雷利度胺在多发性骨髓瘤患者中的应用及效果观察

目的:探讨雷利度胺在多发性骨髓瘤(MM)患者中的应用效果及护理方法.方法:根据25例MM患者病情拟定不同治疗方案,均以雷利度胺为主,其中5例初治MM患者采用R-PAD方案,13例难治和(或)复发MM患者选用R-MD方案,7例平台期维持治疗MM患者采用单药(R)治疗,均给予精心护理.结果:本组5例初治患者完全缓解(CR)率为100.00%,均出现1～2级白细胞减少和血小板减少,无需处理,化疗期间恢复正常;13例难治和(或)复发患者CR率为23.08%,总反应率(ORR)为76.92%,其中7例出现白细胞及血小板减少;7例平台期维持治疗患者均维持缓解,未出现血液学不良反应.结论:雷利度胺治疗MM效果满意,常见不良反应为中性粒细胞和(或)血小板减少,精心护理可减少不良反应发生,促进患者康复.     

细胞色素酶CYP2C19代谢对沙利度胺体外抗骨髓瘤作用的影响

目的 研究人肝微粒体代谢对沙利度胺体外抗骨髓瘤作用的影响,并探讨细胞色素酶CYP2C19在其中的作用.方法 以沙利度胺或与人肝微粒体在体外孵育后分别处理多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266、NCI-H929、RPMI 8226、LP-1和CZ-1细胞,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡.结果 沙利度胺对MM细胞活力无明显抑制作用,10、50和100μg/ml沙利度胺处理5株MM细胞后的细胞活力分别为96.2%～103.7%、96.3%～103.7%和97.9%～106.5%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).但与人肝微粒体孵育后,沙利度胺明显抑制MM细胞活力,且该作用呈剂量依赖性.10、50和100μg/ml沙利度胺与人肝微粒体共孵育后对5株MM细胞活力抑制率分别为12.2%～22.9%、25.9%～36.4%和34.9%～46.3%,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05).100μg/ml沙利度胺与人肝微粒体孵育后,5株MM细胞凋亡的比例增加达18.5%～32.5%.在孵育体系中加入CYP2C19特异性抑制剂奥美拉唑后,沙利度胺与人肝微粒体孵育后对MM细胞活力的抑制作用减弱,5 μmol/L和10μmol/L奥美拉唑对100μg/ml沙利度胺经肝微粒体孵育后抑制细胞活力的逆转率分别为7.5%～21.9%和19.1%～38.3%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 沙利度胺的体外抗骨髓瘤作用需要人肝脏代谢,细胞色素酶系中的CYP2C19参与了这一过程.     

雷利度胺在恶性血液病治疗中的应用现况

雷利度胺(Lenalidomide)是第二代免疫调节药物(IMiD),临床试验证实该药对伴5q-染色体异常的输血依赖性低危和中危-1骨髓增生异常综合征和多发性骨髓瘤疗效肯定。以外,已有初步研究结果提示其还可用于骨髓纤维化、慢性淋巴细胞白血病、淀粉样变性以及华氏巨球蛋白血症等的治疗。     

沙利度胺联合地塞米松对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用

为了探讨沙利度胺（thalidomide,THD）联合地塞米松（Dx）对多发性骨髓瘤KM3细胞的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（MTT法）观察不同浓度、不同作用时间的THD或THD＋地塞米松（Dx）作用于KM3细胞后细胞的抑制率,以选取最佳药物干预条件。使用该条件处理KM3细胞,并采用间接ELISA法检测细胞上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、内皮抑素（ES）、凋亡抑制蛋白survivin的表达。结果表明：随着THD浓度的加大、作用时间的延长,KM3细胞生长的抑制也呈增强的趋势,同时THD与Dx联用可显著提高药物对KM3细胞的生长抑制作用。80μg／ml或100μg／mlTHD联合Dx（4μg/ml）可使KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin表达下降,ES表达增加,而对VEGF的表达无影响,结论：THD联合Dx对KM3细胞有协同抑制作用,THD联合Dx可能通过下调KM3细胞IL-6、TNF-α、survivin的表达,上调ES的表达而发挥抗多发性骨髓瘤的作用。     

雷利度胺治疗恶性血液病的新进展

雷利度胺是沙利度胺的第二代类似物,属第二代免疫调节药。该药在恶性血液病治疗中的作用机制较复杂,包括直接细胞毒性、对肿瘤免疫的间接作用等,目前已用于多发性骨髓瘤及骨髓增生异常综合症的治疗,且疗效肯定。近几年来的研究结果提示,雷利度胺单药口服可使非霍奇金淋巴瘤、复发难治的霍奇金淋巴瘤、老年急性髓系白血病及初治的慢性淋巴细胞白血病患者获得持久缓解,且不良反应轻微、可控,为血液淋巴系统疾病的治疗带来了新的希望。本文就近5年来雷利度胺在治疗恶性血液病方面的新进展作一综述,以期对本药的应用及恶性血液病的临床治疗提供一定的参考与帮助。     

沙利度胺对多发性骨髓瘤细胞Survivin表达的影响

多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性浆细胞增殖性疾病,由于致病机制不十分清楚和缺乏有效的治疗手段,其中位生存率仅3年,完全缓解率不到10%。沙利度胺作为新一代抗肿瘤药物[1],近年来已广泛用于治疗MM,并取得了较好疗效。目前细胞淍亡的明显受抑被认为是此病的原因之一,而Survivin是新     

沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的临床疗效

多发性骨髓瘤（MM）是一种起源于骨髓单克隆浆细胞的恶性增生肿瘤性疾病。临床上治疗骨髓瘤方案虽多，但并无高效者。作者2004年12月-2006年2月使用沙利度胺（反应停）治疗多发性骨髓瘤（MM）19例，取得满意疗效，现总结如下。     

来那度胺在初治多发性骨髓瘤中的临床研究

来那度胺是第二代免疫调节药,是沙利度胺的衍生物,具有更强的免疫调节和抑制血管生成作用,是复发/难治性多发性骨髓瘤患者的首选药物。目前,多项关于来那度胺在初治多发性骨髓瘤中临床应用的国际大型临床试验正在进行中。本文就来那度胺在初治多发性骨髓瘤中应用的临床研究作一综述。     

沙利度胺治疗难治性多发性骨髓瘤的临床研究

多发性骨髓瘤是一种浆细胞异常增生的血液系统恶性肿瘤,多见于老年人,所有患者中约70％对化疗有效,但多次化疗后易产生耐药,成为难治性复发性的多发性骨髓瘤。我们自2001年2月至2004年1月,采用沙利度胺(反应停)单药治疗难治性多发性骨髓瘤25例,取得一定的效果,现报告如下。     

沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的临床疗效

多发性骨髓瘤(MM)是一种起源于骨髓单克隆浆细胞的恶性增生肿瘤性疾病。临床上治疗骨髓瘤方案虽多,但并无高效者。作者2004年12月~2006年2月使用沙利度胺(反应停)治疗多发性骨髓瘤(MM)19例,取得满意疗效,现总结如下。1资料与方法本组病例19例,均为住本院确诊为多发性骨髓瘤患者,诊断标准符合《血液病诊断及疗效标准》[1]。其中女性14例,男性5例。临床分期[2-3]:初治多发性骨髓瘤10例,难治性多发性骨髓瘤9例。初治多发性骨髓瘤10例,确诊后未经任何化疗方案治疗;难治性多发性骨髓瘤9例,为正规使用过MP、M2、VDA、VBMCP等方案化疗2~4疗程…     

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞及KM3细胞TRAIL受体表达的研究

目的　了解多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)及骨髓瘤细胞系(KM3细胞)中4种TRAIL受体的表达情况,探讨TRAIL的选择性杀瘤机制及化疗药物对TRAIL受体的影响。方法　应用半定量RT PCR和流式细胞术检测23例MM患者、15名正常对照者BMMNC和KM3细胞中4种TRAIL受体的表达,并比较了12例MM患者化疗前后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育前后4种TRAIL受体表达的变化。结果　MM患者BMMNC死亡受体DR4、DR5的表达均高于正常对照组(P<0. 05),DR5的表达高于DR4(P<0. 05);诱捕受体DcR1、DcR2在MM组中的表达明显低于正常对照组(P<0. 05);KM3细胞死亡受体DR4、DR5强表达,未检测到诱捕受体DcR1、DcR2的表达; MM患者化疗后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育后DR5的表达均上调(P<0. 05)。结论　死亡受体DR4、DR5和诱捕受体DcR1、DcR2在MM患者BMMNC和正常人BMMNC中表达有差异,这可能是TRAIL可以选择性杀死MM细胞而对正常细胞无毒性作用的机制之一; MM患者化疗后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育后死亡受体DR5表达上调,提示化疗药物可能通过上调死亡受体DR5的表达而促使细胞凋亡。     

三氧化二砷增强硼替佐米、地塞米松对多发性骨髓瘤细胞的作用

目的 通过观察硼替佐米单用及与三氧化二砷(As_2O_3)、地塞米松(DXM)联合应用对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3细胞增殖及凋亡的影响,探讨As_2O_3能否增强硼替佐米、DXM的抗MM作用.方法 采用MTT法检测硼替佐米单用及与As_2O_3、DXM联合应用对KM3细胞增殖的抑制作用,计算其IC_(50)值.采用细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段观察硼替佐米对KM3细胞凋亡的影响,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测硼替佐米联合As_2O_3、DXM后KM3细胞凋亡率的变化.结果 硼替佐米、As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制呈时间和浓度依赖性IC_(50)值分别为0.27、3.10、8.01 μmol/L;硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞的增殖抑制作用强于硼替佐米联合As_2_O3或DXM[(34.51±0.51)%对(25.39±0.90)%;(34.51±0.51)%对(23.80±0.78)%].0.25μmol/L硼替佐米与KM3细胞共孵育48 h后,KM3细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA电泳呈现梯形条带,Annexin V阳性细胞比例增高;硼替佐米联合As_2O_3、DXM组的KM3细胞凋亡率明显高于硼替佐米联合DXM组.结论 在体外,硼替佐米能够抑制KM3细胞增殖,诱导其凋亡.硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制作用显著增强;As_2O_3可增强硼替佐米、DXM对KM3细胞的诱导凋亡作用.     

氟达拉滨诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其基因表达分析

目的 探讨氟达拉滨诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡及其分子机制.方法 用MTT法检测氟达拉滨对MM细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡蛋白表达;采用细胞凋亡基因芯片技术检测并分析对照组与氟达拉滨处理组间的基因表达差异.结果 氟达拉滨显著抑制RPMI8226和KM3细胞生长,呈时间和剂量依赖性.24 h半数生长抑制值(IC50)分别为2.13μg/ml和0.36 μg/ml.流式细胞术分析显示,氟达拉滨作用24 h后MM细胞凋亡呈剂量依赖性,同时伴有caspase-3和PRAP激活,具有典型的细胞凋亡生物学特征.在97个凋亡相关基因中,筛选出25个差异表达基因.氟达拉滨处理组与对照组比较,表达上调的基因有13个,主要涉及Bcl-2家族促凋亡基因、肿瘤坏死因子及其受体超家族基因,以及胱天蛋白酶募集结构域家族.表达下调的基因有12个,主要涉及Bcl-2家族抗凋亡基因、肿瘤坏死因子超家族及其受体相关因子基因,以及凋亡抑制蛋白家族.结论 氟达拉滨显著抑制MM细胞生长,诱导细胞凋亡;其作用机制涉及多个凋亡相关基因表达改变.     

多发性骨髓瘤患者骨髓细胞IL-6分泌机制的研究

目的：探讨多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者骨髓细胞中白细胞介素６（ＩＬ－６）分泌机制。方法：应用双标记免疫荧光技术检测了１６例ＭＭ患者和１９例对照者新鲜分离的骨髓单个核细胞中ＩＬ－６表达情况。结果：ＭＭ患者骨髓单个核细胞ＩＬ－６表达阳性率为１５．４％±６．５％，骨髓瘤细胞ＩＬ－６表达阳性率达７．９％±２．９％，基质细胞ＩＬ－６表达阳性率达４．５％±１．２％；对照组骨髓单个核细胞ＩＬ－６表达阳性率为４．６％±２．３％，基质细胞ＩＬ－６表达阳性率为２．６％±１．１％，浆细胞ＩＬ－６表达阳性率为０．７％±０．１％。ＭＭ患者均较对照组显著升高（Ｐ均＜０．００１）。另外ＭＭ组骨髓单个核细胞中基质细胞所占比率为６．９％±１．４％，也较对照组的４．７％±１．８％明显升高（Ｐ＜０．００１）。结论：ＭＭ患者升高的ＩＬ－６既可由瘤细胞分泌，又可由基质细胞分泌，自分泌和旁分泌机制可能都参与了ＭＭ的发病。     

尿多酸肽通过调节caspase家族诱导多发性骨髓瘤细胞U266凋亡的实验研究

目的探讨尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞株U266增值及其机制。 方法采用四甲基偶氮唑（MTT）比色法计算不同尿多酸肽浓度（1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg/g）对U266细胞生长的抑制率,Hoechst33258染色观察尿多酸肽作用后的细胞凋亡情况,Annexin-V/碘化丙啶（PI）检测尿多酸肽作用6、12、24 h后与对照组细胞（加细胞未加药物）的细胞凋亡率。使用Western-blotting法检测caspase 8、caspase 3及其激活物在U266细胞株经尿多酸肽（4 mg/g）作用6、12、24 h后的表达改变。 结果随着尿多酸肽浓度提高,U266细胞抑制率显著上升（F= 17.276,P< 0.001）。经尿多酸肽作用后,Hoechst33258荧光染色提示细胞核浓集及出现凋亡小体。Annexin-V/PI分析显示,尿多酸肽处理6、12、24 h后细胞凋亡率显著高于对照组细胞[（5.53 ± 0.28）%、（9.43 ± 1.78）%、（21.50 ± 2.45）%、（3.03 ± 0.11）%,F= 12.242,P<0.001]。同时,随着尿多酸肽作用时间延长,pro-caspase 8、pro-caspase 3表达明显下降（F= 18.241,P<0.001;F= 4.924,P= 0.005）,而active-caspase 8、active-caspase 3表达明显上升（F= 22.322,P<0.001;F= 6.213,P= 0.002）。 结论尿多酸肽可抑制U266细胞增殖,且可能通过caspase凋亡途径在其中起主要作用。     

脂肪酸合成酶抑制剂抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的 明确脂肪酸合成酶（FAS）在人多发性骨髓瘤（MM）细胞中的高表达；探讨FAS抑制剂抑制MM细胞增殖及诱导其凋亡的机制。方法 通过RT-PCR方法检测FAS在MM细胞系U266、RPMI8226细胞中的表达；以MM细胞系U266细胞为模型，MTT法观察FAS抑制剂浅蓝菌素（cerulenin）对U266细胞增殖抑制率；以流式细胞术检测经cerulenin处理后U266细胞Annexin V的表达及细胞周期变化。结果 MM细胞系U266、RPMI8226细胞均有FAS mRNA的高表达，而健康献血员外周血单个核细胞（PBMNC）中不表达FAS mRNA；cerulenin对U266细胞增殖有显著的抑制作用，并呈剂量-效应相关；20μg／ml的cerulenin作用于U266细胞12h，细胞早期凋亡率为56．9％，24h细胞早期凋亡率为69．3％，而对照组分别为4．3％和1．8％（P＜0．01）；细胞周期DNA分析发现，20μg／mlcerulenin作用于U266细胞12h，S期细胞从对照组的9．7％上升至20．3％，作用24h，S期细胞上升为29．8％。结论 FAS在MM细胞中高表达；FAS抑制剂可抑制U266细胞的增殖；DNA合成阻止在S期，其抑制增殖的作用可能是通过促进U266细胞早期凋亡；FAS可能是一个潜在的抗MM的靶位。     

有三种免疫球蛋白分泌的多发性骨髓瘤细胞的克隆起源

目的 用1例有3种免疫球蛋白分泌的多发性骨髓瘤（MM）患者免疫球蛋白重链（IgH)基因标志探讨MM究竟是由几个克隆组成。方法 患者血清蛋白电泳发现3个单克隆免疫球蛋白峰;RT-PCR采用IgH V6个家族（VH1-VH6）正向引物,通用J区反向引物,IgH恒区Cμ、Cδ、Cγ、Cα和Cε5种特异性反向引物。采用不同的引物组合进行PCR。获得的免疫蛋白重排基因经克隆后,进行测序分析。结果 患者用VH3家族引物和通用J区引物获得一条边缘清晰的浓染条带,表明患者骨髓瘤细胞是上Ig VH3片段组成可变区。用Ig VH3和恒区Cμ、Cγ、Cα特异性引物也可获得相应的PCR产物条带,但是不能用引物VH1、VH2、VH4、VH5和J以及VH3和Cδ、Cε获得,表明患者有IgM、IgG、IgA基因重排,因此外周血血清有相应免疫球蛋白产物。克隆用Cμ、Cγ、Cα引物获得的PCR产物并扩增,然后测序比较,3种产物除恒区片段不同外,其重链基因的VH-J重排序列完全一致。表明该MM患者血清出现的3种免疫球蛋白IgM、IgG、IgA的可变区是完全一致的。结论 尽管从蛋白角度分析MM细胞似乎是寡克隆性的,但是基因序列分析结果表明其恶性克隆仍然是单克隆性起源。     

巨细胞病毒对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对IL-6 mRNA表达的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (CMV)对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对细胞IL 6mRNA表达的影响。方法　以 10 0 ,10 ,1半数组织培养感染量 (TCID50 )滴度的CMV与KM3细胞共培养 ,RT PCR法检测细胞CMV即刻早期抗原基因 (IE)、甘油醛 3 磷酸脱氢酶基因 (GAPDH)及IL 6mRNA的表达 ,流式细胞术检测细胞CMVpp6 5抗原的表达 ,透射电镜检测细胞内CMV病毒颗粒。结果　CMV感染的KM3细胞可明显地表达IEmRNA ,同时该细胞IL 6mRNA水平明显升高 ;10 0 ,10TCID50滴度的CMV感染的KM3细胞CMVpp6 5抗原表达率分别为 (5 .5 8± 1.5 5 ) %、(3.75± 0 .85 ) % ,与对照组的 (1.5 8± 0 .33) %相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;透射电镜下 ,10 0TCID50 滴度的CMV感染的KM3细胞内及胞膜表面可见到CMV病毒颗粒。结论　CMV可感染多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞 ,并在其中活化复制 ;该病毒可提高KM3细胞IL 6mRNA的表达     

新诊断多发性骨髓瘤患者120例临床分析

目的 总结多发性骨髓瘤(MM)的临床特征及各治疗方案疗效.方法 回顾性分析120例新诊断MM患者的临床首发症状、实验室检查资料、治疗方法以MP(美法仑+泼尼松)、M2(美法仑+泼尼松+环磷酸胺+卡莫司汀+长春新碱)、VAD(长春新碱+阿霉素+地塞米松)、BD(硼替佐米+地塞米松)、Thal+DEX(沙利度胺+地塞米松)等方案化疗为主的临床疗效.结果 120例MM患者,发病高峰在40～60岁,平均发病年龄54岁,发病年龄在国内有年轻化趋势;MM首发症状以骨骼疼痛、贫血、感染最为常见;临床疗效:①MP方案和M2方案疗效比较,差异无统计学意义(χ2=2.439,P＞0.05);MP方案和VAD方案疗效比较,差异有统计学意义(χ2=10.626,P＜0.05);MP方案和Thal+DEX方案疗效比较,差异无统计学意义(χ2=5.870,P＞0.05).②M2方案与VAD方案疗效比较,差异有统计学意义(χ2=8.307,P＜0.05);M2方案和Thal+DEX方案疗效比较,差异无统计学意义(χ2=2.592,P＞0.05).③VAD和Thal+DEX方案疗效比较,差异无统计学意义(χ2=0.916,P＞0.05).④BD方案总有效率最高,但由于观察例数尚少,尚需进一步观察.结论 目前国内MM治疗仍以化疗为主,主要方案MP、M2、VAD、BD等,均有一定的疗效,适合不同的患者群体.适宜化疗方案的选择并联合自体或异基因造血干细胞移植将有助于改善该疾病患者的预后.     

2-甲氧基雌二醇联合硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米的抗多发性骨髓瘤(MM)效应及与聚集小体(aggresome)形成之间的相关性.方法 以MM细胞系RPMI 8226、NCI-H929、U266、SKO-007细胞作为研究对象,采用硼替佐米单药或联合2-ME2处理,通过等效应线图法分析两者是否具有抗MM协同效应;通过免疫荧光技术在同一组细胞群中研究聚集小体阳性和阴性细胞的凋亡情况.结果 ①硼替佐米呈浓度和时间依赖性地显著提高聚集小体阳性细胞比例,且聚集小体几乎全部出现于非凋亡细胞中.②等效应线图法分析显示一定浓度范围的硼替佐米与2-ME2联合具有显著的协同作用.③硼替佐米与2-ME2联合应用后聚集小体阴性的凋亡细胞显著增多而聚集小体阳性的非凋亡细胞明显减少.在RPMI 8226及U266细胞中,硼替佐米单药与联合用药组相比,聚集小体阴性的凋亡细胞分别由(14.5±2.6)%及(20.1±2.9)%增加至(80.7±6.9)%及(71.6±6.2)%;聚集小体阳性的非凋亡细胞分别由(75.3±5.7)%及(69.1±8.6)%减少到(13.8±3.8)%及(19.5±4.2)%.结论 硼替佐米诱导生成的聚集小体对MM细胞具有保护作用;2-ME2通过抑制聚集小体途径可以显著增强硼替佐米的抗MM效应.