EPO通过抑制心肌细胞凋亡保护糖尿病心肌病大鼠的心功能

目的探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对糖尿病心肌病(diabetes cardiomyopathy,DCM)大鼠心脏的保护作用及机制。方法将25只SD大鼠随机分为3组:对照组(n=5)、DCM组(n=10)、DCM+EPO组(n=10),DCM组及DCM+EPO组应用链脲佐菌素60 mg/kg一次性腹腔注射构建DCM大鼠模型,饲养4周后,DCM+EPO组另外给予rhEPO 2 000 U/kg腹腔注射。行心脏超声心动图检测心功能,心肌HE染色、电镜检查,TUNEL染色测定细胞凋亡,Western Blot检测Caspase-3的表达,RT-PCR检测Bcl-2及Bax的mRNA的相对表达量。结果与对照组比较,DCM组和DCM+EPO组心功能降低(P<0.01),rh EPO能改善DCM+EPO组的心功能(P<0.01)。与对照组比较,DCM组及DCM+EPO组心肌细胞凋亡指数明显增加(P<0.001),rh EPO能改善DCM+EPO组的心肌细胞凋亡(P<0.001)。DCM组大鼠心肌的Caspase-3的蛋白表达量较正常组增加(P&l... 更多     

超声破坏微泡联合G-CSF促进心肌梗死大鼠血管新生

目的：探讨超声破坏微泡联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）刺激大鼠梗死心肌血管内皮生长因子（VEGF）分泌、促进血管新生的有效性．方法：心肌梗死模型Wistar大鼠40只,随机分为：超声＋微泡造影剂＋G—CSF（A组）;超声＋微泡造影剂组（B组）;单纯G—CSF组（C组）;单纯手术（SA）组（D组）．于治疗后2wk处死大鼠取材,采用免疫组化法检测心肌组织CD34的表达,并在显微镜下计数心肌内新生血管密度（MVD）．采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测心肌组织内VEGF蛋白表达情况．结果：免疫组化显示A组心肌组织中有大量CD34表达,新生血管最多,MVD计数为（231±24）个／高倍镜视野,明显高于B组（148±19）,C组（100±12）,D组（86±8）个／高倍镜视野,差异具有统计学意义（P〈0．05）．ELISA检测结果显示A组心肌组织中VEGF蛋白表达量为（3．14±0．21）ng／g,明显高于B组（2．56±0．17）,C组（1．91±0．14）,D组（0．97±0．11）ng／g,差异具有统计学意义（P〈0．05）．结论：超声破坏微泡可刺激缺血心肌内源性VEGF分泌,促进心肌血管新生,联合G—CSF能明显增强其血管新生作用．     

VEGF单克隆抗体对胰腺缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的:从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体在胰腺缺血再灌注损伤中保护作用.方法:采用钳闭大鼠腹腔干、肠系膜上动脉制备胰腺缺血再灌注损伤模型,并应用细胞凋亡原位标记法(TUNEL)、免疫组化技术等检测VEGF单克隆抗体干预后对胰腺细胞凋亡及Bax,Bcl-2蛋白表达的影响.结果:干预组15,30,60 min胰腺细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组(P<0.01).正常胰腺组织未见凋亡调控基因Bcl-2的表达,VEGF单克隆抗体干预后15,30,60 min胰腺细胞Bcl-2染色阳性率明显高于缺血冉灌注组(P<0.01);正常胰腺组织见较弱的凋亡调控基因Bax的表达,而VEGF单克隆抗体干预后15,30,60 min胰腺细胞Bax染色阳性率明显低于缺血再灌注组(P<0.01).结论:VEGF单克隆抗体能够通过抑制胰腺腺泡细胞的过度凋亡减轻胰腺炎的严重程度,该作用可能是通过促进抗凋亡Bcl-2基因表达,抑制促进凋亡基因Bax表达来实现的.     

七叶皂苷钠通过p38MAPK通路减少大鼠心肌梗死面积和无复流面积的研究

目的研究七叶皂苷钠(SA)通过p38MAPK通路减少大鼠心肌梗死面积和无复流面积的作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注(I/R)组、I/R+SA组、空白腺病毒+I/R组、p38MAPK腺病毒+I/R组、空白腺病毒+I/R+SA组、p38MAPK腺病毒+I/R+SA组,采用左冠状动脉前降支结扎的方式建立心肌I/R模型,给予腹腔注射SA或心肌局部多点注射腺病毒干预,硫黄素S染色检测心肌无复流面积、氯化硝基四氮唑蓝染色检测心肌梗死面积、TUNEL染色检测心肌细胞凋亡率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量,Western blot检测bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、p-p38MPAK的表达量。结果与I/R组比较,I/R+SA组大鼠心肌无复流面积、梗死面积明显缩小,细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、ICAM-1的含量、Bax、Cleaved caspase-3、pp38MPAK的表达量明显减少(P<0.05);与空白腺病毒+I/R组比较,p38MAPK腺病毒+I/R组大鼠心肌无复流面积、梗死面积明显增加,细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、ICAM-1的含量、Bax、Cleaved caspase-3、p-p38MPAK的表达量明显增加(P<0.05);与空白腺病毒+I/R+SA组比较,p38MAPK腺病毒+I/R+SA组大鼠心肌无复流面积、梗死面积明显增加,细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、ICAM-1的含量、Bax、Cleaved caspase-3、p-p38MPAK的表达量明显增加(P<0.05)。结论 SA能够减少大鼠心肌I/R后梗死面积和无复流面积,抑制p38MAPK通路介导的炎症反应及细胞凋亡是SA发挥上述改善作用相关的分子机制。     

丹参酮ⅡA对扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的探究丹参酮ⅡA(STS)对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌细胞凋亡的改善作用以及可能的作用机制。方法制备DCM大鼠,随机数字表法分为DCM组、STS-L、STS-M、STS-H、卡维地洛组(CAR),另设置对照组,每组均12只大鼠,超声检测左心室收缩末期内径(LVIDs)和左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室射血分数(LVEF),HE、Masson染色观察心肌组织病理损伤情况; ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平; TUNEL染色法检测大鼠心肌细胞凋亡情况;免疫印迹(WB)、免疫组化法检测心肌组织中p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-蛋白激酶B(Akt)、Bax、caspase-3、Bcl-2表达。结果与对照组相比,DCM组LVIDs、LVIDd增大,LVEF降低,心肌组织病理学评分、心肌胶原纤维比例均升高,血清TNF-ɑ、IL-6水平升高,心肌细胞AI升高(P0. 05);与DCM组相比,STS各组以及CAR组LVIDs、LVIDd降低,LVEF提高,心肌组织病理学评分、心肌胶原纤维比例均降低,血清TNF-ɑ、IL-6水平降低,心肌细胞AI降低(P0. 05)。与对照组相比,DCM组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达降低,caspase3、Bax蛋白表达升高(P0. 05);与DCM组相比,STS各组以及CAR组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达升高,caspase3、Bax蛋白表达降低(P0. 05)。结论 STS可能通过激活PI3K/Akt信号通路,抑制DCM大鼠心肌细胞凋亡,发挥对DCM大鼠的保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠急性心肌梗死后的心脏保护作用

目的促红细胞生成素(EPO)是一种造血细胞生长因子,主要用于治疗多种原因所致的贫血,最近的研究表明其具有多种非促造血方面的细胞保护作用,包括抗细胞凋亡、促血管生成作用等,可在心脏缺血性疾病中发挥心肌细胞保护作用,这些作用可能是其作为治疗心血管疾病的治疗学基础。本研究旨在观察EPO对大鼠急性心肌梗死后的心肌保护作用。方法实验采用标准化大鼠心肌梗死模型的制作的方法复制大鼠心梗模型,即大鼠全麻、无创呼吸支持的条件下,开胸并结扎冠状动脉前降支,以此建立大鼠心肌梗死模型。所有心梗模型复制成功的大鼠随机分成两组,即EPO组和对照组,EPO组大鼠采用腹腔注射方法给予EPO(3 000 u/kg),共3d(术前1 d、当天、后1 d),对照组大鼠相同的时间点给予等量的生理盐水。术后7 d各组随机选取5只大鼠,尾静脉抽血,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6的含量。术后28 d后经右颈总动脉插管检测血流动力学指标,评价大鼠心功能;通过梗死周围心肌组织Ⅷ因子免疫组织化学染色和调亡蛋白Bcl-2、Bax免疫组化染色,借以评价EPO对大鼠心肌梗死后毛细血管和调亡蛋白因子表达的影响。结果试验过程中,...     

外源性Apelin-13对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响研究

目的:研究外源性Apelin-13对急性心肌梗死大鼠心肌细胞保护作用。方法:通过结扎左冠状动脉前降支方法建立急性心肌梗死大鼠模型,存活大鼠分为心梗组(AMI组)及Apelin-13治疗组,另设假手术组(Sham组)及假手术Apelin-13治疗组(Sham+Apelin-13组)。治疗14d后,取心脏组织,TTC/Evans Blue染色检测心肌梗死面积;HE染色检测心脏组织病理变化;TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡阳性率;Western blot法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-3的表达。结果:与急性心肌梗死模型组相比,Apelin-13治疗后,大鼠心脏组织梗死率显著减小,心肌组织炎性细胞富集减少,凋亡心肌细胞数减少,促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase-3表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多。结论:Apelin-13可以有效缓解缺血引起的急性心肌梗死和心肌细胞凋亡,可以作为临床治疗急性心肌梗死的备选药物。     

Ultrasound microbubble-mediated heart fatty acid binding protein in treatment of chronic heart failure rats

目的 研究超声靶向破坏微泡(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)技术转染H-FABP基因对心肌梗死后心功能的影响.方法 通过结扎成年雄性Wistar大鼠46只,体质量(220±20)g,冠状动脉前降支建立心肌梗死模型.于心肌梗死8周后,将存活的31只心衰大鼠随机分为4组:①H-FABP+超声+微泡组(H-FABP+ US/MB组,n=8),用超声破坏携H-FABP基因微泡转染大鼠心肌;②超声+微泡组(US/MB组,n=8),用超声破坏不含基因的微泡;③H-FABP+生理盐水组(H-FABP+NS组,n=8),由颈静脉输入含基因的生理盐水;④单纯手术组(SA组,n=7),仅由颈静脉输入生理盐水;⑤假手术组(SS组,n=6).基因转染14d后测定各组大鼠心功能,Western blot检测左心室非梗死区H-FABP表达,ELISA法检测静脉血及非梗死区心肌游离脂肪酸(FFA)含量,硫代巴比妥酸反应物(TBARS)法检测非梗死区心肌组织脂质过氧化水平,免疫组织化学法检测非梗死区心肌诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达.结果 心肌梗死大鼠各组与假手术组比较心功能明显下降(P＜0.05),H-FABP表达明显下降(P＜0.05),静脉血及心肌FFA含量明显升高(P＜0.05),丙二醛(MDA)水平明显升高(P＜0.05),iNOS表达明显升高(P＜0.05).H-FABP+超声+微泡组与心肌梗死大鼠中的另外3组比较心功能明显改善(P＜0.05),H-FABP表达升高(P＜0.05),心肌FFA含量降低(P＜0.05),MDA水平降低(P＜0.05),iNOS表达受抑制(P＜0.05).结论 超声微泡介导的H-FABP转染可改善大鼠慢性心衰时心功能.可能与通过提高H-FABP表达、降低心肌FFA含量、改善心肌氧化应激水平、进而抑制iNOS的表达有关.     

VEGF165基因治疗对心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响

目的探讨直接心肌注射血管内皮生长因子165基因(VEGF165 cDNA)对急性心肌梗死大鼠心功能、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白p53、Fas、Bax和Bcl-2表达的影响.方法40只雄性SD大鼠结扎左冠状动脉后随机接受VEGF165 cDNA(治疗组)或pcDNA3.1(对照组)治疗.于注射2周后测定血流动力学参数、梗死面积、微血管数量、心肌细胞凋亡指数、心肌组织p53、Fas、Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果在实验中对照组5只、治疗组8只大鼠死亡,27只进入研究.注射后2周治疗组的平均动脉压、左室收缩压、左室最大收缩或舒张速率和微血管计数显著高于对照组(P<0.05～0.001),而左室舒张末压和梗死面积则显著低于对照组(分别P<0.01和0.05).治疗组心肌细胞凋亡数量明显少于对照组[(7.6±2.5)%比(14.2±3.4)%,P<0.001],VEGF165 cDNA治疗抑制p53、Fas和Bax的表达,促进Bcl-2的表达.结论直接心肌注射VEGF165 cDNA能够明显改善急性心肌梗死大鼠的血流动力学,缩小梗死面积,促进心肌内新血管的形成,减少心肌细胞凋亡,抑制p53、Fas和Bax的表达,促进Bcl-2的表达.     

促红细胞生成素对新生HIBD大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的:观察促红细胞生成素(EP0)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨EPO神经保护作用的分子机制。方法:42只7d龄新生Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组、EPO干预组,其中EPO干预组又分大、中、小剂量3组。建立HIBD模型后,立即一次性腹腔注射不同剂量(10000U/kg、5000U/kg、1000U/kg)的人基因重组促红细胞生成素(rhEPO),用免疫组织化学方法观察给药24h后脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果:大鼠缺氧缺血后,脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达均显著增高,Bcl-2/Bax显著降低,EPO干预后Bcl-2蛋白表达增加,Bcl-2/Bax显著增高,Bax蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义。结论:EPO可以通过上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,改变Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡而起到神经保护作用,为临床治疗新生儿HIBD提供了更有意义的理论依据。