HOXB1基因转染对HL-60细胞视黄酸代谢和α-干扰素表达的影响

目的探讨同源盒基因B1(HOXB1)转染对HL-60细胞视黄酸代谢和α-干扰素表达的影响.方法采用脂质体介导的质粒转染、RT-PCR及高效液相色谱(HPLC)分析等方法进行分析检测.结果 2.5×10-7 mol/L全反式视黄酸(ATRA)能抑制HOXB1转染及非转染HL-60细胞的增殖,HOXB1的高表达能明显减弱ATRA对HL-60细胞的增殖抑制作用;HPLC分析显示,转染细胞ATRA的代谢减慢;ATRA处理能诱导HOXB1转染及未转染HL-60细胞IFNα表达,加用外源性IFNα能上调ATRA处理HL-60细胞IFNα基因表达.结论 HOXB1转染使HL-60细胞ATRA代谢受抑,ATRA增殖抑制作用减弱,外源性IFNα能上调HL-60细胞IFNα表达.     

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染HL-60细胞放射敏感性的影响

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其可能机制.方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα),转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后,对细胞进行RA和辐射联合处理,分析细胞增殖功能、细胞DNA片段化百分率,caspase-3蛋白表达与活性,以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和/或辐射的效应的拮抗作用.结果 HL-60和HL-60IFNα细胞经2×10-7mol/L RA和/或4 Gy 60Co γ射线电离辐射处理后,细胞增殖能力减弱,DNA片段化百分率增加,caspase-3蛋白表达上调,活性升高,RA和辐射联合处理作用更明显,DEVD-CHO可拮抗RA引起的caspase-3活性升高,并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡.结论 RA及其诱导的外源性IFNα可提高肿瘤细胞放射敏感性,caspase-3的表达和活性升高在RA和辐射诱导细胞凋亡过程中可能具有重要作用.     

视黄酸诱导下的HL-60凋亡和IFNα控制机制的研究

目的探讨在多功能的细胞因子干扰素（IFN）和全反视黄酸（ATRA）联合作用下，HL-60细胞的细胞增殖、分化及表达水平。方法选择人白血病细胞HL-60细胞株为实验对象，以逆转录病毒载体PbCSN—IFNa5经PA317细胞包装，再特染HL-60细胞，用RT-PCR、ELISA、流式细胞仪和NBT实验进行观察和分析。结果逆转录病毒载体介导下的IFNα在HL-60细胞中高表达，24h10^6个细胞分泌量为95ng／ml，ATRA对IFNα高表达的HL-60细胞诱导作用十分明显。结论逆转录病毒载体介导的1FNα能显著增强ATRA对HL-60细胞的抑制增殖、诱导分化作用，1FNα和ATRA联合使用存在叠加或协同效应。     

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用     

人类巨细胞病毒感染对神经胶质瘤细胞HOXB5,HOXB6,HOXB7及HOXB8基因表达的影响

以半定量RT -PCR技术检测经人类巨细胞病毒 (HCMV)感染和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理的神经胶质瘤细胞U2 5 1株的HOXB5 ,HOXB6 ,HOXB7和HOXB8的相对表达水平 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。结果示 ,未经处理的U2 5 1细胞不表达HOXB5 ,HOXB6及HOXB8,但表达HOXB7;HCMV感染和 /或ATRA处理后 ,细胞仍不表达HOXB5及HOXB6 ,但在第二代时均表达HOXB8,尤以HCMV和ATRA共同处理后更明显 ;第三代后HOXB8的表达恢复正常。HCMV和 /或ATRA处理细胞后 ,HOXB7的表达在第一代即上调 ,第二代、第三代其表达稍下降 ,至第四代时表达又上调。表明HCMV致畸作用可能是通过诱导HOX基因的表达进而调节其它基因的异常表达而实现。     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOXB1，HOXB1，HOXB5，HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的：研究人胚肺（HEL）细胞HOXB1，HOXB5，HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒（HCMV）感染对上述基因表达的影响。方法：采用半定量逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术。结果：①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6，但不表达HOXB1和HOXB9；②HCMV感染后，HEL细胞HOXB6基因的表达上调，且被HCMV诱导表达HOXB9T，而HOXB5基因的表达无明显改变，HOXB1基因仍旧不表达；③全反式维甲酸（ATRA）能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达，但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论：HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常，这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。     

视黄酸和α-干扰素对带有视黄酸反应元件的LUC报告基因表达的调控作用

目的：探讨视黄酸（Retinoic acid,RA）通过视黄酸反应元件（RARE）调控外源基因表达的可行性。方法：构建带有视黄酸受体β（RARβ）基因增强子区域RARE的荧光素酶（Luciferase,LUC）报告基因表达载体，应用脂质体包裹RARE－TK－LUC和RARE3－TK－LUC质粒，并转染HL－60细胞，48h后，用RA和／或α-干扰素（IFNα)处理不同时间，用LUC报告基因检测试剂盒分析LUC报告基因活性。结果：经RA处理不同时间后，RARE－TK－LUC和RARE3－TK－LUC质粒转染细胞的LUC相对活性分别较未经处理的转染细胞增加12－38和20－85倍；单用IFNα处理转染细胞，对LUC的表达无明显的诱导作用；IFNα和RA联合处理48、72h，LUC相对活性比单用RA处理增加60％－70％。结论：RA可调控带有RARE的LUC报告基因的表达，说明应用RARE构建RA可调控的目的基因表达载体是可行的。     

反义hTERT在体外对HL-60细胞的抑制作用

[目的 ]探讨反义hTERT表达质粒是否能够抑制HL - 6 0细胞增殖能力及端粒酶活性。 [方法 ]通过脂质体法将反义hTERT表达质粒导入HL - 6 0细胞中 ;以G4 18进行筛选得到阳性克隆 ;以MTT法和体外集落形成实验检测反义hTERT表达质粒对HL - 6 0细胞增殖的抑制作用 ;以TRAP -PCRELISA法来研究反义hTERT对HL - 6 0细胞的端粒酶活性的抑制作用。 [结果 ]转染反义hTERT表达质粒组与空白对照及空质粒组相比 ,细胞增生速度明显较慢 ,克隆形成能力明显下降 (P <0 .0 1) ;反义hTERT对HL - 6 0细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用。 [结论 ]本研究构建的端粒酶反义hTERT表达质粒能够抑制HL - 6 0细胞的体外增殖能力及其端粒酶活性。     

全反式维甲酸调控AMPK/mTOR通路抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)在全反式维甲酸(ATRA)抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法采用MTS实验检测VSMC的增殖情况并进行细胞活力测定;Western blot测定AMPK活化后pAMPKα和AMPKα的表达水平及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路激活后p-mTOR和mTOR的表达水平;利用AMPK抑制剂(CC)通过Western blot测定p-AMPKα和AMPKα的表达水平及A7r5细胞活力进一步确定AMPK在ATRA抗VSMC增殖中的作用。结果 ATRA可以剂量和时间依赖性方式抑制A7R5细胞的增殖(P均0.05);ATRA可以剂量依赖性显著地上调Thr172处AMPKα的磷酸化水平(P0.05),而不改变AMPKα的总水平;ATRA可以剂量依赖性抑制mTOR的磷酸化水平(P0.05),而不改变mTOR的总水平。AMPK抑制剂(CC)通过抑制AMPKα,部分抵消ATRA介导的对VSMC增殖的抑制作用。ATRA(4μmol/L)和CC共刺激A7R5细胞可显著下调AMPKα的磷酸化水平(P0.05);与此同时,与单独ATRA(4μmol/L)处理相比,ATRA(4μmol/L)与CC共同处理,可显著缓解ATRA抑制A7r5细胞的增殖作用(P0.05)。结论 ATRA可能通过激活AMPK和抑制mTOR信号通路抑制VSMC的增殖。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株COC1增殖分化的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人卵巢癌细胞株COC1增殖分化的影响.方法:选用人卵巢癌细胞株COC1进行体外培养,以不同浓度的ATRA处理COC1细胞,MTT比色法检测细胞增殖抑制情况;流式细胞仪进行细胞周期时相分析;光镜及透射电镜进行形态学观察;免疫细胞化学法测定细胞内增殖细胞核抗原Ki-67的表达;酶联免疫法测定培养液中卵巢癌标志物CA125水平的变化.结果:ATRA浓度为10～10-5mol/L时,均明显抑制COC1细胞的增殖;ATRA处理COC1细胞后G0/G1期细胞增加,S期细胞减少.经ATRA处理的COC1细胞发生显著形态学分化,Ki-67表达减弱,培养液中CA125的表达水平降低.结论:ATRA能明显抑制人卵巢癌细胞株COC1的生长增殖并诱导部分细胞向良性分化.     

Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的研究Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖过程中的作用。方法HL-60细胞经全反式视黄酸(ATRA)和二十二碳五烯酸(EPA)处理一定时间后，MTr比色法测定细胞增殖功能；RT—PCR分析ATRA和EPA对HL-60细胞Cyclin D1、CDK4、CDK2mRNA表达的影响；Western blot分析CDK4和P15蛋白质表达水平。结果ATRA或EPA单独处理均能抑制HL-60细胞生长，下调节HL-60细胞Cyclin D1、CDK4mRNA和CDK4蛋白的表达，上调P16蛋白的表达，二者联合处理时上述变化更明显，而ATRA和／或EPA对CDK2 mRNA表达无明显影响。结论ATRA和EPA可能通过下调节Cychn D1、CDK4的表达，上调节P16的表达，导致Cyclin D1／CDK4复合物的活性下降，细胞生长被阻断在G1／G0期，从而发挥它们对HL-60细胞增殖抑制作用。     

全反式维甲酸对人子宫内膜腺癌细胞增殖抑制作用的研究

目的:探讨全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)对人子宫内膜腺癌细胞株(RL95-2)的增殖抑制作用.方法:用不同浓度ATRA处理体外培养的RL95-2,分别在处理后不同的时间点,以MTT法检测ATRA对RL95-2增殖活性的影响;用流式细胞术检测经ATRA处理后的RL95-2细胞周期的变化;免疫组化方法检测细胞周期素A(Cyclin A)的改变;扫描电镜和透射电镜观察ATRA处理后的细胞形态变化.结果:ATRA可抑制RL95-2的增殖,且这种作用呈时间及浓度依赖性.FCM分析发现RL95-2细胞增殖被ATRA阻滞于G0/G1期.电镜观察到用药后细胞恶性表型消失.免疫组化发现AT-RA处理后48h,Cyclin A蛋白表达降低.结论:ATRA对子宫内膜癌细胞系RL95-2的生长有抑制作用,且这种抑制作用与Cyclin A蛋白表达水平降低有关.     

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。     

wnt5α基因修饰bMSCs对HL60细胞生长分化影响的研究

目的 探讨外源性wnt5α基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,bMSCs)支持骨髓造血及抑制白血病细胞HL60生长的双重作用,为白血病治疗提供新的思路.方法 用流式细胞仪鉴定所培养的bMSCs,重组腺病毒Ad5-wnt5α对bMSCs进行基因修饰,RT-PCR检测wnt5α的表达,流式细胞仪检测wnt5α基因修饰bMSCs的效率.描绘不同处理组(bMSCs组,Ad5-GFP组,Ad5-wnt5α组)的细胞生长曲线.采用外源性wnt5α基因修饰的bMSCs与HL60细胞共培养的方法,利用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测各处理组(HL60细胞组,HL60+bMSCs组,HL60+Ad5-GFP组,HL60+Ad5-wnt5α组)细胞表面分化抗原CD13、CD14、CD68以及细胞分化周期的变化.结果 腺病毒成功将外源性wnt5α基因转染bMSCs;HL60+Ad5-wnt5α组细胞单核细胞系表面标志抗原CD14、CD68表达高于对照组(P<0.05),而粒细胞系表面标志抗原CD13表达与对照比较差异无统计学意义(P>0.05);HL60+Ad5-wnt5α组细胞自第3 d开始,细胞周期阻滞在G2期.结论 外源性wnt5α促进bMSCs增殖,抑制HL60细胞的生长并可诱导HL60细胞向成熟方向分化.     

γ－干扰素合并维甲酸对维甲酸耐药细胞的作用机制

目的　寻求解决维甲酸(ATRA)耐药问题的新途径。方法　光镜、NBT还原实验及免疫荧光间接法观察NB4及其耐药细胞MR-2单用及联用ATRA、γ-干扰素(IFNγ)后细胞形态学、细胞分化及PML蛋白表达的变化。结果　IFNγ单用及与AFRA联用对两种细胞的生长均有抑制作用,IFNγ能诱导PML蛋白的表达,ATRA与IFNγ联用能部分诱导耐药细胞分化 结论 IFNγ通过诱导PML蛋白的表达而抑制细胞生长,ATRA与IFNγ联用部分诱导耐药细胞分化的作用可能与两药各自不同的信号传递途径发生交叉激活有关。     

γ－干扰素合并维甲酸对维甲酸耐药细胞的作用机制

目的　寻求解决维甲酸(ATRA)耐药问题的新途径。方法　光镜、NBT还原实验及免疫荧光间接法观察NB4及其耐药细胞MR-2单用及联用ATRA、γ-干扰素(IFNγ)后细胞形态学、细胞分化及PML蛋白表达的变化。结果　IFNγ单用及与AFRA联用对两种细胞的生长均有抑制作用,IFNγ能诱导PML蛋白的表达,ATRA与IFNγ联用能部分诱导耐药细胞分化结论IFNγ通过诱导PML蛋白的表达而抑制细胞生长,ATRA与IFNγ联用部分诱导耐药细胞分化的作用可能与两药各自不同的信号传递途径发生交叉激活有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经TSA, ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长和增殖状态,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b,CD64,CD14等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.TSA (30 μg/L)联合ATRA (1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,生长增殖受抑,S期细胞减少,CD11b表达增高,PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主,细胞功能上的分化可能尚不成熟.结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937/PLZF细胞发生部分分化.     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量RT PCR技术研究人胚肺 (HEL)细胞HOX基因的表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对HEL细胞HOX基因表达的影响。结果发现 :HEL细胞表达HOXB7基因 ;HCMV感染后 ,其表达上调 ;用全反式维甲酸 (ATRA)处理HEL细胞 ,HCMV对HOXB7基因表达的上调作用更强。提示HCMV可能通过影响HOXB7基因的表达导致胚胎发育畸形。 更多还原     

干扰素—γ对3个肿瘤细胞系TAP—2表达及HeLa细胞对细胞毒敏感性的影响

目的　探讨干扰素 -γ(IFN-γ)对 3个肿瘤细胞系 TAP- 2分子表达及对 He L a细胞对细胞毒敏感性的影响。　方法　以免疫细胞化学法检测 Hela细胞、白血病细胞系 HL - 6 0、K5 6 2在 IFN-γ作用前后 TAP- 2分子表达的变化 ;将 He L a细胞和单个核细胞混合培养后 ,收获细胞毒细胞 ;以 MTT法分别测定活化和未活化的细胞毒细胞对 IFN -γ处理和未处理 He L a细胞的杀伤率。　结果　 (1) IFN-γ处理使 He L a细胞 TAP- 2分子的免疫组织化学染色从弱阳性提高到强阳性 ;经 IFN-γ处理后 ,HL - 6 0、K5 6 2细胞 TAP- 2的免疫组织…