补肾阴对胚胎干细胞活动的影响

目的观察补肾阴中药复方对胚胎干细胞活动的影响。方法选用胚胎干细胞模型CRL-1825细胞株,加入补肾阴中药复方大鼠含药血清,观察补肾阴中药对干细胞分化、凋亡、细胞周期及其关键基因表达的影响。结果补肾阴中药复方含药血清可以抑制干细胞的分化和凋亡,促进干细胞增殖以及细胞周期的进程,促进干细胞Wnt、Oct4等基因的表达,下调P16INK4a基因的表达。结论补肾阴中药复方可以促进干细胞增殖、维持其不分化状态。     

缩泉丸含药血清对小鼠胚胎干细胞增殖、分化及Nanog基因表达的影响

目的研究缩泉丸含药血清对小鼠胚胎干细胞(ESCs)增殖、分化及Nanog基因表达的影响。方法选用129小鼠胚胎干细胞株,将培养的细胞分为空白组,金匮肾气丸组,缩泉丸低、中、高剂量组5组。空白组给予浓度为10%的空白大鼠血清;金匮肾气丸组给予浓度为10%的含药血清;缩泉丸低、中、高剂量组分别给予按0.585 g·kg~(-1)·d~(-1)、1.17 g·kg~(-1)·d~(-1)、2.34 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃给药的大鼠的含药血清,浓度均为10%。采用流式细胞仪检测缩泉丸对ESCs增殖的影响,倒置相差显微镜观察缩泉丸含药血清对DMSO诱导的ESCs的分化情况,荧光定量PCR检测ESCs关键因子Nanog mRNA的表达,流式法检测Nanog蛋白的表达。结果与空白组比较,缩泉丸含药血清中、高剂量能够促进ESCs的增殖(P0.01),缩泉丸低、高剂量可以显著提高ESCs中Nanog mRNA的表达(P0.05,P0.01),缩泉丸中、高剂量可以显著提高ESCs中Nanog蛋白的表达(P0.05,P0.01)。与空白组比较,缩泉丸高剂量能够促进DMSO诱导的ESCs进行分化。结论缩泉丸可以促进ESCs的增殖,促进DMSO诱导的ESCs进行分化,可能与其上调关键基因Nanog的表达相关。     

单味中药及有效成分对体外干细胞的影响研究

1胚胎干细胞(ESCs)目前,中医药与ESCs的文献报道较少,这可能与其研究涉及的技术有关。朱丹雁[1]研究淫羊藿具有雌激素样活性和抗氧化活性成分淫羊藿素(ICT,5、7-二羟基-4’甲氧基-8-异戊烯基黄酮)对ESCs的影响,发现ICT可诱导小鼠胚胎干细胞定向     

铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响

目的研究铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响。方法采用水提醇沉法对铁皮石斛进行初步提取,体外培养小鼠胚胎干细胞,通过克隆形成率试验、MTT试验及实时定量PCR的方法研究铁皮石斛提取多糖对小鼠胚胎干细胞的增殖及多能性维持的作用。结果铁皮石斛多糖处理组细胞(50~200μg/m L)的克隆形成率、MTT吸光度值均高于空白对照组,同时其干性相关基因的表达量与对照组相比无显著差异。结论铁皮石斛多糖可以显著促进小鼠胚胎干细胞的增殖、提高其克隆形成率,同时又不影响其多潜能性的维持。     

胚胎干细胞基础研究进展及中医药对干细胞的认识和展望

干细胞研究是目前生命科学领域研究的热点之一,同为干细胞的胚胎干细胞(ESC)研究显示了广阔的应用前景。主要从分化角度综述ES细胞用于人类疾病治疗的基础研究,中医药学对干细胞及ES细胞的基本认识,有关干细胞的中医药研究进展以及目前存在的一些问题。认为应在分化研究的基础上从先后天之本入手,探索中医药对ES细胞增殖的影响。     

补肾阴对胚胎干细胞关键基因功能的影响

1材料 1．1细胞株与试剂 小鼠胚胎干细胞CRL-1825细胞：购自ATCC（American Type Culture Collection）；α-MEM培养基：Hyclone公司产品；DeadEnd^TM Fluorometric TUNEL System：Promega公司产品；Wnt-1（H-89）单抗、Oct-3／4（C-10）单抗、p16（50．1）单抗为Santa Cruz公司产品；Lipofetamine^TM2000：Invitrogene公司产品；DNA合成有关试剂;上海生工生物工程技术服务有限公司；siRNA Oligo合成;上海吉玛制药技术有限公司，其余为国产试剂。     

小半夏加茯苓汤含药血清对小鼠胚胎干细胞体外增殖及分化的影响

[目的]研究小半夏加茯苓汤含药血清对体外培养的小鼠胚胎干细胞(ES)增殖及分化的影响.[方法]噻唑蓝比色法(MTT)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下24、48、72、96 h后的ES细胞活性.半定量逆转录-聚合酶链反应法( RT-PCR)检测小半夏加茯苓汤含药血清作用下ES分化为心肌细胞的能力,判断受试物的胚胎发育毒性.[结果]在促细胞增殖方面:小半夏加茯苓汤含药血清作用下的ES细胞,在连续培养24、48、72、96 h时,其活性水平均呈显著上升趋势,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).在促细胞分化方面:小半夏加茯苓汤含药血清对ES分化心肌细胞的肌球蛋白重链基因β-MHC的表达能力,与其他组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]小半夏加茯苓汤含药血清能够促进ES细胞增殖,并能促进ES细胞向心肌细胞分化,提示在该实验剂量下,小半夏加茯苓汤无明显胚胎毒性.     

疏肝活血中药对骨髓间充质干细胞移植心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的观察疏肝活血中药对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植心肌缺血再灌注损伤(IRI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其保护心肌的作用机制。方法制备心肌IRI模型,分离、培养BMSCs,且移植于IRI大鼠,SD大鼠随机分为假手术组、IRI组、BMSCs组、疏肝活血中药+BMSCs组(联合组)。联合组以疏肝活血中药灌胃,其余各组灌胃等量生理盐水,4周后取心肌组织,采用TUNEL法和免疫组化法检测心肌细胞凋亡及心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与IRI组比较,BMSCs组和联合组心肌细胞凋亡、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.01);与BMSCs组比较,联合组心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。结论疏肝活血中药对BMSCs移植IRI大鼠心肌细胞凋亡的抑制具有促进作用,进而保护心肌细胞。     

补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育的网络分子机制初探

目的初探补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育的潜在分子机制。方法结合生物信息学方法建立补肾阳中药的成分库、表征美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准用于治疗促性腺激素缺乏男性不育的药物靶标库;再应用通路分析软件(ingenuity pathway analysis,IPA)将成分库投影靶标库,筛选出可作用于靶标及通路的成分,预测分子成分功能,构建“成分-靶标”分子网络。结果分别建立了补肾阳中药成分库(242个化合物)与FDA批准药物靶标库(565个靶标),成分库与靶标库投影后发现补肾阳中药成分库中的30个化学成分可直接激活或抑制药物靶标库中的60个靶标,参与缺氧诱导因子1-α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF1α)信号途径,血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,TSP1)抑制血管生成途径,芳基烃受体信号途径,孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)/类视黄醇X受体(retinoid X receptor,RXR)激活等18条通路的直接调控。结论本研究构建了补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育的“成分-靶标”分子网络,分析其治疗效应机制,为补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育奠定理论基础和实验依据,具有一定的科学意义。     

从胚胎干细胞基本生命活动研究肾为先天之本的思路

肾为先天之本,主藏精,其精气促进人体的生长、发育和生殖,是人体生命活动的原动力。现代医学与生命科学已明确地表明,人体的发育     

艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠大脑皮层细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子、视网膜母细胞瘤抑制蛋白及c-fos的影响

目的:探讨艾炷灸治疗D-半乳糖衰老小鼠的可能机制。方法:雄性昆明小鼠60只随机分为生理盐水组、造模组、艾灸1组、艾灸2组、尼莫地平组,每组12只。皮下注射D-半乳糖造成小鼠衰老模型。艾灸1、2组分别选取小鼠"足三里""悬钟""关元""百会"行艾柱灸治疗,尼莫地平组给予尼莫地平灌胃。采用免疫组化法观察各组小鼠细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P16)、视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRb)及c-fos的表达。结果:造模组小鼠大脑皮质P16蛋白表达的神经元密度较生理盐水组增高(P0.01),艾灸1、2组及尼莫地平组较造模组降低(P0.01)。造模组小鼠pRb、c-fos蛋白表达的神经元密度较生理盐水组、艾炷灸、尼莫地平组降低(P0.01,P0.05)。其余组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:艾炷灸"足三里""悬钟""关元""百会"可调控D-半乳糖衰老小鼠脑组织P16、pRb、c-fos蛋白的表达。     

人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老与 p16INK4a表达关系的研究

目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据.方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组.对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;Rg1组在对照组基础上加入10μmol·L-1Rg1共培养;Rg1延缓衰老组给予10μmol·L-1Rg1预处理后,复制衰老模型;Rg1治疗衰老组,衰老模型复制后,给予10μmol·L-1Rg1抗衰老处理.衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC衰老生物学作用.RT-PCR及Western blotting检测衰老相关基因pl6INK4amRNA及蛋白的表达.结果:Rg1延缓衰老组,Rg1治疗衰老组与衰老组相比,SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成造血祖细胞混合集落数增加,p16INK4amRNA及蛋白的表达下降;Rg1延缓衰老组的SA-β-gal染色阳性细胞百分比、G1期比例、pl6INK4amRNA及蛋白的表达均低于Rg1治疗衰老组,形成造血祖细胞混合集落数高于Rg1治疗衰老组.结论:Rg1具有延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用,Rg1延缓衰老比治疗衰老效果更好.Rg1可能通过调控p16INK4a的表达发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC衰老的作用.     

复方中药白龙对G1期人胃癌细胞中抑癌基因的影响及与PKA信号通路的相关性

目的：探讨复方中药白龙对人胃癌ＢＧＣ８２－３Ｇ１期细胞周期蛋白激酶抑制因子（ＣＫＩ）ｐ１６＾ＩＮＫ４ａ，ｐ２１以及Ｒｂ，ｃ－ｍｙｃ等基因转录的影响和ｃＡＭＰ－ＰＫＡ信号通路的调节关系。方法：通过实验室常规分子生物学手段（细胞同步化，分子杂交－Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交等）检测相关基因的表达变化。     

清毒栓血清药理对宫颈癌SiHa细胞P53基因调控作用的研究

[目的]研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。[方法]以不同浓度含药血清培养液作用于SiHa细胞,并以空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过噻唑蓝(MTT)法检测该药对细胞生长及增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测对抑癌基因P53表达的影响。[结果]经含药血清培养液作用后细胞数量减少,其中以8%浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强;细胞周期各时相中,S期细胞所占的比例明显减少;对细胞凋亡有影响但未见明显规律性,RT-PCR结果示细胞中P53表达明显增加。[结论]清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过调控P53基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。     

姜黄素对阿霉素肾病大鼠Notch信号通路相关蛋白的影响

目的:探讨姜黄素通过调控Notch信号通路相关蛋白表达延缓阿霉素肾病大鼠肾小球硬化进程的机制。方法:将60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为六组,分别为空白组、模型组、对照组和姜黄素低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组尾静脉注射阿霉素制备阿霉素肾病大鼠模型,造模成功后对照组以10 mg/kg盐酸贝那普利灌胃; 姜黄素低、中、高剂量组分别予50、100、200 mg/kg姜黄素灌胃; 空白组和模型组分别予等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃,各组均灌胃6周。检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、血生化指标,电镜观察大鼠肾脏病理结构改变,RT-PCR检测神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch1)、转化生长因子β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达水平,免疫组化法检测Notch1、TGF-β1、MCP-1蛋白表达水平。结果:姜黄素可有效降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐和血尿素氮水平,改善肾脏病理结构,下调Notch1、TGF-β1、MCP-1 mRNA及蛋白在肾脏组织的表达,且呈剂量依赖性。结论:姜黄素可通过下调Notch信号通路相关蛋白的表达,抑制肾小球基底膜增厚和细胞外基质过度沉积,进而延缓肾小球硬化进程。     

温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

AMPK在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及其意义

目的:检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)及其相关分子在正常与退变腰椎间盘髓核中的表达情况,并探讨AMPK在椎间盘退变中的作用.方法::取6例正常和10例腰椎间盘突出症患者的髓核组织,Western Blot检测线粒体能量代谢相关蛋白质AMPK的含量和磷酸化状态,免疫组化检测细胞衰老相关基因p16INK4a和细胞增殖相关基因mTOR的表达.结果:退变髓核组织中AMPK和磷酸化AMPK蛋白表达量较正常对照组均有所增加,二者比较差异均有统计学意义(P<0.01).免疫组化显示,正常对照组和退变髓核组织p161NK4a染色阳性细胞率分别为12.1%和53.1%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01).正常对照组髓核组织和退变髓核组织中,mTOR染色阳性细胞率分别为55%和22.7%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:能量代谢障碍是椎间盘退变的重要机制,椎间盘细胞可能通过AMPK含量和磷酸化状态的改变而调控细胞的增殖和衰老.     

非小细胞肺癌组织中FHIT基因蛋白表达缺失及其与P53基因异常表达的相关性研究

目的　了解非小细胞肺癌组织 (NSCLC)中脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因蛋白(Fhit)表达缺失及其与P5 3基因蛋白 (P5 3)异常表达的相关性。方法　应用免疫组织化学方法了解NSCLC组织中Fhit及P5 3的表达。结果　NSCLC组织中Fhit及P5 3的异常表达率分别为 6 2 % (5 6 /90 )和 4 9% (4 4 /90 ) ;两者的异常表达在非鳞癌 (non -SqCC)和非吸烟的肺癌者中明显相关 ,而在肺鳞癌和吸烟者中无相关性。结论　Fhit的表达缺失是非小细胞肺癌中常见事件 ,尤其在肺鳞癌 (SqCC)和吸烟患者中多见 ;而且其与P5 3的异常表达在非鳞癌和非吸烟的肺癌者中明显相关     

葛根素对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨葛根素(Puerarin,Pue)对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分成空白组、糖尿病模型组、Pue低剂量组和Pue高剂量组各10只。对4组大鼠行空腹血糖、心肌细胞凋亡指数(AI)、免疫组化和Western-Bloting检测。结果:Pue各治疗组均较模型组有显著意义改变:空腹血糖降低;AI下降;Bcl-2表达升高,Caspase 3和Cyt-C表达均下降;且高剂量组的改善情况更为理想。结论:Pue可以改善糖尿病大鼠空腹血糖和AI,其机制可能与调节Bcl-2、Caspase 3和Cyt-C水平有关。