大黄蛰虫丸调控ROS介导的PI3K/Akt/FoxO4信号通路改善大鼠肝脏衰老的作用和机制北大核心CSCD

近年来的研究显示,非酒精性脂肪性肝病、肝硬化以及肝癌等常见肝病的发生和发展都与肝脏衰老(liver aging,LA)有关。基于此,为了探究传统经方——大黄蛰虫丸(Dahuang Zhechong Pills,DHZCP)多靶点地改善LA的作用和机制,笔者将24只大鼠随机均分为4组,即正常组、衰老模型组(模型组)、衰老模型+DHZCP组(DHZCP组)和衰老模型+维生素E(vitamin E,VE)组(VE组)。通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)连续腹腔注射建立大鼠LA模型。对于LA模型鼠,采用衰老表型和体质量来评估其一般情况;采用肝细胞衰老病理学特征、肝功能指标、肝脏磷酸化组蛋白H2A变异体(phosphorylated histone family 2A variant,γ-H2AX)染色特征、肝脏细胞周期阻滞蛋白(P21、P53、P16)表达水平以及肝脏衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotypes,SASP)因子蛋白表达水平来评估其LA;采用肝脏活性氧产物(reactive oxygen species,ROS)表达特征以及肝组织磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/叉头盒蛋白O4(forkhead box protein O4,FoxO4)信号通路关键信号分子蛋白表达水平来评估ROS介导的PI3K/Akt/FoxO4信号通路活性。结果显示,经DHZCP或VE干预12周后,对于DHZCP组和VE组大鼠,其特征性衰老表型和体质量,肝细胞衰老病理学特征和肝功能指标,肝脏ROS相对表达量,肝组织磷酸化PI3K(phosphorylated PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、FoxO4等关键信号分子的蛋白表达水平,肝脏γ-H2AX染色的特征以及肝组织P16、P21、P53和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的蛋白表达水平均得到相应改善,且两者的作用相似。总之,借助D-gal诱导的LA模型鼠,该研究阐明,DHZCP在体内能多靶点地改善LA,其作用和机制与调控肝组织ROS介导的PI3K/Akt/FoxO4信号通路活性有关。这些发现为DHZCP治疗衰老相关肝病提供了新的药理学证据。     

黄蜀葵花总黄酮抑制糖尿病肾脏疾病足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化的作用和机制北大核心CSCD

研究表明,高血糖介导的“慢性微炎症”可以导致糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)患者出现“炎症性足细胞损伤”。其中,“坏死性凋亡”是新的足细胞死亡形式,与肾脏纤维化密切相关。为了探究传统治肾中药黄蜀葵花的提取物——黄蜀葵花总黄酮(total flavones of Abelmoschus manihot,TFA)在体内改善DKD足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化的作用和机制,并进一步揭示其“多途径、多靶点”的科学内涵,笔者将全部大鼠随机分为4组,即正常组、模型组、TFA组以及雷帕霉素(rapamycin,RAP)组。在改良型DKD大鼠模型成功建立后,每天经灌胃分别给予4组大鼠双蒸水、TFA混悬液以及RAP混悬液。在药物干预的第4周末,处死全部大鼠,收集尿液、血液以及肾组织等标本,进而针对模型鼠足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化各项指标进行观察、检测和分析。结果显示,对于改良型DKD模型鼠,TFA和RAP改善了一般情况、体质量、血清肌酐、尿白蛋白以及肾脏肥大指数;改善了肾脏纤维化指标,包括肾小球组织形态特征、肾小球内纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,collagenⅠ)染色程度以及肾组织FN、collagenⅠ、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad2/3蛋白表达水平;改善了足细胞损伤,包括足突形态以及肾组织中podocin、CD2AP蛋白表达水平;改善了肾脏中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)介导的足细胞坏死性凋亡,包括足细胞坏死性凋亡形态特征以及肾组织中TNF-α、磷酸化底物混合谱系激酶样蛋白(phosphorylated mixed lineage kinase domain like pseudokinase,p-MLKL)表达程度和蛋白表达水平,其中,对于p-MLKL,RAP的作用更强;改善了肾脏中受体相互作用蛋白激酶(receptor interacting serine/threonine protein kinase,RIPK)1/RIPK3/MLKL信号轴活性,包括其关键信号分子蛋白表达水平,如磷酸化受体相互作用蛋白激酶(phosphorylated receptor interacting serine/threonine protein kinase,p-RIPK)1、p-RIPK3、p-MLKL和半胱氨酸蛋白水解酶-8(cysteinyl aspartate specific proteinase-8,caspase-8),其中,对于p-RIPK1,TFA的作用更强。总之,该研究阐明:TFA通过抑制TNF-α介导的RIPK1/RIPK3/MLKL信号轴活性而减轻DKD足细胞坏死性凋亡和肾脏纤维化。笔者的发现为深入揭示TFA治疗DKD肾脏纤维化的科学内涵提供了新的药理学证据。     

松萝酸调节RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路对脑梗死大鼠神经元坏死性凋亡的影响

目的 探讨松萝酸对脑梗死大鼠神经元坏死性凋亡的影响,以及调节受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)/受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)/混合谱系激酶结构域样蛋白（MLKL）信号通路发挥的作用。方法 采用大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO/R）方法建立大鼠脑梗死模型,将造模成功大鼠分为模型组、NEC-1(RIPK1抑制剂)组及低、中、高剂量松萝酸组,每组20只;另取20只大鼠设置为假手术组。药物干预3 d后,以改良大鼠神经功能损伤评分（m NSS）评价各组大鼠神经功能损伤程度;TTC染色检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理损伤;PI/NeuN染色观察神经元坏死;RT-qPCR法检测大鼠缺血脑组织中RIPK1、RIPK3、MLKL的mRNA水平;Western Blot法检测大鼠缺血脑组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比,模型组大鼠神经细胞结构破坏,细胞萎缩变形、核固缩;mNSS评分、脑梗死体积、PI阳性神经元比例均明显升高（P<0.05）;脑组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA水平,p-RIPK1/RIPK1比值及RIPK3、ML...     

柴胡桂枝干姜汤通过RIP1/RIP3/MLKL通路抑制坏死性凋亡 改善大鼠非酒精性脂肪肝

探讨柴胡桂枝干姜汤对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠的治疗作用及机制。【方法】实验设正常组,模型组,中 药（柴胡桂枝干姜汤）低、高剂量组及GSK872[受体相互作用蛋白激酶（RIP）3抑制剂]组等5组。除正常组,其余各组大鼠分别 采用高脂饲料饲喂法构建NAFLD模型。治疗结束后,采用原位末端转移酶标记（TUNEL）法观察肝细胞凋亡情况,酶联免疫 吸附分析（ELISA）检测中血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）,血脂[总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白 胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）]水平及肝组织中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β） 水平,Western Blot法检测肝组织中RIP1、RIP3、混合谱系激酶结构域样蛋白（MLKL）磷酸化水平。【结果】与正常组比较, 模型组大鼠肝细胞凋亡指数升高,血清中ALT、AST及TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著降低,肝组织中 TNF-α、IL-1β含量及RIP1、RIP3、MLKL磷酸化表达水平均显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,中药低、高剂量组及 GSK872组大鼠肝细胞凋亡指数降低,血清中ALT、AST及TC、TG、LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著升高,肝组织 中TNF-α、IL-1β 含量及RIP1、RIP3、MLKL 磷酸化表达水平均显著降低（P＜0.05）;中药低、高剂量组上述各指标与 GSK872组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。【结论】柴胡桂枝干姜汤可以有效改善大鼠NAFLD,其机制可能与抑制 RIP1/RIP3/MLKL信号通路活化,进而抑制坏死性凋亡有关。     

大黄蛰虫丸对大鼠静脉血栓形成模型ET,6-Keto-PGF1α的影响

目的：探讨大黄蛰虫丸治疗下肢深静脉血栓形成（DVT）后遗症的作用机理。方法：观察大黄蛰虫丸对深静脉血栓形成动物模型的ET,6-Keto-PGF1α的影响。结果：大黄蛰虫丸能够降低血清中ET,升高血清中6-Keto-PGF1α的含量,与通塞脉片组无明显差异。结论：大黄蛰虫丸治疗DVT后遗症可能与降低血清中ET含量,升高6-keto-PGF1α含量有关。     

三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响。方法将SPF级SD大鼠随机分为9月龄组(9M),24月龄组(24M),PNS低、中、高剂量组,每组10只。大鼠从18个月开始,PNS低、中、高剂量组分别灌胃给予PNS 10,30,60 mg·kg^(-1),灌胃至24个月,每周灌胃6 d,周日停1 d,连续灌胃6个月。末次给药并禁食不禁水12 h后,处死大鼠,迅速取出睾丸组织。苏木精-伊红(HE)染色法观察睾丸组织形态学变化,Western Blot检测睾丸组织中P21^(WAF1/CIP1)(P21)、核转录因子(NF-κB)以及下游炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧化酶2(COX2)蛋白的表达和凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生殖细胞凋亡。结果 HE染色观察发现,与9M比较,24M大鼠睾丸生精小管形态结构发生明显变化,生精细胞层数减少,细胞稀疏,各级生精细胞脱落。与24M比较,PNS低、中、高剂量组均能在一定程度上改善睾丸组织生精小管结构形态。与9M比较,24M大鼠睾丸组织P21、NF-κB及其下游炎症因子IL-1β、TNF-α、COX2的表达显著上调(P<0.01),PNS低、中、高剂量组可显著下调其表达(P<0.05,P<0.01)。24M大鼠睾丸组织抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白Bax显著升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01),PNS可显著升高Bcl-2的表达,降低Bax的表达,升高Bcl-2/Bax比值(P<0.05,P<0.01);与9M比较,24M大鼠睾丸内凋亡阳性细胞数显著增多,PNS低、中、高剂量组可明显减少凋亡的阳性细胞数。结论 PNS能够抑制自然衰老大鼠睾丸炎症反应,显著减少睾丸生殖细胞凋亡。     

大黄蛰虫丸对糖尿病大鼠视网膜血管周细胞凋亡NF-κB通路相关因子表达的影响

目的 观察大黄蛰虫丸对糖尿病大鼠视网膜NF-κB通路相关因子表达的影响,探讨大黄蛰虫丸抑制糖尿病大鼠视网膜周细胞凋亡的作用及机制.方法 100只雄性Wistar大鼠随机分成空白组、模型组、大黄蛰虫丸治疗组(包括大黄蛰虫丸低剂量组、中剂量组、高剂量组)5组.除空白组外各组均采用链佐脲菌素腹腔注射诱导DR大鼠模型.造模成功...     

大黄虫丸对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖凋亡及PI3K/AKT信号传导通路的影响

目的观察大黄虫丸对慢性粒细胞性白血病K562细胞抑制增殖、诱导凋亡及对PI3K/AKT表达的影响,进而探讨其治疗慢性粒细胞性白血病的作用机制。方法制备大黄虫丸含药血清,应用MTT法检测对K562细胞增殖的影响,细胞克隆形成实验检测对细胞克隆形成的影响,用Annexin V FITC/PI法检测对细胞凋亡和细胞周期的影响,免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。相关实验数据用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。结果大黄虫丸含药血清能显著抑制白血病K562细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性;能抑制K562细胞克隆的形成;能诱导K562细胞的凋亡,且将细胞阻滞于G0/G1期,呈浓度依赖性。随着浓度升高,p-Akt/Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论大黄虫丸能够体外抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活实现。     

大黄蛰虫丸对动脉粥样硬化大鼠模型NO和ET-1表达影响随机对照研究

[目的]观察大黄蛰虫丸对动脉粥样硬化大鼠模型腹主动脉壁中NO及ET-1含量的影响。[方法]采用大鼠腹主动脉机械损伤联合高脂饮食的方法复制动脉粥样硬化大鼠模型,然后采取经口灌胃的方式给予大黄蛰虫丸口服,连续给药4周,治疗4周后,处死各组大鼠,检测各组大鼠腹主动脉中NO及ET-1的含量。[结果]与模型组比较,大黄蛰虫丸组大鼠腹主动脉中NO含量显著升高(P<0.05),而ET-1含量显著下降(P<0.01)。[结论]大黄蛰虫丸治疗动脉粥样硬化效果明显,其机理可能与其能够提高动脉血管中NO的含量,降低ET-1含量有直接关系。     

基于ATR/Chk1/P53信号通路探讨三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用

目的基于ATR/Chk1/P53信号通路探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用。方法将SPF级SD大鼠随机分为青年对照组(3月龄),衰老模型组(18月龄),PNS低、中、高剂量(10、30、60 mg/kg)组(18月龄),每组10只。PNS低、中、高剂量组大鼠分别ig给予PNS 10、30、60 mg/kg,每周6 d,给药6个月。结束时称体质量后处死大鼠,迅速取出睾丸组织,称取睾丸质量,计算睾丸指数。HE染色法观察睾丸组织形态学变化,免疫组化法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、ATR的表达和定位,Western blotting检测睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、Chk1、p-P53、P21的表达水平。结果与青年对照组比较,衰老模型组大鼠睾丸质量、睾丸指数显著降低,PNS能不同程度地升高睾丸质量、睾丸指数;HE结果表明,PNS能显著改善自然衰老所致的睾丸组织形态学变化;与青年对照组相比,衰老模型组大鼠睾丸组织DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达水平和阳性灶点数明显升高,ATR的阳性灶点数及其下游Chk1、p-P53、P21的蛋白表达明显升高,而PNS干预后可降低上述DNA损伤相关反应蛋白的表达。结论 PNS能够减轻自然衰老大鼠睾丸组织DNA损伤,其机制可能与调控ATR/Chk1/P53信号通路有关。     

丹参饮提取物A通过PI3K-Akt信号通路抗细胞凋亡机制的研究北大核心CSCD

目的探讨丹参饮提取物A(Danshen Yin's extracts A,DSYEA)抗心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法采用大鼠冠脉结扎手术制备心肌缺血大鼠模型。取70只大鼠随机分为正常组、模型组、复方丹参滴丸组(含生药量78.7 g·kg^(-1))、尼可地尔组(含生药量2.91 g·kg^(-1))及丹参饮提取物A(DSYEA)低、中、高剂量组(含生药量3.88,7.76,15.52 g·kg^(-1)),正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。给药30 d后,TUNEL法测定细胞凋亡指数;免疫组化法检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;Westen Blot法检测Caspase-3、P-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组比较,DSYEA中、高剂量组可下调心肌细胞凋亡指数及Bax蛋白、Caspase-3蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),促进Bcl-2蛋白、P-GSK-3β、P-Akt蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论DSYEA可降低心肌缺血大鼠心肌细胞的凋亡,其机制可能与通过PI3K-AKt信号通路调控凋亡蛋白有关。     

大黄蛰虫丸、当归补血汤对D-半乳糖致衰小鼠 肝组织中的SOD活性和MDA含量的影响

目的:通过当归补血汤与大黄蛰虫丸对D-半乳糖致衰小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响,初步探讨其延缓衰老的作用机制。方法:昆明种6月龄小鼠50只,随机分成模型组、正常组、VitE胶丸组、当归补血汤(4.68 g.kg-1)及大黄蛰虫丸(1.17 g.kg-1)组。以D-半乳糖致衰小鼠模型,检测各组小鼠肝组织中SOD活性和MDA含量。结果:与模型组比较,大黄蛰虫丸组及当归补血汤组小鼠肝组织中SOD活性显著升高(P<0.05),肝组织中MDA含量显著降低(P<0.05)。结论:大黄蛰虫丸及当归补血汤可能通过清除衰老机体产生的过多自由基,提高抗脂质过氧化过程而达到延缓衰老的作用。     

竹节参总皂苷通过调节AMPK/Sirt1/NF-κB通路抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡的作用研究

研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicus,SPJ)对自然衰老大鼠心肌细胞凋亡的调节作用及其作用机制。将SD雄性大鼠随机分为青年对照组、自然衰老组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只。自然衰老组、SPJ低、高剂量组从18月龄开始分别灌胃给予生理盐水、SPJ 10,60 mg·kg~(-1)·d-1,每周灌胃6 d,持续6个月至24月龄处理动物。HE染色观察各组大鼠心肌形态;Tunel法检测心肌细胞凋亡;Western blot检测各组大鼠心肌组织中Bcl-2,Bax,IL~(-1)β,TNF-α,AMPK,p-AMPK,Sirt1,Ac-NF-κB p65蛋白表达。SPJ能有效改善自然衰老大鼠心肌纤维的排列紊乱,减少炎性细胞浸润,抑制心肌细胞凋亡。同时,SPJ能明显抑制自然衰老过程中心脏组织Bax,IL~(-1)β,TNF-α,Ac-NF-κB p65的表达,促进Bcl-2,Bcl-2/Bax,p-AMPK/AMPK,Sirt1蛋白表达。SPJ可有效抑制自然衰老大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节AMPK/Sirt1/NF-κB通路介导的炎症反应有关。     

二氢杨梅素抑制坏死性凋亡信号通路改善帕金森病小鼠认知功能障碍的作用机制

目的 研究二氢杨梅素(DHM)对帕金森病(PD)小鼠认知功能障碍的影响及分子机制。方法 将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、DHM组,每组10只。模型组、DHM组采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,25 mg·kg^-1),1 h后皮下注射丙磺舒(250 mg·kg^-1),每间隔3.5 d注射1次,共注射10次,以复制慢性PD小鼠模型。模型复制后,DHM组按100 mg·kg^-1剂量灌胃给药,每日1次,每周5次,持续8周。采用Morris水迷宫评估小鼠认知功能;微板法检测小鼠海马组织中乳酸脱氢酶(LDH)释放量;Western Blot法检测小鼠纹状体及海马组织中酪氨酸羟化酶(TH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6),磷酸化受体相互作用蛋白激酶1(p-RIPK1)、受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)、磷酸化受体相互作用蛋白激酶3(p-RIPK3)、受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)、混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL...     

基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨二十五味珊瑚丸对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的作用研究北大核心CSCD

该研究基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路研究藏族药二十五味珊瑚丸(Ershiwuwei Shanhu Pills,ESP)改善东莨菪碱(scopolamine,scop)致小鼠学习记忆障碍的作用机制。将ICR小鼠随机分为空白组、模型组、二十五味珊瑚丸低(200 mg·kg^(-1))、中(400 mg·kg^(-1))、高(800 mg·kg^(-1))剂量组和盐酸多奈哌齐组,采用腹腔注射东莨菪碱的方法建立学习记忆障碍模型。通过Morris水迷宫行为学实验检测小鼠学习和记忆能力,Nissl染色检测小鼠海马和皮质神经元损伤情况,免疫荧光检测小鼠海马和皮质中神经元特异核蛋白(NeuN)表达,采用生化试剂盒检测小鼠海马中乙酰胆碱(Ach)含量和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性,血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)含量,Western blot法检测海马中细胞质Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白含量。结果显示,与模型组相比,二十五味珊瑚丸给药组小鼠在Morris水迷宫行为学实验中潜伏期显著减少;Nissl染色结果显示,神经元数量显著增加;免疫荧光检测NeuN结果显示,NeuN表达显著提高;AchE活力和MDA水平显著降低,Ach含量和SOD、CAT、T-AOC水平显著提高;Western blot法检测结果显示,模型组小鼠Keap1表达显著提高,二十五味珊瑚丸给药组表达差异无统计学意义,与模型组小鼠相比,二十五味珊瑚丸给药组Nrf2和HO-1表达显著提高。结果表明,二十五味珊瑚丸对东莨菪碱导致的小鼠学习记忆障碍有保护作用,其作用机制可能是通过调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路发挥抗氧化作用。     

消瘰丸治疗淋巴瘤基于PD-1/PD-L1信号通路的机制研究

[目的]初步探究古方消瘰丸治疗淋巴瘤基于程序性死亡因子(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L)信号通路上的免疫调控机制。[方法]从健康人、淋巴瘤患者的外周血中分离外周血单个核细胞,体外培养刺激后,应用流式细胞仪、CFSE等技术,以PD-1/PD-L1信号通路为靶通路,通过是否阻断PD-1/PD-L1信号通路与消瘰丸药物干预,观察消瘰丸对T细胞不同亚细胞的活性作用。[结果]淋巴瘤患者T淋巴瘤细胞在消瘰丸干预下,CD4~+T细胞PD-1(+)和CD69表达降低,而CD8~+T细胞PD-1(+)和CD69表达增加;PD-L1阻断剂和消瘰丸联合使用对淋巴瘤T细胞中的CD4~+细胞CD69抑制作用比PD-L1阻断剂组和消瘰丸组都明显;与PD-L1阻断剂组相比,消瘰丸组CD8~+T细胞活性增加更明显,而同时加入两者,与消瘰丸组相比,增加并不明显。[结论]消瘰丸对大量异常增殖的CD4~+T细胞可以抑制PD-1(+)的高表达,消瘰丸与PD-L1阻断剂二者对于CD4~+PD-1(+)和CD69表达有协同降低的作用;消瘰丸对于有细胞毒作用的CD8~+T细胞活性有增强作用,可以促进PD-1(+)的表达。     

肾气丸对自然衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接功能损伤的保护作用及其机制研究

目的研究肾气丸对衰老所致雄性大鼠睾丸支持细胞紧密连接功能损伤的保护作用及其可能的分子机 制。方法将SPF 级SD 雄性大鼠随机分为4 组,分别为青年对照组（2 月龄）、衰老模型组（17 月龄）及肾气丸 低、高剂量组（0.1、0.4 g·kg-1,17 月龄）,每组8 只,分别给予普通饲料或含药饲料持续喂养4 个月。HE 染色 法观察睾丸组织形态变化并测量生精上皮厚度和生精小管直径;透射电镜观察睾丸组织紧密连接超微结构; Western Blot 法检测睾丸组织中波形蛋白（Vimentin）、闭合蛋白（Occludin）、闭锁连接蛋白-1（Zonula occludens-1,ZO-1）和β-连环蛋白（β-catenin）表达水平;双标免疫荧光法检测睾丸支持细胞中Vimentin、 β-catenin、ZO-1 和磷酸化p38 丝裂原活化蛋白激酶（Phosphorylated p38 Mitogen-activated protein kinase, p-p38MAPK）的表达和定位。结果HE 结果显示,肾气丸能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,提 高生精上皮厚度（P＜0.05）和生精小管直径（P＜0.05,P＜0.01）;透射电镜结果显示,肾气丸能明显改善自然 衰老大鼠支持细胞紧密连接超微结构;Western Blot 结果显示,肾气丸能明显上调自然衰老大鼠睾丸组织中 Vimentin、Occludin、ZO-1 和β-catenin 蛋白表达水平（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）;免疫荧光结果显示,肾 气丸能明显上调衰老大鼠睾丸支持细胞Vimentin、ZO-1 和β-catenin 蛋白表达水平,下调支持细胞p-p38MAPK 蛋白表达水平。结论肾气丸可减轻自然衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤,其机制可能与下调支持细胞 p38MAPK 信号通路有关。     

三百棒醇提物通过抗炎和凋亡作用减轻CIA大鼠的关节炎北大核心CSCD

探讨三百棒醇提物(Toddalia asiatica alcohol extract,TAAE)通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其机制研究。首先建立CIA大鼠模型,然后每天口服TAAE和雷公藤多苷片(TGT),每周对后肢关节的肿胀程度进行评分。给药35 d后,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子(TNF-α、IL-6)的水平;TUNEL法检测TAAE对大鼠滑膜组织细胞凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的表达水平;RT-qPCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-1β及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的mRNA水平。TAAE可减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清炎症因子水平,改善滑膜组织病理改变,促进滑膜组织细胞凋亡,抑制滑膜炎症。此外,RT-qPCR和Western blot实验结果显示TAAE上调促凋亡相关蛋白Bax水平,下调抑凋亡蛋白Bcl-2水平,激活caspase-3促进了滑膜组织细胞凋亡,TAAE还有效地下调了p-PI3K、p-Akt蛋白水平。该研究表明,TAAE对CIA大鼠的关节炎具有很好的治疗作用,并且对降低炎症反应具有很强的药理活性,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,促进滑膜细胞凋亡有关。总体而言,该研究为三百棒的抗炎机制的研究提供了新的线索,并为临床更好应用三百棒治疗炎症性及自身免疫性疾病提供理论依据。     

淫羊藿苷激活Nrf2/HO-1信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为青年对照组(2月龄)、衰老模型组(16月龄)和淫羊藿苷低、高剂量组(2、6 mg/kg,16月龄),每组8只,给予普通或含药饲料饲养4个月,禁食12 h后处死大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态变化;黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平;免疫荧光法检测睾丸组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达和定位;Western blotting法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、γ-H2AX和DNA损伤修复相关蛋白p-p53和p21表达水平。结果HE染色结果表明,淫羊藿苷能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,显著提高衰老大鼠睾丸组织SOD活力,降低MDA水平;免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸组织中各级生精细胞内Nrf2蛋白表达水平,明显下调初级精母细胞和精原细胞中γ-H2AX蛋白表达水平;Western blotting结果显示,淫羊藿苷能显著上调衰老大鼠睾丸组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平,下调γ-H2AX、p-p53和p21蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

基于IRE1/GPR78信号通路研究三黄益肾胶囊抑制DKD大鼠肾组织细胞凋亡的作用机制

[目的] 探讨三黄益肾胶囊对糖尿病肾病（DKD）模型大鼠的治疗作用,同时研究三黄益肾胶囊对 DKD 模型大鼠肌醇酶 1（IRE1）/G 蛋白偶联受体 78（GPR78）信号通路的影响。[方法] 将 30 只大鼠平均分为正常组、模型组、阳性药组、三黄益肾低剂量及三黄益肾高剂量组,每组 6 只。除正常组外,其余各组运用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）注射建立 DKD 模型,造模后正常组与模型组每天灌胃生理盐水,阳性药组每天灌胃厄贝沙坦 11.51 mg/kg,三黄益肾低剂量及三黄益肾高剂量组每天分别灌胃三黄益肾胶囊 0.81、1.62 g/kg,分别干预 8 周。通过观察给药期间各组大鼠血糖、 体质量水平, 检测造模给药后生化指标水平及肾组织病理学染色评估三黄益肾胶囊对 DKD 的治疗作用;其次,运用试剂盒及酶联免疫吸附（ELISA）法研究三黄益肾胶囊对 DKD 大鼠肾组织中氧化应激及炎症因子水平的影响;最后运用免疫荧光、Tunel 染色、蛋白免疫印迹（Western blot）等方法研究三黄益肾胶囊对 DKD 大鼠肾组织细胞凋亡以及 IRE1/GPR78 信号通路的影响。[结果] 经三黄益肾胶囊干预后,DKD 大鼠体质量显著增加, 血糖水平降低,血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）及 24 h 尿蛋白水平下降,同时也可改善 DKD 大鼠肾组织病理学变化,肾组织炎细胞浸润及纤维化减轻。此外,三黄益肾胶囊可显著升高 DKD 模型大鼠肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性、降低丙二醛（MDA）水平,并降低 DKD 大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。Western blot 结果显示,三黄益肾胶囊显著降低了 DKD 模型大鼠肾组织中内质网应激标志性因子 GRP78、IRE1 蛋白表达水平, 同时有效降低了模型大鼠肾组织中促凋亡蛋白 BcL2 关联 X 蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）的表达,提高了抑制凋亡蛋白 BcL2 的表达。[结论] 三黄益肾胶囊对 DKD 模型大鼠具有显著治疗作用, 其作用机制可能与抑制肾组织中 IRE1/GPR78 信号通路激活,改善内质网应激有关。