甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双生物作用的实验研究I观察指标的探讨

目的 :研究二巯基敌枯双所致甲状腺的形态改变 ,探讨二巯基敌枯双是否属甲状腺激素干扰物。方法 :Wistar大鼠 60只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/kg体重。于实验组的给药第 5 d、第 10 d和第 2 0 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,常规 HE染色 ,光镜下观察。结果 :各时间点实验组血清 T4,TSH的浓度和对照组相比无显著变化 (P>0 .0 5 ) ;实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 ,(P<0 .0 5 ) ;组织学观察到实验组在第 5 d甲状腺滤泡上皮增生 ,有的滤泡出现局灶性增生斑块 ,第 10 d复层化的甲状腺滤泡上皮细胞继续增生 ,并向间质突出 ,形成实心芽 ,第 2 0 d实心芽向继发滤泡分化 ,出现了滤泡腔。结论 :二巯基敌枯双引起甲状腺增生 ,提示具有甲状腺激素干扰物的可能性     

二巯基敌枯双生物作用的实验研究Ⅲ:时效关系的探讨

目的 :研究甲状腺激素干扰物二巯基敌枯双所致甲状腺的形态、血清 T4 和 TSH改变 ,探讨二巯基敌枯双生物作用的时效关系。方法 :Wistar大鼠 78只 ,随机分为正常对照组和实验组。正常对照组给予溶剂二甲基亚砜 ,实验组给予二巯基敌枯双的二甲基亚砜溶液 ,剂量为 5 0 mg/ kg体重。于实验组的给药第 1d、第 3d和第 5 d,分别放血处死两组动物。测定血清中 T4 ,TSH的浓度 ;取动物甲状腺称重 ,同时光镜下观察其形态学的变化。结果 :第 3d和第 5 d实验组血浆 TSH的浓度和对照组相比 ,显著增高 (P<0 .0 5 ) ,第 5 d实验组动物的甲状腺脏器系数显著高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,组织学观察到该组甲状腺滤泡上皮局灶增生成增生斑。第 3d实验组甲状腺脏器系数与对照组比较尽管无差异 ,但组织学观察到该组甲状腺滤泡上皮已增生成复层。结论 :TSH、甲状腺的脏器系数和甲状腺的组织学观察在本实验中呈现明显的时间效应关系 ,而且最早出现生物学指标变化的时间是实验第 3d。     

五溴联苯醚对大鼠甲状腺结构和功能的影响

目的研究五溴联苯醚(BDE-99)对大鼠甲状腺结构和功能的影响。方法将健康清洁级4周龄SD大鼠40只随机分为溶剂对照(玉米油)组和低(30mg/kg)、中(60mg/kg)和高(120mg/kg)剂量BDE-99染毒组,每组10只。采用灌胃方式进行染毒,染毒剂量为2.5ml/kg体重,连续染毒15d。采用放射免疫法测定游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)和促甲状腺素(TSH)的浓度。分别采用二氨基联苯胺(DAB法)和四唑氮(NBT)法对甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydro-genase,SDH)的酶组织化学情况进行观察,并采用免疫组化检测和HE染色观察组织病理改变。电镜下观察甲状腺滤泡细胞超微结构改变。结果随着BDE-99染毒剂量的升高,血清FT4、FT3浓度呈降低趋势,而血清TSH浓度则呈升高趋势;甲状腺组织的TPO、SDH活力呈降低趋势,甲状腺组织的PCNA阳性细胞数则呈升高趋势。BDE-99染毒组TPO、SDH显色加深,电镜观察可见甲状腺滤泡细胞胞浆内有大量明显扩张呈囊状的粗面内质网,胞核、胞膜和线粒体未见损伤。结论 BDE-99有可能通过降低甲状腺球蛋白的合成水平而减低甲状腺激素的浓度,反馈性升高TSH浓度,从而导致腺体组织代偿性增生、细胞酶活力增高。     

丙硫氧嘧啶致甲状腺组织增生的时效关系研究

目的初步建立以染毒(PTU)为模型的甲状腺激素干扰物体内短期甄别实验系统。方法PTU(5mg/kgbw)灌胃染毒,分别设丙硫氧嘧啶染毒3、6、9、12天实验组及溶剂对照组,每组10只大鼠,在染毒期满后处死动物,取血清,用全自动化学发光法测量TT3,TT4和TSH,同时观察甲状腺组织病理改变,PAS染色观察胶质的改变,免疫组化法和Western-blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果与对照组相比,染毒3天组,TT3开始出现显著的降低(P<0.05),6、9、12天组,TT3、TT4浓度均显著降低,并伴TSH浓度显著升高(P<0.05)。甲状腺脏器系数在6、9、12天组均显著高于对照组(P<0.05)。组织学观察发现3天组甲状腺滤泡上皮复层化;6天组弥漫性增生,大量增生斑、实心芽形成(P<0.05);9天组纤维母细胞和毛细血管内皮细胞大量增生,大量实心继发滤泡形成;12天组有大量的空心继发滤泡形成。PAS染色显示,3、6、9天组的甲状腺滤泡胶质染色弱阳性,12天组甲状腺滤泡胶质染色阴性。免疫组织化学检测的PCNA标记指数和Western-blot检测的PCNA/β-actin的相对值随时间变化的规律完全一致,即3天组开始显著增加(P<0.05);而6天组达到高峰(P<0.05);9天组开始减少(P<0.05);12天组与对照组相比则差异无显著性。结论初步确定甲状腺激素干扰物体内短期甄别实验实验观察终点为增生斑和实心芽,以及IHC检测的PCNA标记指数,最佳实验期为6天。     

围生期接触磺胺二甲嘧啶对子代大鼠甲状腺功能的影响

目的研究围生期母体接触磺胺二甲嘧啶对子代大鼠甲状腺功能的影响。方法受孕母鼠在受孕第7日起至哺乳期结束每天分别给予磺胺二甲嘧啶0、50、100和200mg/kg,HE染色观察20日龄子代大鼠甲状腺的组织病理学变化,并用免疫组织化学染色观察甲状腺内核增殖抗原的表达。结果各染毒剂量组子代大鼠甲状腺滤泡细胞出现不同程度的增生表现,核增殖抗原表达阳性细胞数显著高于对照组(P0.05)。结论磺胺二甲嘧啶可通过母体干扰子代大鼠甲状腺功能。     

PCNA、ER在甲状腺乳头状癌和滤泡状腺瘤中表达及临床意义

[目的]探讨PCNA(增殖性细胞核抗原)、ER(雌激素受体)在甲状腺乳头状癌等组织中的表达及临床意义.[方法]对58例甲状腺乳头状癌、30例甲状腺滤泡状腺瘤和30例癌旁正常甲状腺组织,采用免疫组织化学技术S-P法,检测PCNA、ER表达.[结果]PCNA、ER在甲状腺乳头状癌中的表达率显著高于甲状腺滤泡状腺瘤组织及癌旁正常甲状腺组织(P<0.01);PCNA、ER在甲状腺乳头状癌组织中的表达率具有负相关性(r=-0.3).[结论]PCNA、ER表达可作为甲状腺癌的协助诊断指标,对临床治疗和预后判断具有重要的指导意义.     

氯丹对大鼠甲状腺结构和功能影响的量效关系研究

[目的]研究氯丹对大鼠甲状腺结构和功能影响的量效关系研究。[方法]21日龄SD大鼠40只,经7d适应性饲养后,将大鼠随机分为溶剂对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。每组10只,雌雄各半。低、中、高剂量组的剂量分别为5mg/kg、15mg/kg、30mg/kg,配成相应的玉米油溶液,按0.5%体重灌胃,对照组用同样体积的玉米油灌胃。染毒10d后观察其血清学、组织病理学、组织化学指标和甲状腺滤泡细胞超微结构改变。[结果]随着氯丹染毒剂量的增加,血清FT4、FT3浓度呈逐渐降低的趋势,而TSH浓度则随染毒剂量的增加呈逐渐升高的趋势;甲状腺组织增生的程度随氯丹染毒剂量增加也有明显的加重;PCNA阳性细胞数在实验组明显高于对照组,且随着染毒剂量的增加而增加;各实验组的TPO、SDH酶活性明显升高,表现为显色加深;电镜观察可见实验组的甲状腺滤泡细胞胞浆内有大量明显扩张呈囊状的粗面内质网,胞核、胞膜和线粒体未见损伤。[结论]在一定剂量条件下,氯丹可干扰甲状腺结构和功能,并存在着剂量效应关系。     

高脂膳食大鼠血清对人肺腺癌细胞系SPCA1增殖活性的影响

目的 用血清生理学方法直接从细胞水平研究膳食脂肪对肺癌细胞增殖的影响。方法 SD雄性大鼠分为两组，分别喂以普通饲料及高脂饲料。30d时取血并分离血清，用含20％大鼠血清的：RPMll640培养液培养人肺腺癌细胞SPCA1，从MTT比色法、Giemsa染色、核增殖抗原(PCNA)表达三个方面观察两组血清对细胞增殖活性的影响。结果 MTT比色法结果显示高脂组细胞在第5天出现生长活跃的状态，使生长曲线反常上扬。Giemsa染色结果发现高脂组细胞呈局灶样增殖，在每个增殖灶的周围有多个呈花瓣状分布的细胞坏死灶。对照组中细胞染色较浅，有多个坏死灶，而无增殖灶出现。核增殖抗原检测结果发现高脂组PCNA阳性细胞数表达明显多于对照组，且阳性信号表达较强。结论 高脂膳食大鼠血清能促进人肺腺癌细胞系SPCA1增殖，其机制可能涉及多个方面。     

不同浓度的碘对大鼠实验性甲状腺肿的影响

目的 观察高碘对已形成甲状腺肿大鼠的影响。方法 复制Wistar大鼠甲状腺肿模型，分成两组：即实验组及实验对照组，实验组又分成5组，常规饲料中投放不同浓度的碘，饲养7个月后处死，将甲状腺组织常规方法固定并包埋，切片，HE染色核仁组织区嗜银蛋白（AgNOR)染色，用图像分析系统测量甲状腺滤泡上皮高度与甲状腺滤泡腔面积。结果 实验组出现了胶质性甲状腺肿，不典型增生出现的百分率增加，甲状腺细胞的高度随饲料含碘量的增加而逐渐降低；其滤泡腔面积逐渐增大，实验组不典型增生区域的AgNOR颗粒数目增多。结论 高碘可使药物性甲状腺肿变成高碘性甲状腺肿，并使某些区域增殖活跃，有恶变的可能。     

己烯雌酚影响雄性胎鼠睾丸引带ACTIN和PCNA表达的研究

目的研究环境雌激素(EEs)的经典代表己烯雌酚(DES)对雄性胎鼠睾丸引带肌动蛋白(ACTIN)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法怀孕雌性昆明小鼠60只,随机分成6组,实验组于孕9~17 d分别给予DES 0、25、50、100、200μg.kg-1.d-1,二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂,对照组给予等体积NS。孕17 d处死母鼠取出胎鼠,取下腹部,常规固定、制片,应用免疫组织化学方法检测睾丸引带ACTIN和PCNA的表达。结果实验组雄性胎鼠睾丸引带发育较差,ACTIN、PCNA表达明显降低(P<0.05),均有显著的剂量效应关系。结论DES降低雄性胎鼠睾丸引带ACTIN和PCNA的表达,从而影响睾丸引带的收缩及增殖活性,这可能是EEs影响睾丸引带发育及导致隐睾的机制。     

三种环境雌激素对卵巢癌PEO4细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨几种常见的环境类雌激素壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)对人雌激素受体阳性卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡相关基因PCNA ,bcl 2和baxmRNA及相应蛋白质表达的影响。方法　PEO4细胞在DMEM培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含 5 %活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养 5d ,收集细胞 ,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或 75ml培养瓶 ,32× 1 0 - 7mol LBisA和NP及 32× 1 0 - 6 mol LDBP对PEO4细胞分别处理 72h ,用半定量RT PCR技术观察其对核增殖抗原PCNA、bcl- 2及baxmRNA表达的影响 ,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果　与溶剂对照组相比 ,32× 1 0 - 7mol LNP和BisA对PEO4处理 72h可促进核增殖抗原PCNA和抗凋亡基因bcl 2mRNA表达 ,但对baxmRNA的表达没有影响 ;DBP可促进PCNA的表达 ,但对bcl 2和bax的表达均没有明显的影响。随后进行的免疫组化实验结果显示 ,NP和BisA可促进Bcl 2蛋白的表达 ,并抑制Bax蛋白的表达。结论　对PCNA和bcl 2表达的影响可能是环境类雌激素调节卵巢癌细胞PEO4增殖和凋亡的重要机制之一。     

甲状腺乳头状癌中CK19、Galectin-3、TPO的表达及意义

目的检测甲状腺乳头状癌中CK19、Galectin-3、TPO的表达情况,评价其在与良性增生性疾病中的鉴别诊断价值。方法利用免疫组织化学染色SP法,检测34例甲状腺乳头状癌和42例良性增生性疾病(27例结节性甲状腺肿+15例甲状腺滤泡性腺瘤)中CK19、Galectin-3、TPO的表达。结果34例甲状腺乳头状癌中CK19、Ga-lectin-3阳性率均为100.0%,TPO除4例弱阳性外其余均为阴性。42例良性增生性疾病中CK19、Galectin-3多为阴性,而TPO阳性率100.0%。CK19、Galectin-3、TPO的表达在甲状腺乳头状癌和良性增生性疾病之间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论联合检测CK19、Galectin-3、TPO有助于甲状腺乳头状癌与甲状腺良性增生性疾病的鉴别诊断。     

农药叶枯宁对大鼠血清甲状腺素水平影响的时效关系

[目的 ]研究甲状腺素干扰物叶枯宁对大鼠血清游离T4(FT4)和促甲状腺激素 (TSH)水平的影响及其时效关系 ,为建立甲状腺素干扰物甄别方法体系的体内方法提供实验依据。 [方法 ]叶枯宁二甲亚砜溶液灌胃染毒 ,剂量为 5 0mg/kg ,分别设 5、6、10、2 0d实验组及溶剂对照组 ,在染毒期满后处死动物 ,取血清测FT4和TSH ,同时观察甲状腺组织学改变。 [结果 ]与对照相比 ,5d组出现显著的FT4降低并伴TSH升高 (P <0 0 5 ) ,6d及以后组则未见差异 ;组织学观察到 5d、6d组甲状腺滤泡上皮增生 ,10d组出现实心芽 ,2 0d组出现实心继发滤泡。 [结论 ]叶枯宁对大鼠血清FT4和TSH水平的影响发生在 5d之内 ,并可继发引起甲状腺增生。本实验为建立甲状腺素干扰物的初筛方法奠定了基础     

高碘对大鼠实验性甲状腺肿的影响

目的：观察高碘对已形成甲状腺肿大鼠的影响。方法：复制Wistar大鼠甲状腺肿模型，分2组，实验组及实验对照组，实验组又分5组，常规饲料中投放不同浓度的碘。饲养7个月后处死，将甲状腺组织常规方法固定并包埋，切片，HE染色，核仁组织区嗜银蛋白（AgNOR)染色，用图象分析系统测量甲状腺滤泡上皮高度与甲状腺滤泡腔面积。结果：实验组出现胶质性甲状腺肿，不典型增生出现的百分率增加。甲状腺细胞的高度随饲料含量碘量的增加而逐渐降低，其泡腔面积逐渐增大，实验组不同共型增生区域的AgNOR颗粒数目增多，结论：高碘可使药物性甲磁谣胀变成高碘性甲状腺肿，并使某些区域增殖活跃，有变的可能。     

杀草强致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究杀草强(Amitrole)致甲状腺增生的量效关系,为杀草强的体内短期甄别甲状腺激素干扰物的标准化实验提供剂量设计依据.[方法]SD大鼠40只,随机分为1个对照组和4个实验组.对照组用蒸馏水灌胃,实验组用不同剂量的杀草强溶液灌胃.于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察及PAS染色观察.[结果]在100mg/(kg.day)剂量组,大鼠甲状腺脏器系数高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在200mg/(kg.day)剂量组甲状腺增生以实心继发滤泡为主.[结论]杀草强可作为短期甄别甲状腺激素干扰物实验体系的验证药物,200mg/(kg.day)可作为验证实验的中心剂量.     

三种环境雌激素对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

[目的 ]探讨环境中常见的三种类雌激素壬基酚 (NP)、双酚A(BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)影响人乳腺癌细胞T47D增殖和凋亡的分子生物学作用机制。 [方法 ]T47D细胞在含 10 %胎牛血清的DMEM培养液中进行常规传代培养 ,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含 5 %活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养 5d ,收集细胞 ,PBS洗涤后接种于内置盖玻片的 6孔板或 75ml培养瓶中 ,用 3 2× 10 -7mol/LNP、3 2× 10 -7mol/LBisA及 3 2× 10 -6mol/LDBP对细胞分别处理 72h ,用半定量RT PCR技术观察这 3种化合物对核增殖抗原PCNA、bcl 2及baxmRNA表达的影响 ,并用免疫组化方法对结果进行验证。 [结果 ]与溶剂对照组相比 ,NP和BisA对T47D细胞处理 72h可显著抑制baxmRNA表达而促进bcl 2和PCNAmRNA的表达 ,随后的免疫组化实验也证实了这一结果 ;DBP可促进PCNAmRNA及蛋白的表达 ,但对bcl 2及bax的表达未见统计学意义。 [结论 ]环境雌激素NP和BisA可通过调节PCNA、bcl 2及bax的表达而调节乳腺癌T47D细胞的增殖和凋亡作用。DBP通过促进核增殖抗原PCNA的表达而促进T47D的增殖作用     

碘剂对自身免疫性甲状腺病大鼠甲状腺功能影响

目的观察补充碘剂对自身免疫性甲状腺病大鼠甲状腺功能的影响。方法采用皮下注射甲状腺球蛋白诱发实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型(EAT),通过饮水中给予碘剂观察对大鼠甲状腺重量、形态学改变、促甲状腺激素(TSH)和甲状腺激素谱以及甲状腺自身抗体滴度变化。雌性Wisrar大鼠分为A空白对照组、B抗原免疫组、C碘剂喂养组及D抗原免疫加碘剂组。免疫组大鼠给予猪甲状腺球蛋白100μg/只,与全弗氏佐剂(CFA)乳化后皮下注射,第2周后给予不完全弗氏佐剂(IFA)乳化抗原加强免疫。碘剂干预组给予0.05%碘化钠溶液喂养。分别于第0,2,4,6,8周内眦静脉采集血样。结果D组甲状腺绝对及相对重量显著高于A、B组。P<0.05,略高于C组;C组高于A、B组,但P>0.05。B组小叶间散见淋巴细胞浸润;碘剂组滤泡异质性改变,小叶间少量淋巴细胞浸润;D组甲状腺滤泡灶性萎缩、炎症细胞浸润明显,范围较广,滤泡周围可见纤维组织增生。第8周B组FT3、FT4高于A、B组;D组升高更为显著。P<0.01。B组大鼠血清TgAb、TmAb自第2周开始升高,至第4周达到最高水平,随后略有下降,但仍然显著高于对照组;C组抗体水平缓慢升高,第8周时升高达到高峰;D组抗体水平升高最快,而且维持时间更长,P<0.01。结论碘剂可以加重EAT大鼠甲状腺病理损害,升高甲状腺自身抗体滴度,     

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对小鼠甲状腺激素系统稳态的影响及作用机制研究

目的研究不同剂量2,2’,4,4’-四溴联苯醚(BDE-47)对C57BL/6小鼠甲状腺激素T3、T4和促甲状腺激素TSH的影响,并探讨可能的毒作用机制。方法将C57BL/6小鼠分成对照组和低、中、高剂量组,对照组按0.1ml/10g给予玉米油,染毒组分别按0.5、5和50mg/kg剂量给予BDE-47化合物,连续4天腹腔注射后,收集动物血液、肝脏和甲状腺组织。电化学发光免疫法测定各组小鼠血清总T4(TT4)、总T3(TT3)和TSH,愈创木酚法测定甲状腺组织中过氧化物酶(TPO)活性,CHOPRA法检测肝脏中I型脱碘酶(DI)活性。结果与对照组相比,所有染毒剂量组TT4水平均降低(P<0.01),中、高剂量染毒组小鼠TT3水平降低(P<0.01);中、高剂量染毒组小鼠肝脏DI活性与对照组相比有显著增加(P<0.05);血清TSH水平和甲状腺TPO活性各组之间无显著差异(P>0.05)。结论BDE-47可以破坏小鼠甲状腺激素系统稳态,产生甲状腺激素干扰毒性,其作用机制之一可能是影响肝脏DI活性。     

肝细胞生长因子抑制动脉旁路转流术后吻合口内膜增生的研究

目的 研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对动脉旁路转流术后吻合口内膜增生的抑制作用.方法 32只新西兰白兔按随机数字表法分为对照组(16只)和实验组(16只),对照组为单纯的静脉移植,实验组术中给予HGF处理(100ng/ml),术后14、28d分别切除移植静脉,HE染色、弹力纤维染色、计算机图像分析系统测量和计算内膜厚度及中膜厚度、内膜/中膜厚度比值(I/M),免疫组织化学方法检测静脉移植物平滑肌细胞增殖细胞核抗(PCNA)的表达.结果 对照组静脉移植术后14d I/M(0.81 ±0.05)高于实验组(0.47±0.05),差异有统计学意义(P＜0.01),对照组静脉移植术后28d I/M(0.73 ±0.01)高于实验组(0.65 ±0.01),差异有统计学意义(P＜0.01).实验组静脉移植术后的PCNA指数明显低于对照组(P＜0.01).结论 肝细胞生长因子对动脉旁路转流术后吻合口内膜增生有抑制作用.     

地方性甲状腺肿患区饮食致大鼠甲状腺肿的代谢表现

本文测定地甲肿患区饮食致大鼠甲状腺肿的代谢指标,实验前,部分大鼠注射30％碘化油0.2ml做对照组。4～7个月处死。实验结果表明,甲状腺碘浓度下降,MIT/DIT(MIT:一碘酪氨酸,DIT:二碘酪氨酸)、T_3/T_4(T_3:三碘甲腺原氨酸、T_4;甲状腺素)比值和TPO(甲状腺过氧化物酶)活性升高。这些代谢表现说明,实验组大鼠处于缺碘状态,并和人工低碘食致大鼠甲状腺肿的代谢表现一致。尽管甲状腺碘浓度下降,但组织总碘无明显变化,加上T_3/T_4比值和TPO活性增高,说明实验组大鼠对碘缺乏有一定的适应能力。