珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的:观察珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)孵育24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果:珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H2O2所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性.结论:珠子参总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase 9表达有关.     

白介素-15对过氧化氢诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的观察白介素-15(IL-15)对H2O2诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响及探讨其机制。方法体外培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(RLE-6TN),分为:(A)正常对照组;(B)IL-15预处理组;(C)H2O2损伤组;(D)IL-15预处理后H2O2损伤组。采用DAPI荧光染色及Annexin V-FITC/PI检测各组细胞凋亡,JC-1染色观察各组线粒体膜电位;RT-PCR检测各组细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,H2O2损伤能明显诱导RLE-6TN凋亡,IL-15预处理可明显降低H2O2诱导的细胞凋亡率,使细胞线粒体膜电位下降,Bcl-2 mRNA表达增加,Bax、Caspase-3mRNA表达降低(P<0.05)。结论 IL-15能抑制H2O2诱导的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡,其作用机制可能为稳定细胞线粒体膜电位,增强抗凋亡基因Bcl-2,同时,抑制促凋亡基因Bax表达,下调Caspase-3表达。     

微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。     

丁香酚诱导癌细胞PC-12凋亡的研究

目的 研究丁香酚诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC-12的凋亡作用机制。方法 用不同浓度的丁香酚处理PC-12细胞,MTT法检测细胞相对存活率,荧光染色观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3酶活性;real-time PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA水平的变化,Western blot检测蛋白水平的变化。结果 丁香酚能显著降低PC-12细胞存活率,促进Bax mRNA及蛋白表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达,进而提高Caspase-3酶活性。结论 丁香酚可能通过上调Bax、下调Bcl-2表达,激活Caspase-3酶活性,诱导PC-12细胞凋亡。     

柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶通路的调控效应研究

目的探讨柚皮素对体外培养的Aβ_25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关信号通路的调控机制。方法将生长至对数期的PC12细胞接种于培养瓶培养24 h,弃掉旧培养液后,随机分为空白组(培养液)、模型组(150μmol·L-1 Aβ_25-35)、实验组-1(4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35)和实验组-2(10μmol·L-1 U0126+4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35),使每组细胞浓度为20μmol·L-1(除空白组),给药24 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果空白组、模型组、实验组-1、实验组-2的细胞总凋亡率分别为(4.13±0.55)%,(34.70±1.66)%,(11.26±0.77)%,(23.52±0.80)%;Bax蛋白表达量分别是0.24±0.06,0.76±0.03,0.21±0.02,0.68±0.04;Bcl-2蛋白表达量0.61±0.04,0.20±0.04,0.55±0.03,0.34±0.02;Caspase-3蛋白表达量0.13±0.03,0.40±0.03,0.21±0.04,0.31±0.02;p-ERK1/2蛋白表达量0.86±0.03,0.48±0.06,0.78±0.04,0.50±0.07。模型组与空白组、实验组与模型组和实验组-2与实验组-1比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论柚皮素可通过丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)信号通路改变Bax、Caspase-3、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达量,抑制细胞凋亡,对Aβ_25-35损伤的PC12细胞有保护作用。     

六味地黄方含药血清对H_2O_2致HUVECs损伤的保护作用

目的研究六味地黄方(LWDHF)含药血清对过氧化氢(H2O2)损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并阐明其可能的机制。方法采用400μmol·L-1H2O2复制HUVECs损伤模型,LWDHF含药血清分为3个剂量干预组(体积分数为5%、10%、20%);MTT法测定细胞活力,Hoechst染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin VFITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR法检测Bax、Caspase-3等基因mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3、Bax等蛋白表达。结果 LWDHF含药血清能明显促进H2O2损伤后的HUVECs增殖;Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双染法结果均显示LWDHF含药血清抑制血管内皮细胞凋亡;RT-PCR和Western blot结果提示LWDHF抑制H2O2所致的血管内皮细胞凋亡可能是通过降低Caspase-3、Bax mRNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 mRNA和蛋白表达实现的。结论 LWDHF含药血清可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

银杏叶标准提取物对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏叶标准提取物EGB761对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞（PC12细胞）凋亡的保护作用及可能的机制。方法：PC12细胞常规培养生长至对数期,进行如下分组试验：正常对照组（NS）,H2O2组（H2O2,200μmol/LH2O2）,低剂量EGB761组（GL,10μg/mlEGB761＋H2O2）,中剂量EGB761组（GM,20μg/mlEGB761＋H2O2）,高剂量EGB761组（GH,50μg/mlEGB761＋H2O2）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定PC12细胞活力;流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率;分光光度计测定过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活力和抗氧化能力（T-AOC）以及丙二醛（MDA）含量;Western blot法测定胞浆内Bcl-2、Bax以及Caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,H2O2组的PC12细胞的活力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组的PC12细胞活力显著增强,且呈剂量依赖关系（P〈0.05）;GM组和GH组CAT,GSH-Px,T-SOD和活性和T-AOC均显著提高（P〈0.05）,MDA含量显著下降（P〈0.05）,GL组T-SOD活力和T-AOC水平升高以及MDA含量下降（P〈0.05）,而CAT和GSH-Px活力无显著变化（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组PC12细胞的Bcl-2的表达量增加,Bax的表达量下降,Bcl-2/Bax的比值显著增加（P〈0.05）,Caspase-3的表达显著降低（P〈0.05）。结论：H2O2可诱导PC12细胞凋亡,EGB761能显著抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡并对细胞有保护作用;EGB761有较强的抗氧化能力,通过其抗氧化作用改善H2O2诱导的氧化应激状态,并能显著提高Bcl-2/Bax的比值,抑制Caspase-3的活化,发挥保护作用。     

PUMA介导大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的研究

目的研究促凋亡蛋白p53上调凋亡调制物(PUMA)在大鼠缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡中的作用及意义。方法原代培养的大鼠心肌细胞缺氧5 h后复氧2～12 h以制备缺氧/复氧损伤模型,靶向PUMA的siRNA转染大鼠心肌细胞以建立PUMA沉默表达模型。采用Annexin V-FITC联合PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;分光光度法检测Caspase-3活性变化;RT-PCR、Western blot等方法分析PUMA及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的mRNA及蛋白表达变化。结果与正常对照组相比,H/R处理后心肌细胞凋亡率及Caspase-3活性迅速上升;PUMA mRNA及蛋白表达上调,凋亡相关蛋白Bax表达上调及Bcl-2的表达下调。靶向PUMA的siRNA转染后,Bax上调表达及Bcl-2下调表达的程度明显被抑制。结论在大鼠心肌细胞缺氧/复氧过程中,PU-MA表达明显升高,其可能通过下调Bcl-2表达及上调Bax表达导致Caspase-3活性增加以介导心肌细胞凋亡。     

姜黄素对急性肺栓塞大鼠细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对急性肺栓塞(PTE)后细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法健康雄性SD大鼠40只,随机分为5组(n=8):假手术组、模型组及姜黄素低剂组、中剂组、高剂组(腹腔注射50、100、150mg/kg)。采用颈总静脉注射自体血栓的方法制备大鼠PTE模型。取肺组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot方法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达明显上升,Bcl-2表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,姜黄素能明显降低细胞凋亡率及Bax、Caspase-3、Caspase-9表达,升高Bcl-2表达(P<0.05和P<0.01)。结论姜黄素能抑制PTE大鼠的肺组织细胞凋亡,与下调Bax、Caspase-3、Caspase-9表达,上调Bcl-2表达有关。     

非诺贝特改善脂多糖诱导的急性肺损伤及其机制研究

摘要：目的　探究非诺贝特（Fen）对急性肺损伤（ALI）的作用及机制。方法　（1）体内实验。30只C57BL/6雄性小鼠采用随机数字表法分成6组：正常组,模型组（LPS组）,阳性药地塞米松（DXMS）组,Fen低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组。分组给药12 h后,收集肺泡灌洗液（BALF）,处死小鼠,获取肺组织,记录肺组织湿/干质量比;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-1β含量;BCA比色法和瑞氏-吉姆萨染色检测BALF中总蛋白含量和免疫细胞数目;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病变并进行病理评分。Western blot检测肺组织B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）表达。（2）体外实验。实验设Control、LPS（10 mg/L）、LPS+Fen（5 μmol/L）、LPS+Fen（10 μmol/L）、LPS+Fen（20 μmol/L）组。A549细胞经LPS（10 mg/L）处理后分别加入5、10、20 μmol/L的Fen处理12 h,分别用DCFH-DA、Annexin V-FITC/PI法和Western blot检测Fen对A549细胞ROS、凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及p-JNK影响。另选取LPS（10 mg/L）+Fen（20 μmol/L）处理后添加H2O2（100 μmol/L）,观察细胞ROS、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化。此外,选取LPS（10 mg/L）+Fen（20 μmol/L）处理后添加JNK激动剂Anisomycin（3 μmol/L）,观察Bcl-2、Bax表达变化。结果　（1）与正常组相比,模型组小鼠肺组织湿/干质量比,肺组织损伤评分,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,肺泡灌洗液总蛋白含量,免疫细胞数目,p-JNK和Bax表达均出现显著升高,Bcl-2表达显著降低。与模型组相比,Fen低、中、高剂量组上述指标变化均被逆转。（2）Fen能显著减少LPS诱导的A549细胞ROS含量,降低凋亡率,抑制p-JNK和Bax表达并促进Bcl-2表达。H2O2可逆转Fen引起的上述效应。Anisomycin也能抑制Fen引起的Bcl-2上调和Bax蛋白下调。结论　Fen可通过ROS/JNK信号抑制细胞凋亡,从而减轻ALI。     

神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探索神经妥乐平对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制.方法 用CCK-8法检测细胞存活率,以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒体膜电位的变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生,qRT-PCR测定Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 PC12细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐下降.其中,450μM H2O2处理细胞24 h后细胞存活率、凋亡率、坏死率明显降低;细胞内活性氧水平表达明显升高;线粒体膜电位JC-1红/绿荧光比值下降;Bax和Caspase-3的mRNA表达升高,而Bcl-2的mRNA表达下降,以上指标与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而预先给予0.01UN/ml的NTP处理细胞12h可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和坏死率,减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位,抑制Bax和Caspase-3的mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA的表达,以上指标与H2O2组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NTP能抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关.     

美洲大蠊提取物对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨美洲大蠊提取物(PAS840)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤模型的保护作用及机制。方法:采用H₂O₂刺激PC12细胞建立神经细胞氧化损伤模型,实验分为正常组(Con)、模型组(Mod)、PAS840低中高剂量组(20,50,125 μg·mL^-1的PAS840培养基溶液进行处理),采用倒置显微镜观察细胞形态并采用CCK-8法检测各组细胞存活率,生化试剂盒检测各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的水平;DCFH-DA荧光探针检测各组活性氧簇(ROS)的水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1法染色检测各组细胞线粒体膜电位(MMP);RT-qPCR检测各组Nrf2/HO-1通路因子(Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1)、凋亡因子(Bcl-2、Bax和Caspase-3)、炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)、乙酰胆碱酯酶(AchE)和过氧化氢酶(CAT) mRNA的表达水平;Western blot法检测各组Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平。结果:PAS840可显著提高氧化损伤细胞的存活率、MMP及SOD、GSH-Px和GSH的水平,降低LDH、MDA和ROS的水平;显著降低Keap1、TNF-α、IL-1β、IL-6和AchE mRNA表达的同时,显著增加CAT和NQO1 mRNA的表达,显著降低Nrf2、Bax和Caspase-3的mRNA及其蛋白表达,显著增加HO-1和Bcl-2的mRNA及其蛋白表达。结论:PAS840可以抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,减轻炎症,其机制可能与降低ROS、调控Nrf2/HO-1通路因子减轻细胞的氧化损伤程度有关。     

缺血预适应对肢体缺血-再灌注后骨骼肌损伤和细胞凋亡的影响

目的 探讨缺血预适心(IPC)对肢体缺血-再灌注(LI-R)损伤后骨骼肌的保护机制.方法 雄性Wistar大鼠24只随机分为对照(C)组,缺血-再灌注(I-R)组和缺血预适应(IPC+I-R)组,每组8只.分别测定血浆乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)的含量;测定竹骼肌组织中ROS、MDA、Ca~(2+)、Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P_x)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达.采用原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡指数(AI).结果 与I-R组比较,IPC+I-R组血浆LDH,CK、ROS、MDA及骨骼肌组织中ROS、MDA、Ca~(2+)含量下降,骨骼肌组织中Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-Mg~(26)-ATP酶、GSH-Px、GSH、水平升高,骨骼肌组织Bax、Caspase-3表达明显减弱,Bcl-2表达增强,Bcl-2/Bax比值升高,AI下降.结论 IPC可能通过减少自由基生成和提高自由基清除酶的活性,降低钙超载抑制骨骼肌细胞的凋亡对LI-R后骨骼肌产生保护作用.     

新型金属铜络合物对SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的研究新型金属铜络合物(N-Cu)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法将不同浓度的N-Cu(0.3～24μmol.L-1)作用于体外培养的SMMC-7721细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 N-Cu可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈明显的量效与时效关系。随着药物浓度的增加,G0/G1期的细胞比率上升,G2/M和S期细胞比率下降,并促进凋亡率增加。N-Cu可上调细胞中Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,抑制Bcl-2基因及蛋白的表达,且均呈剂量依赖性。结论一定浓度的N-Cu可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。上调Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax比值,可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。     

甘草次酸的差向异构体对顺铂诱导H9c2心肌细胞损伤的保护机制

目的 探究甘草次酸（GA）的差向异构体18α-GA和18β-GA对顺铂（CDDP）诱导H9c2心肌细胞损伤的保护机制。方法 采用CCK-8法检测细胞活力,筛选CDDP诱导细胞损伤的浓度,18α-GA和18β-GA安全浓度以及18α-GA与18β-GA改善CDDP致心肌细胞活力下降的有效浓度;将细胞分为对照组、CDDP组、18α-GA组和18β-GA组,使用Hoechst染色检测各组细胞凋亡情况;流式细胞术检测活性氧（ROS）水平;Mito-Tracker Red CMXRos染色评估线粒体活性;Western blot法检测各组细胞剪切化胱天蛋白酶3(C-Caspase3)、B-淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）以及细胞色素C(Cyt-c)的蛋白表达。结果 CCK-8实验结果显示,CDDP在20μmol/L时可使H9c2心肌细胞活力显著下降（P<0.01）;18α-GA和18β-GA浓度小于100μmol/L时,对心肌细胞无明显影响,且50和100μmol/L时均可改善CDDP导致的心肌细胞活力的降低（P<0.01）。与对照组相比,CDDP组细...