尼氏小体染色方法的改进及其在神经病理学研究中的应用

组织或细胞的染色在病理学诊断、科学研究和教学工作中,都具有非常重要的意义和使用价值。组织切片染色的质量好坏对于医学诊断,科研和教学至关重要。为了更好的研究神经组织,使医学诊断、科研和教学工作更为方便,本文对Toluidine Blue(甲苯胺蓝)染色方法做了一些改进。在传统的甲苯胺蓝染色过程中,仅考虑对细胞核和尼氏小体进行染色,未考虑细胞浆和其他细胞器:而改进后的甲苯胺蓝染色方法在甲苯股蓝染色后用伊红再染色,既考虑对细胞核和尼氏小体进行染色,也对细胞浆进行了染色。结果显示传统的Toluidine Blue染色结果光镜下观察,细胞核和尼氏小体都可见,即尼氏小体为深蓝色,细胞核为蓝色,染色背景为淡蓝色;改进后的染色结果光镜下观察,尼氏小体为紫蓝色,细胞核为蓝色,染色背景为粉红色。可见,改进后的染色方法染出的组织切片比传统的要清晰、美观。随着科学技术的飞速发展,病理学的研究也随之发展,病理技术势必进一步提高,来适应科技的进步和医学的发展。改进的尼氏小体染色法能够使脑组织切片更清楚观察,更有利于医学工作者对神经组织及尼氏小体的研究。     

高压氧治疗对实验性大鼠脑梗死后皮层神经元内尼氏小体的影响

目的 观察高压氧治疗对大鼠脑梗死治疗后尼氏小体的影响,探讨高压氧治疗脑梗死的机制.方法 对72只大鼠采用大脑中动脉栓塞的办法制备脑梗死模型,随机分为高压氧组和对照组,然后在梗塞后6h、48h、7d、14d观察皮层神经元尼氏小体染色、尼氏小体的变化并且进行定量分析.结果 高压氧治疗组尼氏小体的数目明显高于对照组.结论 高压氧治疗对脑缺血急性期的神经细胞有保护作用.     

消化系肥大细胞染色方法改进

肥大细胞显示方法很多,易被碱性染料着色,如硫堇、甲苯胺蓝、美蓝、阿利新蓝等,均能显示其形态结构,经多次实验我们改用次甲基蓝、天青Ⅱ混合液染消化系肥大细胞效果满意。1 材料与方法     

应用Nissl/GFAP荧光标记流式细胞术检测神经干细胞分化的研究

目的:探寻一种能快速准确地对神经干细胞分化结果进行定量鉴定的检测方法.方法:采用神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)免疫荧光和Nissl荧光染色观察体内神经元尼氏小体的染色情况;采用NeuN免疫荧光和Nissl荧光染色观察体外神经干细胞诱导分化后的神经元尼氏小体的荧光染色情况;体外诱导神经干细胞分化...     

卡氏肺孢子虫病动物模型建立和虫体形态观察

采用醋酸可的松诱发Wistar大鼠、BALB/C小鼠和家兔感染卡氏肺孢子虫,比较不同动物对卡氏肺孢子虫的易感性。经姬氏染色法、哥氏银染色法等染色后进行虫体形态观察,结果显示,Wistar大鼠卡氏肺孢子虫惑染率最高(100%),虫体量多。不同给药方式对Wistar大鼠卡氏肺孢子虫的感染率无显著性意义。各种染色法可显示肺组织印片或切片的滋养体或包囊。姬氏染色法是显示印片中虫体的可靠方法。改良哥氏银染色法和快速焦油紫法是显示肺组织石蜡切片中包囊的可靠方法。伦氏荧光桃红——肼黄法能良好地显示切片中的滋养体和囊内小体。     

缺血低氧性脑损伤对未成熟新生大鼠神经元和髓鞘的影响

目的探讨大鼠缺血低氧脑损伤对于神经元和髓鞘的影响情况。方法将3日龄SD新生大鼠随机分为对照组和缺血低氧处理组,对照组不予任何特殊处理,缺血低氧处理组大鼠行左颈总动脉结扎术后休息1~2 h入封闭容器,充以8%O_2+92%N_2的混合气体,处理时间为120 min,之后恢复正常氧供。待造模完成后3 d时进行尼氏小体染色探讨两组大鼠神经元的情况,造模后7 d进行劳克坚牢蓝染色探讨两组大鼠的髓鞘情况。结果尼氏染色结果提示,与对照组相比,缺血低氧处理之后大鼠脑组织中的神经元尼氏小体染色密度明显降低;劳克坚牢蓝染色结果显示,与对照组相比,缺血低氧处理组的髓鞘明显受损。结论大鼠缺血低氧性脑损伤对脑组织的神经元和髓鞘造成了一定程度的影响,进而导致脑组织相关的功能损伤。     

38例葫豆黄患儿海氏小体检查方法及其动态变化

1890年Robert，Heinz氏在苯胼溶血过程中，于红细胞中观察到一些形态不规则的折光小体，后命名为海氏（Heinz）小体、它可由相差显微镜或活体染色（如结晶紫、煌焦油蓝）观察到，其本质目前尚不清楚，多数学者认为它是血红蛋白破     

吉姆沙氏染液显示肥大细胞的方法

1877年Ehrlich首先记载了硷性苯胺染料有异染性特征。其后有许多学者对肥大细胞的异染性作了大量的研究。已知甲苯胺蓝、天青、美蓝、硫堇、结晶紫等多种硷性染料以及中性红等都能显示肥大细胞。我们从1953年起,20多年来一直使用吉姆沙氏液染小白鼠的肥大细胞,方法简便,效果良好,满足了教学需要,兹介绍如下。方法 1.将小白鼠击头杀死或一手按头一手拉尾处死后,用水打湿腹壁皮肤后再剪开,取出小块皮下疏松结缔组织,放在干净的载玻片上,用分离针轻轻分离成铺片。     

穴位埋线疗法对缺血性认知障碍模型大鼠的学习记忆力及海马CA1区突触超微结构的影响

目的观察穴位埋线疗法对缺血性认知障碍模型大鼠学习记忆力及海马CA1区形态学超微结构的影响,并探讨其作用机制。方法将32只SPF级雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、穴位埋线组、药物组,每组8只,采用双侧颈总动脉永久性结扎法复制慢性缺血性认知障碍模型。穴位埋线组取"百会""大椎""肾俞""悬钟",每周1次,共埋线4次;药物组予以单唾液酸四已糖神经节苷脂钠注射液腹腔注射(0.33 mg/kg),每天1次,共4周。采用Morris水迷宫测大鼠学习记忆能力,尼氏染色法观察海马组织内尼氏小体病理变化及染色面积,透射电镜观察大鼠海马CA1区超微结构变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠学习记忆能力明显降低(P0.01);海马组织尼氏小体面积减少(P0.01);突触相关结构受损,突触结构参数差异具有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆能力增强(P0.01),尼氏小体面积增加(P0.01),大鼠海马CAl区突触计数增多,突触活性区长度变长,突触间隙宽度变窄,PSD厚度变厚,差异有统计学意义(P0.01)。与药物组比较,穴位埋线组大鼠学习记忆成绩、尼氏小体面积、海马CA1突触结构超微变化,差异均无统计学意义(P0.05)。结论穴位埋线可改善缺血性认知障碍模型大鼠的认知损害,其作用机制可能与其保护海马尼氏小体及改善突触可塑性有关。     

对火棉胶切片尼氏染色方法的体会

尼氏(NiSSL)染色法是应用碱性染料显示神经元胞体的一种常规方法,广泛应用于脑内核团的定位、核团内神经元的类型、分布和计量学分析。尼氏染色多采用冰冻或石蜡切片,但上述切片法由于组织收缩较剧、难以制作大块组织切片、以及切片易破损、切片厚度不匀等缺点。而火棉胶包埋可改善上述不足,得到质量较高的切片,其缺点是不易制作连续切片。我们在人类脑干核团的计量学研究中,在以往染色程序的基础上,制作了脑干连续火棉胶切片,并对染色程序进行了相应的改变,得到了较理想的染色效果,现将我们的方法介绍如下,以供参考。(一)连续切片的制作:我们采用两人切片法,     

介绍一种简便宜行的神经细胞尼氏体染色法

<正> 1892年Nissl氏首次用美兰(Methylene blue)染出了以他本人的名字命名的小体,而后又用另外一些硷性染料如甲苯胺兰(Toluidine blue)、焦油紫(Cresyl violet)、硫堇(Thionin)和棓酸菁兰(Gallocyanin)等染出了神经细胞体内的尼氏体、胞核及核仁,统称为Nissl氏染色法。应用Nissl氏法可以很容易观察神经细胞的分布情况,同时对确定神经细胞类型、     

NGF和BME对小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的探讨神经生长因子(NGF)β-疏基乙醇(BME)诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mousenarrow mesenchmal stem cells,mMSCs)分化为神经元样细胞的作用.方法密度梯度离心结合差异贴壁法分离、纯化mMSCs,用血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB)和表皮生长因子(Epidermal Growth Facotro,EGF)刺激促进mMSCs分裂增殖.以NGF和BME为诱导剂,观察诱导期间细胞的形态变化,并用免疫细胞化学法鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,甲苯胺蓝色法显示尼氏小体.结果免疫细胞化学显示:70%细胞表达NSE,74%细胞表达NF;实验组行尼氏染色出现尼氏小体.结论NGF和BME能诱导mMSCs分化为神经元样细胞,而且具有较高的诱导效率.     

检测阴道霉菌两种方法的对比分析

目的：对比生理盐水直接涂片法和吕弗勒氏碱性美蓝（亚甲蓝）染色法对阴道霉菌的检出情况,探讨更可靠的阴道霉菌诊断依据。方法：对497份阴道分泌物标本分别用两种方法检测霉菌。结果：生理盐水直接涂片法检测率15.49%,吕弗勒氏碱性美蓝染色法检测率17.75%。结论：吕弗勒氏碱性美蓝染色法取代生理盐水直接涂片法检测阴道霉菌。     

大脑冰冻连续切片细胞染色新方法-改良的Pischinger缓冲美蓝法

脑神经细胞染色方法甚多,如硫堇、甲苯胺蓝、美蓝、焦油紫、核酸菁蓝等,其中以P·Mayer氏硫堇法,Nissl氏甲苯胺蓝法,Bielschowsky——pal氏焦油紫法和pischinger氏缓冲美蓝法,至今仍为脑神经学研究工作者沿用.上述神经细胞染色法程序虽不复杂,但稍有不当往往难获满意结果,且染色保存性不稳定,极易褪色,尤以硫堇、美蓝、甲苯胺蓝最为突出.焦油紫和棓酸菁蓝的保存性虽较好,但这两种试剂目前在我国尚靠进口供应,价格贵且不易购得,不便于进行大量脑连续切片作脑神经细胞染色观察研究工作.1985年以来我们为制     

30例慢性粒细胞白血病患者骨髓涂片甲苯胺蓝染色结果分析

本文对30例慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓涂片进行甲苯胺蓝染色和瑞姬氏染色比较。结果显示同一患者骨髓涂片,甲苯胺蓝染色嗜碱性粒细胞百分率明显高于瑞姬氏染色。由于CML患者骨髓中嗜碱性粒细胞均有增多,且嗜碱性粒细胞百分率的高低与患者的预后又有着一定的关系,故甲苯胺蓝染色应作为CML患者骨髓涂片的常规化学染色。     

大鼠额叶创伤后早期神经元型一氧化氮合酶的表达变化

目的观察大鼠额叶创伤后不同时间点创伤区及周边皮质神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的表达变化。方法采用成年健康SD大鼠（76只）脑额叶锐器损伤模型,随机分成空白对照组、假手术组和脑损伤组3组。于伤后0、1、3、6、12、24h等6个时间点分别采用尼氏染色法、免疫荧光组织化学方法、Western blot法来观察创伤区及周边皮质神经元的病理变化、nNOS阳性细胞和nNOS蛋白的表达变化。结果尼氏染色显示创伤区及周边皮质神经元数目减少,胞浆染色加深,尼氏小体减少,神经元突起不明显甚至消失。免疫荧光组织化学、Western blot免疫印迹显示,空白对照组及假手术组额叶皮质中偶见nNOS阳性细胞,nNOS蛋白表达量较低;伤后1h创伤区及周边nNOS阳性细胞表达开始增多,nNOS蛋白表达开始升高,6h达高峰,12h开始下降。结论大鼠额叶创伤后早期创伤区及周边皮质有nNOS的时程表达变化。     

毒蛇咬伤的病理组织学初步观察(6例尸检病例报告)

有关毒蛇咬伤的病理形态学研究,国内外都有一些报告,但人体病理材料报告较少。现将我们遇到的6例尸检材料加以总结分析,供蛇咬伤防治工作的参考。因尸检材料有2例由其他单位送检,资料、标本有些不够完整,不全面之处,有待进一步探索。检查方法尸检标本均按常规方法固定于10%福尔马林液中,组织块用石蜡包裹切片,苏木精-伊红染色,脑组织加作甲苯胺蓝染色观察尼氏小体。病例报告一、临床资料(附表)     

粪菌移植疗法对大鼠脊髓损伤后的作用研究

目的:探讨粪菌移植疗法(FMT)对大鼠脊髓损伤(SCI)后的作用.方法:将36只SD大鼠随机分为对照组(A组)、SCI组(B组)、FMT组(C组),每组12只.A组仅手术暴露,不进行击打,B组和C组用改良Allen's击打法建立SCI模型.C组灌胃给予粪菌液,连续14d.对16SrDNAV3-V4高度保守区进行HiSeq平台测序,比较SCI后肠道菌群变化,Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脊髓组织IL-17、IL-4和IL-10水平,苏木精—伊红(HE)染色法观察脊髓组织病理学变化,尼氏染色观察脊髓神经元细胞及尼氏小体.结果:与A组比较,B组有益菌Bacteroide-tes和Saccharibacteria数量减少,BBB评分下降,脊髓组织中抗炎因子IL-10和IL-4下降和促炎因子IL-17升高(均P＜0.05),炎性细胞浸润和神经元细胞核固缩,尼氏小体数量明显减少;与B组比较,C组BBB评分升高,脊髓组织IL-10和IL-4含量升高,IL-17含量下降(均P＜0.05),细胞变性水肿情况改善,尼氏小体数量增加.结论:FMT疗法能够有效抑制SCI后炎症反应,从而治疗SCI.     

阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体与APL遗传学标志相关性的研究

目的研究阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体与急性早幼粒细胞白血病（APL）遗传学标志的相关性。方法选取骨髓涂片检查中原粒、早幼粒均〉20%的初诊急性髓细胞白血病（AML）患者21例。R显带法检查染色体,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测PML-RARa融合基因。骨髓涂片行阿利新蓝染色,光镜下检测柴捆状Auer小体。结果阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体阳性8例,遗传学检查均显示t（15;17）和PML-RARa融合基因,其中附加其他染色体异常3例。其余13例阴性,其APL遗传学标志均阴性。结论阿利新蓝染色检测柴捆状Auer小体结果与APL遗传学标志具有显著的相关性,为APL的诊断和鉴别诊断提供了一项重要指标。     

基于“肾脑相济”理论探讨电针疗法对SAMP8小鼠神经元内尼氏小体的影响

目的:基于"肾脑相济"理论观察补肾益脑电针疗法对快速老化SAMP8小鼠皮层神经元病理形态改变,探讨补肾益脑电针疗法对阿尔茨海默病(AD)的治疗作用及机制。方法:根据"肾脑相济"理论,8月龄SAMR1和SAMP8小鼠电针"百会"、"肾俞"、"太溪"穴,连续8周后,取一半脑制作石蜡切片,甲苯胺蓝染色观察各组小鼠皮层神经元内尼氏小体结构的变化。结果:对照组SAMR1小鼠皮层神经元体积较大,形态规则,胞浆内布满尼氏体;模型组SAMP8小鼠皮层神经元体积较小,有较多细胞失去完整形态,尼氏小体颜色变浅且数目减少;电针和西药组的SAMP8小鼠皮层神经元体积变大,尼氏体较致密,无明显缺失和空泡变性。结论:依据"肾脑相济"理论的补肾益脑电针疗法可改善SAMP8小鼠脑内神经元的形态和功能状态,对AD可能有很好的治疗作用。