HPLC法测定不同贮藏条件下莪术中6种化学成分的含量

摘要：目的:建立同时测定不同贮藏条件下莪术中吉马酮、莪术二酮、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素、去甲氧基姜黄素含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为WATERS Atlantisd C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,以0.3%甲酸乙腈溶液（A）-水溶液（B）为流动相,梯度洗脱;检测波长:215 nm（检测吉马酮、莪术二酮、莪术醇、β-榄香烯）,420 nm（检测姜黄素和去甲氧基姜黄素）;流速:1.0 ml·min-1,柱温:25℃,进样量:10μl。结果:吉马酮、莪术二酮、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素、去甲氧基姜黄素分别在的线性范围分别为0.080 3～0.884 2 mg·ml-1、0.037 7～0.415 5 mg·ml-1、0.018 3～0.201 1 mg·ml-1、0.047 5～0.523 4mg·ml-1、0.005 2～0.057 2 mg·ml-1、0.003 1～0.034 3 mg·ml-1范围内有良好线性（r=0.999 3～0.999 8）。精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于5%（n=6）,平均加样回收率在98.09%～101.48%范围内（RSD <1.2%,n=6）。6批莪术药材中吉马酮、莪术二酮、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素、去甲氧基姜黄素的含量分别为7.893 6～8.956 2 mg·ml-1、7.893 6～8.956 2 mg·ml-1、0.981 2～1.119 9 mg·ml-1、3.000 5～3.199 7 mg·ml-1、0.091 9～0.098 5 mg·ml-1、0.064 7～0.073 5 mg·g-1,均呈下降趋势,且下降速率为室温> 15℃> 5℃;在相同贮藏温度下的下降速率为聚乙烯塑料袋<聚丙烯编织袋;莪术醇及β-榄香烯的含量分别为0.981 2～1.119 9 mg·ml-1、3.000 5～3.199 7 mg·ml-1,反而有所增加。结论:该法简便、准确,用于同时测定莪术中6种成分的含量。建议莪术药材密封包装后于干燥阴凉处贮藏,且贮藏时间不宜过长。     

GC法测定不同品种莪术药材中3种成分的含量

目的建立莪术药材中β-榄香烯、=牛儿酮和莪术二酮的GC含量测定方法 ,并比较不同品种莪术药材中3种成分的含量。方法采用DB-225毛细管柱,FID检测器。结果β-榄香烯、=牛儿酮和莪术二酮的线性范围分别为：1.019-5.095mg.mL-1（r=1.0000）;1.0609-10.609mg.mL-1（r=0.9999）;2.218-4.436mg.mL-1（r=0.9999）。平均回收率分别为：β-榄香烯100.6%,RSD=1.95%（n=9）;=牛儿酮100.6%,RSD=1.85%（n=9）;莪术二酮99.6%,RSD=2.13%（n=9）。结论不同品种莪术药材挥发油中莪术二酮的含量存在显著性的差异。该法准确、可靠,可用于莪术药材的质量控制。     

温郁金醋制前后5种成分含量变化考察

摘要：目的:比较温郁金醋制前后5种成分含量变化。方法:采用HPLC法对温郁金和醋温郁金中的莪术二酮、吉马酮、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素5种成分进行定量分析。结果:莪术二酮、吉马酮、莪术醇、β-榄香烯、姜黄素5种成分能够良好分离,线性范围分别为2.506～20.050μg·ml-1（r=0.999 5）、0.919～7.355μg·ml-1（r=0.999 6）、0.964～7.714μg·ml-1（r=0.999 7）、0.927～7.416μg·ml-1（r=0.999 4）、1.123～8.982μg·ml-1（r=0.999 3）;平均加样回收率分别为99.59%（RSD=0.95%）,98.84%（RSD=0.91%）,99.41%（RSD=1.19%）,98.72%（RSD=0.79%）,98.94%（RSD=1.06%）（n=6）。温郁金经醋制后莪术二酮及吉马酮的含量显著降低（P<0.05）,莪术醇和β-榄香烯的含量则有所增加,而姜黄素含量无明显变化,5-羟甲基糠醛为炮制后新增加的成分。结论:基于HPLC法对温郁金和醋温郁金中5种成分进行定量分析,为进一步对温郁金炮制前后的质量变化和药效物质基础提供参考依据。     

莪术单煎及与三棱合煎后挥发油中有效成分煎出率的比较研究

目的:研究莪术与三棱配伍前后莪术挥发油中4种有效成分的煎出率变化,为揭示莪术与三棱配伍的作用机制提供参考。方法:采用高效液相色谱法同时测定莪术单煎及与三棱合煎后挥发油中4种有效成分(莪术二酮、莪术醇、吉马酮、β-榄香烯)的含量,并对各成分的煎出率进行比较。结果:与莪术单煎比较,合煎后挥发油中莪术二酮、莪术醇、吉马酮的煎出量差异具有统计学意义(P<0.05),β-榄香烯的煎出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:莪术与三棱配伍合煎后可有效增加其挥发油中有效成分莪术二酮、莪术醇和吉马酮的溶出,推测此可能为二者配伍后药效增强的原因。     

黔产莪术和种子中提取挥发油的具体成分异同比较

目的研究黔产莪术和莪术种子中挥发油质控成分的检定方法与含量范围。方法建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定黔产莪术与莪术种子中吉马酮和呋喃二烯含量方法:色谱柱为C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0~20 min,60%A~95%A;20~35 min,95%A),流速为1 ml/min,检测波长为216 nm,柱温35℃,进样量10μl。结果吉马酮和呋喃二烯的检测浓度分别在4.18~83.6μg/m L(r=0.9999),10.21~204.2μg/ml(r=1.0000)范围呈现良好的线性关系;吉马酮和呋喃二烯的平均回收率(n=6)分别103.2%(RSD=1.44%,102.2%(RSD=1.28%),重复性实验(n=6)RSD分别为0.90%,2.10%。结论黔产莪术与莪术种子中提取的挥发油的质量,可以用挥发油中所含吉马酮和呋喃二烯含量进行控制。控制范围是:黔产莪术挥发油中吉马酮,呋喃二烯含量依次是85.87%~100.10%,59.07%~78.92%;黔产莪术种子挥发油中吉马酮,呋喃二烯含量依次是65.69%~80.47%,59.94%~68.41%。     

不同来源莪术中莪术醇、吉马酮、莪术二酮GC-MS定量分析

目的:测定并比较不同来源莪术中莪术醇、吉马酮、莪术二酮的含量。方法:采用甲醇超声提取,GC-MS选择离子监测法测定3种成分含量。色谱条件:HP-5MS毛细管柱(30 m×0．25 mm×0．25μm);柱流速为1 mL·min-1,柱温:100℃(2 汽化室温度250℃;载气为高纯He(99.999％)。质谱条件:EI离子源,电子能量70 eV;四极杆温度150℃;EM电压2165 V;接口温度280℃;溶剂延迟 3 min;m／z范围40-550 amu。结果:莪术醇、吉马酮和莪术二酮分别在12．4-124．0,12．4-82．3,13．0-86．7 ng线性关系良好;r值分别为0.9990,0．9981,0．9989。不同来源莪术中莪术醇含量均极低,大多数样品均未检出;所有样品中均可检出吉马酮,但含量差异较大(5．479 mg·g-1vs0．459 mg·g-1);莪术二酮在部分样品中未检出。结论:不同来源莪术中莪术醇、吉马酮和莪术二酮的含量差异显著。     

RP—HPLC法分离分析温莪术油中6种倍半萜类成分

目的：建立反相高效液相色谱法，可同时分离分析温莪术油中6种倍半萜类活性成分（莪术二酮、莪术醇、吉马酮、莪术烯、呋哺二烯和β-榄香烯）。方法：采用RP—HPLC法作为莪术油及其制剂倍半萜类活性成分的检测方法，色谱柱为Kroma—silKR100—5C18柱（250mm&#215;4．6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（90：10）；流速：1mL&#183;min-1；检测波长：215nm。结果：温莪术油中6种倍半萜类成分在同一色谱条件下得到良好分离。莪术二酮、莪术醇、吉马酮、莪术烯、呋喃二烯和届一榄香烯浓度分别在2．66～26．6，3．47～34．7，5．63～56．3，4．22～42．2，10．2～102，7．44～74．4μg&#183;mL-1。范围内与峰面积线性关系良好（r≥0．9997），方法平均回收率分别为98．8％，96．5％，101．2％，105．4％，96．6％，95．2％（RSD〈3．0％，n=5）。结论：本方法灵敏、专属，重复性好，且可避免倍半萜类中热敏物质的转化，能够真实、准确地反映温莪术油及其制剂的质量。     

采挖期内不同月份对广西桂莪术挥发油的影响

目的 考察采挖期内不同月份对桂莪术主要成分的影响.方法 利用挥发油提取器提取,比较不同采收月份桂莪术挥发油含量;运用HPLC法测定不同采收月份中吉马酮的含量,色谱柱为C18柱(4.60×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(67∶33),检测波长210nm,流速为1.0mL·min-1;柱温为35℃.结果 HT6K 10月份采挖的桂莪术挥发油含量最高,11月份桂莪术吉马酮含量最高.结论 采挖期内不同月份桂莪术挥发油和吉马酮含量差异明显.     

促渗剂对莪术软膏中莪术醇、吉马酮透皮吸收的影响

目的:研究不同促渗剂对莪术软膏中莪术醇、吉马酮透皮吸收的影响。方法:采用Franz扩散池法,以离体大鼠皮肤为透皮屏障,以高效液相色谱法测定加入不同促渗剂(3%冰片、3%薄荷脑、3%冰片+3%薄荷脑)的莪术软膏中莪术醇、吉马酮的累积渗透量,同时测定稳态透皮速率以计算增渗倍数。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈-1%磷酸溶液(梯度洗脱),柱温为25℃,流速为1.0 ml/min,检测波长为216 nm,进样量为20μl。结果:莪术醇、吉马酮检测质量浓度的线性范围分别为9.62~47.11μg/ml(r=0.999 1)、33.61~167.82μg/ml(r=0.999 5);精密度、稳定性试验的RSD均小于2.05%,回收率为99.42%。加入3%冰片、3%薄荷脑、3%冰片+3%薄荷脑后莪术醇、吉马酮10 h平均累积渗透量分别为221.21、209.92、269.44μg/cm2与506.74、480.85、615.67μg/cm2;莪术醇、吉马酮6 h增渗倍数分别为1.62、1.41、1.85与1.66、1.50、2.13。结论:3%冰片+3%薄荷脑对莪术醇和吉马酮促渗效果最佳;本试验为莪术软膏的深入研究提供了一定的理论基础。     

HPLC波长切换法测定莪术中8个主要有效成分的含量

目的 建立HPLC同时测定莪术药材中8个主要有效成分（蓬莪术和温莪术的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素、莪术烯醇、莪术二酮、呋喃二烯酮、牻牛儿酮和呋喃二烯）的方法。方法 取样品粉末,以70%甲醇超声提取。采用Kromasil 100-5-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈（A）-0.4%磷酸溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1;检测波长分别为426 nm和216 nm。再通过化学计量学分析蓬莪术和温莪术共有模式与成分差异。结果 双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素、莪术二酮、莪术烯醇、呋喃二烯酮、牻牛儿酮和呋喃二烯的线性范围分别为3.90~155.9 μg·mL^-1（r=0.999 6）,3.52~140.9μg·mL^-1（r=0.999 4）,4.34~173.8 μg·mL^-1（r=0.999 5）,36.88~1 475.2 μg·mL^-1（r=0.999 4）,142.45~5 698 μg·mL^-1（r=0.999 9）,36.47~1 458.9 μg·mL^-1（r=0.999 9）,48.04~1 921.8 μg·mL^-1（r=0.999 3）,37.52~1 500.6 μg·mL^-1（r=0.999 9）;平均加样回收率（n=3）为99.4%~100.3%。20批药材测定结果显示蓬莪术中姜黄素类成分高于温莪术。化学计量学分析结果表明莪术二酮和呋喃二烯酮是蓬莪术和温莪术的重要差异成分。结论 所建立的方法符合方法学验证要求,可用于莪术药材的姜黄素类和倍半萜类成分的同时测定。     

莪术挥发油提取工艺的研究

目的利用正交设计优选法确定提取莪术挥发油的最佳工艺条件。方法以莪术油的含量为指标,通过L9(34)正交试验设计,对提取工艺中的浸泡时间、提取时间、加水量和药材粒度4个因素进行优选研究,以筛选出莪术挥发油的最佳提取工艺条件。结果影响提取的主次因素为:提取时间>药材粒度>浸泡时间>加水量。优选得到的最佳提取工艺条件是浸泡12h,提取5h,加水7倍,药材粒度为粒状。结论本工艺条件科学合理,稳定可行,可有效保证产品质量。     

Cocktail探针药物法评价生、醋莪术对CYP450酶亚型的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究生、醋莪术对大鼠CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响并进行比较,探讨其通过炮制增强或改变作用的趋向性。方法将SD大鼠随机分组,生、醋莪术组分别给予生、醋莪术提取液(9 g.kg-1),以生理盐水为空白对照,在一定时间点采集血样,用HPLC检测探针药物在大鼠体内的代谢情况,以评价生、醋莪术对CYP450酶的影响。结果生莪术的茶碱、氨苯酚和氯唑沙宗的代谢情况与空白组相比差异无显著性;但醋莪术与空白组相比,茶碱和氯唑沙宗的T12、Tmax和AUC明显增加,CL/F明显降低;氨苯酚的T12变化不明显,AUC明显降低,CL/F明显增加;氯唑沙宗的T12、Tmax、AUC明显增加,CL/F明显降低。结论单次给予大鼠生、醋莪术后,生莪术对CYP450酶的作用不明显,醋莪术对CYP1A2和CYP2E1具有抑制作用,对CYP3A4具有诱导作用。     

醋炙莪术炮制工艺研究及其GC-MS分析

目的优选醋炙莪术的炮制工艺,并对莪术醋炙前后化学成分进行对比分析。方法以加醋量、醋炙温度、醋炙时间为自变量,莪术醇、莪术二酮和姜黄素含量的总评"归一值"为评价指标,通过星点设计-效应面法优选醋炙莪术的炮制工艺;通过水蒸气蒸馏法提取莪术生品、莪术醋炙品挥发油,采用GC-MS对2种挥发油进行分析。结果最佳炮制工艺为加醋量29.45%,醋炙温度136℃,醋炙时间15 min,测定值和预测值之间的相对误差为:2.79%;经GC-MS分析,生品检索出92个峰,最优醋炙品检索出108个峰。结论星点设计-效应面法优选醋炙莪术的炮制工艺方法可行,预测性良好。     

湖南引种温莪术挥发油的GC-MS分析

目的对比湖南引种温莪术与浙江产温莪术挥发油的化学成分。方法运用水蒸汽蒸馏法提取挥发油,气相色谱-质谱联用(GC-MS)法结合计算机检索对浙江、湖南产温莪术挥发油的化学成分进行分析和鉴定,用气相色谱面积归一法计算各组分的相对百分含量。结果湖南引种温莪术与浙江产温莪术的挥发油含量分别为3.4%(m L·g-1)、3.1%(m L·g-1),均符合中国药典2010年版一部质量标准;浙江温莪术中共分离得到33个色谱峰,相对含量>2%的有9种,占总含量的89.92%;湖南引种温莪术中共分离得到34个色谱峰,相对含量>2%的有10种,占总含量的86.80%。结论湖南引种温莪术挥发油含量符合药典质量标准。     

中药莪术对大鼠十二指肠平滑肌收缩的影响

目的探讨中药莪术(Curcumna Rhizoma)水提液对大鼠离体十二指肠平滑肌收缩运动的影响,并初步探索其作用机制。方法制作大鼠离体十二指肠标本,用恒温灌流的方法,使用BL-420生物机能实验系统观察不同浓度莪术对大鼠离体十二指肠平滑肌的收缩效应。选适当终浓度莪术分别与阿托品、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、维拉帕米共同孵育,观察莪术对它们引起平滑肌收缩作用的影响;制作不同浓度新斯的明肠管收缩作用的量效曲线,与莪术组进行对比,初步探讨其可能的作用机制,并作胆碱酯酶活性测定辅助证明是否与新斯的明作用机制相似。结果莪术可以对大鼠离体十二指肠的收缩有兴奋作用,呈剂量依赖性;莪术可以部分被M受体阻断药阿托品阻断、β受体激动药异丙肾上腺素和钙通道阻滞剂维拉帕米对肠管收缩的抑制作用;对α受体激动药去甲肾上腺素无影响;与乙酰胆碱酯酶抑制剂新斯的明的作用相似。结论莪术明显促进大鼠离体十二指肠平滑肌收缩作用,呈剂量依赖性。其作用机制可能是通过抑制胆碱酯酶,与M受体介导有关,同时还可能与抑制α和β受体有关。     

中药姜黄的姜黄素提取工艺研究

目的研究优选姜黄的姜黄素提取工艺。方法采用单因素考察及正交试验设计，以姜黄素的含量为考察指标优选提取工艺。结果优选的姜黄素提取工艺为用10倍量80％乙醇提取2次，每次1．5h。结论采用优选工艺，姜黄素提取效率高且稳定，优选工艺适合于大生产。     

莪术太赫兹指纹图谱双指标序列分析

目的:建立2个产地3个品种莪术的太赫兹光谱鉴别方法。方法:采用共有峰率和变异峰率双指标序列法对不同产地、不同品种的莪术石油醚、氯仿和无水乙醇提取物进行鉴别。结果:用双指标序列法对3种莪术不同溶剂提取物太赫兹吸收曲线的分析结果显示,3种溶剂提取物均可以对不同产地、不同品种的莪术进行区分。结论:该方法简便、快捷、灵敏,可用来鉴别不同品种、不同产地的莪术。     

不同剂量对莪术功效发挥的影响

目的：研究剂量对莪术功效发挥的影响,揭示莪术在复方中发挥各功效时的常用剂量。方法：以《中医方剂大辞典》为主要数据来源,收集合莪术的内服方剂274首,用Excel建立数据表,采用归类分析方法,以功效为纲归类统计出与莪术发挥特定功效时莪术的用药剂量范围,单因素考察剂量对莪术功效的影响。结果：莪术的功效可归纳为破血、行气、消积和止痛。其发挥破血功效时在煎剂中的用量多为中剂量,约为3～12g;发挥行气功效时在丸剂中的用量约为15~30g;用于消积作用时在丸剂中宜用中等偏大剂量,约为15～45g;发挥止痛功效时在散剂中的用量约为15~30g。结论：莪术的功效发挥与剂量有密切关系,但与剂量的大小并不成正比,用量应视情况而定。     

低温冷藏对原料用温莪术中挥发油的影响

目的:了解冷藏贮存对原料用温莪术中挥发油的影响。方法:药材分为鲜品冷藏、鲜品直接提取、阴干室温贮存和阴干冷藏4组。均照药典法测定比较挥发油含量。用高效液相色谱法(HPLC)测定比较挥发油中莪术醇含量。结果:按鲜重计算,鲜药材直接提取得油率最高,但莪术醇含量较低。阴干冷藏和鲜品冷藏油中,莪术醇均有较高含量。结论:冷藏可作为原料用温莪术的一种贮存方式。