外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的 观察外源性野外型ｐ５３对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３突变的人肺巨细胞癌系８０１－Ｄ。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺｉＰ－ｐ５３。用基因枪介导外源基因。经Ｇ４１８筛选得到转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３。用ＰＣＲ检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果 转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３体外长期传代有外源性ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显     

重组腺病毒介导入野生型p53,GM-CSF和B7-1基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响

目的：探讨重组腺病毒分导入野生型ｐ５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因对肿瘤化疗耐药细胞生物学行为的影响,为临床使用该重组腺病毒治疗多药耐药的肿瘤提供实验基础。方法：选用ｐ５３异常的ＫＢ－ｓ（ＶＣＲ敏感）和ＫＢ－ｖ２００（ＶＣＲ耐药）细胞作为肿瘤化疗药物敏感和耐药的模式细胞,感染携带人野生型ｐ５３,ＧＭ－ＣＳＦ和Ｂ７－１基因的重组腺病毒后,观察这两种转基因癌细胞的生物学行为（包括药物敏感性）的变化。结果：药物敏感和耐药细胞都对腺病毒易感,重组腺病毒携带的三个外源基因（ｐ５３、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１基因）在两种细胞中都能得到有效表达,并且能抑制它们的生长及诱导其凋亡。耐药细胞 ＫＢ－ｖ２００在转染该重组腺病毒 ４８ｈ后,其细胞膜上 Ｐｇｐ糖蛋白的泵出药物的功能却受到显著影响,表现为罗丹明１２３在其细胞内的积累增加。ＭＴＦ的实验结果也显示出其对ＶＣＲ药物敏感性的增加,裸鼠体内实验证实了感染上述重组腺病毒的ＫＢ－ｖ２００细胞的致瘤性降低,同时能增加对化疗药物ＶＣＲ的敏感性。结论：实验研究结果提示,使用该重组腺病毒并结合化疗药物,对临床治疗多药耐药的肿瘤可能会更有效。     

转染外源p53基因在荷瘤裸鼠人肠癌细胞中表达的检测

采用直接注射外源ＤＮＡ－脂质体复合物的方法分别在荷瘤裸鼠人肠癌组织中转染外源正义ｐ５３ｃＤＮＡ和反义ｐ５３ｃＤＮＡ的重组表达质粒及非整合型哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９，并以注射等量生理盐水为对照，然后应用链菌素亲生物蛋白－过氧化酶免疫组化法检测肿瘤组织中突变型ｐ５３蛋白的表达。结果表明：体外培养ＳＷ１１１６细胞中约有５０％为突变型ｐ５３蛋白阳性；转染反义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组的裸鼠移植瘤细胞ｐ５３蛋白阳性率为２５％，而注射生理盐水、转染ｐＲＥＰ９及正义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组阳性率分别为６６．７％，７７．８％，６６．７％；前者与后三者之间有显著住差异（Ｐ＜０．０１，Ｘ［２］检验），但各组间肿瘤大小并无显著性差异。据此认为，肿瘤体内直接转染外源反义ｐ５３基因能封闭肠癌ＳＷ１１１６细胞中突变型ｐ５３基因的表达。     

肺癌患者癌组织和痰液细胞中p53和K-ras基因突变的研究

目的 检测肺癌组织和肺癌患者痰液脱落细胞中ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ基因突变情况,比较联合检测ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ和单一检测ｐ５３或Ｋ－ｒａｓ基因在肺癌诊断中的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测了５９例肺癌组织、癌旁肺组织、１４全肺部良性病变肺组织及患者痰液脱落细胞中ｐ５３基因第５～８外显子、Ｋ－ｒａｓ基因第１外显子突变。结果 肺癌组织中ｐ５３基因突变率为３７．３％（２２／５９）,痰液脱落细胞为３     

野生型p53基因的导入对膀胱癌细胞抑制作用的观察

转染外源野生型ｐ５３基因对膀胱癌ＥＪ细胞的抑制作用。方法将含外源野生型ｐ５３基因的（ａｄ┐Ｗｔｐ５３）转染膀胱癌ＥＪ细胞,观察生长曲线,细胞周期变化及裸鼠体内抑瘤试验。结果转染了ａｄ┐Ｗｔｐ５３的ＥＪ细胞在体外生长速率下降,在裸鼠体内致瘤性丧失,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止期的细胞比例增高。另外,ａｄ┐Ｗｔｐ５３直接注射到肿瘤组织内,可使外源野生型ｐ５３基因在肿瘤细胞内有效、稳定的表达,肿瘤表现为生长减缓,最后停止生长并有缩小。结论腺病毒载体介导基因转染效率高,速度快,安全,是很有前途的体内基因治疗载体。     

非小细胞肺癌中p53基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变的情况，应用改良聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测１７例非小细胞肺癌中ｐ５３基因第５～８外显子的突变情况，有８例存在ｐ５３基因突变，突变率为４７．００％（８／１７），其中鳞癌为５５．５６％（５／９），腺癌为３７．５０％（３／８）。本研究结果表明：非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变较为常见；改良后的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对非小细胞肺癌的基因诊断具有潜在性应用价值     

非小细胞肺癌p53基因突变检测及临床病理分析

目的　探讨ｐ５３基因点突变在非小细胞肺癌中的发生情况及临床病理联系。方法　运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性分析方法（ＳＳＣＰ）检测原发性非小细胞肺癌的ｐ５３ 基因第５－８外显子点突变。结果　８例良性肿瘤均无点突变发生,４０ 例肺癌中１９例（４７．５％ ）有点突变发生,点突变发生与临床分期和淋巴结累及程度明显相关（Ｐ＜ ０．０２）。结论　ｐ５３基因点突变在非小细胞肺癌的发生和进展中起着相当重要的作用。     

外源性p53基因增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

 目的 探讨外源性ｐ５３基因转染对人卵巢癌细胞株的化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的转染技术，将人野生型ｐ５３基因的真核表达载体导入不表达ｐ５３的卵巢癌ＳＫＯＶ－３细胞中，经Ｇ４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定后，观察其对顺铂作用后的 ＳＫＯＶ－３细胞的集落形成及凋亡的影响。结果 外源性Ｐ５３基因在转染细胞中有效表达，并增强了顺铂对ＳＫＯＶ－３细胞集落形成的抑制作用及促进了顺铂诱导的细胞凋亡。结论 外源性ｐ５３基因能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，两者联合作用能更大程度地杀灭肿瘤细胞。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

转化生长因子β1正反义基因对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖的影响

探讨人转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）正反义基因对人肺巨细胞癌细胞（ＰＬＡ－８０１Ｄ）增殖的影响及调控。方法通过基因转染方法,将ＴＧＦβ１正、反义基因分别导入ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞,观察转染和未转染细胞体内外增殖变化、ｎｍ２３基因和ｃ－ｍｙｃ基因表达以及细胞凋亡特征。结果与未转染细胞比较,正义ＴＧＦβ１基因转染细胞培养上清中ＴＧＦβ１活性增加,体外生长速度减慢,软琼脂细胞培养集落形成能力降低,裸鼠体内成瘤率下降约４７％,肿瘤的转移受到抑制。其机制可能与正义ＴＧＦβ１基因转染细胞ｎｍ２３基因表达增加,ｃ－ｍｙｃ基因表达减少以及诱发细胞凋亡有关。而反义ＴＧＦβ１基因转染细胞则出现相反结果。结论ＴＧＦβ１对ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的体内外生长具有负调控作用