辛伐他汀通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡

目的观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡不同时间的膜电位(Δψm),caspase-3、9和细胞色素C的改变,以推测其凋亡通路。方法采用浓度为20μmol.L-1的辛伐他汀处理K562细胞24、48、72 h,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3、9蛋白活性,免疫组织化学法检测细胞色素C蛋白。结果浓度为20μmol.L-1辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(6.1±0.35)%、(14.15±0.42)%(、30.70±0.65)%,随着凋亡率增加线粒体膜电位降低分别为(39.6±4.80)%,(24.4±2.45)%,(6.0±1.62)%;caspase-3、9蛋白活性与对照组相比上调,细胞浆内细胞色素C升高。结论辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时线粒体膜电位下降,caspase-3、9活性增高和细胞色素C释放,推测辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡可能经过线粒体凋亡途径。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时caspase-3，8，9蛋白活性与mRNA的动态变化

目的:研究辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中caspase-3,8,9活性与mRNA的动态变化,探讨其凋亡通路。方法:20μmol.L-1辛伐他汀处理K562细胞,48 h观察细胞形态学;24,48和72 h流式细胞技术检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3,8和9活性;半定量RT-PCR检测caspase-3,8,9的mRNA变化。结果:20μmol.L-1辛伐他汀作用K562细胞48 h后细胞出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;24,48和72 h辛伐他汀处理组细胞凋亡率较对照组的增加值分别为(6.10±0.35)%,(14.15±0.42)%和(30.70±0.65)%,差异均具有显著性(P<0.01);不同时间辛伐他汀处理组的caspase-3,8,9活性与mRNA表达量均比对照组明显升高(P<0.01)。结论:caspase-3,8,9蛋白活性与mRNA上调是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的重要原因和机制。     

辛伐他汀对K562细胞端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的探讨辛伐他汀治疗慢性粒细胞白血病可能的作用机制。方法辛伐他汀10和20μmol.L-1与K562细胞作用48或72 h后,用流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡百分率;提取细胞端粒酶,用PCR-ELISA检测端粒酶活性;实时荧光定量PCR检测人端粒酶逆转录酶(hTERT),c-myc和bcl2-mRNA表达。结果辛伐他汀10和20μmo.lL-1与K562细胞作用48 h后,细胞凋亡率分别为(6.24±0.18)%和(9.41±0.22)%,与对照组(1.88±0.14)%比较明显增加;作用72 h后细胞凋亡率分别为(12.41±0.32)%和(19.08±0.26)%,与对照组(4.20±0.19)%比较明显增加。辛伐他汀10和20μmo.lL-1与K562细胞作用48或72 h后,端粒酶活性,hTERT,c-myc和bcl-2 mRNA表达明显低于对照组。结论辛伐他汀可使K562细胞端粒酶活性降低,其机制可能与下调hTERT mRNA表达有关。     

丙戊酸钠诱导K562细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)诱导K562细胞凋亡的可能机制.方法 将K562细胞分为经VPA 2.0mmol/L处理的实验组(A组)和正常对照组(B组),分别培养24、48、72 h.流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位改变,分光光度法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)8、Caspase-9蛋白活性.结果 A组细胞凋亡率、细胞线粒体跨膜电位破坏率呈时问依赖性地增加,且明显高于B组(P<0.05);与B组相比,A组不同时间的Caspase-8、Caspase-9活性均上调(P<0.05).结论 VPA诱导K562细胞凋亡的机制可能与线粒体跨膜电位崩溃或死亡途径有关.     

鬼臼毒素纳米脂质体对人白血病细胞的凋亡诱导作用

目的研究鬼臼毒素纳米脂质体对人白血病细胞K562的凋亡诱导效应。方法薄膜超声分散法制备鬼臼毒素纳米脂质体。不同浓度的鬼臼毒素和鬼臼毒素纳米脂质体分别处理K562细胞,MTT法检测细胞的增殖活性,细胞形态学改变和AnnexinⅤ/PI染色检测细胞凋亡。结果鬼臼毒素纳米脂质体对K562细胞增殖的抑制作用明显高于鬼臼毒素,24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.71、0.02、0.003μg·ml-1,而鬼臼毒素为1.50、0.12、0.05μg·ml-1;0.01μg·ml-1鬼臼毒素纳米脂质体处理24、72h,AnnexinⅤ/PI染色K562细胞凋亡率分别为91.1%和92.7%,但72h时以晚期凋亡为主;而0.01μg·ml-1鬼臼毒素处理的细胞凋亡率分别为63.4%和66.8%。鬼臼毒素纳米脂质体和鬼臼毒素处理后,K562细胞出现皱缩、胞膜起泡、凋亡小体等典型的细胞凋亡形态学改变。结论鬼臼毒素纳米脂质体较鬼臼毒素对白血病K562细胞具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效应。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及对细胞内活性氧和Ca2+动态变化的影响

目的研究辛伐他汀诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡及细胞内活性氧与Ca2+水平的变化,以探讨凋亡机制.方法20 μmol·L-1辛伐他汀处理K562细胞,24 h 后光镜观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧和细胞内游离Ca2+水平.结果20 μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞 48 h 后出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变;AnnexinV-FITC/PI检测细胞早期凋亡率,处理组凋亡率高于对照组,随药物作用时间延长逐渐增大,具有时间依赖性.荧光染料2',7'-二氯荧光乙酰乙酸(2',7'-dichloro fluorescein diacetate, DCFH-DA)检测K562细胞内活性氧,不同时间处理组与对照组比较活性氧均升高,峰值时间为 24 h,与对照组比较发生显著改变.荧光染料Fluo-3AM检测K562细胞内游离Ca2+浓度,不同时间细胞内游离Ca2+浓度均升高,峰值时间为 12 h,与对照组比较发生显著变化.结论辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过提高细胞内活性氧及游离Ca2+水平,从而导致细胞凋亡.     

舒尼替尼经线粒体内活性氧引起心肌细胞凋亡

目的探讨舒尼替尼引起心肌细胞凋亡的作用机制。方法 H9C2细胞分别用舒尼替尼0.1,1和10μmol.L-1处理24,48,72 h,MTT法测定细胞存活率;流式细胞仪分别测定处理24 h细胞的凋亡、细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(ΔΨm)水平及胱天蛋白酶3活性。结果与同一时间点正常对照组相比,舒尼替尼1,10μmol.L-1处理24,48,72 h后,细胞存活率分别明显下降了22%和32%(24 h);41%和68%(48 h);62%和82%(72 h)(P<0.05)。与正常对照组相比,舒尼替尼1,10μmol.L-1作用24 h后,心肌细胞内ROS水平显著升高(4.41±0.76 vs 8.68±0.74,3.57±1.45)(P<0.05),线粒体膜电位下降(309±6 vs 244±28,174±2)(P<0.05),胱天蛋白酶3活性升高(0.96±0.13 vs 59.40±13.17,79.90±0.06)(P<0.05)及细胞凋亡率增加(〔6.03±0.40)%vs(21.05±5.55)%,(59.05±4.62)%〕(P<0.05)。结论舒尼替尼可通过诱导心肌细胞内ROS的产生,经线粒体内途径引起心肌细胞凋亡。     

辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制。方法:取浓度为0(阴性对照组)、10、20、30μmol·L-1的辛伐他汀作用K562细胞72h后,双染色法检测细胞凋亡率;DNALadder实验检测细胞凋亡条带;用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白;逆转录-聚合酶链反应法检测GRP78、caspase-9、caspase-3、GADD153mRNA表达;Western blot法检测GRP78、caspase-12、caspase-9、caspase-3、GADD153、细胞色素C蛋白水平。结果:与阴性对照组比较,10、20、30μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞72h后出现典型的凋亡条带,凋亡率分别为12.41%、19.08%、23.41%(P<0.01),GRP78、caspase-9、caspase-3和GADD153 mRNA表达上调(P<0.05),caspase-12、caspase-9、caspase-3蛋白水平下降,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放,GRP78、GADD153蛋白表达上调。结论:辛伐他汀可通过内质网和线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

沙利度胺对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的影响研究

目的:研究沙利度胺对人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的影响。方法:将K562细胞分为对照(未加药)组和沙利度胺低、中、高剂量(0·5、1·0、2·0mmol·L-1)组,加入相应药物分别作用24、48、72、96h后,MTT法检测各组细胞生长抑制率,Wright-Giemsa染色观察各组细胞形态变化,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果:K562细胞的生长抑制率和凋亡率与沙利度胺浓度和作用时间均呈正相关;与对照组比较,沙利度胺3个剂量组作用72、96h后细胞的生长抑制率明显升高(P<0·05),4个时间点的细胞凋亡率均明显升高(P<0·01)。沙利度胺3个剂量组作用72h后,K562细胞出现细胞体积缩小等凋亡形态。结论:沙利度胺能够抑制K562细胞的增殖,呈一定的浓度和时间依赖性,并能够诱导K562细胞的凋亡。     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的 比较4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562/ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法 以依托泊苷和K562细胞为对照，用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间，MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率，普通光学显微镜观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果 8～128 mol·L^-1 GP-7处理48 h或64 μmol·L^-1 GP-7处理24～72 h，GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性（r=0.947，P＜0.05)和时间依赖性(r=0.999，P＜0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC₅₀分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol·L^-1；64 μmol·L^-1 GP-7作用48 h可使G₂/M期细胞明显增多，相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡，但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解，但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞；128及256 μmol·L^-1 GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48 h，GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷，但32和64 μmol·L^-1时作用则相反。结论 GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

榄香烯诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究榄香烯抗肿瘤的作用机制。方法用流式细胞仪和琼脂糖电泳检测DNA断裂,透射电镜观察超微结构变化。结果260μmol·L-1榄香烯孵育K562细胞6、12、24、48h后流式细胞仪检测到逐渐增强的凋亡峰,电泳发现明显的阶梯状条带,电镜观察到染色体聚集、凋亡小体。结论榄香烯能诱导K562细胞凋亡。     

细胞内游离钙在辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的　研究 3 羟 3 甲戊二酰辅酶A (HMG CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的机制。方法　以荧光染料Fura 2 /AM负载后荧光分光光度计法检测细胞内游离钙浓度 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪PI/膜联蛋白 (an nexin)V染色及半胱天冬酶 3激活来检测细胞凋亡。结果　辛伐他汀 30 μmol·L- 1孵育VSMC后 ,细胞内游离钙浓度显著升高 ,6h时达对照的 3倍以上 (P <0 .0 1) ,维拉帕米 80 μmol·L- 1与辛伐他汀 30 μmol·L- 1共同孵育VSMC 6h后细胞内游离钙浓度为 (14 4± 34)nmol·L- 1(P <0 .0 1)。辛伐他汀可诱导细胞凋亡率增高、“DNA梯状”样改变及半胱天冬酶 3的激活 ,这些变化均可被维拉帕米所逆转。结论辛伐他汀通过使细胞外钙大量内流而诱导VSMC凋亡。     

辛伐他汀对K562细胞Ras-MAPK信号通路的体内外研究

目的通过体内、外实验研究辛伐他汀对K562细胞Ras-MAPK信号通路的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的可能机制。方法体外培养CML细胞株K562细胞,做以下实验:①用流式细胞术(FCM)检测辛伐他汀处理K562细胞后其凋亡率的变化,②18只Balb/c-nu/nu裸小鼠皮下接种K562细胞,构建裸鼠的K562细胞移植瘤模型,③TUNEL法检测辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞早期凋亡的变化,④RT-PCR检测裸鼠体内外K562细胞N-ras、c-Raf-1、ERK1mRNA水平的变化。结果辛伐他汀在体外能明显诱导K562细胞凋亡,Ras-MAPK通路大多数基因出现差异表达。不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P<0.01);辛伐他汀能够引起N-ras、c-Raf-1、ERK1mRNA水平的明显差异表达(P<0.01)。结论辛伐他汀在体内外均能够引起参与K562细胞凋亡的Ras分子和Ras分子下游分子mRNA水平的变化,从一定角度说明辛伐他汀能依赖Ras-MAPK信号通路诱导K562细胞凋亡。     

钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺对人白血病细胞K562和K562/A02生长的抑制作用

目的研究钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺(EBB)体外抗白血病作用及机制。方法四唑盐(MTT)比色法评价EBB的细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞ROS水平;激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i含量。结果EBB明显抑制敏感K562和耐药K562/A02细胞增殖,IC50分别为(8.22±1.67)mol.L-1和(8.97±1.48)mol.L-1。EBB作用早期诱导凋亡,晚期引起坏死。K562/A02细胞的ROS静息值是K562细胞的2倍,EBB诱导两种细胞ROS生成呈浓度和时间依赖性,加入SOD明显降低坏死率。K562/A02细胞的[Ca2+]i低于K562细胞。EBB能明显增加两种细胞的[Ca2+]i。结论EBB明显抑制K562和K562/A02细胞增殖。信号分子Ca2+、ROS参与了EBB的细胞毒作用。     

丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用;PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响;An-nexin V/PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用。结果丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖,IC50分别为5.22和15.11μmol·L-1,且分别在2.5~10μmol·L-1和10~40μmol·L-1剂量范围内,G0/G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性;丹参酮2在100μmol·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为27.8%,无诱导其凋亡作用,但可以使G0/G1期细胞增多。结论丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡;丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用,但可将其阻滞于G0/G1期。