基于高通量测序技术研究葛根芩连汤及其配伍对急性肠炎大鼠肠道菌群多样性的影响

研究葛根芩连汤对急性肠炎大鼠肠道菌群的影响,探讨葛根芩连汤及其配伍改善急性肠炎与肠道菌群的关系。雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、葛根芩连汤全方组、全方去甘草组、全方去葛根组、全方去芩连组和芩连组,造模和给药前后观察大鼠的病理切片情况及检测指标。给药7 d后,选取24只大鼠粪便样本,利用Illumina Miseq平台进行高通量测序。从抗炎和药效指标来看,葛根芩连汤全方组、全方去甘草组、全方去葛根组、芩连组的作用最明显,与模型组比较P<0.05。alpha多样性与beta多样性显示,各组大鼠肠道菌群组成存在明显差异,与模型组比较,除全方去芩连组外均能下调急性炎症引起的菌群丰度和多样性的增加(P<0.05)。利用LEfSe分析挖掘差异菌属,结果显示双歧杆菌属Bifidobacterium等有益菌只出现在正常组中;与正常组相比,模型组乳酸杆菌属Lactobacillus显著减少(P<0.01),拟杆菌属Bacteroides、梭杆菌Flavonifractor和梭菌属Clostridiumsensustricto1上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,葛根芩连汤全方组、全方去甘草组、芩连组均可显著增加阿克曼菌属Akkermansia的数量(P<0.05),降低与肠道炎症疾病相关的梭菌属Clostridiumsensustricto1的数量;全方甘草组和全方去芩连组引起瘤胃菌科Ruminococcaceae的上调,但同时导致结肠细胞毒害的脱硫弧菌属Desulfovibrio富集;全方去葛根组引起变形菌门Proteobacteria及伯克菌目Burkhonderiales的上调。该研究表明葛根芩连汤可能是部分通过改善肠道屏障、调节炎症因子水平及肠道菌群的结构而发挥治疗急性肠炎的作用。     

葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠肠道菌群结构的影响

目的 观察葛根芩连汤对自发型2型糖尿病KKAy小鼠肠道菌群结构的影响.方法 采用自发型2型糖尿病SPF级KKAy小鼠65只及C57BL小鼠13只,高脂饲料喂养,血糖＞13.9mmol/L后,随机分为5组,正常组、阳性组(3.9 mg/kg)、葛根芩连汤高、低剂量组(18.2、4.55 g/kg)及模型组(生理盐水20 mL/kg).连续8周后留取粪便,采用16SrRNA检测菌群结构.结果 因高脂饲料喂养,各给药组体质量均有不同程度上升,其中葛根芩连汤组有相对控制体质量上升的趋势.与模型组比较,各给药组均有不同程度降低血糖的作用(P＜0.05、P＜0.01).同时,葛根芩连汤低剂量组及阳性组能够明显提高KKAy小鼠肠道菌群的群落丰度指数及多样性指数(P＜0.01),包括OTU、ACE、chaol及shannon、simpson.在菌群结构方面,从纲、属、科水平发现葛根芩连汤能够提高 Bacteroidia 的丰度,降低 Bacilli、Clostridia 和 Saccharimonadia 丰度、占比.降低 Lactobacillus 丰度,提高Akkermansia和f_Muribaculaceae_Unclassified丰度.提示葛根芩连汤具有一定程度的类似于乳酸杆菌的调节作用,同时能够调节脂代谢达到缓解2型糖尿病及胰岛素抵抗的作用.结论 葛根芩连汤能够改善糖尿病动物模型肠道菌群结构丰度及多样性,其作用机制可能是通过抑制慢性炎症水平,改善机体糖脂代谢,而达到改善2型糖尿病及胰岛素抵抗的作用.     

基于16S rRNA测序研究葛根芩连汤对菌群失调性腹泻大鼠肠道菌群结构的影响

目的:采用16S rRNA技术研究葛根芩连汤对菌群失调性腹泻大鼠肠道菌群结构的影响.方法:将60只健康SD大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、葛根芩连汤高、中、低剂量组,丽珠肠乐组,每组10只.除正常组外,每日按头孢拉定178.6 mg·kg-1,硫酸庆大霉素31.25 mg·kg-1混合抗生素进行灌胃造模,造模成...     

葛根芩连汤干预2 型糖尿病前期大鼠的代谢机制研究

目的探讨葛根芩连汤对高脂诱导的2型糖尿病大鼠预防作用的代谢机制。方法将SD大鼠随机分为正常组(8只)和高脂造模组(40只),分别使用基础饲料和高脂饲料喂养12周。高脂造模组大鼠产生胰岛素抵抗(IR)后,将高脂造模组大鼠再随机分为模型组及葛根芩连汤低、中、高剂量组(1.65、4.96、14.86 g·kg-1),每组8只。模型组及不同剂量给药组继续给予高脂饲料喂养,给药组给予不同剂量的葛根芩连汤进行干预,灌胃给药,给药体积为10 mL·kg-1,每天1次,连续16周。检测大鼠空腹血糖值及空腹胰岛素含量,计算IR指数;使用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UHPLC/Q-TOF-MS)结合多元分析方法,分析大鼠血清中的内源性代谢物及其变化差异,寻找葛根芩连汤干预IR大鼠及预防2型糖尿病的潜在生物标记物。结果高脂饲料喂养12周后,与正常组比较,造模组大鼠的IR指数明显升高(P<0.05),血糖无明显变化(P>0.05)。给药16周后,与正常组比较,模型组大鼠的IR指数及血糖值均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,葛根芩连汤低、中剂量组大鼠的IR指数显著降低(P<0.01),葛根芩连汤高剂量组的IR指数无明显变化(P>0.05);葛根芩连汤低剂量组的空腹血糖值明显降低(P<0.05),而葛根芩连汤中、高剂量组的空腹血糖值无明显变化(P>0.05)。大鼠血清代谢组分析鉴定共得到4种潜在代谢标志物,分别是Hippuric acid(马尿酸)、12-Ketodeoxycholic acid(12-去氧胆酸)、3-Oxo-4,6-choladienoic acid和LysoPC[20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z)](溶血磷脂酰胆碱,LPC)。结论葛根芩连汤可以降低IR大鼠的胰岛素抵抗指数,同时可预防血糖升高,其机制可能与调节胆汁酸代谢、磷脂代谢以及肠道菌群代谢有关。     

葛根芩连汤干预胰岛素抵抗大鼠的粪便代谢组及相关菌群研究

目的从代谢组学及肠道菌群角度探讨葛根芩连汤干预胰岛素抵抗（IR）大鼠肠道代谢紊乱的作用机 制。方法将雄性SD 大鼠随机分成正常组、模型组及葛根芩连汤低、中、高剂量（1.65、4.96、14.86 g·kg-1）组。 采用高脂饲料喂养12 周建立IR 大鼠模型;模型复制成功后,连续灌胃给药16 周,每天1 次,同时继续以高 脂饲料喂养。给药结束后,采用超高效液相色谱-串联四级杆-飞行时间质谱（UHPLC/Q-TOF-MS）结合多元分 析的代谢组学技术对大鼠的粪便样品进行代谢轮廓分析,分析各组大鼠粪便内源性代谢物的变化,鉴定潜在 的生物标记物并进行生物学意义分析。对粪便样品进行16S rRNA V3~V4 区域测序,通过两部分模型（Twopart model）对生物标记物与肠道菌群进行关联性分析。结果筛选和鉴定出5 个潜在生物标记物：咪唑丙酸、 吲哚丙烯酸、二十碳四烯酸、二十四碳六烯酸及十二烷二酸;与模型组比较,葛根芩连汤低剂量组的十二烷 二酸含量明显增加（P＜0.05）,二十四碳六烯酸含量明显减少（P＜0.05）。肠道菌群关联分析结果显示,二十碳 四烯酸和十二烷二酸共关联到5 个肠道菌群操作分类单元（OTU）,涉及到的肠道菌群为厚壁菌门和拟杆菌门, 其中厚壁菌门消化链球菌科Romboutsia 属为二者所共有,其余OTU 为十二烷二酸特有;另外3 个生物标记物 未关联到相关肠道菌群。结论葛根芩连汤对高脂诱导的IR 大鼠的预防作用可能与其改善肠道中内源性代谢 物及相关肠道菌群的水平,恢复体内正常代谢活动有关。     

藏族药二十五味松石丸调控肠道菌群改善非酒精性脂肪性肝炎的作用机制研究北大核心CSCD

探究藏族药二十五味松石丸(Ershiwuwei Songshi Pills,ESP)对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠肠道菌群的影响。将48只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组(control),模型组(MCD),藏族药二十五味松石丸高(ESP 0.8 g·kg^(-1))、中(ESP 0.4 g·kg^(-1))、低(ESP 0.2 g·kg^(-1))剂量组和吡格列酮组(pioglitazone,PGZ 10 mg·kg^(-1)),每组8只。空白组普通饲料喂养,其余5组蛋氨酸-胆碱缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)饲料喂养5周构建非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型,造模的同时灌胃(ig)给予相应的药物进行干预;实验过程中记录小鼠体质量、日饮水量及日摄食量的变化;实验结束后收集肝组织,苏木精-伊红染色(HE)染色观察肝脏病理变化,油红O染色观察肝脏脂肪堆积情况,检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和肝组织中甘油三酯(TG)的含量;采用16S rRNA高通量测序技术检测小鼠肠道菌群的变化。结果显示,与模型组相比,二十五味松石丸高、中、低剂量组和吡格列酮组血清中的AST、ALT和肝组织中TG含量显著降低,对肝细胞脂肪变性和肝脏中脂肪堆积均有改善作用。16S rRNA测序结果显示,模型组肠道菌群丰度和多样性指数降低,二十五味松石丸组小鼠肠道菌群的丰度和多样性指数升高,并且在门水平上降低了厚壁菌门Firmicutes与拟杆菌门Bacteroidetes的比例;在改变肠道菌群组成方面,降低了肠道菌群中Erysipelotrichia和Faecalibaculum的丰度,提高了Desulfovibrionaceae、Rikenellaceae、Lachnospiraceae和Ruminococcaceae的丰度。该研究发现藏族药二十五味松石丸对MCD饮食诱导的NASH具有保护作用,其作用机制可能是通过调节肠道菌群的变化,改变肠道菌群的组成,抑制肠道菌群的失调,进而改善NASH。     

葛根芩连汤调节肠道菌群的研究进展

综合葛根芩连汤相关的动物实验及临床研究,梳理葛根芩连汤对肠道菌群的影响及其通过调节肠道菌群以治疗疾病的作用机制。葛根芩连汤可调节肠道菌群结构向正常状态转归,双向调节菌群多样性,上调双歧杆菌属（Bifidobacterium）等益生菌属,下调Tyzzerlla属等机会致病菌属,抑制大肠埃希菌（Escherichia coli）等致病菌属,且这种作用的发挥受用药剂量及疗程的影响。葛根芩连汤能通过影响肠道菌群,增加体内短链脂肪酸的含量,减少肠道炎症因子,加强肠道紧密连接,形成生物屏障,维持肠道屏障和内环境的稳定,从而发挥对疾病的防治作用。     

16S rRNA高通量测序研究柴芪汤对代谢综合征大鼠肠道菌群的影响

目的:采用16S rRNA高通量测序技术分析柴芪汤对代谢综合征(MS)大鼠肠道菌群的影响。方法:通过Illumina Miseq PE300型高通量测序仪对大鼠粪便肠道菌群进行16S rRNA基因V3-V4可变区检测,运用Usearch、Mothur、LEfSe分析肠道菌群的组成结构及不同菌属相对丰度变化。结果:柴芪汤能够逆转MS大鼠肠道菌群物种多样性的下降,并纠正MS导致的菌群组成结构改变。研究发现MS大鼠的肠道菌群在菌属水平有57个菌属相对丰度发生显著变化,而柴芪汤能将其中的54个菌属恢复至正常水平。结论:从肠道微生态角度阐释了MS的可能病机,柴芪汤可以通过调节肠道菌群防治MS。     

基于16S rRNA技术分析柴胡龙骨牡蛎汤对精神分裂症大鼠肠道菌群多样性的影响

目的:基于16S rRNA技术研究柴胡龙骨牡蛎汤对精神分裂症模型大鼠肠道菌群多样性的影响,并探讨该复方治疗精神分裂症的作用机制。方法:雄性SD大鼠除正常组外,每日按剂量0. 1 mg·kg~(-1)腹腔注射地卓西平马来酸盐进行造模,模型成功后,柴胡龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组给予实验大鼠柴胡龙骨牡蛎汤(11. 2,5. 6,2. 8 g·kg~(-1)),利培酮组按0. 4 mg·kg~(-1)灌胃给予利培酮片,正常组与模型组灌胃给予蒸馏水,给药体积均为10 mL·kg~(-1),连续给药14 d,将大鼠麻醉后取大鼠盲肠内容物,以Illumina MiSeq为测序平台,对其16S rRNA V4区的肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数量,alpha与beta多样性,丰富度指数与多样性指数以及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价。结果:柴胡龙骨牡蛎汤可改善精神分裂模型大鼠OTUs数量及alpha与beta多样性的失调,降低菌群生物丰富度指数与多样性指数,对精神分裂症模型大鼠的5种差异菌门(上调拟杆菌门、酸杆菌门、变形菌门和TM7菌门,下调厚壁菌门)与20种差异菌属的分布结构均产生回调作用。结论:柴胡龙骨牡蛎汤对精神分裂症模型大鼠的异常菌群多样性起到治疗作用,并通过16S rRNA技术揭示了肠道菌群在精神分裂状态下的相关病理机制。     

葛根芩连汤对高血脂模型大鼠降脂作用研究

目的:研究葛根芩连汤对高血脂模型大鼠的降脂作用。方法:建立大鼠高血脂模型,用葛根芩连汤高、中、低三个剂量组提取物灌胃,连续6周,采集大鼠血清,用半自动生化仪测量总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的值,计算肝指数,并做病理学观察。结果:葛根芩连汤能显著降低高脂血症大鼠TC、HDL-C、LDL-C和ALT水平。大鼠肝脏切片与模型对照组大鼠相比,葛根芩连汤治疗组肝组织细胞肿胀明显减轻。结论:葛根芩连汤对高脂饮食诱导的高血脂模型大鼠具有明确的降脂作用。     

FQ-PCR技术分析葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌属的影响

目的探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌在不同肠管内的动态的影响。方法采用氨苄青霉素灌胃制备巴马猪抗生素性腹泻动物模型,然后用葛根芩连汤进行治疗,采用实时荧光定量PCR检测葛根芩连汤治疗前后十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠中双歧杆菌的数量,分析其动态变化。结果与正常对照组比较,模型组肠道内双歧杆菌数量显著减低(P0.01),而用药组7d与之相比亦有差异(P0.05);与模型组比较,葛根芩连汤治疗组双歧杆菌属在各个肠段中数量显著上升(P0.05)。结论氨苄青霉素灌胃会减少肠道优势菌双歧杆菌数量,葛根芩连汤对抗生素对腹泻模型肠道双歧杆菌具有调理作用。     

葛根芩连汤干预高脂血症肥胖大鼠的粪便代谢组学研究

目的:探讨葛根芩连汤干预高脂血症肥胖大鼠肠道代谢,改善脂代谢的相关代谢机制。方法:将大鼠随机分成正常对照组与高脂组,高脂组以高脂饲料饲养建立高脂血症肥胖大鼠模型,待模型建立后,将高脂组大鼠随机分为模型对照组,葛根芩连汤14.85 g/kg、4.85 g/kg、1.65 g/kg组,各组继续给予高脂饲料并给药7 w,观察葛根芩连汤对大鼠血脂的影响,利用液质联用技术,对各组大鼠的粪便代谢组进行分析,寻找各组间共同的生物标记物,分析生物标记物的剂量依赖性。结果:高脂饲料饲养4 w后,高脂血症肥胖大鼠模型建立成功。给药7 w后,与正常对照组比较,模型对照组TC、TG、LDL-C含量明显升高(P<0.01或P<0.05),HDL-C含量明显降低(P<0.05),Lee′s指数显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较,葛根芩连汤1.64、4.85、14.85 g/kg组TC、TG和HDL-C含量明显降低(P<0.05或P<0.01),葛根芩连汤4.85 g/kg组LDL-C含量明显降低(P<0.05),葛根芩连汤1.65 g/kg组FBG含量明显降低(P<0.05)。通过对各组大鼠粪便进行代谢组分析,成功鉴定了正离子模式中的5个物质:亚油酸、二十四碳六烯酸、切诺维乙醇酰胺、12-酮基去氧胆酸和3-氧代胆酸,负离子模式中未能鉴定到物质。除亚油酸和12-酮基去氧胆酸外,葛根芩连汤对生物标记物二十四碳六烯酸、切诺维乙醇酰胺和3-氧代胆酸的调节均具有较好的剂量依赖性。结论:葛根芩连汤能够有效改善高脂血症肥胖大鼠脂代谢异常,改善高脂血症肥胖大鼠脂代谢紊乱与调节不饱和脂肪酸的生物合成、胆汁酸代谢有关。     

糖耐康对T2DM大鼠ZDF肠道菌群结构的影响

目的:研究自发性2型糖尿病(T2DM)大鼠ZDF(Zucker diabetic fatty)(fa/fa)与ZDF(fa/+)及经糖耐康干预后,ZDF(fa/fa)肠道共生细菌菌群结构的变化。方法:将6只雄性ZDF(fa/+)大鼠设为正常组,雄性ZDF(fa/fa)大鼠18只(不同日随机血糖均值≥11.1 mmol·L~(-1))设为T2DM成模组。根据体重及随机血糖(RBG)随机分为3组,分别为模型组(生理盐水10 mL·kg~(-1)),糖耐康高、低剂量(糖耐康3.24,0.81 g·kg~(-1))组,每组6只。给药6周后取材,腹主动脉取血检测大鼠空腹血糖(FPG)及空腹血清胰岛素(FINS);收集大鼠肠道内粪便,行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),通过扩增子焦磷酸测序分析16S rRNA V4区菌群的改变。结果:与模型组比较,糖耐康高、低剂量组大鼠FPG,FINS有显著改善(P0.01)。各组大鼠在菌群丰度多样性及结构组成上有显著差异。在科及以下水平上,与正常组比较,模型组乳酸杆菌明显升高(P0.05);与模型组比较,糖耐康高、低剂量组乳酸杆菌丰度有所下降,但无统计学差异,普雷沃氏菌丰度显著升高(P0.01),且普雷沃氏菌属与ZDF大鼠FINS呈正相关。结论:ZDF(fa/fa)与ZDF(fa/+)大鼠在肠道菌群结构上有很大差异,糖耐康对ZDF大鼠血糖的改善作用可能是通过影响ZDF大鼠肠道中乳酸杆菌、普雷沃氏菌的丰度实现。     

清肺排毒汤对大鼠整体代谢及肠道菌群的调节作用研究

通过代谢组学和肠道微生物组学探讨清肺排毒汤(Qingfei Paidu Decoction,QPD)对大鼠整体代谢及肠道菌群的影响,为揭示清肺排毒汤的临床药效机制提供实验依据。采用GC-MS结合LC-MS/MS的非靶向代谢组学以及肠道微生物组学方法,对清肺排毒汤干预大鼠5 d后的血清内源性代谢物谱与肠道菌群组成开展了系统的研究。基于GC-MS和LC-MS/MS代谢组学方法分别获得清肺排毒汤调控的23种和43种差异代谢物,涉及的代谢通路主要包括甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、TCA循环和丙酮酸代谢。利用基于16S rDNA测序分析发现清肺排毒汤显著调节了大鼠肠道菌群的组成,明显上调Romboutsia,Turicibacter,Clostridium_sensu_stricto_1的相对丰度,下调norank_f_Lachnospiraceae的相对丰度。该研究证明清肺排毒汤短期干预能够显著调节大鼠整体代谢,并调节动物的肠道菌群组成,提示清肺排毒汤的临床疗效可能与其对机体的内源性代谢调控及肠道菌群组成的调节有关。     

葛根芩连汤对胰岛素抵抗模型大鼠尿液代谢组影响的~1H NMR代谢组学方法研究

目的采用基于~1H NMR的代谢组学方法,研究葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)对高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠尿液代谢组的影响。方法 32只Wistar大鼠适应1周后,随机分为正常对照组、模型组、阳性药物组和葛根芩连汤组,每组8只。正常对照组给予纯净水喂养,其余3组给予10%的高果糖水喂养4周,制备胰岛素抵抗模型。4周后,阳性药物组和葛根芩连汤组分别给予罗格列酮3. 0 mg/(kg·d)和葛根芩连汤18. 2 g/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予一定体积的纯净水灌胃,整个实验持续8周。在实验第6和8周末收集各组大鼠的尿液,并采集大鼠尿液的~1H NMR谱,应用多成分数据分析方法分析。结果在第8周末,与模型组大鼠相比,葛根芩连汤组大鼠尿液中α-酮戊二酸、柠檬酸、胆碱、磷脂酰胆碱/甘油磷脂酰胆碱(PC/GPC)和牛磺酸含量增加,肌酸/肌酐、氧化三甲胺/甜菜碱和马尿酸含量降低;而与对照组相比,仅肌酸/肌酐相比对照组含量升高,其它无显著性变化。结论葛根芩连汤能够逆转多种代谢物紊乱,初步阐明了葛根芩连汤对胰岛素抵抗状态下大鼠尿液代谢具有调控作用。     

基于靶向代谢组学探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻大鼠粪便短链脂肪酸的影响

目的：通过靶向代谢组学探究葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻(AAD)粪便短链脂肪酸(SCFAs)代谢的影响。方法：将240只SD大鼠随机分为空白组、模型组、丽珠肠乐组(0.15 g·kg^-1)、葛根芩连汤高、中、低剂量组(10.08、5.04、2.52 g·kg^-1),每组40只(雌雄各半),除空白组外,其余各组每日均给予克林霉素(250 mg·kg^-1)灌胃造模,连续7 d。造模成功后,各给药组按相应剂量灌胃药液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续治疗14 d。分别在药物干预后0、3、7、14 d,从各组中随机抽取8只大鼠,气相色谱-飞行时间质谱法(GC-TOF-MS)对大鼠粪便中SCFAs进行靶向代谢组学分析,运用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)比较不同治疗时间组间代谢轮廓差异,并对大鼠粪便中SCFAs的组间含量变化进行比较。结果：PLS-DA结果显示,空白组与模型组可明显区分,在葛根芩连汤治疗7 d后逐渐趋近于空白组。进一步分析SCFAs组成后发现,与空白组比较,模型组中乙酸的占比增加,丁酸、戊酸、...     

葛根芩连汤对湿热证大鼠炎症因子及肠黏膜屏障功能的影响

目的 研究葛根芩连汤对湿热证模型大鼠的药效,并探究葛根芩连汤是否能调节肠黏膜屏障功能,改善湿热证炎症反应。方法 Wistar雄性大鼠随机分为对照组(C)、湿热证组(M)、葛根芩连汤低剂量组(T1,0.98·kg^-1·d^-1)、葛根芩连汤高剂量组(T2,4.9·kg^-1·d^-1)。以内湿热饮食+外湿热环境的方法复制湿热证动物模型,共42 d。葛根芩连汤低、高剂量组给药治疗14 d。期间采用旷场实验记录大鼠的探究行为及活动度,监测大鼠精神状态、被毛、阴囊等体征变化并赋分统计。动物处死后行苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠结肠组织病理变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血浆中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-LA),血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠组织紧密连接闭合蛋白(Occludin)、封闭蛋白-1(Claudin-1)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1...     

基于16S rRNA测序与网络药理学探讨葛根芩连汤干预抗生素相关性腹泻的作用机制

目的：通过16S rRNA测序与网络药理学探究葛根芩连汤(GQT)对抗生素相关性腹泻(AAD)肠道菌群的作用机制。方法：将60只SD大鼠随机平均分为空白组、模型组、丽珠肠乐组(0.15 g·kg^-1)、葛根芩连汤高、中、低剂量组(10.08、5.04、2.52 g·kg^-1),除空白组外,各组每日均给予克林霉素(250 mg·kg^-1)灌胃造模,连续7 d。造模成功后,各给药组按剂量灌胃对应药物,1次/d,持续14 d,空白组与模型组给予等体积生理盐水灌胃。通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选GQT活性成分及作用靶点,利用人类基因数据库GeneCards、在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库、药物遗传学与药物基因组学知识库(PharmGKB)、药品生物信息学和化学信息学数据库DrugBank、疾病相关的基因与突变位点数据库DisGeNET检索AAD疾病靶点,通过R软件分析获得“药物-疾病”共有靶点。利用STRING数据库分析靶点蛋白质-蛋白质相互作用关系,并进行京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集...     

基于16S rDNA测序技术的自发性高血压大鼠肠道菌群结构变化及中药干预作用

目的分析自发性高血压大鼠(SHR)肠道菌群结构特征,初步探讨中药黄连解毒汤(HLJDD)干预作用影响。方法 12周龄雄性SHR随机分模型组(M组)、HLJDD组(H组),同周龄雄性Wistar大鼠为正常对照组(W组),每组各4只。空白对照组及模型组常规饲养,HLJDD组按0.027 g/(kg·d)灌胃给药,每天给药1次,连续给药6周。干预结束后,取出盲肠内容物(新鲜粪便),采用16S rDNA高通量测序并进行生物信息学分析。结果 3组大鼠肠道微生物测序覆盖度在0.997以上,从属水平分析3组大鼠物种丰度聚类分布于4个优势的细菌门:27个属于厚壁菌门类(Firmicutes)、4个属于拟杆菌门类(Bacteroidetes)、3个属于变形菌门类(Proteobacteria)和1个属于疣微菌门类(Verrucomicrobia)门类细菌;Simpson指数表明,模型组大鼠肠道菌群多样性降低,HLJDD组大鼠肠道菌群多样性高于模型组;3组大鼠肠道菌群微生物群落结构在门水平上主要由厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)组成,其中模型组厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度增加,HLJDD组大鼠肠道菌群厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度低于模型组;3组大鼠肠道菌群微生物群落结构在属水平上主要由乳酸杆菌属(Lactobacillus)、肠球菌属(Enterococcus)、大肠志贺氏杆菌属(Escherichia Shigella)组成,其中益生菌乳酸杆菌属(Lactobacillus)相对丰度在模型组明显降低,HLJDD组大鼠肠道菌群乳酸杆菌属相对丰度高于模型组。结论 SHR肠道菌群结构失于平衡状态,菌群多样性有一定程度下降,HLJDD可能通过增加SHR菌群多样性、降低SHR致病菌厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度、升高SHR益生菌乳酸杆菌属相对丰度达到对抗高血压的作用,尚需扩大样本量进一步进行验证。     

基于16S rDNA高通量测序研究针灸对克罗恩病大鼠肠道菌群的调节作用

目的：采用16S rDNA高通量测序技术分析针灸对克罗恩病（CD）大鼠肠道菌群物种相对丰度和多样性的影响,探讨针灸对克罗恩病的作用机制。方法：将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药饼灸组、电针组和西药组,每组8只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸溶液灌肠4周构建CD大鼠模型,隔药饼灸组和电针组选取天枢（双侧）、气海穴进行干预,西药组采用柳氮磺吡啶溶液灌胃干预。干预结束后取结肠组织进行HE染色,收取大鼠粪便进行16S rDNA高通量测序并对进行物种相对丰度、alpha多样性和基因功能代谢预测分析等。结果：隔药饼灸组和电针组大鼠结肠组织病理学评分显著低于模型组（P<0.01）。与正常组比较,模型组拟杆菌门、放线菌门、拟杆菌纲、拟杆菌目、紫单胞菌科、普雷沃菌科、拟杆菌科、普雷沃菌属等的相对丰度升高,厚壁菌门、变形菌门、梭菌纲、梭菌目、毛螺菌科、瘤胃菌科、乳酸杆菌属等的相对丰度降低;在经过隔药饼灸和电针治疗后,上述大多数微生物相对丰度均有不同程度改善。与正常组比较,模型组肠道菌群的Chao1、Observed species、Shannon、Simpson等alpha多样性指数均显著下降（P<0.05）;与模型组比较,隔药饼灸组和电针组上述指数均显著升高（P<0.05）。功能预测分析发现隔药饼灸和电针均能调节参与碳水化合物代谢、氨基酸代谢等的功能基因。结论：CD与肠道菌群结构变化有关,针灸能够调节CD大鼠肠道菌群物种相对丰度和菌群多样性。