AT2R基因可调控表达对体外培养VSMC纤维黏连蛋白表达的影响

目的 利用Dox-on可调控哺乳动物表达系统,建立起了受四环素类似物Doxycycline(Dox)紧密调控、表达AT2R基因的双重稳定血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),在此基础上对纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究.方法 建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞,观察该VSMC细胞中AT2R受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ,AngⅡ)及其1型、2型受体拮抗剂干预上述细胞后FN的mRNA及蛋白表达情况变化.结果 Dox-on可调控哺乳动物表达系统可成功介导AT2R基因在原代培养大鼠主动脉VSMC的表达,该表达受到Dox给予/去除的紧密调控;Dox干预可在48 h内迅速诱导该VSMC细胞表达AT2R,AT2R表达在Dox干预后72 h进一步增强(P＜0.01).AT2R基因的可调控表达抑制由于AngⅡ干预VSMC后引起FN表达的增强(P＜0.01).这一作用被AT1R拮抗剂CV-11974进一步增强(P＜0.01);而被加入AT2R拮抗剂干预而取消;同时给予AT1R拮抗剂和AT2R拮抗剂时FN的表达与基础状态时的情况一致.结论 AngⅡ干预增强FN的表达,该作用是通过AT1R介导的;经Dox 诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用,说明在这一生物学效应上,AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能.     

血管损伤后酪氨酸激酶活性变化与血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞迁移

目的本研究旨在探讨蛋白酪氨酸激酶活性变化在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用.方法体外培养VSMC,采用[γ-32P]-ATP掺入法、改良Boyden′s chamber法和细胞化学的方法,观察AngⅡ干预前后VSMC胞浆内PTK活性的变化,粘着斑、肌动蛋白纤维丝的动态组装变化以及迁移能力的变化,探讨AT1R拮抗剂、AT2R拮抗剂以及酪氨酸激酶抑制剂对上述观测指标的影响.结果 (1)AngⅡ可以剂量依赖性诱导VSMC内胞浆PTK激活;(2)AngⅡ刺激后,VSMC粘着斑表达增强,肌动蛋白丝数量明显增加,纵向平行排列;(3)AngⅡ刺激后VSMC发生迁移;(4)AT1R拮抗剂CV-11974可显著抑制上述生物学效应,AT2R拮抗剂PD123319对此无明显的作用;酪氨酸激酶抑制剂Genistein可显著但不能完全抑制上述生物学效应.结论 AngⅡ通过AT1R介导调节VSMC内粘着斑和肌动蛋白丝动态组装,进而改变VSMC的迁移能力;酪氨酸激酶的激活参与AngⅡ介导的VSMC迁移的信号转导调控;由于完全抑制PTK活性尚不能完全抑制AngⅡ诱导的VSMCs跨膜迁移,因此VSMCs迁移的调控可能还有其他的信号转导通路的参与.     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞粘着斑及肌动蛋白细胞骨架组装的影响及意义

目的　旨在探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及其受体 (ATR)在血管平滑肌细胞 (VSMC)迁移中的作用及其细胞生物学机制。方法　以体外培养VSMC为基础 ,采用免疫细胞化学和荧光细胞化学的方法 ,观察AngⅡ干预后 ,VSMC中粘着斑 (FA)组装和肌动蛋白纤维丝 (F actin)形成的动态改变 ,同时观测AT1R拮抗剂、AT2 R拮抗剂对上述观测指标的影响。结果　AngⅡ刺激后 3 0min ,VSMC中FA体积增大、数量增加 (P <0 .0 1 ) ,VSMC内F actin数量明显增加 ,纵向平行排列。AngII干预VSMC后 2 4h ,上述结构变化持续存在 ,表达进一步增强。AT1R拮抗剂CV 1 1 974明显抑制这一生物学效应 (P <0 .0 1 ) ,AT2 R拮抗剂PD1 2 3 3 1 9对此无明显的增强或抑制作用。同时给予CV 1 1 974和PD1 2 3 3 1 9干预VSMC与单独给予CV 1 1 974时比较无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　AngⅡ通过AT1R介导调节VSMC内FA动态组装和F actin形成 ,进而改变VSMC的迁移能力 ,并可能由此参与VSMC迁移的调控。     

血管紧张素诱导MMP-2和MMP-9在人结肠癌细胞中的表达

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人结肠癌细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 筛选出AT1受体(AT1R)高表达的结肠癌细胞株,采用不同浓度的AngⅡ进行处理,收集不同时点的细胞,提取细胞总RNA和总蛋白.采用实时PCR和Western blotting,分别检测AngⅡ处理前后结肠癌细胞MMP-2、MMP-9 mRNA以及相应编码蛋白的表达变化,研究AngⅡ对MMPs表达的诱导作用.结果 AT1R在多数结肠癌细胞株中有表达,以LoVo细胞最为明显.AngⅡ能够刺激LoVo细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达,并呈剂量和时间依赖效应.Lovo细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的上调能被AT1R拮抗剂阻断.结论 AngⅡ可以通过AT1R诱导人结肠癌细胞MMP-2和MMP-9的表达,在肿瘤的转移机制中可能具有一定的作用.     

丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ上调培养的血管平滑肌细胞转化生长因子-β受体表达中的作用

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)转化生长因子-β受体(TGF-βR1)上调中的作用。方法:培养大鼠主动脉VSMC,以10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,AngⅡ刺激前分别应用10-5mol/L氯沙坦(Losartan)、PD98059预处理,以正常的VSMC为对照组,细胞免疫化学法测定培养12h时VSMC TGF-βR1的含量。结果:与对照组相比,AngⅡ刺激培养12h的VSMC TGF-βR1表达上调(P<0.01);AngⅡ受体AT1型拮抗剂Losartan使TGF-βR1表达显著降低(P<0.01),丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059能显著降低TGF-βR1表达(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1上调TGF-βR1的表达,丝裂原活化蛋白激酶参与AngⅡ的胞内信号转导。     

血管紧张素诱导MMP-2和MMP-9在人结肠癌细胞中的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人结肠癌细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法筛选出AT1受体(AT1R)高表达的结肠癌细胞株,采用不同浓度的AngⅡ进行处理,收集不同时点的细胞,提取细胞总RNA和总蛋白。采用实时PCR和Western blotting,分别检测AngⅡ处理前后结肠癌细胞MMP-2、MMP-9 mRNA以及相应编码蛋白的表达变化,研究AngⅡ对MMPs表达的诱导作用。结果AT1R在多数结肠癌细胞株中有表达,以LoVo细胞最为明显。AngⅡ能够刺激LoVo细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达,并呈剂量和时间依赖效应。Lovo细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的上调能被AT1R拮抗剂阻断。结论AngⅡ可以通过AT1R诱导人结肠癌细胞MMP-2和MMP-9的表达,在肿瘤的转移机制中可能具有一定的作用。     

罗格列酮对鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的影响

目的探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导鼠血管平滑肌细胞(VSMC)血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA表达的影响。方法选6~10代处于对数生长期的鼠血管平滑肌细胞,用终浓度为1μmol.L-1AngⅡ预先培养2 h后分成A、B和C组,分别加入终浓度为20、30、50μmol.L-1罗格列酮培养12 h;另外,取预先用终浓度为1μmol.L-1AngⅡ培养6 h的鼠血管平滑肌细胞,加入终浓度为30μmol.L-1的罗格列酮分别再培养0、6、12、24 h。提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测平滑肌细胞AT1RmRNA的表达。结果与空白对照组(23.82±4.68)相比,AngⅡ组AT1RmRNA的表达显著升高(P<0.01);与AngⅡ组(61.04±12.20)比较,罗格列酮干预组(A、B和C组)AT1RmRNA的表达(45.22±7.17、39.82±6.34、34.70±6.69)呈浓度依赖性降低,差异均有显著性(P<0.01)。30μmol.L-1的罗格列酮干预组呈时间依赖性抑制AngⅡ诱导的VSMC AT1RmRNA的高表达(57.37±8.04、46.99±4.81、39.82±6.34、35.71±6.13),差异均有显著性(P<0.01)。结论一定浓度范围内,罗格列酮可呈浓度和时间依赖性地下调AngⅡ诱导的鼠VSMC AT1RmRNA的表达,这可能是其抗炎、抗动脉粥样硬化(AS)作用的重要机制之一。     

BIM在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞凋亡机制的研究

目的 探计前凋亡因子Bim是否参与血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞(EPCs)调亡及其机制.方法 采集人脐静脉血,用6%羟乙基淀粉沉降和密度梯度离心法联合提取脐血中单个核细胞.培养7d,采用免疫荧光法和免疫组化法鉴定EPCs.AngⅡ诱导EPCs凋亡,加入AT受体拮抗剂1h后即刻加入AngⅡ.实验分为对照组、AngⅡ组和AngⅡ+AT受体拮抗刺组.24h后检测EPCs凋亡率,KT-PCK法分析各组BimmKNA的表达.结果 一定剂量AngⅡ可诱导EPCs凋亡,通过AT受体拮抗剂的阻断可降低EPCs凋亡率,KT-PCK显示BimmRNA在对照组中低表达,AngⅡ组表达最高,AngⅡ+AT受体拮抗剂组中表达水平显著降低,其表达变化趋势与EPCs凋亡率变化一致.结论 AngⅡ可诱导EPCs凋亡,BLM参与并促进了EPCs的凋亡.     

血管紧张素Ⅱ2型受体在体可调控表达对大鼠颈动脉新生内膜增生的影响

目的血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R)基因转染可减轻血管损伤后新生内膜的过度增生,但如何主动调控转入体内基因的表达有着重要的临床意义。文中以四环素可调控系统下的AT2R基因转染的骨髓间充质干细胞(m esenchymal stem cell,MSC)为载体,探讨AT2R在体可调控表达及对大鼠颈动脉新生内膜的影响。方法大鼠颈动脉球囊损伤后,分别将PBS液、常规培养的大鼠MSC、四环素可调控系统下的AT2R基因转染的MSC局部灌注,后者又分为给予强力霉素(deoxycyline,Dox)及不给予强力霉素组。于术后14、28 d取材,分析新生内膜增生情况,免疫组化法及逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测AT2R在大鼠颈动脉壁中的表达变化。结果导入转染AT2R-MSC+Dox组大鼠颈动脉新生内膜面积较其他各损伤组显著降低(P<0.01),同时AT2R的表达显著增高;MSC对血管内膜增生无明显影响。结论四环素可调控AT2R基因在体可调控表达系统受到Dox的有效控制,可显著抑制动脉损伤后新生内膜的增生。     

血管紧张素受体两种亚型的矛盾与统一

血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）受体的两种亚型AT1R和AT2R在体内构成矛盾的统一体，AngⅡ的大多数作用是通过与AT1R结合来实现的，AT2R的部分作用与AT1R相反。AT2R拮抗剂可减弱AT1R拮抗剂的降压作用。但AT1R和AT2R并非单纯的对抗关系。AT1R可加速糖尿病肾病的慢性化进程。     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞AT1受体和Ⅳ型胶原表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)蛋白和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白的表达情况及氟伐他汀对AT1R和ColⅣ表达的影响,探讨其肾脏保护作用的可能机制。方法:将HBZY-1细胞分为3组:①阴性对照组;②不同浓度(0.1,1.0,10μmol/L)AngⅡ刺激组;③1.0μmol/L AngⅡ加不同浓度(0.1,1.0,10μmol/L)氟伐他汀干预组,蛋白质印迹法检测各组AT1R蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测各组ColⅣ蛋白的表达。结果:AngⅡ刺激后,HBZY-1细胞AT1R及ColⅣ的表达随AngⅡ浓度增加而增强;氟伐他汀能够剂量依赖性地抑制AT1R和ColⅣ的表达。结论:氟伐他汀能够抑制AngⅡ诱导的HBZY-1细胞AT1R和ColⅣ的表达,同时AT1R和ColⅣ的表达存在正相关,推断氟伐他汀可能通过下调AT1R影响ColⅣ的表达,进而改善高血压肾脏硬化。     

单核细胞趋化蛋白1 在前列腺癌 进展中的调节作用

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）在前列腺癌进展中的作用。方法 采用免疫组织化学 （简称免疫组化）检测MCP-1 和血管紧张素Ⅱ 1 型受体（AT1R）在前列腺癌细胞系LNCaP,C4-2 和C4- 2AT6 中的表达。ELISA 检测Ang Ⅱ和CV11974（AT1R 阻断剂）对前列腺癌细胞系中MCP-1 生成的影响。 在C4-2AT6 细胞中,ELISA 检测Ang Ⅱ和LY294002（PI3K 抑制剂）对MCP-1 生成的影响,Western blot 检 测Ang Ⅱ和CV11974 对Akt 蛋白磷酸化水平（p-Akt）的影响,免疫组化检测TCV116（AT1R 阻断剂）对 C4-2AT6 细胞中MCP-1 和F4/80+ 表达的影响。免疫组化检测前列腺癌患者组织中MCP-1 和CD68 的表 达。结果 MCP-1 和AT1R 在前列腺癌细胞系LNCaP,C4-2 和C4-2AT6 中均表达,且在C4-2AT6 中表达 最高。在C4-2 和C4-2AT6 细胞中,Ang Ⅱ能够增加MCP-1 生成（P <0.05）,而CV11974 则能够逆转Ang Ⅱ介导的MCP-1 生成增加（P <0.05）。在C4-2AT6 细胞中,LY294002 逆转了Ang Ⅱ介导的MCP-1 生成 增加（P <0.05）,CV11974 能够逆转Ang Ⅱ介导的p-Akt 增加。TCV116 可降低C4-2AT6 细胞中MCP-1 和 F4/80+ 的表达（P <0.05）。前列腺癌患者组织中MCP-1 和CD68 的表达与前列腺癌的恶性程度有关,格里森 分数越高,MCP-1 和CD68 的表达越高。结论 MCP-1 可通过AT1R-PI3K/Akt 信号通路在前列腺癌恶性进 展中发挥重要作用。     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对肝星状细胞Ⅲ型胶原合成的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对体外培养的肝星状细胞Ⅲ型胶原蛋白合成及其mRNA表达的影响.方法 采用HSC-T6肝星状细胞系作为活化的肝星状细胞的研究模型.将培养的肝星状细胞随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、受体拮抗剂(AT1RA)组和血管紧张素Ⅱ 受体拮抗剂(AngⅡ AT1RA)组.采用ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅲ型胶原蛋白的含量;RT-PCR法检测肝星状细胞中Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果 细胞培养上清液中Ⅲ型胶原蛋白的含量对照组、AngⅡ组和AngⅡ AT1RA组分别为(6.301±0.432)ng/ml、(7.356±0.237)ng/ml和(6.263±0.236)ng/ml,AngⅡ组高于对照组(P＜0.05),AngⅡ AT1RA组显著低于AngⅡ组(P＜0.05).肝星状细胞Ⅲ型胶原mRNA的表达水平对照组、AngⅡ组和AngⅡ AT1RA组分别为2.317±0.015、2.643±0.057和2.330±0.036,AngⅡ组高于对照组(P＜0.05),AngⅡ AT1RA组显著低于AngⅡ组(P＜0.05).结论 血管紧张素Ⅱ能够促进肝星状细胞Ⅲ型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达,而血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂能够明显抑制这一作用.     

Stat3信号通路参与结肠癌细胞中AngⅡ对MMPs表达的诱导

目的 探讨转录因子Stat3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导结肠癌细胞株表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9中的作用.方法 以Ang Ⅱ受体(AT1R)高表达的人结肠癌细胞Lovo为研究对象,观察经AngⅡ处理不同时间后Stat3、MMP-2和MMP-9 mRNA及其编码蛋白、磷酸化Stat3(Phospho-Stat3)蛋白的表达变化;研究AngⅡ受体1(AT1R)拮抗剂和JAK激酶抑制剂AG490对上述蛋白表达的影响;并观察转染Stat3反义寡核苷酸后,Lovo细胞中上述蛋白的表达变化.采用实时定量RT-PCR检测Stat3、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达;Western blotting法检测Phospho-Stat3、Stat3、MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果 Lovo细胞经10-7 mol/L AngⅡ处理后,Stat3和MMP-9 mRNA均在刺激后30 min达最高峰,MMP-2 mRNA在刺激后1 h达最高峰;Phospho-Stat3蛋白在刺激后12 h表达最强,MMP-2和MMP-9蛋白在刺激后48 h表达最强;AT1R拮抗剂和AG490分别能显著抑制上述蛋白的表达上调;转染Stat3反义寡核苷酸后,Phospho-Stat3、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均有明显减少.结论 Stat3信号通路参与了AngⅡ对MMP-2和MMP-9表达的诱导,可能在结肠肿瘤的侵袭转移过程中具有一定的作用.     

血管紧张素Ⅱ促进血管平滑肌细胞胶原合成以及其AT2受体在其中的作用

目的利用血管紧张素（AT）Ⅱ（AngⅡ）受体阻滞剂研究血管紧张素Ⅱ的1型和2型受体在血管平滑肌细胞（VSMC）胶原合成中的作用。方法实验采用自发性高血压大鼠（SHR）以及SD大鼠血管平滑肌细胞，分别分为空白对照组，血管紧张素Ⅱ作用组，血管紧张素Ⅱ＋AT1受体阻滞剂组，血管紧张素Ⅱ＋AT2受体阻滞剂组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测量上清中细胞分泌Ⅰ型胶原的含量，细胞ELISA法测量细胞中贮存的Ⅰ型胶原的含量，逆转录-多聚酶链式反应（RT-PCR）法测量Ⅰ型胶原mRNA水平的变化。结果阻断AT1受体后，两种大鼠VSMC分泌以及胞内胶原量较AngⅡ照组明显下降（P〈0．01）；阻断AT2受体后，SHR大鼠VSMC分泌以及胞内胶原量均较Angli对照组下降（P〈0．01，后者P〈0．05），而在SD大鼠中，则无明显下降。结论在胶原合成方面，源自SHR的VSMC对于AngⅡ反应性高于源自SD大鼠的VSMC。AT1受体参与AngⅡ诱导血管平滑肌细胞胶原合成的过程；AT2受体参与AngⅡ诱导SHR的血管平滑肌细胞胶原合成的过程，但是在SD大鼠的VSMC巾没有作用。     

miR-155抑制AngⅡ诱导的主动脉血管平滑肌细胞周期转换

目的： 观察转染miR-155后对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）细胞周期转换的影响并探讨其机制。方法：原代培养小鼠VSMC,用1×10-6 mol/L AngⅡ作用于VSMC 48 h后,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q-RT-PCR）检测空白对照组及AngⅡ组miR-155表达水平。用q-RT-PCR及Western blot检测分别转染miR-155及阴性对照后各组AngⅡ 1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R）的mRNA及蛋白表达水平;用Western blot检测转染miR-155 mimic及阴性对照后对AT1R下游细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）、核糖体蛋白S6激酶（P70S6K1）通路的影响。分别检测转染miR-155 mimic及使用血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦、mTOR通路抑制剂雷帕霉素、ERK1/2抑制剂U0126对细胞周期素D1（Cyclin D1）的表达影响,并使用流式细胞分析检测细胞周期变化,探讨miR-155对细胞周期的影响及其机制。结果：AngⅡ可显著降低miR-155的表达。miR-155可从mRNA及蛋白水平抑制AT1R表达,并抑制AngⅡ促AT1R表达的作用。转染miR-155 mimic后可显著抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活的作用。转染miR-155 mimic、使用缬沙坦、雷帕霉素、U0126抑制AngⅡ促Cyclin D1表达的作用,并使细胞周期阻滞在G0/G1期。结论：miR-155可通过抑制AT1R间接抑制AngⅡ促进ERK1/2、P70S6K1通路激活及Cyclin D1表达的作用,抑制AngⅡ促进细胞周期转换的作用。     

血管紧张素Ⅱ有关受体与原发性高血压关系的研究进展

从AngⅡ 1受体(ATlR)和Ang Ⅱ 2受体(AT2R)的功能、基因多态性等方面阐述两种受体在高血压中的重要作用,并简要介绍AT1R拮抗剂治疗高血压病的优越性.     

AngⅡ对大鼠HSC表达ATR及Ⅰ型前胶原mRNA的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)对大鼠肝脏星状细胞(HSC)表达AngⅡ受体(ATR)及Ⅰ型前胶原mRNA的影响,探讨AngⅡ调控HSC分泌胶原的作用途径.方法 HSC分离培养后,采用细胞免疫技术、原位杂交技术及RT-PCR方法分别测定ATR和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平.结果培养激活的HSC表达少量的AT1R蛋白和mRNA,10-6 mol/L AngⅡ刺激后AT1R 蛋白表达水平及mRNA转录水平显著升高,同时亦能促进Ⅰ型前胶原mRNA表达;而体外培养激活的HSC不表达AT2R,AngⅡ作用后亦不能刺激其表达.结论 AngⅡ能够促进激活的大鼠HSC表达AT1R,同时增强Ⅰ型前胶原mRNA表达,由此推测HSC表面AT1R的表达水平可能与胶原分泌有关.     

高甲状腺素模型心室组织中血管紧张素转化酶及血管紧张受体的表达

目的 研究甲状腺功能亢进(简称甲亢)性心肌病兔心室组织血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张受体表达,探讨甲亢性心肌病的发病机制.方法 健康成年新西兰大白兔40只,随机分为4组:对照组,左旋甲状腺素(L-thy) 组,咪哒普利组(L-Thy+Imidapril),缬沙坦组(L-Thy+Valsartan).L-Thy[45 μg/(kg·d)×28 d]腹腔注射建立甲亢动物模型,测定左右心室心肌肥厚指数、心肌细胞直径,Masson′s 染色测定胶原容积分数,放免法检测血浆及组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,RT-PCR半定量检测ACE、血管紧张素受体1(AT1R)、血管紧张素受体2(AT2R) mRNA表达,Western blot检测ACE、AT1R、AT2R蛋白表达.结果 L-Thy可诱导心肌肥厚及心肌纤维化,血浆与局部组织AngⅡ浓度升高, ACE mRNA及蛋白表达上调,AT1R、AT2R mRNA及蛋白表达上调.咪哒普利和缬沙坦均可显著抑制L-Thy诱导的心肌细胞肥厚和纤维化,咪哒普利可降低血浆与局部心肌组织AngⅡ水平,对AT1R、AT2R和ACE的表达无影响.缬沙坦显著升高血浆AngⅡ浓度,但不升高组织AngⅡ浓度;且显著上调AT1R、AT2R mRNA表达,对ACE的表达无影响.结论 甲亢性心肌病兔有循环和组织AngⅡ浓度升高,AT1R、AT2R和ACE 表达上调,肾素-血管紧张素系统(RAS)可能参与甲亢性心肌病的发病机制.咪哒普利和缬沙坦可以改善L-Thy诱导的心肌重构.     

BIM在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞凋亡机制的研究

目的探讨前凋亡因子Bim是否参与血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞（EPCs）调亡及其机制。方法采集人脐静脉血,用6%羟乙基淀粉沉降和密度梯度离心法联合提取脐血中单个核细胞,培养7d,采用免疫荧光法和免疫组化法鉴定EPCs。AngII诱导EPCs凋亡,加入AT受体拮抗剂1h后即刻加入AngII。实验分为对照组、AngⅡ组和AngⅡ＋AT受体拮抗剂组。24h后检测EPCs凋亡率,RT-PCR法分析各组BimmRNA的表达。结果一定剂量AngII可诱导EPCs凋亡,通过AT受体拮抗剂的阻断可降低EPCs凋亡率,RT-PCR显示BimmRNA在对照组中低表达,AngⅡ组表达最高,AngⅡ＋AT受体拮抗剂组中表达水平显著降低,其表达变化趋势与EPCs凋亡率变化一致。结论 AngⅡ可诱导EPCs凋亡,BIM参与并促进了EPCs的凋亡。