CpG岛的生物信息学预测及甲基化特异性PCR分析技术的建立

1 材料和方法 1.1 材料 CpGenome Universal Methylated DNA和CpGenome Universal Unmethylated DNA购自Chemicon公司.亚硫酸氢钠和氢醌购自Sigma公司.Wizard DNA Clean-Up systems购自 Promega公司.     

人β_2-糖蛋白Ⅰ的基因克隆和原核表达、纯化及鉴定

材料:①菌株、质粒及细胞株:E．coli M15／SG10039、表达载体pQE-30由本室保存,pGEM-T -Easy测序载体购自Pro- mega公司,新鲜肝组织由本院普外科提供。②主要试剂:TagDNA聚合酶、限制性内切酶Bam HI、Hind Ⅲ、Kpn Ⅰ、T4 DNA 连接酶、Oligo dT12-18、引物合成(TaKa- Ra);NALON凝胶(QIAGEN);逆转录酶 (AMV)(Promega);Golden Tag酶(PER-     

抗—HBC阳性献血者HBV—DNA检测的意义

我们在对献血者进行乙肝五项指标筛查过程中，对HBSAg阴性而抗一HBC阳性者，进一步采用聚合酶链反应（PCR）进行了HBV－DNA的检测，现将结果报道如下。l材料与方法l．l检测对象共98例，男62例，女36例，年龄18～55岁。均为各单位组织的无偿献血者，经健康检查、乙肝五项指标中抗一HBC阳性。1．2方法乙肝五项EI－ISA试剂盒购自厦门新创科技有限公司；HBV－DNAPCR试剂盒购自河南洛阳华美生物工程公司；全自动酶标仪和DNA扩增仪均为美国产品，按说明书严格操作。2结果检测结果见表卫。表1抗一HBC阳性献血者HBV－DNA检测结果…     

小肠RNA对小鼠辐射损伤修复的差异基因表达

0　引言　辐射外源核酸 (RNA,DNA)对受照小鼠肠腺的恢复作用已有文献报道 [1 - 3] .我们建立辐射模型后给予 RNA治疗 ,采集肠组织标本后用消减杂交基础上的 L D- PCR技术 ,观察外源小肠 RNA对受照小鼠损伤修复的差异基因表达 ,为进一步研究电离辐射对小鼠肠道损伤的修复机制奠定基础 .1　材料和方法1 .1　材料　 m RNA提取采用 Promega公司 Poly ATtract RSystem1 0 0 0试剂盒 ,反转录采用 SMARTTMPCR c DNA Syn-thesis Kit (Clontech) ,PCR产物纯化试剂盒采用 Promega公司 Wizard R Plus Minipreps DNA Purification…     

HBV PreS1基因不同片段酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定

1材料和方法1.1材料含PreS全长cDNA质粒pcDNA3．0-PreS S由第四军医大学微生物教研室尹文博士惠赠；人胎肝酵母双杂交cDNA文库购自美国Clontech公司；基因重组技术所需酶类购自大连TaKaLa公司。引物合成及序列测定由上海基康公司完成；大量质粒提取试剂盒购自美国QIAGEN公司。     

应用RT—PCR技术克隆人白细胞介素6的cDNA

0引言人白细胞介素6（11。－6）是一种由212个氨基酸组成的多功能细胞因子「‘’，我们应用反转录一聚合酶链反应（RT－P（二）的方法，成功地从人Hel。a细胞中克隆了11。－6的CDNA，为后续的表达奠定了基础．l材料和方法1．l材料人Hel。a细胞系购自中科院细胞生物所；pUC19及JM103为本实验室保存；Taq聚合酶、AMV反转录酶、T4ljNA连接酶及MagicPCR纯化试剂盒为Promega产品；重组a干扰素和DMEM培养基为GIBCO产品；内切酶为华美公司产品；PCRdl物PI：5’CGGAATTCATGC－CAGlxACCCCCAGGAG3’pZ：5’（7G（iGATCC…     

银屑病患者血小板天然免疫分子CD35、CD59与外周血淋巴细胞CD2表达的相关性研究

1．1 试剂和仪器美国BD-Facscan型流式细胞仪，鼠抗人CR1(CD35)单克隆抗体购自丹麦Dako公司，羊抗鼠IgG(FTTC)购自华美生物工程公司，鼠抗人CD59(R-PE)、CD2(FTTC)单克隆抗体均购自美国BD公司。     

反义封闭胶质瘤端粒酶后c-myc活性研究

本实验探讨了端粒酶有效封闭后,在转录水平是否致使癌基因c-myc的活性下降. 1 材料与方法 1.1 主要材料 阳离子脂质体Dosper(罗氏公司);ELISA端粒酶检验试剂盒(罗氏公司);端粒酶RNA反义硫代磷酸寡脱氧核甘酸(ASODN)(其序列为5'-CTCAGTTAGGGTTAGACA-3'互补于人端粒酶RNA第43号～60号核甘酸序列,上海生工生物工程公司合成);两步法RT-PCR试剂盒(Promega);Trizal(华舜生物);U251胶质瘤细胞系(购自中科院上海细胞生物研究所).     

重组腺病毒介导的CTLA-4Ig cDNA在体外培养细胞中的表达

1　材料　　293细胞购自ATCC（美国），鼠抗人CTLA-4Ig单抗购自Pharmingen公司，5 ml亲合层析柱HiTrap Protein A为Pharmacia公司产品。 2　方法 2.1　细胞培养 　　293细胞用含10%小牛血清的DMEM培养液；人成纤维细胞、人脐静脉内皮细胞、HeLa细胞均用含5%小牛血的DMEM培养液。培养条件均为37 ℃，5%CO2，饱和湿度细胞培养箱中培养。     

正交实验法优选咽立舒颗粒的制备工艺

1材料和方法 1．1材料高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-6AV紫外检测仪，C18分析柱（美国Waters公司）；绿原酸（0753-200111）、黄芩苷对照品（110715—200212）（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，药材购自兰州市黄河药材市场．