具挡板摇瓶在林可霉素产生菌种子培养中的应用

林可霉素发酵的特点是在菌丝体生长的同时合成抗生素。因此,在发酵时提高种子接种量,可增加林可霉素的生物合成。林可霉素的罐发酵通常将摇瓶种子接种于一级种子罐。为提高一级种子罐的接种量,可增加种子摇瓶数量,但增加了染菌机会;而大容积摇瓶又不易办到;如增加装量,则由于培养基内溶解氧浓度的降低会使菌丝体的生长和代谢受到影响。本厂在林可霉素生产中采用了壁底具有面积为1cm~2的挡板的摇瓶,经四年来生产     

生物素与氨基酸对林可霉素生物合成的影响

在合成培养基中利用林可链霉菌发酵生产林可霉素。当向培养基中加入生物素和氨基酸时，林可霉素的产量受到很大影响。本研究中首先采用两水平因子设计法筛选出6个显著影响因子，即生物素、谷氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和酪氨酸；然后采用中心组合设计法．得到上述6因子的优化含量分别为30μg／L、100．5、83、29、117．5和58．5mg／L；最后在摇瓶中进行验证实验，优化条件下发酵液的生物效价为2116μg／ml；对照样品Ⅰ（培养基中无生物素和氨基酸）和Ⅱ（培养基中按原配方加入6个显著影响因子）的生物效价分别为893和1481μg／ml，与样品Ⅰ和Ⅱ比较，生物效价分别提高136．62％和42．88％。     

麦考酚酸产生菌液体发酵条件的优化

研究了短密青霉菌L产生麦考酚酸的发酵工艺条件，包括斜面培养基种类、初始pH、培养温度、碳氮源种类等，并通过均匀设计法优化了发酵培养基的组成。在优化条件下，摇瓶发酵单位达8565μg／ml，比优化前提高了89％。     

变温培养工艺在林可霉素发酵上的应用

研究在林可霉素发酵的不同阶段采用不同的培养温度对生产菌菌丝形态和发酵单位的影响，改进了林可霉素发酵的传统恒温培养工艺。培养起初60h维持在31℃，随后降到30℃培养70h，再回升至31℃培养至放罐，结果显示：生产菌中、后期菌体浓度下降幅度减小，菌丝上的空泡缩小，美兰染色加深，自溶期推迟；平均单批放罐总亿提高了4．4％，同时可以缓解冷却水水源不足和减轻染菌对发酵水平的影响。     

链霉菌702抗药性致死突变标志微波诱变筛选研究

目的 筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株.方法 分别以链霉菌702菌株为试验材料和以庆大霉素为敏感抗生素建立链霉菌702孢子致死突变标志的微波诱变筛选模型,通过微波对链霉菌702菌株孢子进行不同时间的诱变处理,将诱变处理后的孢予悬液涂布于含致死浓度的庆大霉素的PDA平板培养基上,获得抗庆大霉素突变株,分别挑取单个抗药性突变菌株进行摇瓶初筛和复筛.生物效价测定采用一剂量法.结果 微波处理30s对菌株的致死率可达70.53%,抗药性突变率高达23.13%,获得的抗药性突变株经过摇瓶初筛和复筛,获得高产突变株20-29-47菌株,产抗真菌活件物质的摇瓶发酵单位达到1478μg/ml,比出发菌株发酵单位986μg/ml提高T49.9%.结论 采用抗药性致死突变标志的微波诱变筛选模型可以获得产抗真菌活性物质的链霉菌702高产菌株.     

林可霉素产生菌的推理选育

根据林可霉素生物合成途径对林可链霉菌进行推理选育取得了较好的效果。林可霉素是由一个氨基酸亚单位PHA和一个糖亚单位MTL组成，L－酷氨酸和葡萄糖可能是合成它们的前体。将2mg/ml的NTG和UV（253．7nm,300w,120s）处理后的菌丝片段分别涂布于含有18％的葡萄糖、30％的L－酪氨酸和12000μg/ml林可霉素的分离培养基上，分别挑选其耐受葡萄糖、L－酪氨酸和抗林可霉素的菌株，结果表明，分别用18％的葡萄糖耐受和12000μg/ml林可霉素抗性这两种方法挑选出来的菌株，效价正变率达60％－70％，较单纯随机筛选菌株的正变率提高20％以上，用这三种方法先后处理98－1菌株，最后得到00－282菌株，其效价提高了50％，对葡萄糖耐受浓度提高到20％，对林可霉素的抗性浓度提高到14000μg/ml。00－282菌析经3周保藏和传代实验F3，菌株高产性状稳定。与此同时进行了UV和NTG对林可链霉菌的诱变效果比较，NTG2mg/ml诱变效果优于UV120S。     

格尔德霉素发酵工艺的优化

目的研究格尔德霉素产生菌吸水链霉菌SIPI.A.2039的发酵工艺,以提高产生菌生物合成格尔德霉素的能力。方法以本实验室保藏的吸水链霉菌SIPI.A.2039为出发菌株,从摇床转速、摇瓶装量、碳源、50L发酵罐参数等方面进行发酵工艺的优化研究。结果采用经过优化获得的发酵培养基和培养条件,发酵周期为144h时,格尔德霉素的摇瓶发酵效价可由原来的230μg/mL提高至2500μg/mL。在50L发酵罐中采用优化的溶解氧和补料工艺能够使格尔德霉素的发酵效价达到3700μg/mL,并使发酵周期比摇瓶缩短了48h。结论本实验得到的结果比国内外报道的格尔德霉素的发酵效价提高了两倍以上,该发酵工艺已经达到了产业化的要求。     

万古霉素产生菌的选育与发酵培养基优化

万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）5－13经紫外线（30W，253.7nm，距离30cm，照射50s）诱变后，在含万古霉素1000μg/ml的浓度梯度平板上筛选万古霉素抗性变株，得到一株万古霉素抗性变株A.orientalis 6-21，其摇瓶效价较出发菌株提高23％，对万古霉素的抗性提高200％。传代试验表明该变株的高产性能遗传特性较稳定。用正交试验法对万古霉素发酵培养基进行了优化，与原发酵培养基相比，万古霉素的摇瓶发酵效价提高了14.3%。     

安丝菌素P-3的发酵工艺

考察了珍贵橙色束丝放线菌SIPI-3-21生产安丝菌素P-3(AP-3)的发酵工艺。首先优化了摇瓶发酵培养基配方,在含葡萄糖20.0 g/L、玉米淀粉30.0 g/L、棉籽饼粉30.0 g/L、CaCl2 10.0 g/L和CaCO3 5.0 g/L的发酵培养基中发酵培养9 d,AP-3产量为123.2 mg/L。进一步在摇瓶中考察了前体异丁醇对AP-3合成的影响,结果表明,添加异丁醇可以显著提高AP-3的产量。当其添加浓度为54 mmol/L时,AP-3的产量为307.8 mg/L,同时发酵液中AP-3的含量从57.2%提高到86.5%。     

林可霉素高产菌种的选育

以林可霉素产生菌82－7^#为出发菌株,采用氯化锂、紫外线（uV)、甲基磺酸乙酯（EMS）三重复合诱变处理、筛选耐自身产物的高产菌种,从中获得65－12^#菌株。其摇瓶效价较出发菌株提高25％,发酵培养基优化组合后,其摇瓶效价提高28％。应用于30吨发酵罐生产,其发酵指数较出发菌株提高16．8％。     

Cytotoxic, genotoxic and pro-inflammatory effects of zinc oxide nanoparticles in human nasal mucosa cells in vitro

Despite increasing application of zinc oxide nanoparticles (ZnO-NPs) for industrial porpuses, data about potential toxic properties is contradictory. The current study focused on the cyto- and genotoxicity of ZnO-NPs in comparison to ZnO powder in primary human nasal mucosa cells cultured in the air-liquid interface. Additionally, IL-8 secretion as a marker for pro-inflammatory effects was measured. Particle morphology and intracellular distribution were evaluated by transmission electron microscopy (TEM). ZnO-NPs were transferred into the cytoplasm in 10% of the cells, whereas an intranuclear distribution could only be observed in 1.5%. While no cyto- or genotoxicity could be seen for ZnO powder in the dimethylthiazolyl-diphenyl-tetrazolium-bromide (MTT) test, the trypan blue exclusion test, and the single-cell microgel electrophoresis (comet) assay, cytotoxic effects were shown at a ZnO-NP concentration of 50 μg/ml (P < 0.01). A significant enhancement in DNA damage was observed starting from ZnO-NP concentrations of 10 μg/ml (P < 0.05) in comparison to the control. IL-8 secretion into the basolateral culture medium was increased at ZnO-NP concentrations of 5 μg/ml (P < 0.05), as shown by ELISA. Our data indicates cyto- and genotoxic properties as well as a pro-inflammatory potential of ZnO-NPs in nasal mucosa cells. Thus, caution should be taken concerning their industrial and dermatological application. Additionally, further investigation on repetitive NP exposure is needed to estimate the impact of repair mechanisms.     

黄芪多糖对脐血造血细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪多糖对脐血造血细胞凋亡作用的影响。方法采用淋巴细胞分离液分离出脐血中的单个核细胞（MNC）,IMDM培养基加入不同浓度的黄芪多糖进行无血清体外培养48h和72h。收获培养后的细胞用AnnexinV-FITC和半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）荧光分别标记,流式细胞技术分析测定细胞的凋亡表达情况。结果在无血清IMDM培养液中培养后,AnnexinV及Caspase-3在脐血造血细胞表面均有表达。培养48h后在黄芪多糖40μg／ml组,细胞表面Annexin V及Caspase-3的表达均比对照组有明显减少（P〈0．05）。培养72h后Caspase-3的表达在黄芪多糖40μg／ml组为（44．90±1．18）％,较对照组[（52．47±1．95）％]有明显减少,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论在体外无血清及细胞因子的培养体系中,一定浓度的黄芪多糖具有抑制造血细胞凋亡的作用。Caspase-3在造血细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

共振瑞利散射法测定微量唑来膦酸

建立了共振瑞利散射法测定微量唑来膦酸。在酸性条件下,唑来膦酸被破坏后产生的无机磷进一步与钼酸铵结合形成磷钼杂多酸,再与罗丹明B形成磷钼杂多酸-罗丹明B三元离子缔合物后共振瑞利散射急剧增加,并于370nm处有最大散射峰,唑来膦酸在6.25～100ng/ml浓度范围内线性关系良好,检测限为1.55ng/ml。     

氟化钠对林可霉素发酵的影响

研究了在15L发酵罐中添加氟化钠对林可霉素合成的影响。结果表明,96h向培养基中添加100mg/L氟化钠,发酵液中林可霉素的效价达5795u/ml,比对照提高12.6%。进一步研究发现,氟化钠可以降低糖酵解途径中丙酮酸激酶的酶活力,使更多碳源流向磷酸戊糖途径,可为林可霉素合成提供更多前体,从而提高林可霉素产量。     

灵芝菌液体深层培养的研究

本文研究了培养基成分及摇瓶发酵条件对灵芝菌丝体生长的影响,进行了 100 L气升环流式生物反应器的扩大试验。研究表明,无机盐KH_2PO_4和MgSO_4·7H_20对生长有影响,其最适浓度分别为0.1％和0.025％.麸皮、玉米粉和葡萄糖对菌丝体生长都有显著的作用。在摇瓶培养中,菌丝体易形成菌丝球,其大小随振荡速度而变化。将菌丝球用玻璃球打碎制成的匀浆种比直接用菌丝球接种获得的产量高。 100 L气升环流式生物反应器培养结果表明,以较皮为培养基的氛源,5d菌丝体干重为5～6g/L;以豆粉为培养基的氮源,5d菌体干重可达7～8g/L。     

培养基组分对蛹虫草生物量及核苷、碱基积累的影响

考察了碳源、氮源和金属离子对蛹虫草发酵生物量和7种核苷、碱基积累的影响，结果表明以20％土豆汁＋2％葡萄糖为碳源，0.3％酵母膏＋0.3％蛋白胨为氮源，并在培养基中加入0．1mmol／LMn^2＋能促进菌体生长和核苷、碱基的积累。在最佳条件下，腺苷和3＇-脱氧腺苷在菌丝体中含量分别为4．96、0．199mg／g，在气生菌丝体中分别为4．91、7．22mg／g。     

吡喹酮对体外培养的日本血吸虫的作用

吡喹酮(Praziquantel,Embay 8440)系一种具有抗绦虫和抗血吸虫作用的广谱抗寄生虫新药。动物实验证明,该药对小鼠、家兔和犬的日本血吸虫病都有很好的疗效,且毒性低,疗程短;临床上用吡喹酮的1～2天疗法治疗日本血吸虫病,总剂量为45～90mg/kg时,治后半年的粪检虫卵转阴率达99.7％。本文报道吡喹酮对体外培养的日本血吸虫的作用。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,进一步探讨透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制的分子机制。方法MTr法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响,免疫组化方法检测SMMC-7721细胞β-catenin和cyclinD1蛋白的表达。结果6．25—100μg／ml透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞增殖抑制率与对照组相比显著增加（P〈0．05）,而且随透骨草浓度的增加,抑制率逐渐增加。透骨草提取物对SMMC-7721细胞的半数抑制浓度（IC50）为40．91ug/ml。40．91μg／m1透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞β—catenin和cyclinD1的表达明显低于对照组（P〈0．05）。结论透骨草提取物对SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与下调β-catenin和cyclinD1的蛋白表达有关。     

Enhanced sinefungin production by medium improvement, mutagenesis and protoplast regeneration of Streptomyces incarnatus NRRL 8089

Increased production of sinefungin, a very potent antifungal and antiparasitic nucleoside antibiotic was achieved by medium and strain improvement. When soybean-meal, dextrin and yeast extract were added as carbon and nitrogen sources to the fermentation medium, instead of corn steep liquor, soya-oil and glucose; the antibiotic yield increased from 40 micrograms/ml to 126 micrograms/ml with low biomass production. Strain improvement was attempted by two methods. The mean antibiotic yield of the variants after multistep mutagenesis by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine and ethyleneimine was 466 micrograms/ml. Protoplasts of the parental strain were prepared by lysozyme digestion from mycelia grown in a medium containing 0.7% glycine. The mean activity of the regenerated protoplasts was 664 micrograms/ml. Thus, the overall sinefungin production could be increased 16-fold.     

Site of regulation of nanaomycin biosynthesis by inorganic phosphate

The site of regulation of nanaomycin biosynthesis by inorganic phosphate was studied with washed cells previously grown in a chemically defined medium containing a high- or low-phosphate concentration. The former mycelia produced only about one-tenth the amount of nanaomycin A from acetate as did the latter mycelia. On the other hand, the bioconversions of nanaomycin D to A and nanaomycin A to E were only slightly affected. It is suggested that the site of regulation of nanaomycin biosynthesis by inorganic phosphate lies within steps between acetate and nanaomycin D.