Bloodletting Puncture at Hand Twelve Jing-Well Points Relieves Brain Edema after Severe Traumatic Brain Injury in Rats via Inhibiting MAPK Signaling Pathway

Objective:To investigate whether blood-brain barrier(BBB)served a key role in the edema-relief effect of bloodletting puncture at hand twelve Jing-well points(HTWP)in traumatic brain injury(TBI)and the potential molecular signaling pathways.Methods:Adult male Sprague-Dawley rats were assigned to the shamoperated(sham),TBI,and bloodletting puncture(bloodletting)groups(n=24 per group)using a randomized number table.The TBI model rats were induced by cortical contusion and then bloodletting puncture were performed at HTWP twice a day for 2 days.The neurological function and cerebral edema were evaluated by modified neurological severity score(mNSS),cerebral water content,magnetic resonance imaging and hematoxylin and eosin staining.Cerebral blood flow was measured by laser speckles.The protein levels of aquaporin 4(AQP4),matrix metalloproteinases 9(MMP9)and mitogen-activated protein kinase pathway(MAPK)signaling were detected by immunofluorescence staining and Western blot.Results:Compared with TBI group,bloodletting puncture improved neurological function at 24 and 48 h,alleviated cerebral edema at 48 h,and reduced the permeability of BBB induced by TBI(all P<0.05).The AQP4 and MMP9 which would disrupt the integrity of BBB were downregulated by bloodletting puncture(P<0.05 or P<0.01).In addition,the extracellular signal-regulated kinase(ERK)and p38 signaling pathways were inhibited by bloodletting puncture(P<0.05).Conclusions:Bloodletting puncture at HTWP might play a significant role in protecting BBB through regulating the expressions of MMP9 and AQP4 as well as corresponding regulatory upstream ERK and p38 signaling pathways.Therefore,bloodletting puncture at HTWP may be a promising therapeutic strategy for TBI-induced cerebral edema.     

薏苡仁提取液静脉注射对脑缺血大鼠存活率、存活时间及脑水肿影响的实验研究

[目的]观察薏苡仁提取液静脉注射对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠局灶性脑缺血损伤后存活率、存活时间及脑水肿的影响。[方法]选用雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组和薏苡仁提取液静脉注射组。用Longa法建立大脑中动脉栓塞模型后分别进行不同的干预,测定48 h后各组大鼠的脑含水量和脑系数,同时统计各组大鼠的存活率及存活时间。[结果]薏苡仁提取液静脉注射后,大鼠48 h内的存活时间延长,病变侧的脑含水量、脑系数降低。[结论]薏苡仁有提高脑缺血大鼠48 h存活率的趋势,可延长脑缺血大鼠48 h存活时间,对缺血性脑水肿有一定的改善作用。     

Wake-Promoting Effect of Bloodletting Puncture at Hand Twelve Jing-Well Points in Acute Stroke Patients: A Multi-center Randomized Controlled Trial

Objective: To assess the effect and safety of bloodletting puncture at hand twelve Jing-Well points (HTWPs) in acute stroke patients with conscious disturbance. Methods: In this multi-center and randomized controlled trial, 360 patients suffered from ischemic or hemorrhagic stroke with conscious disturbance within 48 h from the onset of symptom were divided into bloodletting (180 cases) and control (180 cases) groups using a block randomization. Patients in both groups received routine Western medicine, and patients in the bloodletting group received additional bloodletting puncture at HTWPs on admission immediately before conventional treatment. The primary outcome measure was Glasgow Coma Scale (GCS) score and the secondary outcomes included blood pressure, respiratory rate and pulse rate. All variables were evaluated at baseline (before bloodletting), 0 (after bloodletting immediately), 15, 30, 50 and 80 min post bloodletting. Results: At 80 min post bloodletting, the proportion of patients with improved consciousness in the bloodletting group was greater than the control group (P<0.05). In the separate analysis of moderate consciousness disturbance subgroup, bloodletting therapy benefited ischemic patients, and improved the eye and language response of GCS score at 15, 30, 50, 80 min post bloodletting (P<0.05 or P<0.01). No significant differences were observed regarding the secondary outcomes between two groups (P>0.05). Conclusion: The bloodletting puncture at HTWPs was safe and could improve conscious levels of ischemic stroke patients, highlighting a first-aid intervention for acute stroke. (Registration No. ChiCTR-INR-16009530)     

静脉注射用免疫球蛋白对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨静脉注射用免疫球蛋白(Intravenous immune globlin,IVIG)干预对大鼠脑缺血/再灌注损伤后补体系统激活和脑水肿的影响.方法 SD大鼠随机分为假手术组、山梨醇注射组(山梨醇组)和IVIG注射组(IVIG组).采用Longa改良线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,造模后进行运动功能评分.用免疫组化法测定大鼠脑组织补体成分C5a的表达,用干湿重法测定脑含水量.结果 大鼠脑缺血/再灌注后,IVIG组和山梨醇组术侧补体C5a在12 h即可见表达,第3天达到高峰,第7天仍高于健侧.山梨醇组和IVIG组术侧脑含水量在脑缺血/再灌注12 h上升,第1天到达高峰.补体C5a的表达增加与脑含水量的上升趋势基本一致.在IVIG组各时间点补体C5a表达水平和脑含水量均较山梨醇组低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脑缺血/再灌注后补体系统激活加重了脑水肿,IVIG能通过抑制补体有效减轻脑水肿.     

单纯吻合指动脉行末节断指再植疗效观察

目的探讨单纯吻合指动脉末节断指再植的方法和疗效。方法回顾性分析单纯吻合指动脉的末节断指再植34例(39指),按照常规方法行指动脉端端吻合,所有病例均行甲床放血,部分病例行再植指侧方切开放血,维持3～5d即可建立有效循环。结果 39指成活36指,失败3指,成活率92.3%。术后随访3～6个月,再植指体指腹饱满,皮色及皮温正常,再植指体远端痛温觉均有不同程度恢复,两点辨别觉为3～6mm。结论单纯吻合指动脉的末节断指再植,缩短手术时间,提高成活率,术后外形及功能恢复良好。     

中风康对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响

目的 探讨中风康对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响。方法 采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型，以步长脑心通为对照，于脑缺血6、12、24、48h动态观察中风康对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响。结果 与假手术组比较，大鼠局灶性脑缺血6h，模型组出现明显脑水肿（P〈0．01），随缺血时间延长，水肿逐渐进展，至24h水肿达到高峰（P〈0．01），与同时点模型组比较，各治疗组脑水肿均有不同程度减轻，以中风康高剂量组减轻最为显著（P〈0．01）。结论 中风康可减轻脑水肿，有效维护血脑屏障的完整性，减轻局灶性脑梗死引起的缺血性损伤。     

心脉通冲剂抗应激性及对脑缺血作用的实验研究

目的：观察心脉通冲剂对小鼠应激性反应及大鼠脑缺血缺氧保护作用的影响。方法：采用常压耐缺氧、抗疲劳游泳和脑缺血缺氧实验检测小鼠存活时间，用双侧颈总动脉结扎法分别检测对大鼠实验性脑缺血及对脑毛细血管通透性的影响。结果：心脉通冲剂能明显提高小鼠抗缺氧能力，延长游泳时间，降低脑缺血大鼠的脑指数及脑水肿，降低脑毛细血管通透性。结论：心脉通冲剂可提高机体抗应激反应的能力，对脑缺血缺氧具有保护作用。     

乌司他丁对大鼠心肺复苏后脑水肿和超微结构的影响

目的:研究乌司他丁对心肺复苏后早期脑水肿和脑超微结构的变化的影响.方法:建立大鼠心肺复苏模型,120只大鼠随机分成对照组、复苏组和药物组(每组再按时间分即刻、1/2 h、3 h、6 h、9 h五亚组),检测心肺复苏后各时相脑组织水含量及伊文氏兰(EB)含量的变化,以电镜观察各时相脑组织超微结构.结果:复苏组心肺复苏后1/2 h、3 h、6 h、9 h脑组织水含量持续增加,6 h后EB含量升高,电镜观察各时间点见细胞水肿,6 h后V-R间隙明显扩大;药物组仅于复苏后1/2、3 h有脑组织水含量的增加,6 h后水含量回降,各时间点EB含量无明显升高,复苏后6 h开始超微结构改变明显减少.结论:乌司他丁可通过抑制脑水肿,对大鼠心肺复苏后早期脑损伤起到一定的保护作用.     

十二井穴刺络放血联合薏苡仁对颅脑创伤性脑水肿作用的研究进展

十二井穴刺络放血和中药薏苡仁已被广泛应用于临床治疗,两者单独应用也取得不同程度的临床疗效,但对于他们联合应用治疗颅脑损伤的机制及治疗效果的研究报道少之又少。文章查阅了大量文献,总结出十二井穴刺络放血对颅脑创伤性昏迷患者的醒脑开窍作用和通过调节氢离子（H⁺）、钾离子（K⁺）、钠离子（Na⁺）、钙离子（Ca²⁺）等离子而达到减轻脑水肿及神经保护作用的中西医理论依据,并且阐述了薏苡仁治疗创伤性脑水肿的研究进展,以及两者联合应用对颅脑创伤性脑水肿的疗效。     

甘草酸二胺对大鼠脑出血后脑水肿的疗效研究

目的 观察甘草酸二胺对大鼠脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)后脑水肿的疗效.方法 参照Rosenberg等报道的方法制备大鼠脑出血模型,术后24 h对大鼠进行头颅磁共振(Magnetic resonance,MR)扫描,判断脑出血模型制作是否成功,将模型制作成功大鼠随机分为脑出血模型组、甘草酸二胺治疗组,另设假手术组,所有大鼠第5天MR扫描后处死,采用干湿重法测定大鼠脑组织含水量,用ELISA法测定脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNT-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的表达水平.结果 脑出血模型组大鼠脑含水量、脑组织中TNF-c、IL-1β、IL-6水平明显高于假手术组,甘草酸二胺治疗组脑含水量、TNF-α、IL-1β、IL-6较模型组明显下降(P＜0.01).磁共振扫描显示模型组血肿血肿周围水肿范围明显增大,甘草酸二胺治疗组血肿周围未见明显水肿.结论 甘草酸二胺能减轻大鼠脑出血后脑水肿,其机制可能与减轻炎症反应有关.     

灯盏花素冰片注射液对实验性脑缺血的保护作用

目的:研究灯盏花素冰片注射液(SBI)对大鼠局灶性脑缺血和小鼠缺血缺氧性损伤的保护作用。方法:采用大鼠急性不完全性脑缺血实验,以大脑皮层含水量为指标初步筛选组方剂量。采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型(MCAO)对模型大鼠进行神经症状和行为学评分,测定大脑皮层含水量,计算脑梗死区百分比,组织病理切片观察海马损伤程度,并测定脑组织内总抗氧化能力(T-AOC),丙二醛(MDA)和乳酸(LD)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na -K -ATP酶、Ca2 -Mg2 -ATP酶、总ATP酶(T-ATP)活力等生化指标;采用小鼠急性不完全性脑缺血实验和小鼠常压耐缺氧实验,测定其存活时及对耐缺氧能力的影响。结果:灯盏花素12mg/kg与冰片0.48mg/kg配伍对模型大鼠降低其脑含水量作用最为显著。与模型对照组比较,SBI组尾静脉注射能使动物的神经行为学评分,脑梗死率和脑含水量显著降低,能显著改善海马区神经元的形态,同时还能明显增强MCAO后大鼠脑组织内T-AOC能力,增加脑组织SOD,显著减少脑组织内MDA含量,同时对于脑组织内CK活力、LDH活力也有显著的增加作用,还能显著减少MCAO后大鼠脑组织LD含量,显著增加Na -K -ATP酶、Ca2 -Mg2 -ATP酶及T-ATP酶活力。结论:SBI高剂量组可以极显著延长急性不完全性脑缺血小鼠存活时间和耐缺氧能力。结论:SBI对实验性脑缺血具有保护作用。     

手十二井穴刺络放血后脑卒中好发区组织液流动速率变化规律研究

目的 应用MRI示踪技术,定量分析与观察手十二井穴刺络放血后脑卒中好发脑区（丘脑及大脑中动脉供血区）脑细胞外间隙的解剖与组织液流动速率的变化规律,探讨该法对脑卒中神经保护的可能机制.方法 成年雄性SD大鼠（32只）,随机分为丘脑放血组、丘脑对照组、尾状核放血组、尾状核对照组,每组各8只.丘脑放血组及尾状核放血组接受手十二井穴放血后,将2 μL 10 mmol/L GD-DTPA分别导入成年大鼠丘脑区及尾状核区,在导入前后分别进行脑MRI动态扫描（0,15 min、30 min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h）,利用图像后处理技术,定量分析丘脑区及尾状核区脑组织液引流以及脑细胞周围间隙迂曲度等参数的变化规律.结果 丘脑放血组脑组织液流动速率下降,清除时间延长,半衰期达（1.34±0.19）h,长于丘脑区对照组（0.51±0.13）h,差异有统计学意义（P＜0.05）;局部微观清除率为（7.60±4.18）×10-5/s,明显小于丘脑对照组[（14.40±4.50） ×10-5/s],差异有统计学意义（P＜0.05）.丘脑放血组丘脑区脑细胞周围间隙迂曲度为（1.29±0.32）,与丘脑对照组（1.28±0.17）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.尾状核放血组及对照组之间的各项参数未见明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 手井穴刺络放血可明显改变丘脑区组织液流速,但对大脑中动脉供血区的脑组织液引流速率没有明显影响.由于刺络放血后丘脑区细胞外间隙的迂曲度没有明显变化,因此,其流速下降应与神经元代谢水平的下调有关,而代谢水平的下调可能是卒中时该法神经保护的机制.     

急进高原大鼠形态学变化与早期脑水肿关系的研究

目的 为阐明急进高原脑组织病变发病机制,对急进高原大鼠在高原环境下脑组织形态学变化和脑含水量的改变进行相关研究.方法 解剖、观察Wister大鼠高原1、3 、7 d组脑组织大体形态变化.H-E染色,光镜观察脑组织学变化;电镜观察脑组织超微结构变化.测定脑组织含水量.结果 光镜下,脑组织出现明显炎症反应,脑组织充血水肿,内有大量的炎性细胞.电镜下,神经元细胞出现凋亡.脑组织含水量与对照组比较,1、3、7 d组含水量增加（P＜0.05）.结论 高原脑组织损伤的发生与高原缺氧有关.推测缺氧使脑毛细血管壁通透性增加、脑水转运功能障碍;脑细胞发生凋亡,脑组织内液体大量聚集,引发脑水肿.     

亚低温对实验性大鼠脑出血后血肿周围组织MMP-2/9表达的影响

目的:研究亚低温对脑出血后MMP-2/9表达及脑水肿的影响,探讨亚低温对出血性脑水肿的作用机制。方法:以立体定向技术在大鼠尾状核注射自体血制作脑出血模型;用冰块降温及白炽灯照射加温的方法调节体温;应用免疫组化方法检测脑组织MMP-2/9表达。结果:脑出血模型大鼠血肿周围MMP-2/9的表达水平明显高于假手术组(均P<0.01);各个时间点亚低温组大鼠病灶侧血肿周围MMP-2/9的表达水平均明显低于常温对照组(P<0.05～0.01)。结论;亚低温能明显减轻脑出血后MMP-2/9的表达,亚低温可能通过抑制MMP-2/9的表达而减轻脑水肿。     

丁咯地尔对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织MMP-9与TIMP-1的影响

目的:观察丁咯地尔对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,探讨丁咯地尔的脑保护作用机制.方法:健康SD大鼠108只随机分成假手术组、对照组和丁咯地尔治疗组,每组36只,18只用于检测MMP-9、TIMP-1,18只测量脑组织含水量.大鼠建立脑缺血再灌注损伤模型,缺血时间为1 h,假手术组仅在颈外动脉处穿线;对照组制作脑缺血再灌注模型,不作干预;丁咯地尔治疗组于再灌注时经尾静脉给药(赛来乐3 ml/kg,每ml含丁咯地尔10 mg).分别于再灌注后1 d、2 d和3 d处死,每个时间点6只大鼠,断头取脑,以干湿重法测量缺血侧脑组织含水量;用免疫组化方法检测MMP-9与TIMP-1阳性细胞的表达情况.结果:在各时间点丁咯地尔治疗组脑组织含水量低于对照组,丁咯地尔治疗组MMP-9细胞阳性率低于对照组,而TIMP-1细胞阳性率仅在再灌注后第3 d时高于对照组(P＜0.05).结论:丁咯地尔可能通过调节MMP-9/TIMP-1表达,发挥抗脑水肿作用.     

手十二井穴刺络放血法对实验性脑缺血组织一氧化氮浓度的影响

采用凝结大脑中动脉的大鼠脑缺血模型 ,观察手十二井穴刺络放血法对大鼠脑缺血组织一氧化氮 (NO )浓度的影响。实验结果表明 :缺血 10min后 ,刺络组、凝结组NO2 - 浓度均上升 ,30min时 ,凝结组继续上升 ,与自身对照组有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;而刺络组 ,NO2 - 浓度下降 ,与自身对侧对照组无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,提示针刺具有降低脑缺血后脑组织中升高的NO2 - 浓度 ,从而可起到减轻NO神经毒性 ,保护脑神经细胞的作用     

实验性脑梗死后脑组织单核细胞趋化蛋白-1的表达及意义

目的探讨实验性脑梗死大鼠脑组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及其意义。方法将健康雄性SD大鼠42只随机分为假手术组和脑梗死组。参照longa等方法制成大鼠局灶性大脑中动脉阻断(MCAO)模型,于术后6 h、24 h、48 h、72 h、7 d分别处死动物,检测脑组织的含水量,病理切片HE染色观察组织病理学改变,免疫组织化学的方法测定MCP-1的阳性细胞数。结果脑梗死后脑组织MCP-1表达于6 h开始增多,24 h达到高峰,48 h仍高于假手术组,7 d明显减少,与梗死灶周围单核/小胶质细胞浸润及脑水肿变化规律基本一致。结论脑梗死后脑内MCP-1的表达与脑水肿形成有关,且促进了单核巨噬细胞的聚集和小胶质细胞的活化,其参与了脑缺血损伤后的炎症免疫反应。     

脑外伤大鼠脑组织及外周血中ET-1、VEGF表达对脑水肿及微血管变化的影响及意义

目的观察脑外伤早期大鼠脑组织及外周血中内皮素(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化,探讨两者的相关性及两者与脑水肿、微血管动态变化的关系。方法 70只Wistar大鼠随机分为对照组和外伤组,采用自由落体打击法制做大鼠脑外伤模型。按伤后处理时间不同各组再分为7个亚组,每组5只,分别于1 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d不同时间点处死大鼠。采用干湿重法检测损伤侧脑组织含水量;免疫组化法检测大鼠损伤灶周围皮层、海马区脑组织中ET-1、VEGF的表达,并采用ESLA法检测外周血中ET-1、VEGF的水平变化;CD34标记损伤灶周围脑皮层区微血管,所得结果进行统计学处理。结果脑外伤组各时间点损伤侧脑组织含水量及损伤灶周围皮层、海马区脑组织以及外周血中ET-1、VEGF的表达均高于对照组(P0.01);并且外伤早期ET-1、VEGF的表达与脑组织含水量呈正相关(P0.05),与微血管面密度变化呈负相关(P0.05)。结论脑外伤后外周血及脑组织内存在ET-1、VEGF的过量表达,并且参与调控微血管变化及脑水肿的发生,测定外周血中ET-1、VEGF的含量可成为判断外伤性脑水肿中微血管变化以及脑组织含水量的指标及治疗依据。     

早期诊断脑梗死的磁共振成像方法对比及病理基础

目的:比较3种MRI检查方法在早期脑缺血疾病中的诊断价值及早期脑缺血的病理改变。方法:线栓法建立右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分为对照组、栓塞15min、30min、1h、2h、4h、6h组共7组,共42只大鼠(n=6)。应用扩散加权成像(DWI)、T2FLAIR和常规T2WI检查,比较右侧基底节出现高信号的时间、测量不同时相点高信号相对面积(rS),取对应部位脑组织进行病理观察。结果:对照组的3种MRI序列均未见异常信号,DWI在栓塞后15min均显示高信号区(6/6),高信号面积和强度随时间不断增加,在2h内增高明显,与T2FLAIR和T2WI比较差异显著(t=25.76,P<0.01);4h～6h呈缓慢上升;但显示梗死边界欠清,解剖定位不准;栓死后2h,大部分(4/6)在T2FLAIR像上显示高信号区,高信号面积与T2WI比较存在差异显著(t=10.86,P<0.05),可确切显示缺血范围;栓塞后4h有4例(4/6)实验大鼠在T2WI像上出现清晰高信号。3种序列在4h后显示的高信号强度均无明显差异(F=26.12,P>0.05)。结论:DWI信号能反映细胞内水肿程度;T2FLAIR高信号为混合性脑水肿;T2WI只能反映血管性水肿及组织坏死。DWI是诊断早期脑缺血的首选成像方法,其次是T2FLAIR;为了全面显示缺血部位的综合情况,应联合应用3种成像方法。     

短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠海马脑组织水通道蛋白4表达及神经元凋亡的影响

目的 探讨短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠海马脑组织水通道蛋白4表达及神经元凋亡的影响.方法 健康老年Wistar大鼠160只按Pnsinelli方法建立四动脉阻断法全脑缺血模型,随机分为脑缺血1 min组、脑缺血3 min组、脑缺血5 rain组和假手术组,每组40只.每组又按再灌注时间分为再灌注12 h、1 d.2 d.3 d和7 d 5个亚组,每个亚组8只.应用干湿重法计算脑含水量、组织病理学染色观察神经元微观结构,免疫组化方法观察AQP4的表达,TUNEL法检测神经元凋亡.结果 缺血1 rain及3 min组各再灌注时间点脑组织含水量及AQP4表达与假手术组比较差异无统计学意义(P0.05),而缺血5 min组各再灌注时间点脑组织含水量及AQP4表达与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05).假手术组及缺血1 min组有少量神经元凋亡,缺血3 min及缺血5 min后海马区神经元凋亡明显增加.神经元凋亡在缺血后再灌注12 h即有表达,在1 d达高峰,持续至第3天开始下降.结论 老年脑对缺血再灌注损伤的敏感性增加,短暂的脑缺血即可造成老年大鼠脑组织的水肿和AQP4表达及神经元凋亡的增加,神经元的凋亡较脑水肿或AQP4表达对缺血更为敏感;再灌注后神经元凋亡高峰出现得早,持续时间长.