MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2／信号转导子和转录活化子5（JAK2／STAT5）通路特异性抑制剂——苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血（MDS—RA）骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS—RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STATS、Bcl-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测方法；粒单集落刺激因子（GM-CSF）激活10例MDS—RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bcl—xL表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子自细胞介素（IL）-2、IL-3、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，FQ—PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAl（2、STATS、Bcl—xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组（P〈0．01），IL-2、INF-α水平差异无显著性；AG490组JAK2、STAT5、Bcl-xL基因表达与空白对照组比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平，进而影响JAK2／STAT5通路信号转导，下调Bcl-xL表达。     

溃疡性结肠炎患者外周血T-bet/GATA-3基因平衡的检测

目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者Th1、Th2类细胞因子和转录因子T-bet和GATA-3的相关性,探讨它们在UC患者发病机制中的作用。方法选择40例UC患者,分离外周血单核细胞,分别用酶联免疫吸附实验和RT-PCR技术检测UC患者血清中的IFN-γ、IL-4和外周血单核细胞转录因子T-bet和GATA-3的表达状态,同时以40例健康人作对照。结果 UC患者血清中IL-4水平较健康人降低,IFN-γ的水平升高;GATA-3mRNA表达水平下降,T-betmRNA表达水平升高。结论 UC患者外周血Th1/Th2比例失衡,可能与外周血中GATA-3基因表达下降、T-bet基因表达升高相关;T-bet/GATA-3的表达失调可能引起UC患者的细胞免疫紊乱。     

免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型胸腺T-bet的表达水平及其意义

目的：探讨再生障碍性贫血（AA）小鼠模型中T-bet蛋白在胸腺的表达水平和意义。方法：建立免疫介导的骨髓衰竭模型，用免疫组织化学方法检测AA胸腺组织石蜡切片中T-bet蛋白表达水平。结果：模型小鼠组胸腺组织石蜡切片中T-bet蛋白表达水平（1．06＋0．18）％明显高于正常小鼠组（0．41±0．05）％（P〈0．01）；模型小鼠组胸腺T-bet蛋白表达与网织红细胞相对值（RC）及中性粒细胞绝对值（ANC）呈负相关（r值分别为-0．679和-0．701，P〈0．05），而与血小板数及血红蛋白无明显的线性相关关系。结论：在免疫介导的骨髓衰竭模型小鼠中转录因子T-bet蛋白在胸腺表达增加，说明在AA发病机制中T-bet可能起一定作用。     

布地奈德对变应性鼻炎患者Th1/Th2细胞因子的影响

目的：观察布地奈德对变应性鼻炎患者的治疗效果和对Th1／Th2细胞因子表达的影响,探讨布地夺德治疗变应性鼻炎的机制。方法：72例变应性鼻炎患者分成布地夺德治疗组和滴通鼻炎水治疗组,分别予以布地奈德和滴通鼻炎水治疗：两组均于治疗前、治疗2周后分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定患者鼻分泌物中的Th1细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）以及Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-）含量,并与10例健康成年人（正常对照组）比较。结果：（1）治疗前两组患者鼻分泌物中IL-2、IFN-γ含量显著减少,而IL-4、IL-5含量显著增高,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;但两组间IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-5含量差异无显著性（P〉0．05）。（2）布地奈德治疗组治疗2周后患者鼻分泌物中IL-2、IFN-γ含量显著升高,而IL-4、IL-5水平明显降低,与滴通鼻炙水治疗组差异有显著性（P〈0.01）。（3）布地奈德治疗组疗效评定也优于滴通鼻炎水治疗组（P〈0．05）。结论：（1）变应性鼻炎患者体内存在Th1／Th2细胞因子失平衡状态：（2）布地奈德治疗变应性鼻炎疗效可靠,其治疗作用可能与纠正患者体内Th1／Th2细胞因子的失平衡状态有关。     

Th1／Th2细胞因子检测在自身免疫性甲状腺疾病中的诊断价值

目的研究Th1／Th2细胞因子在自身免疫性甲状腺疾病（AITD）中的诊断价值。方法选择Grave病（GD）21例、甲亢甲炎（GDⅢ）11例、桥本甲亢（HTL）11例、桥本甲状腺炎（HT）16例、20名正常人，通过酶免法检测血清Th1型细胞因子γ干扰素（IFN-γ）和Th2型细胞因子白细胞介素-4（1L-4）的含量。结果IFN-γ水平HT〉HTL〉GDm〉GD，IL-4水平GD〉GDⅢ〉HTL〉HT。GDⅢ和HTL组IFN-γ和IL-4水平均有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。结论Th1／Th2细胞因子失衡反映了AITD的病理改变和免疫功能紊乱，与甲状腺自身抗体检测相结合可成为AITD辅助诊断的指标。     

黄芪静脉应用对肺癌患者外周血单个核细胞中辅助性T细胞亚群状态的影响

目的 探讨肺癌患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中辅助性T细胞两个亚群（Th1／Th2）的功能状态及黄芪静脉应用对其的影响。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定了19例肺癌患者和10例健康对照者PBMC中Th1类细胞因子白细胞介素2（IL-2）和干扰素γ（IFN-γ）以度Th2类细胞因子IL-4、IL-6和IL-10的表达,并对肺癌患者与健康对照者及肺癌患者用黄芪前后上述指标进行比较。结果①19例肺癌患者IL-4、IL-6和IL-10的阳性表达例数分别为9、17和10,明显高于健康对照组,差别有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）,IFN-γ和IL-2的阳性表达例数分别为1和2,与健康对照组比较,差别无统计学意义（P〉0．05）;②肺癌患者用黄芪后IL-4、IL-6和IL-10的阳性表达例数分别降至2、7和3,与用药前对比,差别有统计学意义（P〈O．05）,IFN-γ和IL-2的阳性表达倒数升至7和11,与用药前比较,差别有统计学意义（P〈0．05）;③肺癌患者用黄芪后IL-2、IL-4、IL-6和IL10的阳性表达例数与健康对照组比较,差别无统计学意义（P〉0．05）,IFN-γ的阳性表达例数与健康对照组比较,差别有统计学意义（P〈0．05）。结论肺癌患者存在明显Th2优势应答,不利于机体抗肿瘤免疫;黄芪具有抑制肺癌患者PBMC Th2类细胞因子表达,增强Th1类细胞因子表达的作用,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

哮喘患者单个核细胞Th1／Th2和IFN-γ及IL-4 mRNA表达

目的探讨外周血单个核细胞Th1／Th2在哮喘发病中的作用和IFN-γ及IL-4 mRNA表达的情况。方法分别用流式细胞仪及RT-PCR方法检测97例哮喘患者及20例健康人外周血单个核细胞（PBMCs）Th1／Th2水平和IFN-γ及IL-4 mRNA表达。结果哮喘组外周血Th1细胞百分比低于对照组（P〈0．01），而Th2百分比高于对照组（P〈0.01）；哮喘组PBMCS IFN-γ的mRNA表达水平与对照组差异无统计学意义（P〉0．05），而IL-4 mRNA的表达显著高于对照组（P〈0．01）。结论哮喘患者体内存在Th1／Th2的失衡，并提示哮喘属于Th2优势疾病。     

狼疮性肾炎患者Th1／Th2细胞因子的研究

目的探讨狼疮性肾炎患者的发病与Th1／Th2优势活化状态之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法（FLISA）测定32名狼疮性肾炎患者和10名健康人PBMC培养上清白细胞介素-4（IL-4）,白细胞介素-10（IL—10）,干扰素-γ,（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）水平。结果活动期狼疮性肾炎患者IL-4、IL-10水平明显高于非活动期、正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）。活动期狼疮性肾炎患者IL-2水平明显低于非活动期、正常对照组。差异有显著性（P〈0．05）。IFN-γ水平3组间无显著性（P〉0．05）。结论Th2细胞因子介导的免疫应答在活动期狼疮性肾炎的发病机制中占主导地位,活动期狼疮性肾炎患者Th1细胞因子的细胞活化降低。     

IL-4和IFN-γ在反流性食管炎和Barrett食管活检黏膜中的表达及其与病理和内镜分级的关系

目的研究IL-4和IFN-γ在反流性食管炎（reflux esophagitis,RE）和Barrett食管（barrett’s esophagus,BE）活检黏膜中的表达及其与病理和内镜分级的关系。方法RE、BE患者和正常对照组各30例。记录RE患者内镜下表现以及RE和BE的病理表现。IL-4和IFN-γ在食管黏膜中的表达应用SABC法检测。结果IFN-γ在RE组（5．39±1．14）和BE组（5．94±1．79）表达的免疫组化评分均明显高于正常对照组（0．71±0．24）（P〈0．001）;IL-4在BE组（4．45±1．41）表达的免疫组化评分明显高于RE组（1．28±0．35）和正常对照组（0．80±0．20）（P〈0．001）;BE组病理损伤轻于RE组;RE组的IFN-γ表达分别与镜下分级（r=0．509,P〈0．01）、病理分级（r=0．493,P〈0．01）呈正相关。结论Th1／Th2免疫反应可能在RE和BE的发病机制中起到不同的作用,RE以Th1免疫反应为主,BE中则Th1、Th2免疫反应均起到重要作用。     

C型CpG单链寡核苷酸对哮喘小鼠Th1／Th2相关细胞因子的影响

目的C型CpG—ODN对哮喘小鼠Th1／Th2相关细胞因子的影响，为CpG-ODN进一步应用提供依据。方法利用人工合成C型的CpG-ODN（ODN-M362），将其注射于哮喘小鼠腹腔，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测注射后小鼠的Th1和Th2细胞因子的含量，分析其有无差异性。结果C型CpG-ODN组BALF中EOS数量，血清IL-4水平明显低于对照组和哮喘组（P〈0．01），血清IFN-γ明显升高于对照组和哮喘组（P〈0．01）。结论C型的CpG-ODN，对哮喘小鼠Th1／Th2失衡有明显的逆转作用。     

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病患者CD4＋T细胞亚群转录因子表达的变化及其临床意义

本研究通过检测CD4＋T细胞亚群特异性转录因子的mRNA（T-bet、GA TA-3、Foxp3、RORγt）在再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）和急性髓系白血病（AML）患者外周血中的表达变化,探讨3种疾病的细胞免疫状态及其作用机制.采用实时荧光定量方法检测AA组23例、MDS组42例、AML组17例和正常组16例外周血单个核细胞（PBMNC）中转录因子的T-bet、GA TA-3、Foxp3、RORγt mRNA表达并进行对比分析.结果显示：与正常组比较,AA组患者T-bet、RORγt mRNA的表达均显著增高（P＜0.01）,GATA-3、Foxp3表达减低（P＜0.01）.MDS组T-bet、GATA-3 mRNA表达无显著性变化,而Foxp3、RORγt表达均显著增高（P＜0.05）;MDS-RA组T-bet、RORγt表达均较正常组升高（P＜0.01）,GA TA-3表达显著性减低（P＜0.05）,Foxp3较正常组无显著性差异;MDS-RAEB和AML组T-bet、RORγt表达均低于正常对照（P＜0.05）,而GA TA-3、Foxp3mRNA表达均高于正常对照组（P＜0.01）.结论：AA、MDS不同阶段以及AML患者外周血中CD4＋T细胞转录因子表达水平不同,提示细胞免疫状态有差异,在AA和MDS早期阶段,异常免疫介导的造血细胞过度凋亡在骨髓衰竭中可能起重要作用,而在MDS晚期阶段和在AML时,恶性克隆的大量积聚可能是其主要原因.     

骨髓间充质干细胞对慢性特发性血小板减少性紫癜患者T细胞T-bet和GATA-3表达的影响

目的探讨正常人骨髓间充质干细胞体外对慢性免疫性血小板减少症患者T细胞T-bet、GATA-3以及下游细胞因子IFN-Y和IL-4表达的影响。方法采用Ficoll分离和直接贴壁、传代培养扩增骨髓间充质干细胞,用Ficoll法和尼龙棉柱法获取慢性免疫性血小板减少症患者外周血的T淋巴细胞;以5×104个/孔的MSCs作为基底层细胞,经植物血凝素(PHA)刺激后,与正常人骨髓间充质细胞共培养4天,收集T淋巴细胞和培养上清,采用RTPCR法检测T细胞中T-bet和GATA mRNA的表达水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清干扰素-Y(IFN-Y)和白细胞介素-4(IL-4)的浓度;对照组采用地塞米松治疗(5×10-5 mol/L)。结果实验中未检测到骨髓间充质干细胞本身分泌IFN-Y和IL-4;与T细胞+PHA组相比,骨髓间充质干细胞与T淋巴细胞共培养组在接受PHA刺激后,IFN-Y的表达明显降低(P0.05),IL-4表达升高(P0.05);同时显著降低T-bet(P0.05)和升高GATA-3(P0.05)的表达,这与地塞米松治疗组结果相似(P0.05)。结论间充质干细胞可能通过调节T细胞Tbet和GATA-3的表达对ITP患者发挥治疗作用。     

环孢菌素A对慢性再生障碍性贫血患者T-bet、GATA-3、相关信号分子、细胞因子及Th1/Th2的影响

本研究探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(CAA)免疫发病中的作用,从Th细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平研究环孢菌素(CsA)治疗慢性AA的免疫调节机理。采用实时荧光定量PCR(real-time FQ-PCR)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达;采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平,并与正常人进行比较。结果表明:慢性AA患者PBMNC T-bet、STAT4mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、Th1/Th2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(p0.01),经CsA治疗6月后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降,但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,GATA-3、STAT6mRNA表达、Th2比例、IL-4表达在治疗前后与正常人比较均无明显差异(p0.05)。结论:IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及Th平衡向Th1型偏移在AA免疫异常的发病过程中起到关键的作用;CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及纠正Th1过度极化而减轻AA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。     

儿童再生障碍性贫血骨髓间充质干细胞GATA-2基因表达的研究

目的 本研究旨在探索儿童再生障碍性贫血（AA）骨髓间充质干细胞（MSC）GATA-2基因的表达及意义.方法 采集38例AA患儿骨髓标本及20例正常儿童骨髓标本,分离骨髓单个核细胞后体外扩增培养骨髓基质细胞,实时定量PCR（QRT-PCR）方法检测AA儿童免疫抑制治疗前后GATA-2基因表达的变化.结果 AA儿童免疫抑制治疗前GATA-2基因表达水平明显低于正常对照组（P＜0.05）,免疫抑制治疗2年后对治疗有反应的AA儿童GATA-2表达水平高于发病时,且与正常对照组表达水平无统计学差异（P〉0.05）.结论 GATA-2基因的低表达可能影响AA患儿骨髓微环境的造血调控作用.     

异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL／6和BALB／c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组（normal）、单纯照射组（TBI）、骨髓移植组（BMT）和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组（BS）。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,Bs组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）;BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22＋CD4＋T细胞百分率高于IL-22＋CD8＋T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论：GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22＋的Th22细胞。     

骨髓衰竭患者骨髓间充质干细胞细胞因子的表达变化及其意义

本研究旨在探索再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓间充质干细胞（MSC）多种细胞因子的表达及其意义。用半定量RT-PCR方法在mRNA水平上检测AA和MDS患者骨髓间充质干细胞IL-1β、SCF、G-CSF的表达;用实时定量PCR（RQ-PCR）在mRNA水平上检测AA和MDS患者骨髓间充质干细胞TPO的表达。结果表明,AA组SCF的表达明显低于正常对照组（p〈0.05）,TPO的表达较正常对照组明显升高（p〈0.05）,IL-1β的表达与正常对照组相比无明显差异（p〉0.05）。MDS组SCF的表达明显低于正常（p〈0.05）,而IL-1β、TPO的表达与正常对照组相比无统计学差别（p〉0.05）。AA和MDS两组之间IL-1β、SCF、TPO的表达均无明显差异（p〉0.05）。各组均未见G-CSF的表达。结论：AA患者骨髓间充质干细胞SCF和TPO的表达存在明显异常,MDS患者骨髓间充质干细胞SCF的表达也存在异常。     

骨髓间充质干细胞移植治疗矽肺小鼠肺炎及肺纤维化

对矽肺的治疗现有的方法只对病毒感染和粉尘有效。间充质干细胞可以跨胚层分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞、肝细胞,胰腺细胞、支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞,甚至可以重建组织结构,给矽肺的治疗带来了新的思路和希望。目前的研究显示,干细胞移植治疗矽肺在纤维化形成以后,就没有更好的效果了。所以,如何逆转肺纤维化和修复肺组织一直是研究中比较棘手的问题。     

Notch配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞中表达研究

本研究检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平,探讨其与MDS发病的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测38例M DS患者和16例正常对照者骨髓间充质干细胞中Delta-like-1和Jagged-1的基因表达水平。结果表明,MDS患者的Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平较正常对照组均明显升高（P〈0.05）。在WHO分组中,RA/RARS、RCMD及RAEB组Delta-like-1的表达量均高于正常对照组（P〈0.05）,RARB组Jagged-1与正常对照组差异有显著性（P〈0.05）。Delta-like-1表达与骨髓原始细胞比例有显著相关性（r=0.502,P〈0.05）。伴染色体异常MDS组Deltalike-1和Jagged-1 mRNA表达水平较无染色体异常MDS组明显升高（P〈0.05）。在IPSS分组中,较高危组Deltalike-1表达显著高于较低危组（P〈0.01）,而Jagged-1表达在两组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：MSC中Delta-like-1和Jagged-1高表达可能参与了M DS的发病过程。     

再生障碍性贫血患者血清sVCAM-1、IL-18和VEGF水平及其临床意义

本研究探讨再生障碍性贫血（AA）患者血清可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）、白介素18（IL-18）和血管内皮生长因子（VEGF）水平及其临床意义。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测30例AA患者和25例正常人血清sVCAM—1、IL-18和VEGF水平。结果表明：AA患者血清sVCAM-1和IL-18水平分别为（839．08±173．97）ng／ml和（380．354-47．76）pg／ml,较正常对照组的（538．164-91．21）rig／ml和（256．39±59．52）pg／ml明显升高（p均〈0．01）;且重型AA的sVCAM-1和IL-18水平[（969．94±182．54）ng／m]、（388．96±46．06）pg／ml]较慢性AA的sVCAM和IL-18水平[（709．26±165．32）ng／ml、（352．21±47．08）pg／ml]升高更为明显（P〈0．01;P〈0．05）;而AA患者血清VEGF水平[（69．634-27．42）pg／ml]较正常对照组[（125．62±32．15）pg／ml]明显降低（P〈0．01）,且重型AA[（51．30±29．86）pg／ml]较慢性AA[（80．02±25．14）pg／ml]降低更显著（P〈0．01）。AA患者治疗后血清sVCAM-1和IL—18水平[（623．84±176．57）ng／ml、（295．25±89．31）pg／ml]较治疗前[（847．33±186．41）ng／ml,（368．50±62．02）pg／ml]明显降低（p〈0．01;P〈0．05）,而VEGF治疗后水平[（90．61±28．76）pg／ml]较治疗前[（63．93±26．04）pg／ml]则明显升高（p〈0．05）。结论：高水平的sVCAM-1、IL-18及低水平的VEGF细胞因子,可能与AA的发生、发展及病情进展相关。