雷公藤多苷通过NLRP3/caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路对糖尿病肾病大鼠肾损伤的影响

探讨雷公藤多苷(multi-glycosides of Tripterygium wilfordii,GTW)通过Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)/消皮素D(GSDMD)细胞焦亡通路改善糖尿病肾病(diabetic kidney di-sease, DKD)大鼠肾损伤的作用和机制。将42只雄性SD大鼠随机分为正常组8只、造模组34只。造模组予以高糖高脂饮食及一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ),诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦(代文)组、雷公藤多苷(GTW)组。正常组及模型组灌服生理盐水,治疗组分别予以代文和GTW连续灌胃6周后,生化检测各组大鼠血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, Scr)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、血清白蛋白(albumin, ALB)及24 h尿蛋白定量(24 hours urinary ...     

基于NLRP3/caspase-1通路探讨参附注射液调节细胞焦亡改善慢性心力衰竭

基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)信号通路探讨参附注射液干预慢性心力衰竭的机制及作用靶点。采用皮下注射异丙肾上腺素法建立慢性心力衰竭大鼠模型,造模成功的大鼠用随机数字表法分为模型组、参附注射液组、MCC950(NLRP3抑制剂)组,另设空白组,给药15 d后超声心电图检测各组大鼠心功能指标[左室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、左室缩短分数(left ventricular dysfunction, LVFS)];酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测大鼠血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-18;苏木素-伊红(hematoxylin...     

黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3/caspase-1细胞焦亡通路的影响

探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠细胞焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NOD-like receptor thermoprotein domain 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)通路阐释其可能的作用机制.建立3％葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为6组:正常组,模...     

黄芩素调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡减轻小鼠急性肺损伤作用

目的 探究黄芩素对急性肺损伤（acute lung injure,ALI）小鼠的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）焦亡通路的调控作用。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Caspase-1抑制剂VX-765（30 mg/kg）组和黄芩素低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,15 mg/kg）,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予黄芩素或VX-765（30 mg/kg）干预。造模24 h后,检测小鼠肺湿干质量比以评价肺肿胀;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织中巨噬细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-18、IL-1α和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;采用Western blotting检测肺组织NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达。人源单核细胞白血病THP-1细胞加入100 nmol/L佛波酯诱导24 h,贴壁后随机分为对照组、模型组、VX-765（500 nmol/L）组和黄芩素低、中、高剂量（3、10、30 μmol/L）组,除对照组外,采用1 μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）刺激THP-1细胞建立细胞炎症模型,给予黄芩素或VX-765干预,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和IL-1α水平;LDH试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用膜联蛋白-V-PE（Annexin-V-PE）/7-氨基放线菌素（7-aminoactinomycin,7-AAD）试剂盒评价细胞焦亡情况;Western blotting检测细胞NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达。结果 在ALI小鼠模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组小鼠肺肿胀程度明显减轻（P<0.01）,肺组织损伤评分显著降低（P<0.01）,肺组织中巨噬细胞炎性病变得到缓解,血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-1α水平明显降低（P<0.05、0.01）,肺组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01）。在细胞炎症模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组THP-1细胞IL-1β、IL-18、IL-1α分泌量显著降低（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达水平明显降低（P<0.05、0.01）,NLRP3炎症小体组装明显被抑制（P<0.05、0.01）,LDH释放量及细胞焦亡率显著降低（P<0.01）。结论 黄芩素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,从而改善LPS诱导的小鼠ALI。     

艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路的影响

目的:观察艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞焦亡NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路的影响。方法:将30只健康SPF级SD大鼠雌雄各半,分为正常组、模型组和艾灸预处理组。选取足三里(双侧)和中脘穴进行艾灸预处理7 d,再用无水乙醇灌胃法进行造模,观察胃黏膜组织形态,评估UI指数,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)3种细胞因子的表达量; Western blot检测大鼠胃组织炎性小体核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素(GSDMD)的表达水平。结果:艾灸预处理后,机体在应对致病因素刺激时可抑制IL-1β、IL-18及TNF-α的分泌,对比正常组和模型组均有明显下降(P<0.01),NLRP3、Caspase-1和GSDMD蛋白的表达量均低于正常组和模型组(P<0.01)。结论:艾灸预处理通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD经典通路途径抑制细胞焦亡,降低炎症发生的程度,达到保护胃黏膜的作用。     

益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）细胞焦亡通路,探讨益气养阴活血方防治糖尿病肾病（DKD）肾脏损伤的可能作用机制。方法 随机将50只雄性SD大鼠分为正常组8只、造模组42只。造模组高糖高脂饮食6周后予一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组（8.33 mg·kg^-1）、益气养阴活血方低、高剂量组（11、22 g·kg^-1）。连续灌胃6周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）及24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均显著升高（P<0.01）,肾组织病变程度严重,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各药物组FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）,肾组织病变程度得到改善,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,以益气养阴活血方高剂量组效果最佳。结论 益气养阴活血方可通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制细胞焦亡,缓解DKD大鼠炎症反应,减轻肾脏病理损伤。     

基于焦亡通路NLRP3/Caspase-1探讨降脂消斑片防治动脉粥样硬化机制

目的：观察降脂消斑片对高脂饮食（High-Fat Diet,HFD）诱导的动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）小鼠的白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）蛋白表达的影响及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-Binding Oligomerization Domain-like Receptor Protein 3,NLRP3)/半胱天冬酶1(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase 1,Caspase-1)通路活化的影响,探讨降脂消斑片抑制细胞焦亡的作用机制,为防治AS提供新思路。方法：将实验小鼠分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、降脂消斑片给药组（中、高、低剂量组）。除空白组外,其余5组均通过HFD建立小鼠AS模型,6周后检测小鼠主动脉建模情况,预防性给与相应处理因素6周,12周后采用全自动生化仪检测血清总胆固醇（Total Cholesterol,...     

基于Caspase-1/GSDMD焦亡通路探讨复方血栓通胶囊对视网膜血管炎的作用机制

目的：基于Caspase-1/GSDMD焦亡通路探讨复方血栓通胶囊对视网膜血管炎的作用机制。方法：将60只C57BL/6小鼠随机分为空白组（Control）、模型组（Model）、复方血栓通低剂量组（FXST-L）、复方血栓通中剂量组（FXST-M）和复方血栓通高剂量组（FXST-H）,每组12只。将人IRBP1-20肽溶液（100μL,5 mg/mL）与完全弗氏佐剂（100μL,含5 mg/mL结核分枝杆菌）乳化后在小鼠的头颈部、左右大腿根部及尾根部进行皮下注射,再腹腔注射百日咳毒素（100μL,5μg/mL）进行造模。造模后24 h,各组小鼠均灌胃20 d,其中Control、Model组给予蒸馏水,FXST-L、FXST-M、FXST-H组分别给予0.6、1.2、2.4 g/kg复方血栓通溶液。21 d后,各组小鼠进行视网膜眼底血管检查;HE染色法观察各组小鼠视网膜组织病理学变化;PCR法检测各组小鼠视网膜组织Caspase-1、GSDMD、IL-1β mRNA水平;Western blot法检测各组小鼠视网膜组织Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β蛋白表达水平;ELI...     

人参皂苷Rg1通过调控AMPK/NLRP3通路介导的细胞焦亡抑制大鼠肺纤维化研究

目的 探究人参皂苷Rg₁对大鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的影响及作用机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg₁(72 mg/kg)组、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)激动剂(200 mg/kg)组、人参皂苷Rg₁(72 mg/kg)+AMPK抑制剂(20 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠气管内注射博来霉素(5 mg/kg)构建大鼠PF模型。造模成功后2 d开始给药,连续给药28 d后检测大鼠肺功能指标;采用苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肺组织病理变化;采用免疫组化检测肺组织I型胶原(collagen I)和α-肌动球蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;采用试剂盒测定肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-...     

基于NLRP3介导的焦亡通路探讨针刺在中枢神经系统疾病中的作用*

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）的激活在细胞焦亡(Pyroptosis)中发挥着重要作用,而焦亡作为新型程序性细胞死亡方式,参与了诸多中枢神经系统(Central nervous system ,CNS)疾病的免疫应答,并对CNS疾病起重要调节作用,是现今的研究热点与难点。同时,干预NLRP3炎症小体的激活与中枢神经细胞焦亡可以作为减缓CNS疾病的有效手段,其中,针刺干预又发挥着对CNS疾病神经修复的重要作用。因此本文综述了NLRP3炎症小体介导细胞焦亡的研究进展和针刺干预该过程的研究新方向。     

灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

目的 探讨灵宝护心丹对心肌梗死大鼠心肌NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)细胞焦亡信号通路的影响。方法 将50只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、倍他乐克组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹低剂量组（0.9 mg/kg）、灵宝护心丹高剂量组（1.8 mg/kg）,每组10只,连续灌胃3周,末次给药24 h后行急性心肌梗死造模手术,假手术组只穿线不结扎。造模24 h后取材检测相关指标。利用TTC染色测量大鼠心肌梗死面积,采用苏木精-伊红（HE）、铁-苏木素（Heidenhain）染色观察心肌组织病理改变,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠血清白介素（IL）-1β、IL-18水平,采用Western Blot检测大鼠心肌组织NLRP3、Caspase-1水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠均出现不同程度的心肌梗死范围（P<0.01）,心肌组织发生炎症反应、心肌缺血情况,大鼠血清IL-1β、IL-18水平升高（P<0.01）,心肌组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平升高（P<0.01）;...     

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨补中益气汤干预NOD.H-2h4小鼠AIT细胞焦亡的机制

目的 基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠细胞焦亡的作用机制。方法 60只NOD.H-2^h4小鼠分为正常组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量（4.10、8.19、16.38 g·kg^-1）组和硒酵母片（0.26 mg·kg^-1）组,每组10只。除正常组外,其余各组均给予0.05% 碘化钠（NaI）灌胃8周造模,继续给药干预8周。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）、甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠甲状腺组织病理学改变;免疫组化法检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测甲状腺组织中细胞焦亡相关蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清TPO-Ab、TgAb水平显著升高（P<0.01）,甲状腺滤泡或增大呈立方状,或破坏萎缩,滤泡周围可见大量淋巴细胞浸润;与模型组比较,给药组TPO-Ab、TgAb水平显著降低（P<0.01）,滤泡形态结构有所改善,淋巴细胞浸润程度有所减轻,其中补中益气汤中剂量组降低和改善效果最为明显。与正常组比较,模型组小鼠甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达显著增加（P<0.01）,NLRP3、剪切的（cleaved） Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,给药组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,其中补中益气汤中剂量组降低效果最为明显,给药组NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 补中益气汤可改善AIT,其机制可能是通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡实现的。     

心脉康方调控TLR4/NLRP3焦亡通路抗动脉粥样硬化机制研究

目的：探讨心脉康方治疗动脉粥样硬化(AS)的可能分子作用机制。方法：将46只Apo E^-/-小鼠进行8周高脂饲料连续喂养复制小鼠动脉粥样硬化模型,10只C57BL/6小鼠同时使用普通饲料喂养,8周后取6只Apo E^-/-小鼠验证造模成功后,将剩余40只小鼠按随机数字表法分为模型组、阿托伐他汀组、心脉康方低剂量组、心脉康方高剂量组,每组10只。10只C57BL/6小鼠作为空白对照组。各药物干预组小鼠给予相应的药物干预,空白对照组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃。12周后,采用苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察主动脉组织病理学形态改变;采用ELISA法检测血清中ox-LDL、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18的水平;采用全自动生化仪检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;采用q PCR检测主动脉组织中易损斑块稳定性指标(ICAM-1 m RNA、VCAM-1 m RNA、MMP-9 m RNA、MCP-1 m RNA)及细胞焦亡相关指标(IL-1β m RNA、...     

基于PERK/TXNIP/NLRP3通路探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死大鼠神经元细胞焦亡的影响

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路,探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死(diabetes mellitus complicated with cerebral infarction,DM-CI)大鼠神经元细胞焦亡的影响。方法 将95只大鼠随机分为假手术组,模型组,左归降糖通脉方低(12 g·kg^-1)、高剂量(24 g·kg^-1)组,阳性对照(吡格列酮二甲双胍片+阿司匹林肠溶片)组。除假手术组外,其余各组以高糖高脂饲料喂养4周后联合35 mg·kg^-11%链脲佐菌素(STZ)腹腔注射合并大脑中动脉闭塞(MCAO)术建立DM-CI大鼠模型。用蒸馏水,左归降糖通脉方低、高剂量,吡格列酮二甲双胍片和阿司匹林肠溶片进行相应干预,Zea-Longa评分法对大鼠进行神经功能缺损(NIHSS)评分,TTC染色法测量大鼠脑梗死体积,检测各组大鼠随机血糖和果糖胺水平,HE染色观察大鼠脑组织病理学变化,Western Blot法检测大鼠缺血侧脑皮质、海马区P...     

加味温胆汤抑制NLRP3介导的内皮细胞焦亡防治冠心病痰瘀互结证机制研究

目的 基于NLRP3/Caspase-1通路,观察加味温胆汤对内皮细胞焦亡的调控作用,探讨加味温胆汤防治冠心病痰瘀互结证的作用机制。方法 随机将20只雄性SD大鼠分为空白血清组和加味温胆汤血清组,空白血清组给予蒸馏水灌胃,加味温胆汤血清组给予加味温胆汤8.64 g/kg灌胃,1次/d,连续灌胃7 d。末次灌胃3 h后,腹主动脉穿刺取血,分离血清。取人冠状动脉内皮细胞,将其分为4组：空白组加入空白血清培养,模型组加入脂多糖(LPS)、空白血清、三磷酸腺苷(ATP)培养,MCC950组加入LPS、空白血清、MCC950、ATP培养,加味温胆汤组加入LPS、加味温胆汤血清、ATP培养。MTT法检测各组细胞活力,免疫组织化学法检测细胞中NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-1β(IL-1β)阳性表达情况,RT-qPCR法检测细胞中NNLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达量。结果 与空白组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.05),NLRP3、Caspase-1、IL-1β阳性表达积分和mRNA表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,MCC950组和...     

半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

目的 探讨半夏泻心汤（BXT）对溃疡性结肠炎（UC）大鼠细胞焦亡通路NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）及其下游因子的影响,阐释BXT治疗UC的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为正常组、UC模型组、BXT低剂量组6.3 g·kg^-1·d^-1、BXT高剂量组12.6 g·kg^-1·d^-1、柳氮磺吡啶（SASP）组0.42 g·kg^-1·d^-1,每组各7只。依据分组灌胃大鼠2.5%浓度的葡聚糖硫酸钠盐（DSS）溶液10 d建立UC模型后,灌胃给药7 d。实验期间观察大鼠一般状态,给药期间统计疾病活动指数（DAI）评分,实验结束后,采集结肠组织进行苏木素-伊红（HE）染色观察病理学改变,以观察BXT疗效。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织NLRP3、Caspase-1、消皮素D（GSDMD）、白细胞介素（IL）-1β mRNA转录水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达情况,以探讨BXT的治疗机制。结果 与正常组比较,UC模型组大鼠DAI评分明显升高,结肠组织出现病理学改变,结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β mRNA的表达及蛋白水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;与UC模型组比较,各给药组大鼠DAI评分显著降低,结肠组织病理学改变得到改善;BXT给药组结肠组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β mRNA及蛋白的表达水平明显下调或趋于下调,以BXT低剂量组效果最佳（P<0.05,P<0.01）。结论 BXT可通过调控NLRP3/Caspase-1通路抑制细胞焦亡,缓解溃疡性结肠炎大鼠的炎症反应。     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

黄芩汤对溃疡性结肠炎模型小鼠NLRP3/Caspase-1通路的影响

探讨黄芩汤(HQT)对硫酸葡聚糖钠盐(dextran sulfate, DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)模型小鼠NLRP3/Caspase-1信号通路的影响。将C57BL/6J小鼠随机分为空白组,模型组(DSS组),黄芩汤低(HQT-L组)、中(HQT-M组)、高(HQT-H组)剂量组,西药美沙拉嗪组(西药组),建立小鼠UC模型。造模成功后,HQT-L组、HQT-M组、HQT-H组和西药组分别给予低、中、高剂量的黄芩汤和美沙拉嗪混悬液灌胃,空白组和DSS组分别给予等体积的蒸馏水灌胃,给药10 d后,测定各组小鼠体质量、疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织病理学评分,采用ELISA法测定血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,实时荧光定量PCR(quantitative real-time, RT-qPCR)法测定结肠组织NLRP...     

基于NLRP3炎症小体调控细胞焦亡探讨瘀血痹抗动脉粥样硬化的作用机制

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)以慢性炎症和增殖过程为特征,而细胞焦亡与AS的发生发展密切相关。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的激活可以诱导白介素-1β前体(pro-IL-1β)、白介素-18前体(pro-IL-18)和增加核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体的合成,从而触发半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1前体(pro-Caspase-1)蛋白水解为有活性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1),Caspase-1将细胞因子前体pro-IL-1β和pro-IL-18分别转化为成熟的和具有生物活性的白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18),参与AS形成过程,同时活性Caspase-1可以诱发细胞焦亡,前期研究发现瘀血痹能够减少ApoE^-/-小鼠主动脉斑块面积,但机制尚不清楚,同时瘀血痹药物成分可以调节NF-κB、NLRP3、IL-1β等相关因子。因此,拟从NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路介导的细胞焦亡探究瘀血痹抗AS的作用机制,为AS防治提供新的治疗策略。     

基于TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞焦亡的影响

目的:观察当归补血汤对糖尿病肾病(DKD)大鼠足细胞焦亡的影响,探讨其防治DKD及足细胞焦亡的可能作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为造模组42只和正常组8只,造模组大鼠高糖高脂饮食6周结合链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg^-1一次性腹腔注射制备2型糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组、当归补血汤低剂量(0.72 g·kg^-1)组、当归补血汤高剂量(1.44 g·kg^-1)组、厄贝沙坦(0.017 g·kg^-1)组进行灌胃,正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续干预20周。给药期间定期检测各组大鼠空腹血糖(FBG),24 h尿蛋白(24 h-UTP);给药结束后采用过碘酸六胺银(PASM)染色观察肾组织病理形态学变化;透射电镜(TEM)观察足细胞超微结构变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠肾组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平;免疫荧光(IF)三标法检测核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)及肿瘤蛋白-1(WT-1)在足细胞的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路蛋白及足细胞突触足蛋白(Synaptopodin)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,24 h-UTP显著升高,肾小球肥大,系膜增生,系膜外基质增加,基底膜增厚,出现K-W结节,肾小管上皮细胞空泡变性,足突融合或丢失,血清中IL-1β,IL-18含量明显升高,肾组织TUNEL阳性细胞明显增多,NLRP3在足细胞表达增多且WT-1在足细胞表达减少,Synaptopodin蛋白表达水平显著降低,TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤高剂量组明显降低FBG,24 h-UTP水平,明显改善肾组织病理学,改善足细胞的损伤和丢失,减少肾组织TUNEL阳性细胞数,NLRP3在足细胞表达减少且WT-1在足细胞表达增多,升高Synaptopodin蛋白表达水平,降低TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:当归补血汤可能通过调控TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路,抑制足细胞焦亡以减少蛋白尿,从而延缓DKD的发展进程。