     

氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的 探讨氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖及凋亡的影响作用。方法 采用MTT、细胞划痕和Transwell侵袭实验评估氯化两面针碱对人前列腺癌细胞PC-3增殖与侵袭的影响;流式细胞术检测氯化两面针碱对PC-3细胞凋亡的影响;免疫印迹检测AKT/mTOR及细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)的表达,应用PI3K通路抑制剂LY294002探讨抑制AKT通路对前列腺癌细胞PC-3的影响。结果 氯化两面针碱能抑制PC-3细胞的增殖与侵袭,且具有剂量依赖性(P<0.01)。氯化两面针碱可下调Bcl-2、而上调Bax的蛋白表达,Bax/Bcl-2比例明显上升(P<0.01),抑制AKT和mTOR通路的磷酸化,诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡。联合应用LY294002发现,抑制AKT通路可增强氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭的抑制作用。结论 氯化两面针碱能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖与侵袭,诱导其凋亡,并通过抑制AKT/mTOR磷酸化发挥其抗前列腺癌作用,可作为一种潜在治疗前列腺癌的药物。     

细胞凋亡在激素性股骨头坏死发病机制中的研究进展

目的:总结激素性股骨头坏死发病机制中细胞凋亡的研究进展,为临床上预防和治疗此病提供思路和理论依据。方法:对近十年来激素性股骨头坏死的文献做分析,归纳,总结。结果:激素性股骨头坏死的组织中存在大量凋亡细胞。激素性股骨头坏死相关的凋亡基因主要包括Bcl-2家族、p53基因、Caspase家族、Fas受体、一氧化氮等。结论:激素可以通过抑制bcl-2的表达、上调p53基因、调控Caspase家族、激活一氧化氮合酶诱导骨细胞凋亡,从而导致股骨头坏死。     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。     

前列腺癌细胞激素非依赖性转化过程中microRNA的差异化表达

目的 对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制.方法 利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaPAI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析.结果 基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高.对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致.通过检索http://www.mirbase.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶.结论 前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等.     

Survivin在前列腺癌中的表达及其与bcl-2蛋白表达的关系

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在前列腺癌中的表达及其与bcl2蛋白表达的相关性。方法:应用免疫组织化学链霉卵白素过氧化物酶复合物(SP)方法,检测43例前列腺癌组织标本中survivin、bcl2蛋白的表达,并与15例正常前列腺组织进行对照研究。结果:43例前列腺癌组织中,survivin基因蛋白的阳性表达率为60.47%,而正常前列腺组织中未见survivin基因蛋白阳性表达。survivin基因蛋白表达与前列腺癌的WHO肿瘤分级有相关性。根据Spearman相关分析表明survivin基因蛋白表达与bcl2蛋白表达正相关(P<0.01)。结论:Survivin基因可通过抑制前列腺癌细胞凋亡,对前列腺癌的发生发展起作用。survivin基因可能与凋亡相关基因bcl2在前列腺癌发展中起协同作用。     

万珂增强NK 细胞对前列腺癌细胞 杀伤作用的实验研究

目的 探讨万珂是否能够增强自然杀伤细胞（NK）对前列腺癌细胞的杀伤作用及其作用 机制。方法 以激素依赖性和激素非依赖性2 种前列腺癌细胞株LNCaP 和DU145 为模型，不同浓度（0、10 和20 nmol/L）万珂处理2 种前列腺癌细胞株24 h。采用Annexin-V/PI 法检测细胞凋亡率，流式细胞术检测 人白细胞抗原-ABC（HLA-ABC）蛋白的表达，实时荧光定量聚合酶链反应检测HLA-C mRNA 的表达。 结果 万珂能提高2 种细胞系对NK 细胞介导的杀伤作用的敏感性，而且在激素非依赖性前列腺细胞株 DU145 细胞中表现更明显。万珂能下调DU145 细胞表面HLA- Ⅰ类分子水平。相对DU145 细胞，万珂对激 素依赖性前列腺癌LNCaP 细胞不敏感，万珂处理后LNCaP 细胞中HLA- Ⅰ类分子也没有改变。结论 万珂 通过下调HLA- Ⅰ类分子的表达，增强NK 细胞对前列腺癌的杀伤能力，特别是增强对激素非依赖性前列腺 细胞的杀伤，该作用能提高前列腺癌的治疗水平。     

内皮素-1对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响

 目的 观察内皮素-1（endothelin-1, ET-1）对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响，并研究其机制。方法 采用人激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3，设对照组、紫杉醇组、紫杉醇＋ET-1组。流式细胞仪测定PC3细胞周期分布和凋亡细胞百分比。免疫沉淀(immunoprecipitation , IP)及Western blot检测PC3细胞Bcl-2、Bax和Bax /Bcl-2异二聚体的表达。结果 紫杉醇＋ET-1组PC3细胞的G0-G1(%)高于紫杉醇组，G2-M(%)低于紫杉醇组，凋亡细胞百分比低于紫杉醇组，差异有统计学意义（P＜0.05）。紫杉醇＋ET-1组PC3细胞的Bcl-2磷酸化水平显著低于紫杉醇组，Bax /Bcl-2异二聚体水平显著高于紫杉醇组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ET-1能逆转紫杉醇对PC3细胞的G2/M 期阻滞，并能通过影响Bcl-2磷酸化作用于细胞凋亡通路，减少细胞凋亡，从而降低激素非依赖性前列腺癌PC3细胞对紫杉醇的敏感性。     

前列腺癌p53、bcl-2、bax基因表达与凋亡、增殖的关系

目的:研究前列腺癌组织中细胞增殖与细胞凋亡,及其相关蛋白表达意义。方法:采用原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)及免疫组织化学ABC法对36例前列腺癌(Pca)和11例正常前列腺(NP)组织石蜡切片p53、bcl鄄2、bax、PCNA蛋白及细胞凋亡检测。结果:前列腺癌细胞的增殖指数和细胞凋亡指数较NP明显增高,且AI/PI比值较正常组织AI/PI低(P<0.01);随着肿瘤分级的增加,细胞增殖水平明显增加(P<0.01)。p53蛋白表达与前列腺癌细胞增殖水平相关;bcl鄄2蛋白表达与细胞凋亡水平相关(P<0.05);bax基因表达与凋亡无关,但发现它们的bcl鄄2/bax的比值与凋亡有关。表明高bcl鄄2/bax比值多见于低凋亡组,低bcl鄄2/bax比值多见于高凋亡组。结论:细胞增殖与细胞凋亡均参与了前列腺癌的发生、发展。p53基因与细胞增殖水平的调控有关。bcl鄄2和bax在细胞凋亡调节中起到重要作用,由于bcl鄄2蛋白过量表达引起bcl鄄2/bax失平衡,在前列腺癌发生、发展过程中起到重要作用。     

CB-5083在前列腺癌细胞中的抗肿瘤作用及诱导凋亡的分子机制分析

目的 验证新型VCP/p97抑制剂CB-5083对前列腺癌细胞的抗肿瘤作用，并分析其促进癌细胞凋亡的细胞分子机制。方法 使用呈浓度梯度的CB-5083处理PC-3细胞。采用EdU法监测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell法监测细胞迁移、侵袭能力，流式细胞仪检测细胞凋亡，比色法检测Caspase活性，Western Blot检测相关蛋白改变。结果 CB-5083能够抑制PC-3细胞的生长、迁移和侵袭，并促进其凋亡，其作用强弱与药物剂量相关。进一步研究发现CB-5083通过Caspase依赖的内源性途径诱导的细胞凋亡。结论 CB-5083能在前列腺癌细胞中发挥抗肿瘤作用，并通过Caspase依赖的内源性途径诱导前列腺癌细胞凋亡，是一种潜在的治疗策略。     

枸杞多糖诱导雄激素不依赖型人前列腺癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 研究枸杞多糖对诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸杞多糖作用后，采用MTT法测定细胞的增殖情况。采用TUNEL观察PC-3细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 一定剂量的枸杞多糖可明显抑制PC-3细胞的生长，并能渍导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，凋亡率为41．5％，同时PC-3细胞Bcl-2／Bax蛋白比值显著下降，呈明显的剂量／效应关系。结论 枸杞多糖能诱导人前列腺癌PC-3细胞的凋亡，其机制与调节人前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

应用基因芯片技术筛选前列腺癌转移相关基因

目的:筛选前列腺癌转移相关基因,为研究前列腺癌的转移分子标志奠定基础.方法:将DU145细胞接种于裸鼠前列腺腹叶,5周后分别从原发灶和肺转移灶分离肿瘤细胞,利用cDNA芯片技术检测2种细胞中差异表达基因.结果:成功建立了前列腺癌细胞系原位移植自发转移裸鼠模型,经多轮筛选获得了前列腺癌原位及肺转移细胞.通过基因芯片筛选获得284条差异表达基因,基因功能涉及细胞信号转导、细胞周期、细胞凋亡、转录、黏附和代谢等.结论:基因芯片高通量筛选提示200余条基因中的某些基因可能与人前列腺癌转移有关.本研究为前列腺癌转移分子机制提供参考.