指纹图谱及网络药理学联合分析芪胶升白胶囊的药效成分及机制

芪胶升白胶囊(以下简称芪胶)具有补血益气的功效，临床常用于癌症的辅助治疗，防治肿瘤放化疗所引起的白细胞减少症，但其作用机制尚不明确。该研究基于指纹图谱和网络药理学预测分析芪胶的药效成分及作用机制。首先，采用HPLC建立20批芪胶的指纹图谱，并利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)对结果进行相似度评价，结果显示相似度大于0.97。同时，通过对照品指认了其中阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、芒柄花黄素、宝霍苷I和Z-藁本内酯等11个共有峰。采用网络药理学方法建立芪胶“成分-靶标-通路”网络，并结合文献，分析得出芪胶中阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮等10个关键成分，可能通过调控EGFR、RAF1、PIK3R1和RELA等10个潜在靶标，参与PI3K-Akt和MAPK等关键信号通路辅助治疗肿瘤、癌症及白细胞减少症。采用AutoDock Vina对关键靶点和成分进行分子对接验证，对接结合能均小于-5 kcal·mol^-1,表明10个关键成分与各潜在的靶标具有良好的结合活性。综上，该研究建立了芪胶H...     

红芪搓条前后主要次级代谢产物变化规律研究

目的 考察红芪搓条前后主要次级代谢产物的变化规律。方法 UPLC-MS/MS法测定芒柄花素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、美迪紫檀素、染料木素、木犀草素、甘草素、异甘草素、香草酸、阿魏酸、γ-氨基丁酸、腺苷、甜菜碱的含量,聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘判别分析进行化学模式识别以寻找差异性成分。结果 搓条后,芒柄花素、毛蕊异黄酮、甘草素、γ-氨基丁酸含量升高,芒柄花苷、毛蕊异黄酮苷、香草酸含量降低。搓条、未搓条药材聚为2类,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、γ-氨基丁酸、香草酸、毛蕊异黄酮、芒柄花苷为差异性成分。结论 本实验阐明红芪搓条前后化学成分差异,可为其他药材搓条机制研究提供参考。     

益气活血通便方指纹图谱及功效基准物质预测分析

目的 建立益气活血通便方（Yiqi Huoxue Tongbian Recipe，YHTR）指纹图谱检测方法，并结合网络药理学方法对YHTR功效基准物质进行预测分析。方法 建立YHTR的高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱，并对共有峰成分进行指认，运用网络药理学方法建立YHTR的成分-靶点-通路网络，利用AutoDock软件进行分子对接，进一步确定YHTR功效性成分选择的合理性。结果 YHTR的指纹图谱共标定14个共有峰，通过对照品指认出绿原酸、松果菊苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素7个色谱峰，10批样品的相似度均≥0.792，YHTR的功效基准物质有效地实现从药材-饮片-复方的传递；利用网络药理学方法对YHTR的7个活性成分进行分析，构建成分-靶点-通路网络，富集通路包括癌症、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）、脂质与动脉粥样硬化、前列腺癌等信号通路；根据网络药理学和分子对接结果分析，预测绿原酸、松果菊苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素7个成分可通过作用于上述通路起到补血活血、润肠通便的功效。结论 HPLC指纹图谱结合网络药理学方法操作简便、准确度高、稳定性好，可用于YHTR的质量控制，7个化学成分的准确测定也为YHTR功效基准物质的研究提供了依据。     

基于一测多评法测定甘肃红芪中4种黄酮类成分

目的建立甘肃红芪中芒柄花苷、毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素4种黄酮类成分的一测多评法,验证该方法在红芪质量评价中应用的准确性及可行性。方法以毛蕊异黄酮为内标,分别建立毛蕊异黄酮与芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的相对校正因子,计算红芪中毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素的含量,实现一测多评。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法无显著差异。结论以毛蕊异黄酮为内标,同时测定芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的一测多评法可用于红芪的定量分析。     

基于多元统计分析的红芪蜜炙前后成分差异研究

目的比较红芪蜜炙前后化学成分差异,分析其差异标志物,为红芪蜜炙炮制机理及红芪与炙红芪质量标准研究提供参考。方法采用HPLC建立红芪与炙红芪样品指纹图谱,并测定香草酸、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量;采用SIMCA14.1软件对红芪与炙红芪各10批样品共有峰峰面积数据进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)。结果红芪和炙红芪指纹图谱有19个共有峰,20、21号峰为红芪蜜炙后出现的色谱峰。炙红芪中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷和香草酸含量均显著降低(P0.01),分别降低48.00%、21.74%和48.24%;毛蕊异黄酮和芒柄花素含量均显著上升(P0.01),分别上升34.18%和17.49%。多元统计分析结果显示,红芪蜜炙前后化学成分存在显著差异,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、香草酸、毛蕊异黄酮及芒柄花苷为其差异主要指标性成分。结论红芪与炙红芪成分差异显著,红芪蜜炙后产生了新的成分,毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、香草酸、毛蕊异黄酮及芒柄花苷可作为二者的差异标志物。     

甘肃不同产地、不同月份红芪中4种异黄酮的含量特征研究

目的:研究甘肃红芪不同产地、不同月份中4种异黄酮成分的含量变化特征。方法:采集不同月份(7、8、9、10月)的红芪样品,采用HPLC测定样品中4种异黄酮成分的含量,并进行了作图、单因素方差及相关性分析。结果:不同月份3个产地红芪样品中4种异黄酮的量存在显著性差异(P0.01);3个产地的红芪样品中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷含量在7、8、9、10月份均为陇西样品宕昌样品武都样品,3个产地红芪样品中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷在10月份含量最低,9~10月呈下降趋势;芒柄花素含量9~10月呈上升趋势;武都、宕昌、陇西7、8、9、10月红芪样品的特征性成分为毛蕊异黄酮葡萄糖苷。结论:不同产地红芪中4种异黄酮的含量在不同的月份存在个性差异与相关共同特征。     

甘肃不同产地及不同生长年限红芪和黄芪中4种异黄酮类成分的含量对比

目的:建立甘肃红芪和黄芪药材中4种异黄酮类成分含量测定的方法,比较甘肃不同产地一年生、二年生红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量。方法:以毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素为对照品,采用HPLC法,Agilent Eclipse-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,在254 nm处检测。结果:毛蕊异黄酮苷在2.25~0.005 625μg(r=0.999 7),芒柄花苷在2.22~0.111μg(r=0.999 4),毛蕊异黄酮在0.112~0.001 12μg(r=0.999 9),芒柄花素在1.68~0.001 68μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系。红芪和黄芪的平均加样回收率均在95%~105%,RSD均3%(n=6)。结论:该研究建立的红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于甘肃地区红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量测定及其对比研究。从4种异黄酮类成分含量分析,一年生、二年生红芪质量相当,一年生黄芪优于二年生,且黄芪质量优于红芪。红芪最佳产区为武都,黄芪最佳产区为宕昌。甘肃地区红芪芒柄花素含量高于黄芪,黄芪毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷含量高于红芪。在开发和利用甘肃红芪和黄芪时,应根据二者异黄酮含量各自优势有所选择,二者不适合替代使用。     

基于网络药理学探讨四逆散治疗桥本甲状腺炎作用机制

目的 基于网络药理学及分子对接技术,分析四逆散治疗桥本甲状腺炎的作用机制.方法 通过TCMSP数据库,筛选柴胡、白芍、枳实、甘草的主要活性成分及作用靶点;通过Genecards、OMIM数据库获取桥本甲状腺炎的相关靶点;利用STRING数据库构建PPI网络;利用Metascape平台进行KEGG信号通路和GO生物富集分析,并运用Cytoscape3.6.1软件构建"方药-成分-疾病-靶点-通路"网络;利用AutoDock Vina软件进行分子对接验证.结果 四逆散治疗桥本甲状腺炎的核心活性成分包括槲皮苷、山奈酚和异鼠李素等;核心靶点包括STAT3、TNF、AKT1、TP53、JUN、IL-6、MAPK1、EGFR、MAPK14、VEGFA等;核心通路包括TNF信号通路、AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路、Toll样受体信号通路及Th17细胞分化通路等;四逆散中槲皮苷成分与STAT3、TNF、AKT1、MAPK14靶点经分子对接验证后结合活性较好.结论 四逆散治疗桥本甲状腺炎的药理学作用机制多成分、多靶点、多通路.     

HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价红芪质量

目的 以完善红芪Hedysari Radix质量评价方法与内容为目的，建立红芪HPLC指纹图谱并测定4种有效成分的含量，并在建立多成分含量测定方法基础上，为其质量标志物的可测性提供依据。方法 运用HPLC法建立36批红芪的指纹图谱，通过对照品比对，对共有峰进行指认，确定并建立4种有效成分含量的测定方法，在指纹图谱相似度评价基础之上，运用聚类分析、主成分分析、判别分析对36批次红芪差异性成分进行分析。结果 36批红芪指纹图谱共有16个峰，指认了4个峰，分别是毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素；30批红芪相似度大于0.900,6批红芪的相似度在0.802～0.900；聚类分析将36批红芪分为4类；主成分因子分析提取了4个主成分，5批红芪主成分综合得分较低，与其他批次有较大差异，主成分分析依据生长类型将红芪分为2类、依据商品等级分为4类，差异性成分分别为峰7、芒柄花苷、峰10、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素；判别分析结果与主成分分析一致；毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷以及4种有效成分的总量与主成分综合得分呈显著负相关，指认的4种有效成分在可测性方面具备成为红芪质量标志物的科学性。结论 建立的HPL...     

甘肃不同产区红芪中指标性成分含量的比较

目的：采用高效液相色谱法,测定甘肃不同产区红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量,对产区与指标性成分的相关性进行研究.方法：色谱柱为TC-C1s（2）柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,TC-C1s保护柱（10 mm ×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.01％磷酸水溶液（梯度洗脱）,流速为1.0 mL· min-,检测波长为248 nm,柱温为30℃,进样量为10μL.结果：经系统聚类分析方法分析,采自陇南市和定西市的16批样品可分为三大类,其中采自陇南市武都区、宕昌县的9个产地的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较高,芒柄花素含量在111.72～424.92 μg·g-1,毛蕊异黄酮含量在17.20～34.34μg·g-1;而采自定西市岷县、陇西县和宕昌县部分乡镇的红芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量较低,芒柄花素含量在74.35～ 182.88 μg·g-1,毛蕊异黄酮含量在2.27 ～ 13.56 μg·g-1.结论：不同产区红芪药材中指标性成分毛蕊异黄酮和芒柄花素含量存在一定的差异.武都、宕昌产红芪质量优于岷县、陇西等地所产红芪药材,这与武都、宕昌为红芪道地产区一致,可为红芪GAP种植基地的选址提供参考依据.     

基于网络药理学研究栀子入血成分抗阿尔茨海默病的作用机制

栀子具有传统的益智开窍功效,但是其作用机制不明确。该研究以栀子传统益智开窍功效与抗阿尔茨海默症之间的关系为切入点,采用网络药理学方法研究预测栀子中主要入血成分的抗阿尔茨海默症药理作用机制,建立其"入血成分-靶标-通路-疾病"的网络药理学研究模式。研究采用活性成分筛选、靶点预测技术,确定栀子抗阿尔茨海默症的有效成分及作用靶点,利用生物信息注释数据库(DAVID)富集通路及生物过程,分子对接验证网络分析结果,阐述栀子抗阿尔茨海默症的作用机制。结果显示,栀子35个入血成分可能调控胆碱酯酶(cholinesterase,BCHE)和碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2,CA2)等48个靶点,显著影响转录因子活性、核受体活性、类固醇激素受体活性、酰胺结合和肽结合等11条生物过程及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、阿尔茨海默病、促性腺激素释放激素信号通路和雌激素信号途径等7条代谢通路。且分子对接验证显示,60%以上的有效成分与关键靶点具有结合活性,相关文献也显示结果所得活性成分能够抑制关键靶点MAPK1表达,说明结果可靠性较高。研究结果表明栀子可能通过"多成分、多靶点、多通路"发挥抗阿尔茨海默症的作用,为栀子的进一步研究及其产品开发提供了科学依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS结合网络药理学与实验验证探讨四君子汤治疗阿尔茨海默病的作用机制

采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)联用技术分析灌胃给药后四君子汤提取液在大鼠体内的入血成分,并结合网络药理学、分子对接和实验验证研究四君子汤治疗阿尔茨海默病的作用机制。根据一级质谱和二级质谱信息,结合文献和数据库数据,对四君子汤入血成分进行指认。基于这些成分结合PharmMapper、OMIM、DisGeNET、GeneCards和TTD数据库筛选四君子汤入血成分治疗阿尔茨海默病的潜在作用靶点,经网络药理学预测运用STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络;通过DAVID数据库实现京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)信号通路和基因本体论(Gene Ontology, GO)功能富集分析;Cytoscape 3.9.0软件进行可视化分析,最后使用AutoDock Vina和PyMOL软件对相关入血成分与核心靶点进行分子对接。最后依据KEGG通路分析结果,选择PI3K/Akt信号通路进行动物实验验证。结果显示,...     

消炎退热颗粒清热抗炎作用的网络药理学分析及其主要成分的含量测定

目的 运用网络药理学方法分析消炎退热颗粒清热抗炎的作用机制,并采用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)技术测定其8种主要活性成分。方法 通过Swiss Target Prediction数据库筛选退热颗粒入血成分的靶点,利用CTD数据库获取符合发热的疾病主要靶点,借助String平台进行蛋白相互作用(PPI)分析;通过DAVID数据库进行GO功能与KEGG通路富集分析,然后用Cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络,并对关键化合物-靶点进行分子对接验证。采用UPLC-MS/MS法测定消炎退热颗粒中靛玉红、异甘草素、甘草素、甘草酸、甘草苷、秦皮乙素、咖啡酸、绿原酸的含量。采用WATERS ACQUITY UPLC^?BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);以0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸-5 mmol·L^-1甲酸铵(B)为流动相进行梯度洗脱,以多反应监测(MRM)模式进行测定。结果 网络药理学及分子对接筛选出消炎退热颗粒中靛玉红、秦皮乙素和咖啡酸等16个潜在的活性成分,获得转录...     

红芪中的无机元素及其与药效活性成分关系的研究进展

红芪是甘肃特色中药材之一,应用广泛。红芪的临床疗效与其所含有的药效活性成分含量有关,其中红芪多糖、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素和芒柄花苷等可以被看作红芪主要的药效活性成分。红芪中的无机元素种类多,且含量随红芪生长呈规律性变化,并且能影响红芪药效活性成分的积累。对红芪研究中发现的无机元素、主要药效活性成分及一些无机元素与药效活性成分之间的关系进行综述,旨在为提高红芪栽培质量和更好发挥红芪药效作用提供参考。     

基于超高效液相色谱法-串联质谱技术和网络药理学的复方感冒灵成分及作用机制验证

目的：采用超高效液相色谱法-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术系统研究复方感冒灵颗粒药效物质成分及体内代谢谱,并结合网络药理学探讨发挥药效的作用机制。方法：采用UPLC-MS/MS法对复方感冒灵颗粒主要化学成分以及入血成分进行鉴定。采用网络药理学的方法构建“成分-靶点-功效-疾病”网络,通过蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络筛选核心靶点,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果：从复方感冒灵颗粒醇提物中共鉴别出170个化合物和21个入血成分,构建了复方感冒灵颗粒成分谱及代谢谱。预测核心靶点为肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、胱天蛋白酶3(CASP3)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、促分裂原活化的蛋白激酶1(MAPK1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素-2(IL-2)以及促分裂原活化的蛋白激酶14(MAPK14),与解热、抗炎与抗病毒功效对应。结论：本研究采用UPLC-MS/MS技术构建了复方感冒灵颗粒的物质成分谱及体内代谢...     

土壤营养成分与红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素量之间的相关性研究

目的以甘肃不同产区栽培红芪药材及其生长土壤为研究对象,探讨土壤营养成分全氮、全磷、全钾、有机质、速效磷、速效钾与红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素量的相关性。方法采用Duncan多重比较、相关性分析及回归分析对土壤营养成分量及红芪活性成分量进行分析。结果毛蕊异黄酮与土壤中全氮、全钾存在显著正相关性,与有机质、速效磷呈正相关,与速效钾、全磷呈负相关;芒柄花素与土壤中全钾存在极显著正相关性,与全氮、速效磷呈正相关,与速效钾、有机质、全磷呈负相关。结论红芪对土壤中不同营养成分具有选择性,全钾、全氮、速效磷量高的土壤适合于红芪中毛蕊异黄酮与芒柄花素成分的累积,说明全钾、全氮、速效磷较高的土壤有利于红芪药材的生长。     

基于网络药理学和实验验证探讨感咳颗粒干预急性肺损伤的作用机制

依据感咳颗粒在大鼠体内的入血成分研究基础,结合网络药理学、分子对接和动物实验验证探究感咳颗粒干预急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的潜在作用机制。将感咳颗粒的大鼠入血成分导入SwissTargetPrediction平台预测药物靶点,从疾病数据库收集ALI相关靶点,取交集并构建蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)网络筛选核心靶点,随后进行基因本体(Gene Ontology, GO)功能和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Gnomes, KEGG)通路富集分析。构建“入血成分-靶点-通路-疾病”网络,根据其拓扑参数筛选感咳颗粒干预疾病的核心成分。借助分子对接预测核心成分与关键靶点的结合能力。通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的ALI小鼠模型验证感咳颗粒干预急性肺损伤的关键靶点。PPI拓扑参数分析得到与ALI有关的STAT3、SRC、HSP90AA1、MAPK3、HRAS、MAPK1前6个关键靶点。GO功能分析可知主要与ERK1和ER...     

益气生津散治疗2型糖尿病合并高血压的入血成分及作用机制分析

目的 基于超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）分析益气生津散入血药物活性成分,并采用网络药理学、GEO数据库多芯片联合分析及分子对接技术探讨益气生津散治疗2型糖尿病合并高血压的可能作用机制。方法 采用UPLC-MS/MS技术分析2型糖尿病合并高血压患者服用益气生津散后含药血清活性成分;采用Cytoscape构建成分-关键靶点-疾病网络,用STRING数据库和Cytoscape软件筛选蛋白互作分析网络（PPI）及核心靶点,用R软件对基因本体（GO）功能、京都基因与基因组百科全书（KEGG）进行富集分析;采用Pub Chem数据库、RCSB PDB蛋白质结构数据库、AutoDock tools软件及AutoDock Vina1.1. 2进行分子对接,并用Pymol软件进行可视化分析。结果 2型糖尿病合并高血压患者服用益气生津散后,主要入血活性成分为甜菜碱、石斛碱、人参皂苷Rg1、毛兰素、人参皂苷Rb1、丙二酰基人参皂甙Rd、鲁斯可皂苷元、尿苷、京尼平苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、8-O-（羟基桂皮酰）哈帕苷、哈巴俄苷、人参皂苷Re,分别与核心信号通路磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B ...     

基于在体单向肠灌流模型的红车轴草异黄酮类成分渗透性研究

目的研究红车轴草水提物的异黄酮类肠吸收成分及其肠渗透性,探讨其相应机制。方法采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),建立红车轴草水提物肠灌流液中异黄酮类成分大豆苷元、大豆苷、染料木苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷的定量分析方法。基于大鼠在体单向肠灌流模型,研究红车轴草水提物中6种异黄酮类成分在不同小肠段(十二指肠、空肠、回肠)的肠渗透性,并对不同浓度的芒柄花素、芒柄花苷单体成分肠渗透特征进行研究。结果建立了红车轴草水提物肠灌流液中6种异黄酮类成分的UPLC-MS/MS定量分析方法,符合方法学要求。红车轴草水提物灌流液各成分的有效渗透系数(Peff)均大于5×10-5 cm/s,最大者为芒柄花素(Peff=3.20,十二指肠),其次为染料木苷(Peff=2.19,空肠);对于不同肠段,各成分Peff和吸收速率常数(Ka)均存在一定差异,大豆苷元、芒柄花素的十二指肠Peff最大,其余4种成分的空肠Peff最大,表明红车轴草水提物中异黄酮的最佳吸收窗口为十二指肠和空肠;不同浓度芒柄花素、芒柄花苷单体灌流的Peff、Ka差异均无统计学意义(P0.05),吸收曲线近似线性,其吸收机制符合被动扩散的特征。结论本研究初步明确了红车轴草水提物中异黄酮类成分的肠渗透性及吸收机制,可为质控成分筛选、制剂开发及临床合理用药提供参考。