外用中药绞股蓝对紫外线照射无毛小鼠皮肤组织影响的实验研究

目的研究外用绞股蓝紫对紫外线照射引起的无毛小鼠皮肤组织线粒体DNA损伤的作用。材料与方法将昆明种无毛小鼠随机分成5组：正常对照组、照射组、照射加绞股蓝低、中、高剂量组。模拟日光中uv长期照射,给药组照射同时外用绞股蓝。测定皮肤组织中线粒体DNA缺失情况。结果所有模型组小鼠皮肤组织中均存在mtDNA（3867bp）大片段缺失,而正常对照组以及给药组中的中、高剂量组小鼠皮肤组织中mtDNA（3867bp）大片段缺失的发生率和缺失占总mtDNA的百分比均显著低于照射组。结论绞股蓝可防止由紫外线照射引起的线粒体DNA损伤,对紫外线照射下的无毛小鼠皮肤具有保护作用。     

白藜芦醇对自然衰老小鼠皮肤线粒体DNA损伤的的实验研究

目的：研究白藜芦醇对自然衰老小鼠皮肤组织线粒体DNA的作用。方法：健康4月龄昆明种小鼠12只,作为青年组对照组（A）;健康18月龄昆明种小鼠60只,随机分为五组：老年空白对照组（B）,老年阳性对照组（C）,老年绞股蓝皂苷对照组（D）,老年白藜芦醇高剂量组（E）,老年白藜芦醇低剂量组（F）,以灌胃方式给药,测定皮肤组织中线粒体DNA的缺失情况。结果：白藜芦醇高剂量组可以降低mt DNA大片段缺失的发生率和缺失占总mt DNA的百分比。结论：白藜芦醇可防止自然衰老引起的线粒体DNA的损伤。     

绞股蓝对光老化皮肤组织的影响

目的探讨外用绞股蓝对紫外线照射引起的无毛小鼠光老化模型皮肤组织中过氧化氢酶（CAT）、谷光甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性和羟脯氨酸（HYP）含量的变化及其对光老化皮肤组织的影响。方法将昆明种无毛小鼠随机分成5组,制模同时,给药组外用绞股蓝。测定其皮肤组织中CAT、GSH—PX活性及HYP含量。结果模型组CAT、GSH—PX活性明显降低,HYP含量明显减少（分别为P〈0．01,P〈0．05,P〈0．05）,给药组中各指标均有不同程度的改善。结论绞股蓝可以通过提高CAT、GSH—PX的活性,增加HYP含量达到抗皮肤光老化的作用。     

生育男性和白细胞精子症患者精子线粒体基因缺失和含量的研究

目的:测定生育男性与白细胞精子症患者精子线粒体DNA(mtDNA)含量、mtDNA4977bp缺失及精浆活性氧(ROS)水平,探讨精液中白细胞增加、ROS水平升高与精子mtDNA变化的相关性。方法:选取门诊白细胞精子症患者78例(病例组)、正常生育男性31例(对照组),采用Percoll梯度离心法将精液样本分为上清层、30%层和80%精子层,分别应用荧光实时定量PCR技术对每个精子mtDNA含量及mtDNA4977bp缺失进行定量分析,同时应用流式细胞术测定精浆ROS水平。结果:病例组精浆中ROS含量显著高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,病例组各层精子mtDNA含量均显著升高,其P值均<0.01。在上清层和80%层,病例组mtDNA4977bp缺失与对照组差异不显著;而在30%层,病例组mtDNA4977bp缺失明显高于对照组(P<0.01)。对照组与病例组各样本中ROS含量分别与30%层精子和80%层精子的mtDNA含量间呈显著正相关(r=0.347,P<0.01;r=0.456,P<0.01),与上清层精子mtDNA含量无相关性。结论:白细胞增多和ROS升高可能是导致精子mtDNA含量显著增高的原因之一,但是对于mtDNA4977bp缺失没有显著影响。     

绞股蓝皂苷在小鼠皮肤衰老中的抗氧化损伤作用研究

目的:探讨绞股蓝皂苷对衰老小鼠皮肤的抗氧化保护作用。方法:60只小鼠随机分成3组,青年组(A)、老年对照组(B)和老年给药组(C);A、B组灌胃生理盐水20ml/kg,C组灌胃绞股蓝皂苷提取液8g/kg,每天1次。30天后取皮肤组织,检测丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:与A组比较,B组、C组皮肤组织中MDA含量增加,SOD、CAT、GSH-Px活性降低(P<0.05);与B组比较,C组皮肤组织中MDA含量减少,SOD、CAT、GSH-Px活性增加(P<0.05)。结论:灌胃绞股蓝皂苷可减轻衰老小鼠皮肤的氧化损伤,具有延缓小鼠皮肤衰老的作用。     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞线粒体DNA片段缺失的定位研究

目的对梗组性黄疸大鼠线粒体DNA片段缺失进行定位研究，为进一步研究梗阻性黄疸大鼠线粒体功能及肝功能的变化情况打下基础。方法48只健康wistar大鼠随机分为SHAM组（假手术组），BDO组（梗阻性黄疸组），利用大片段PCR结合ApaⅠ及SauⅠ限制性酶切分析及基因测序方法，对大鼠梗阻性黄疸mtDNA的片段缺失状况进行定位研究。结果大鼠梗阻性黄疸肝细胞mtDNA的片段缺失位点位于4101-15294之间。结论大鼠梗阻性黄疸肝细胞mtDNA存在着4101-15294碱基之间约11194bp的片段缺失。     

紫外线照射后无毛鼠皮肤胶原的变化及其定量分析

目的应用长波紫外线(ultraviolet，A，UVA，320～400nm)、中波紫外线(ultraviolet，B，UVB，280～320nm)及UVA UVB照射无毛鼠皮肤，观察不同种类紫外线(ultraviolet，UV)对无毛鼠真皮内胶原的影响，为临床防治皮肤光老化提供依据。方法无毛鼠经UV照射20周，UVA总剂量222J／cm^2，UVB总剂量5．9J／cm^2。通过组织化学(VanGieson和天狼星红染色)及超微结构观察，对接受UV照射后的无毛鼠皮肤胶原纤维进行对比观察，并应用彩色皮肤病理图像定量分析系统对胶原纤维含量进行定量分析。结果UVA照射后胶原纤维与正常对照相比变化不明显。经UVB及UVA UVB照射后胶原纤维变性、均质化、形成片块状，染色变浅，胶原纤维含量减少。Ⅲ型胶原纤维明显增多，Ⅰ型胶原纤维明显减少，两种纤维粗细不等，分布不均匀。超微结构观察可见经UVA UVB照射后，胶原纤维分布不均匀，排列紊乱，周期性横纹消失；横断面可见胶原纤维直径增大；毛细血管内皮细胞肿胀。结论通过对UV照射后无毛小鼠皮肤内胶原的结构和定量分析表明，UVB对胶原的损害明显较UVA强；UVB是UV造成皮肤胶原损害的关键成分。     

卵母细胞mtDNA4977bp缺失在卵巢储备功能下降中的研究

目的检测卵巢储备功能下降患者卵母细胞线粒体DNA(mtDNA)4977 bp缺失,探讨其对卵巢储备功能下降患者生育潜能的可能影响。方法选取湘雅医院生殖中心2008年3～9月行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的不育患者80例,按卵巢储备功能状态分为卵巢储备功能下降(DOR)和卵巢储备功能正常(NOR)两组,胚胎移植日收集两组患者成熟未受精MII卵母细胞110枚,DOR组46枚,NOR组64枚。采用聚合酶链反应(PCR)定性检测mtDNA 4977 bp缺失,比较两组患者卵母细胞mtDNA 4977 bp缺失率。结果 DOR组与NOR组比较,卵母细胞具有较高的mtDNA 4977 bp缺失率(48.8%vs 18.8%,P0.05),两者比较差异有显著性。Logistic回归分析显示,患者年龄对两组患者mtDNA4977 bp的检测结果无影响。结论 DOR患者卵母细胞mtDNA4977 bp缺失率增高,可能与其卵母细胞发育潜能下降相关。     

烧伤后早期心肌线粒体DNA大片段缺失的实验研究

目的　观察严重烧伤后早期大鼠心肌的过氧化损伤对其线粒体DNA(mtDNA)的影响。方法　将 36只SD大鼠随机分为假烫组、30 %TBSAⅢ度烫伤 1、3、6、12、2 4h组 ,半定量PCR法测定大鼠心肌mtDNA缺失情况 ,取各组大鼠心肌组织匀浆后测定超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。　结果　假烫组大鼠心肌mtDNA未见缺失 ;伤后 1、3、2 4h组大鼠心肌mtDNA出现4 834bp大片段的部分或完全缺失 (P<0.0 5或 0 .0 1)。与假烫组比较 ,伤后 1h组大鼠心肌组织中SOD活性明显下降 ,而MDA含量明显升高 (P <0.0 5 );伤后 6h组SOD活性达最低值 (76 .90± 8.30 )U/mg、MDA含量达最高值 (3.17± 0 .80 )nmol/mg( P <0.0 1)。　结论　烧伤后早期大鼠心肌组织受到严重的过氧化损伤 ,此为大鼠心肌mtDNA发生大片段缺失的重要原因     

不孕症患者子宫内膜细胞线粒体DNA缺失研究

目的女性受孕期间子宫内膜能量代谢正常与否,直接决定受精卵的种植成功率及胚胎正常发育。本研究拟探讨子宫内膜细胞线粒体DNA(mtDNA)缺失及能量变化与不孕症发生的关系。方法收集原发性不孕症(n=30)、继发性不孕症(n=27)及对照组(n=26)的子宫内膜组织,采用巢式多聚酶链反应(PCR)检测各组子宫内膜细胞中mtDNA缺失差异;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组mtDNA拷贝数变化;最后,比较各组子宫内膜组织的ATP含量差异。结果巢式PCR检测显示,原发和继发性不孕症患者子宫内膜细胞mtDNA 4 977bp缺失率分别为86.67%和78.78%,均显著高于对照组(38.46%)(P0.05);原发和继发性不孕症子宫内膜细胞mtDNA拷贝数明显增加,分别比对照组高48.49%和51.01%(P0.01),而ATP含量显著下降,分别比对照组低57.00%和61.29%(P0.01)。结论子宫内膜mtDNA缺失率增加,mtDNA拷贝数增加,引起子宫内膜能量代谢失调进而参与不孕症的发生。     

紫外线照射后无毛鼠皮肤弹性纤维的变化及其定量分析

目的应用长波紫外线(UVA,320~400nm)、中波紫外线(UVB,280~320nm)及UVA UVB照射无毛鼠,观察不同种类紫外线对无毛鼠真皮内弹性纤维的影响,为临床防治皮肤光老化提供实验依据。方法无毛鼠经紫外线照射20周,UVA总计量为222J/cm2,UVB总计量为5.9J/cm2。通过常规HE染色和Weigert法染色,对接受紫外线(UV)照射后的无毛鼠皮肤弹性纤维进行对比观察,并应用彩色皮肤病理图像定量分析系统,对弹性纤维含量进行定量分析。结果经UVA、UVB及UVA UVB照射后弹性纤维增粗、断裂、扭曲,部分弹性纤维集聚、缠结,排列方向紊乱,弹性纤维含量增加。结论通过对UV照射后无毛小鼠皮肤内弹性纤维的结构和定量分析表明,UVB对弹性纤维的损害明显较UVA强;UVB是紫外线造成皮肤弹性纤维损害的关键波长。     

中药单体及其组方对~(60)Co-γ致小鼠生精功能障碍的治疗

目的:依据现代中医理论,选择白藜芦醇、枸杞多糖、淫羊藿苷组成新的方剂,研究中药单体及其组方对60Co-γ致小鼠生精功能障碍的治疗作用。方法:105只雄性昆明小鼠随机分为7组,每组15只,A组正常饲喂,B、C、D、E、F、G组以60Co-γ6Gy和4Gy间隔7d两次全身均匀照射,1周后C、D、E、F、G组分别给予白藜芦醇悬液、白藜芦醇+枸杞多糖混悬液、白藜芦醇+淫羊藿苷混悬液、白藜芦醇+枸杞多糖+淫羊藿苷组方混悬液、白藜芦醇+枸杞多糖+淫羊藿苷+L-肉碱组方混悬液各80mg/(kg.d)灌胃60d,记录小鼠每天的一般状况、体征及体重变化,于灌胃结束24h后处死,测量小鼠体重和双侧睾丸重量,并计算睾丸指数;酶联免疫法测定血清FSH、LH、T和E2水平并计算T/E2比值;行睾丸组织学观察。结果:放射线损伤引起睾丸指数下降,灌药后有所恢复,以E、F、G组恢复较好;枸杞多糖对小鼠血清FSH、LH、T具有明显促进作用;淫羊藿苷能增加小鼠的血清T值,对睾丸增重有直接作用;E、F、G组能增加T/E2水平;各灌药组以F组效果最佳,能使小鼠紊乱的生殖内分泌水平恢复正常,使损伤的睾丸重新恢复生精功能。结论:中药单体组方制剂对60Co-γ导致的小鼠生精功能障碍治疗有效,且以白藜芦醇+枸杞多糖+淫羊藿苷组方混悬液组最佳。     

紫外线照射后无毛鼠皮肤纹理的变化及其定量分析

目的 通过用长波紫外线[ultraviolet A，UVA（320～400nm）]、中波紫外线[ultraviolet B，UVB（280～320nm）]及UVA＋UVB照射无毛鼠，观察不同种类紫外线对无毛鼠皮肤纹理的影响，为临床防治皮肤光老化寻找理论依据。方法 无毛鼠经紫外线照射20周、UVA总计量222J／cm^2，UVB总计量5．9J／cm^2。通过肉眼、皮纹放大及应用彩色皮肤病理图像定量分析系统，对接受紫外线（ultraviolet，UV）照射后的无毛鼠皮肤纹理进行对比观察。结果 对照组：皮纹细腻，皮沟、皮脊分布均匀，无明显角化。UVA组：皮肤略显粗糙，皮沟、皮脊分布尚均匀，无明显角化。定量分析结果与正常未照射组差异不明显。UVB组：皮纹粗乱，皮沟加深、加宽，皮脊增宽，分布不均匀，皮肤明显角化。定量分析结果与正常未照射组差异显著。UVA＋UVB组：皮纹更加粗乱，皮沟加深、加宽、皮脊增宽，分布不均匀，皮肤角化更加明显。定量分析结果与对照组差异显著。结论 通过对UV照射后无毛小鼠皮肤纹理的结构和定量分析表明，UVA对皮肤皱纹的产生作用不明显，UVB、uVA＋UVB对皮肤皱纹的产生明显，UVA、UVB有协同作用，UVB是紫外线造成皮肤皱纹产生的关键成分。     

针刺足三里对小鼠皮肤光老化的影响

目的：研究针刺足三里对紫外线照射引起的无毛小鼠皮肤光老化模型皮肤组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响。方法：实验选取2月龄健康昆明种无毛小鼠32只,雌雄各半,体重18～22g。随机分成4组：正常对照组、模型组、针刺组、电针组,每组8只。用紫外线灯管模拟紫外线照射,造成无毛小鼠皮肤光老化,造模同时针剌小鼠足三里,采用生化分析方法测定SOD活性及MDA含量。结果：与对照组比较,模型组无毛小鼠皮肤组织SOD活性明显降低（P〈0．01）,MDA含量明显增加（P〈0．05）;与模型组比较,针刺组和电针组对SOD活性有提高作用（P〈0．05）,并可降低MDA含量（P〈0．01）。结论：针刺足三里对紫外线照射引起的无毛小鼠皮肤光老化具有保护作用。其机制可能是：一方面足三里本身具有清除自由基的作用;另一方面可以通过提高SOD活力来达到抗氧化的目的,从而达到抗皮肤光老化的目的。     

Androgen blockade enhances response to melanoma vaccine

BACKGROUND: Because preclinical studies suggest an interaction between androgens and the immune system, we used a murine model to determine whether androgen blockade with flutamide might enhance the immunogenicity of an irradiated melanoma cell vaccine. MATERIALS AND METHODS: Forty C57BL/6 male mice were randomly assigned to four treatment groups: flutamide + RPMI (Group A), flutamide + irradiated B16 murine melanoma cells (Group B), placebo + RPMI (Group C), and placebo + irradiated B16 cells (Group D). Splenocyte proliferation and secretion of interleukin-2 and interferon-gamma were assayed after coculturing splenocytes with irradiated B16 cells. Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) against B16 cells was determined using peripheral blood lymphocytes. To examine the effect of treatment on tumor growth, a second set of 40 mice assigned to Groups A, B, C, and D underwent tumor challenge 7 days after the last treatment. RESULTS: Splenocyte proliferation was significantly higher in the two groups receiving flutamide at 50 mg/kg x 7 days (29% in Groups A and B vs 3% in Group C and 7% in Group D). Secretion of interferon was significantly higher in mice receiving flutamide + irradiated B16 cells (15.2 pg/ml in Group B vs 0, 1.7, and 4 pg/ml in Groups A, C, and D, respectively; P = 0.0024). Differences in interleukin secretion were not significant. ADCC was 26% in Group B vs 15, 8, and 22% in Groups A, C, and D, respectively (P = 0.0001). In the tumor challenge experiment, the rate of survival was 10% higher in mice receiving irradiated B16 + flutamide than in mice receiving irradiated B16 alone. CONCLUSION: Flutamide can enhance immune responses to an irradiated whole-cell melanoma vaccine. A clinical study of immunotherapeutic androgen blockade is warranted.     

血管内皮生长因子基因治疗联合外科延迟法改善大鼠腹壁超范围轴型皮瓣成活的研究

目的探讨皮下注射血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因、外科延迟两种方法及其联合应用对大鼠腹壁超范围轴型皮瓣成活的影响。方法取雄性Wistar大鼠48只,体重400～450g,制作大鼠以腹壁浅动脉为血管蒂的8cm×8cm超范围轴型皮瓣模型。随机分为六组,每组8只,分别为空白对照组（A组）、术时基因治疗组（B组）、术前基因治疗组（C组）、单纯延迟组（D组）、延迟同时基因治疗组（E组）和延迟后基因治疗组（F组）。术后7d,计算各组的皮瓣成活率;取皮瓣组织标本行HE染色,检测平均微血管密度及内径;取皮瓣组织标本行VEGF免疫组织化学染色检测VEGF165的表达。结果各实验组皮瓣成活率均显著高于A组（P〈0.05）;实验组中,E组皮瓣成活率显著高于其他各组（P〈0.05）,余各实验组间差异无统计学意义（P〉0.05）。微血管密度：B、C、E、F组显著高于A、D组,差异有统计学意义（P〈0.05）;B、C、E、F组间以及A、D组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。微血管内径：D组显著大于E、F组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而D组和E、F组均显著大于A、B、C组,差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫组织化学染色示A组及D组有少量VEGF165沉积,染色深度明显浅于其他各组。B、C组和E、F组可见毛细血管内皮细胞胞浆内有棕褐色VEGF165抗原抗体复合物的沉积,染色较深,部分沉积物呈带状围绕血管腔。各组实验动物角膜层均未见新生血管。结论皮下注射pcDNA4-VEGF165和外科延迟均能有效改善大鼠皮瓣的成活,但二者作用机制不同,而延迟的同时皮下注射VEGF基因能进一步提高大鼠皮瓣成活率。     

酚-巴豆油对无毛鼠光老化皮肤的治疗

目的 通过应用酚-巴豆油对经过长波紫外线（UVA）、中波紫外线（UVB）照射后的无毛鼠光老化皮肤进行治疗，检测酚-巴豆油对光老化皮肤的作用，为化学换肤的临床应用提供实验依据。方法 经紫外线照射20周无毛鼠60只，随机分为未治疗组10只，治疗组50只。乙醚麻醉，应用无菌棉签沾取配好的酚-巴豆油，涂光老化无毛鼠脊背部。分别于处理后7、14、30、60、90d将动物采用颈椎脱臼法处死，行苏木精-伊红（HE）染色。并在处理后第60天进行皮肤纹理图像的采集与分析。结果 经治疗后60d皮肤纹理变得细腻，皮沟、皮脊分布均匀。皮肤纹理定量分析结果与未治疗组差异显著。治疗组表皮、真皮结构随着时间的延长逐渐恢复，30d时基本恢复正常。结论 应用酚-巴豆油化学脱皮剂，对光老化的无毛小鼠进行治疗，通过皮肤纹理、皮肤的病理组织学检测证明，酚-巴豆油完全能逆转光老化引起的无毛小鼠表皮、真皮组织改变，使老化的皮肤恢复青春。这为临床应用酚-巴豆油治疗皮肤光老化疾病提供了实验基础。