羊膜培养液抑制角膜新生血管的实验研究

目的　研究羊膜培养液对小鼠角膜新生血管的抑制作用及机制。方法　应用cornealmicropocket方法 ,将含 10 0ng碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和 12 %hydronpolymer的缓释颗粒植入角膜层间 ,制备小鼠角膜新生血管模型。实验分对照组、羊膜组和去上皮羊膜组 ,每组 10只眼 ,收集各组培养液于模型制作当日起 ,每日滴眼 4次至术后 7d摄片观测角膜新生血管长入情况并处死动物。对脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)进行体外培养 ,并应用Boyden小房技术和荧光结合(CyQUANT)实验分别检测羊膜培养液对HUVEC细胞迁移和细胞增殖的影响。利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组培养液中金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP1)和 2 (TIMP2 )的含量。结果　羊膜培养液明显抑制由bFGF诱发的小鼠角膜新生血管的形成 ,对照组、羊膜组和去上皮羊膜组角膜新生血管面积分别是 (2 4 8± 0 76 )mm2 、(0 6 4± 0 5 2 )mm2 和 (1 96± 0 6 5 )mm2 。羊膜培养液明显抑制血管内皮细胞的迁移和增殖 ,而对照组和去上皮羊膜组对HUVEC细胞迁移无作用。羊膜培养液中TIMP2水平明显增高 ,而TIMP1的含量无变化。结论　羊膜培养液中TIMP1的含量未增加。而羊膜上皮产生或释放大量的TIMP2 ,抑制血管内皮细胞的迁移和增殖 ,其可能是羊膜培养液抑制角膜新生血管的     

辅酶Q10对大鼠紫外线光损伤角膜上皮细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究辅酶Q10对紫外线所致角膜上皮细胞光损伤防护作用.方法 36只wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组与辅酶Q10治疗组.紫外线连续照射24 h建立角膜上皮紫外线光损伤模型.治疗组于光照前3周每天辅酶Q10灌胃.观察角膜组织病理学改变并用免疫组化染色观察凋亡相关基因蛋白Bcl-2、Bax、Fas和FasL的表达,进行细胞计数与统计学检验.结果 正常对照组角膜上皮可以见到Bcl-2、Fas和FasL的阳性表达,很少见到Bax的阳性表达.阳性对照组和辅酶Q10治疗组均可以见到Bcl-2、Bax、Fas和FasL的表达.与正常组比较,阳性组Bcl-2表达阳性的角膜上皮细胞数显著减少,Bax表达阳性的角膜上皮细胞数显著增多(P＜0.01);治疗组Bcl-2、Bax表达阳性的细胞数与正常组相比无明显变化(P＞0.05);而阳性组Fas和FasL表达阳性的角膜上皮细胞数明显增多(P＜0.01),治疗组Fas和FasL表达阳性细胞数明显少于阳性组(P＜0.05).结论 辅酶Q10通过上调Bcl-2的表达,下调Bax、Fas和FasL的表达,能够阻抑凋亡过程和细胞的死亡.     

羊膜培养液体外抑制兔角膜上皮细胞血管内皮生长因子的表达

目的:探讨羊膜培养液对角膜上皮细胞中血管内皮细胞生长因子(vascula rendothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:刮除并收集新鲜兔角膜上皮细胞,传代培养接种于35mm培养皿及自制的羊膜培养皿上。实验分为4组,Ⅰ组(对照组):无血清的DMEM培养液,Ⅱ组:去上皮的羊膜培养液,Ⅲ组:未去上皮的羊膜培养液,Ⅳ组:将细胞直接接种于无上皮羊膜。作用48h后用Trizol法提取各组样本的总RNA,进行RT-PCR一步法反应检测各组VEGF mRNA表达并与β-actin比较。结果:正常角膜上皮细胞中有VEGF基因表达,在Ⅲ,Ⅳ组中表达受到明显抑制(P<0.01,n=5)。结论:羊膜培养液明显抑制VEGF mRNA在角膜上皮细胞中的表达。     

眼眶横纹肌肉瘤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax,p53的蛋白表达

目的 分析眼眶横纹肌肉瘤中的细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2，Bax和p53的表达状态。方法 对31例标本，利用TUNEL技术显示凋亡细胞，用免疫组织化学方法检测Bcl-2，Bax及p53蛋白表达。结果 凋亡细胞检测率90．3％，肿瘤增生活跃区多见。Bcl－2阳性率29％，Bax阳性率54．5％，p53阳性率64．5％。Bcl-2与Bax表达呈正相关（P＜0．01）。Bcl-2阳性细胞与凋亡细胞分布区域明显不同。Bax与p53表达与细胞凋亡无相关关系（P＞0．05）。结论 眼眶横纹瘤中存在细胞凋亡与肿瘤增生有关。Bcl－2抑制Bax的功能进而抑制肿瘤细胞凋亡。p53在该肿瘤中可能不是调控细胞凋亡的主要因素。     

人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞中bFGF表达的影响

目的:观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对体外培养的兔角膜上皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)表达的影响,探讨人羊膜匀浆上清液在促进角膜上皮损伤修复中的作用。方法:将兔角膜上皮细胞离体培养并传代,然后分组。实验组分别在含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液中分别加入终浓度为40,80,160μg/mL 的人羊膜匀浆上清液,对照组仅用100mL/L胎牛血清的DMEM培养液。分别在培养24,48和96h后,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞增殖的影响。同时,采用RT-PCR技术检测三个不同等级浓度对兔角膜上皮细胞bFGF-mRNA表达的影响。结果:培养24h后,与对照组（0.087±0.013）比较,加入终浓度为40,80,160μg/mL人羊膜匀浆上清液的实验组角膜上皮细胞增殖数量（分别为0.185±0.010,0.318±0015,0.501±0.014）明显增加,差异具有显著性(P<0.05);同时,随着作用时间的延长,差异愈加明显;加入40μg/mL和80μg/mL浓度羊膜匀浆上清液组兔角膜的bFGF-mRNA（分别为0.750±0.007,0.785±0.006）和空白对照组（0.708±0.013）比较,差异无显著性意义（P>0.05）,但160μg/mL浓度羊膜匀浆上清液组（1.013±0.120）与其它两组及对照组（0.708±0.013）比较,差异均具有显著性（P<0.05）。结论:人羊膜匀浆上清液具有促进兔角膜上皮细胞增殖的作用,并随着人羊膜匀浆上清液所含蛋白浓度的增加,其促进作用增强;人羊膜匀浆上清液具有促进体外培养的兔角膜上皮细胞bFGF-mRNA表达的作用,但与羊膜匀浆上清液的浓度有关。     

Galardin抑制白细胞介素—1α诱导的角膜基质细胞胶原降解

目的：探讨Galardin对角膜基质细胞胶原降解的抑制作用。方法：角膜基质细胞三维胶原凝胶表面分别添加纤维蛋白溶酶原、白细胞介素-1α（IL-1α）及不同质量浓度的Galardin的MEM培养液培养24h,测定培养上清液中羟脯氨酸的量做为胶原降解活性单位。同时检测Galardin及IL-1α对角膜基质细胞胶原降解的作用。结果：在存在纤维蛋白溶酶原的情况下,随着IL-1α质量浓度的升高,以剂量关系增加角膜基质细胞胶原降解量。Galardin以剂量关系抑制IL-1α诱导的角膜基质细胞胶原降解量。结论：Galardin具有抑制IL-1α诱导的角膜基质细胞胶原降解的作用。     

摘除主泪腺干眼病鼠泪液功能变化与凋亡相关基因蛋白的表达

目的建立摘除主泪腺干眼病鼠动物模型,探讨动物模型眼表组织凋亡相关基因的表达与眼表干变及组织损伤的关系。方法选择健康成年Wistar大鼠20只,随机分为实验组和正常对照组,每组10只,制作摘除主泪腺干眼病动物模型鼠10只（实验组）,于术前和术后3d,1、2、4及8周行SehirmerⅠ试验、泪膜破裂时间检测、角膜上皮荧光素染色检测;采用免疫组织化学方法对10只模型鼠和10只正常对照鼠角膜、结膜上皮细胞及睑板腺腺泡细胞中Bax和Bcl-2等相关基因蛋白的表达进行检测。结果实验组于术后1～2周起SchirmerⅠ试验、泪膜破裂时间明显小于手术前,且随观察时间的延长而更加缩短（P＜0．05）,角膜上皮荧光素染色实验后显示阳性。实验组角膜、结膜上皮及睑板腺腺泡细胞中,Bax阳性表达的细胞数[每1000个细胞中（503．47±343．73）、（586．36±296．47）、（436．61±246．96）个]均明显高于对照组[每1000个细胞中阳性数（241．71±130．12）、（311．03±142．33）、（202．16±109．29）个]（P均＜0．05）;Bcl-2阳性表达的细胞数[每1000个细胞中（237．32±87．07）、（236．07±81．24）、（251．79±89．93）个]均明显低于对照组[每1000个细胞中阳性数（474．24±167．62）、（342．81±114．57）、（320．42±153．32）个]（P均＜0．05）。结论摘除主泪腺干眼病鼠角膜、结膜上皮及睑板腺腺泡细胞中均有凋亡的发生,细胞凋亡可能是干眼病鼠眼表组织破坏损伤的原因之一。     

暴露性干眼症大鼠模型角膜上皮细胞凋亡相关基因的表达

目的探讨暴露性干眼症大鼠模型角膜上皮细胞凋亡相关基因的表达与组织损伤的关系。方法25只健康成年Wistar大鼠随机分为4组实验组和1组正常组,每组5只。实验组通过睑缘缝线机械性阻止大鼠瞬目,充分暴露各组大鼠角膜0.5h、6h、24h及1周后,用角膜荧光素染色及SchirmerⅠ试验对实验组大鼠进行临床诊断;然后分别处死每组大鼠,取双眼角膜进行免疫组织化学染色,研究角膜组织中凋亡相关基因蛋白Bcl-2及Bax的表达。正常组大鼠不进行处理,处死后取双眼角膜标本按实验组同样步骤处理。结果不同实验组大鼠角膜上皮细胞Bax表达阳性细胞数与正常对照组相比增加,而Bcl-2表达阳性细胞数较对照组减少,且差异具有显著性(P<0.05);角膜上皮细胞Bax表达阳性细胞数与暴露时间呈正线性相关(r=0.76,P<0.05),而Bcl-2表达阳性细胞数与暴露时间呈负线性相关(r=-0.57,P<0.05)。结论暴露性干眼症角膜组织中上皮细胞凋亡可能是导致角膜上皮破坏进而功能丧失的原因之一,Bax增加及Bcl-2减少与角膜上皮细胞凋亡有关。     

羊膜对角膜成纤维细胞CTGF表达及凋亡的影响

目的观察羊膜对在其基质面生长的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达以及凋亡的影响。方法将传代的家兔角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面，培养5d后，用RT-PCR检测角膜成纤维细胞CTGF mRNA表达的变化；用流式细胞仪观察羊膜对IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡的影响。结果在羊膜基质面培养的角膜成纤维细胞，其CTGF／GAPDH像素比值较对照组低，与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．05）；羊膜能降低IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡率，与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．01）。结论羊膜不仅抑制体外培养的角膜成纤维细胞CTGF mRNA的表达，而且能抑制角膜成纤维细胞的凋亡，可能部分解释羊膜减轻角膜基质损伤修复反应和抗眼表瘢痕形成的机制。     

人角膜上皮细胞Toll样受体介导的炎性细胞因子的表达

目的探讨人角膜上皮组织和细胞系(THCE)对Toll样受体(TLR)2和TLR4的表达及后者介导THCE对烟曲霉菌(AF)抗原炎性反应的影响。方法用免疫印迹(Western blot)和免疫细胞化学方法检测人角膜上皮组织和细胞系THCE的TLR2和TLR4蛋白质表达与分布;采用自制的AF菌丝体片段(5×106／ml)和培养上清提取物(牛血清白蛋白当量浓度为10μg／ml)抗原,刺激培养的THCE细胞,于刺激1、2、4及8 h收集培养上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测白细胞介素(IL)8和肿瘤坏死因子(TNF)α的水平。于刺激后30 min、1及2 h收集细胞,Western blot检测IκBα的表达变化以评价核转录因子κB的活化;采用抗体封闭实验分析封闭TLR2和TLR4对THCE细胞表达IL-8和TNF-α的影响。结果Western blot和免疫细胞化学结果显示人角膜上皮组织和THCE细胞均表达TLR2和TLR4蛋白质;AF菌丝体或培养上清抗原刺激THCE细胞后,培养上清液中IL-8和TNF-α于1 h后开始升高,至8 h分别达到(64．71±5．15)pg／ml和(32．46±3．28)pg／ml(菌丝体刺激组)及(94．94±11．92)pg／ml和(48．70±3．32)pg／ml(上清刺激组),分别为对照组THCE细胞培养上清中IL-8和TNF-α浓度的3．0倍和2．5倍及4．5倍和3．5倍(均P<0．01);同时Western blot检测AF菌丝体和AF上清刺激30 min后THCE细胞的IκBα表达(平均灰度值)分别由对照组的51．57±5．58和49．23±3．49下降为10．31±1．30和8．15±2．37(均P<0．01),2 h后恢复至对照组水平。在AF菌丝体刺激组,单纯封闭TLR2或TLR4部分抑制THCE细胞IL-8和TNF-α的分泌(均P<0．05),同时封闭两种受体则明显抑制了IL-8和TNF-α分泌(均P<0．01);AF上清抗原刺激组,单纯封闭TLR4和联合封闭两个受体均可明显抑制IL-8和TNF-α的分泌(均P<0．01),而单纯封闭TLR2未明显抑制二者的分泌(均P>0．05)。结论AF可能经过TLR-NF-κB信号转导通路诱导人角膜上皮细胞表达IL-B和TNF-α等炎性细胞因子。TLR2和TLR4可能介导人眼角膜上皮细胞对AF菌丝体的识别,而对AF上清抗原的识别则可能主要由TLR4介导。     

Treatment of retinal detachment of the course of retinopathy of prematurity

Cryo- and laser therapy of stage 3 have reduced, but not eliminated the occurrence of retinal detachment in stages 4a, 4b and 5 of ROP. In this disease the treatment of these stages is still the greatest challenge to the ophthalmologist. Therefore, the aim of this paper is to present our up-to-date possibilities of treatment of different kinds of retinal detachments in ROP, including segmental scleral buckling, encircling scleral buckling, scleral resection, vitrectomy and its modifications in ROP. Guidelines of surgery of retinal detachment in active stage 4 and 5 of retinopathy of prematurity have been described.     

Analysis of some of the possible neonatal risk factors of development of retinopathy of prematurity

PURPOSE: The aim of the study was to evaluate some of the possible risk factors for retinopathy of prematurity (ROP) treated with laser photocoagulation or cryocoagulation. MATERIAL AND METHODS: The study comprised 71 preterm infants with ROP needing treatment and 118 prematures without ROP or with ROP requiring no treatment, as a control group. All infants were born with gestational age < or = 32 weeks and birth weight < or = 1500g. The perinatal variables, including some of clinical data, the length of mechanical ventilation as well as continous positive airway pressure (CPAP), duration of total parenteral nutrition and some of laboratory data were analyzed, to evaluate their correlation with the development of ROP. RESULTS: Gestational age before 28 weeks (OR = 5.11), episodes of convulsiones (OR = 2.15), mechanical ventilation for more than 20 days (OR = 5.86) and > 30 days (OR = 7.47), CPAP for more than 5 days (OR = 4.15) and > 10 days (OR = 2.84), total parenteral nutrition for more than 10 days (OR = 7.84) and > 20 days (OR = 9.02) and elevated peak of alanine aminotransferase (AIAT) levels (OR = 3.17) were significant risk factors for ROP requiring treatment. CONCLUSIONS: The opthalmic examination for retinopathy of prematurity requiring laser photocoagulation or cryocoagulation should be obligatory for prematures born < or = 32 weeks of gestational age, with birth weight < or = 1500 g.The frequency of the consecutive ophthalmic examinations depends on the severity of prematurity and on the presence and intensification of the risk factors for ROP.     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。