^60Co分割照射对鼻咽癌细胞生长增殖影响的观察

目的：观察不同剂量60Coγ射线分割照射对鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长和细胞周期素（Cyclin）D1及增殖细胞核抗原（PC-NA）的影响。方法：0、2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞1次/d,共5d。四唑盐（MTT）比色法测定细胞抑制率;流式细胞术检测细胞周期。PCR检测PCNA和Cyclin D1表达水平。结果：2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射5次/5d后各组细胞生长抑制率分别为-17.05%、4.01%和15.52%;各照射组G1期细胞数量减少,S＋G2/M期细胞数比例增多,χ2=16.53,P〈0.001。0、2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞5次/5d,CyclinD1表达水平随照射分割剂量增加而下降直至不表达,P值分别为0.035、0.022和0.000。2.0Gy照射CNE-2细胞5次/5d,细胞生长增殖未受到抑制,PCNA表达无下调,P=0.471;4.0和6.0Gy照射CNE-2细胞5次/5d,细胞生长增殖受到抑制,PCNA表达下调,P值分别为0.028和0.016。结论：4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射5次/5d,细胞生长增殖受到抑制;2.0Gy照射5次/5d细胞生长增殖未受抑制;2.0、4.0、6.0Gy60Coγ射线分割照射5次/5d后,CyclinD1和PCNA表达受抑制。     

丁酸钠对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞增殖影响的研究

目的：探讨丁酸钠(NaB)对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞体外增殖的影响及机制。方法：不同浓度的NaB作用于体外培养的人子宫内膜癌细胞系HHUA，通过绘制细胞生长曲线观察NaB对细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪定量分析细胞周期分布；用Western Blot分析p21、p53、pRb和E2F1蛋白表达。结果：NaB能诱导HHUA细胞周期G1期阻滞，上调p21蛋白表达，促进pRb去磷酸化，下调E2F1和p53蛋白表达。结论：NaB能抑制HHUA细胞体外生长，其诱导细胞周期G1期阻滞可能与p21等细胞周期调节蛋白的表达改变有关。     

全反式维甲酸联合射线对食管癌细胞TE13增殖及凋亡的影响

目的:研究全反式维甲酸( all-trans-retinoicacid,ATRA)联合放射线照射对食管癌TE13细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:采用MTT法检测ATRA对人食管癌细胞TE13增殖的影响;以其对TE 13细胞生长抑制率(inhibitory rate,IR)达25％、50％和75％时的ATRA的浓度分别联合γ-射线进行分组处理细胞;FCM法分析ATRA单药及联合放射治疗对TE13细胞周期及凋亡的影响;采用克隆形成实验分析对克隆形成率和细胞存活率的影响;采用FCM法检测cyclinD1蛋白的表达.结果:ATRA对TE13细胞有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;ATRA浓度为0.78、6.25和12.5 μmol/L作用48 h后,其对TE13细胞的IR分别达到22.0％、55.1％和71.1％.ATRA联合γ-射线(4 Gy)与ATRA单药组比较,可明显降低TE13细胞的存活率和克隆形成率;ATRA联合γ-射线(4 Gy)处理TE13细胞24和48 h后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显增加,与ATRA单药组比较,联合放射治疗可明显增强对TE13细胞周期和凋亡的影响;ATRA浓度为0.78 μmol/L时和γ -射线联合作用对细胞周期cyclinD1蛋白表达量影响不大,但ATRA浓度为6.25和12.5 μmol/L时则能明显下调cyclinD1的表达.结论:ATRA对TE 13细胞具有明显的增殖抑制作用,其可能通过下调cyclinD1蛋白的表达,将TE13细胞阻断于G0/G1期并诱导细胞凋亡.在ATRA浓度较高时联合放疗,能显著下调cyclinD1蛋白表达,加强细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡,抑制细胞克隆的形成能力;在ATRA浓度较低时联合放疗对原代细胞cyclinD1蛋白表达量的影响较小,但对促进细胞凋亡、抑制细胞克隆仍有一定的效果,其损伤效应可能需要一定时间.     

苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时对 G1细胞周期调节因子的调控

目的：观察苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时,G1细胞周期调节因子的变化,探讨苦参碱对肿瘤细胞增殖的调控。方法：0、0．3、0．8、1．5g/L苦参碱作用HepG2细胞3天,免疫组化检测p53,Rb,p21,p27,p16,cyclinD1蛋白表达：原位杂交检测p53,cyclin D1mRNA的表达。真彩色图像分析对基因表达强弱进行定量。结果用Microsoft-Excel软件统计处理。结果：用药后细胞周期负调控因子p53,Rb,p21,p27,p16表达增强;正调控因子cyclinD1表达减弱。结论：苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2分化、凋亡的机制可能与苦参碱上调了G1细胞周期负调节因子的表达,下调了G1期正调节因子cyclinD1表达有关。     

顺铂对人肺腺癌细胞SLC-89作用的机理探讨

目的 观察顺铂对SLC-89细胞增殖生长、端粒酶活性、细胞周期、p53、bcl-2及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，探讨顺铂抗癌作用的机理。方法 以不同浓度的顺铂作用于培养的SLC-89细胞72h，运用MTT法测定细胞增殖，端粒酶重复序列扩增酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性以及流式细胞术观察细胞周期的变化和p53、bcl-2及PCNA的表达。结果 顺铂能显著抑制SLC-89细胞的生长，IC50为18．47mg／L。顺铂能以浓度依赖方式下调SLC-89细胞端粒酶活性，减少S期细胞而阻滞细胞于G0／G1期，降低bcl-2和PCNA的表达，同时诱导p53的表达。结论 顺铂能显著抑制SLC-89细胞生长增殖、改变细胞周期分布、降低端粒酶活性及bcl-2与PCNA的表达，并诱导p53的表达，这可能是顺铂抗癌作用的重要机理。     

60Coγ射线对肝癌细胞株p27kip1表达及其分布的影响

最近研究表明电离辐射可以改变细胞周期的进程，而且不同的辐射敏感性细胞辐射后存在不同细胞周期变化规律。已有的研究发现^60Coγ射线对于卵巢癌细胞(A2780)和血管平滑肌细胞(VSMCs)主要发生G1阻滞，而对白血病细胞(HL-60)主要是G2 M期阻滞。p27^kip1是一类细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制剂，作为细胞周期负性调因子，参与细胞周期调控。最近有研究者发现细胞G2 M期阻滞p21蛋白高表达和p27^kip1蛋白的低表达共同调控，但是p27^kip1蛋白在γ射线引起的细胞周期改变过程中表达和分布的改变并不清楚。     

电离辐射对胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：研究电离辐射对体外胃腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响。方法：~（60）Coγ射线单次照射胃腺癌BGC-823细胞,照射剂量分别为0、2、4 Gy,利用MTT和克隆形成率实验检测各剂量组BGC-823的增殖能力;同时利用Annexin-V/PI双染法检测各剂量组BGC-823细胞的凋亡;用PI单染测定各剂量组BGC-823的细胞周期。结果：与0 Gy组相比,2、4Gy 60Coγ射线照射可显著抑制胃腺癌BGC-823细胞的增殖（P〈0.05）,诱导BGC-823细胞在照射后依次出现S期和G2/M期阻滞。4Gy 60Coγ射线照射后48h,凋亡细胞比例显著高于对照组（P〈0.05）。结论：60Coγ射线照射可抑制胃腺癌细胞BGC-823增殖、诱导胃癌细胞出现周期阻滞和细胞凋亡。     

60Co分割照射对鼻咽癌细胞生长增殖影响的观察

目的:观察不同剂量射线分割照射对鼻咽癌细胞株CNE-2细胞生长和细胞周期素(Cyclin)D1及增殖细胞核抗原(PC-NA)的影响.方法:0、2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞1次/d,共5 d.四唑盐(MTT)比色法测定细胞抑制率;流式细胞术检测细胞周期.PCR检测PCNA和CyclinD1表达水平.结果:2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射5次/5 d后各组细胞生长抑制率分别为-17.05%、4.01%和1 5.52%;各照射组G1期细胞数量减少,S+G2/M期细胞数比例增多,X2=16.53,P<0.001.0、2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞5次/5 d,Cyclin D1表达水平随照射分割剂量增加而下降直至不表达,P值分别为0.035、0.022和0.000.2.0 Gy照射CNE-2细胞5次/5 d,细胞生长增殖未受到抑制,PCNA表达无下调,P=0.471;4.0和6.0 Gy照射CN E-2细胞5次/5 d,细胞生长增殖受到抑制,PCNA表达下调,P值分别为0.028和0.016.结论:4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射5次/5 d,细胞生长增殖受到抑制;2.0 Gy照射5次/5 d细胞生长增殖未受抑制;2.0、4.0、6.0 Gy60Coγ射线分割照射5次/5 d后,Cyclin D1和PCNA表达受抑制.     

Cyclin D1基因沉默对K562细胞增殖及凋亡的影响

[目的]利用RNA干扰（RNAi）技术观测其对白血病K562细胞cyelin D1基因的沉默效应及对细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。[方法]体外构建靶向cyclin D1基因的小发夹RNA（shRNA）表达质粒．通过壳聚糖介导转染K562细胞，Western blot分析检测转染前后cyclin D1蛋白表达变化；集落形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况。[结果]构建靶向cyclinD1基因的shRNA表达质粒（pshRNA-419和pshRNA-575）经壳聚糖转染后，能显著抑制cyelin D1基因表达；抑制K562细胞增殖，影响其集落形成能力；细胞阻滞于G0／G1期，细胞凋亡明显。而m—pshRNA-790质粒并无上述生物学效应：[结论]cyclinD1基因表达下调可抑制K562细胞生长影响细胞周期分布并诱导细胞凋亡提示，因可能是白血病治疗的一个有效靶点。     

放射线对鼻咽癌细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2表达的影响

目的：研究放射线对鼻咽癌细胞（CNE）周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2蛋白表达的影响。方法：运用流式细胞术检测放射线诱导的细胞周期阻滞、凋亡；运用免疫组织化学法和Westernblot法检测抑癌基因p57^kip2蛋白的表达。结果：照射后，CNE细胞G1期无明显阻滞，S期出现短暂堆积，G2／M期阻滞强度具剂量和时间依赖性，随照射剂量增加，其阻滞程度增强，阻滞时间延长，G2／M期阻滞在12、24h与照射剂量呈正相关（P〈0．01），随照射后时间延长而增强，峰值出现于12Gy24h；凋亡发生率与照射剂量和照射后时间均呈正相关（P〈0．01）。p57^kip2蛋白表达在照射后随照射剂量的增加和照射后时间的延长均呈现上调（P〈0．01）。结论：放射线对鼻咽癌细胞G2／M期阻滞、凋亡率和抑癌基因p57^kip2蛋白表达均有明显的增强作用。     

叶绿酸铜钠对SMMC7721肝癌细胞抑制作用的体外实验研究

[目的]研究叶绿酸铜钠（CHL）体外抑制SMMC7721肝癌细胞的作用及机制。[方法]（1）MTT法测半数抑制浓度（IC50）并绘制生长曲线;（2）流式细胞仪观察CHL对SMMC7721细胞凋亡的诱导作用;（3）免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、环氧化酶-2（COX-2）的表达。[结果]（1）CHL对SMMC7721细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度和时间依赖效应;（2）CHL能诱导SMMC7721细胞G1期阻滞,通过抑制细胞生长周期、降低细胞增生速率抑制肿瘤细胞增殖;（3）CHL对SMMC7721细胞凋亡无明显诱导作用;（4）CHL能下调SMMC7721细胞PCNA和COX-2蛋白表达,并呈一定的浓度依赖性。对Cyclin D1的表达无明显影响。[结论]CHL能抑制SMMC7721细胞的生长,这种抑制作用同PCNA、COX-2表达下调及细胞G1期阻滞有关,但与细胞凋亡和Cyclin D1的表达无关。     

鼠乳腺癌细胞SX-9放射敏感性与细胞周期研究

通过对小鼠乳腺癌放射敏感细胞SX 9照射前、后细胞周期分布及其 p5 3基因状态等研究 ,初步探讨其放射敏感性与照射后细胞周期阻滞的关系。方法　利用克隆形成法比较SX 9与SR 1细胞照射后细胞存活份数及流式细胞术研究其细胞周期分布的差异 ;RT PCR克隆并鉴定p5 3基因 ;DNA电泳、流式细胞术和苔盼蓝染色研究细胞死亡方式。 结果　SX 9细胞对γ射线高度敏感 ,照射后G1 期阻滞消失 ,但仍存在G2 期阻滞 ;其 p5 3基因第 5外显子存在突变 ,DNA电泳检测不到DNAladder;苔盼蓝染色检测到的细胞死亡比例与对照组无显著差异。结论　γ射线照射放射敏感细胞SX 9细胞周期改变与其亲本细胞SR 1明显不同。SX 9亲本细胞SR 1细胞存在G1 ,G2 期阻滞。DNA电泳及苔盼蓝染色检测结果与SX 9细胞相同。结果表明SX 9细胞对放射敏感不是由于照射后细胞凋亡所致 ,而是由于其失去增殖能力引起增殖死亡的结果。     

叶绿酸铜钠对RKO肠癌细胞系生物学行为的影响

[目的]研究叶绿酸铜钠（CHL）体外抑制RKO肠癌细胞系的作用及机制。[方法]不同浓度CHL作用于RKO细胞,倒置显微镜下观察形态学变化;流式细胞仪观察CHL对RKO肠癌细胞凋亡的诱导作用;免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期素D1（Cy-clin D1）、环氧化酶-2（COX-2）的表达。[结果]CHL对RKO细胞有增殖抑制作用,24h IC50值为0.523±0.061mg/ml,48h IC50值为0.314±0.058mg/ml。随着CHL浓度的增高,RKO细胞抑制率明显上升;CHL能诱导RKO细胞G1期阻滞、降低S期,从而抑制肿瘤细胞增殖。CHL对RKO细胞凋亡未见明显影响。CHL能减少RKO细胞PCNA和COX-2蛋白表达,并具有一定的浓度依赖性。[结论]CHL能明显抑制RKO大肠癌细胞的生长,并且呈一定的浓度和剂量效应,抑制作用可能与PCNA、COX-2表达下调及细胞G1期阻滞有关。     

冷冻治疗抑制大鼠C6脑胶质瘤增殖的实验研究

目的：研究冷冻治疗对大鼠C6脑胶质瘤的增殖抑制作用及其机制。方法：建立大鼠C6脑胶质瘤模型，冷冻治疗后免疫组化检测CyclinD1蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞周期的变化，磁共振检测肿瘤体积变化。结果：与对照组比较，冷冻治疗后CyclinD1蛋白的表达下调，细胞周期出现G1期阻滞，肿瘤体积缩小。结论：冷冻治疗可抑制大鼠C6脑胶质瘤的增殖，其机制与下调CyclinD1蛋白的表达后，肿瘤细胞周期发生G1期阻滞有关。     

p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究

背景与目的：肿瘤抑制基因p53是调节多种与细胞周期、凋亡、DNA修复等有关基因表达的转录因子。p53基因在大约30％的胶质瘤中发生突变，在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。本文主要探讨野生型p53基因过表达对脑胶质瘤细胞系U251细胞生长抑制的机制。方法：通过p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染U251细胞系，RT-PCR及Westem blot方法检测转染效率；并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因对U251细胞生长的影响。结果：MOI为100时，野生型p53基因的过表达可引起U251细胞G0、G1期阻滞、诱导U251细胞凋亡以及引起U251细胞生长抑制。结论：p53基因可以通过细胞周期G0、G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长。     

人突变p27基因对大肠癌细胞SW480生长的影响

目的：观察人突变p27基因（p27mt）对人大肠癌细胞生长的影响，探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用机制。方法：以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒（Ad—p27mt）为载体，转染大肠癌细胞SW480；用Western blot方法检测p27mt蛋白的表达；细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪检测细胞周期：用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果：通过免疫印迹分析Ad—p27mt转染SW480细胞后，p27在细胞中出现了蛋白高表达。PI染色流式细胞仪检测77．96％的细胞阻滞于G0/G1期，而Ad—LacZ组及空白对照组分别为27．57％和25．29％；生长曲线显示Ad—p27mt对细胞生长就有明显的抑制作用；DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论：p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用，主要阻滞于G0／G1期；p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。     

PPARγ基因静默抑制肝癌HCCLM3细胞增殖并诱导其凋亡

目的:观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)基因静默对肝癌细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建靶向PPARγ的短发夹状RNA真核表达载体并转染HCCLM3细胞,采用RT-PCR、Western印迹法检测HCCLM3细胞中PPARγ的表达;MTT法检测细胞增殖;TUNEL法及FCM法检测细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测PCNA、野生型p53的表达.结果:shPPARγ转染组PPARγmRNA表达下调80.5%.转染后48 h,pshPPARγ组细胞增殖抑制率为71.5%;40 h时,PCNA阳性率为(23.8±7.2)%;TUNEL法检测凋亡率为(24.2±4.7)%,FCM法检测凋亡率为(23.2±4.2)%,2种方法的检测结果一致;shPPARγ转染组细胞被阻滞干G0/G1期,G2/M期细胞减少,与阴性对照和空白对照组比较(P<0.01)差异有统计学意义,且野生型p53表达增加.结论:PPARγ基因静默能诱导HCCLM3细胞凋亡,抑制增殖;与促进野生型p53表达相关.     

粉防已碱对人卵巢癌细胞株A2780增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防已碱对卵巢癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用MTT试验观察粉防已碱对A2780细胞的增殖抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳检测粉防已碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，通过流式细胞术观察粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞周期的影响以及诱导凋亡的作用，以免疫印迹检测粉防已碱对p53、p21及Bax表达水平的影响。结果：MTT试验显示粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖有抑制作用，其抑制效应具有时间及浓度依赖的特点，琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明粉防已碱可诱导A2780细胞凋亡，并引起G0／G1期阻滞，免疫印迹检测显示粉防已碱上调p53、p21及Bax蛋白表达。结论：粉防已碱对人卵巢癌A2780细胞增殖的抑制效应具有时间及浓度依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与上调p53、p21及Bax蛋白表达有关。     

电离辐射对肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]阐明电离辐射对肺癌A549细胞凋亡、细胞周期及Fas蛋白的影响。[方法]采用流式细胞术检测X射线照射对A549细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响。[结果]1．0-4．0GyX射线照射后,G0／G1期细胞数与对照组相比明显减少（P〈0．05）。0．5～4．0GyX射线照射后,G2／M期细胞数与对照组相比明显增多（P〈0．05）。各照射组细胞凋亡率和Fas蛋白表达与对照组相比均明显增高,其中均以4．0GyX射线照射后增高最为显著。[结论]X射线能诱导A549细胞周期发生G2期阻滞、细胞凋亡,并诱导Fas蛋白表达增高,且在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

酪氨酸激酶Etk/BMX对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的：研究酪氨酸激酶Etk/BMX对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响并探讨其可能机制。 方法：利用脂质体2000将野生型酪氨酸激酶Etk/BMX表达质粒pcDNA3.0-Etk导入Etk/BMX低表达水平的鼻咽癌细胞株Sune-1中,建立Etk/BMX稳定高表达细胞株Sune-wt,空质粒pcDNA3.0转染细胞作为对照（Sune-vector）。X射线（0、2、4、10、15Gy）照射后,MTT法测定细胞的生存分数（survival fraction,SF）;流式细胞术检测细胞的凋亡率、细胞周期、增殖指数以及凋亡相关蛋白p53和bcl-2的变化情况。结果：不同剂量X线照射后Sune-wt较Sune-1和Sune-vector生存分数（SF）均显著增高而凋亡均显著减少(P＜0.05),累计剂量15Gy后出现明显S、G2期阻滞,增殖指数增高。Sune-wt照射前后p53和bcl-2的表达水平出现显著改变(P＜0.05)。结论：Etk/BMX有增强鼻咽癌细胞对放射线的抵抗作用,其可能是通过调控p53和bcl-2的表达以及引起S、G2期阻滞两种途径实现的。