甘草与芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123经空肠黏膜透过性的影响

目的：观察甘草与芫花合用前后对P-糖蛋白（P—gp）的调控作用，探讨甘草、芫花及其合用影响药物经胃肠道渗透的可能作用机制。方法：将25只Wistar大鼠分为5组，分别给大鼠口服甘草液、芫花液、甘草芫花合煎液、合并液以及生理盐水，1周后用体外扩散池法（ussingchamber）评价各种药液对罗丹明123（R123）和荧光素钠（CF）经空肠黏膜透过性的影响，用荧光分光光度法测定R123和CF的浓度，并分析各组表观渗透系数（Papp）差异。结果：4种药液均具有增加R123经吸收方向的透过性，与生理盐水组比较，P〈0．05，且芫花液、合煎液以及合并液还可减少分泌方向的透过（P〈0．05，与生理盐水组比较），甘草对分泌方向透过影响无统计学意义。甘草对CF透过无影响，而其他3组药液则可减少cF吸收和分泌方向的透过性。结论：甘草和芫花对P—gP均有抑制作用，但后者作用较强。芫花某些化学成分抑制P-gp，而另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强，引起旁细胞途径药物cF渗透的降低。甘草与芫花合用后对P—gP抑制作用增强，可能是甘草对芫花有协同作用，使一些毒性成分吸收增加，这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。     

芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123肠内转运和吸收的影响

 目的 研究芫花水煎液对P-糖蛋白(P-gp)的底物罗丹明123(R123)在空肠内转运和吸收的影响,探讨芫花对肠黏膜P-gp的调控作用。方法 大鼠分组制模,利用体外扩散池法(Ussing chamber)评价芫花对R123和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响;利用在体实验测定R123和CF在血浆中药物浓度的变化和各种药动学参数。结果 一方面,0.5 g·mL-1的芫花水煎液降低了R123分泌方向的转运,同时提高了吸收方向的转运,而且对CF吸收和分泌方向的转运都有抑制作用;另一方面,在体实验芫花组R123的生物利用度和曲线下面积都显著大于对照组,CF则与对照组无明显差异。结论 实验表明,芫花某些化学成分抑制P-gp,另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强,引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。因此芫花是肠黏膜P-gp的一种抑制剂,但是哪种化学成分发挥作用有待于进一步研究。     

几种表面活性剂对P-gp底物罗丹明123经肠黏膜透过性的影响

 目的观察低浓度表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油,Labrasol和聚山梨酯80对肠黏膜P-gp的调控作用。方法使用体外扩散池法评价罗丹明123(R123)经空肠、回肠和结肠黏膜的经时经吸收方向和分泌方向的透过量和透过系数(P_app),并测定不同浓度表面活性剂对R123和荧光素钠(CF)经肠黏膜透过性的影响。R123和CF在接受室中的浓度用荧光分光光度法测定。结果R123经肠道黏膜的透过性存在部位差,即以空肠、回肠和结肠的次序透过性依次减少。另一方面,R123经肠道分泌方向的透过性显著地高于其吸收方向的透过性。低浓度的CEL和Labrasol可显著增强R123经吸收方向的透过性,减少经分泌方向的透过性;而低浓度的聚山梨酯80可显著增强R123经吸收方向的透过性,但对经分泌方向的透过性无显著影响。但实验浓度的表面活性剂对CF的肠道转运没有影响。结论低浓度的聚氧乙烯蓖麻油、Labrasol和聚山梨酯80可通过对P-gp功能的抑制而用于改善受P-gp介导药物的吸收,有望提高此类药物的口服生物利用度。     

体外试验评价甘草对肠黏膜P-糖蛋白的影响

目的 :观察甘草对P-糖蛋白(P-gp)底物经大鼠不同区段肠黏膜透过性的差异,以评价其对肠黏膜P-gp功能的影响。方法:通过对大鼠口服甘草煎液、生理盐水一周后,使用体外扩散池(Ussing Chamber)技术评价罗丹明123(R123)和荧光素钠(CF)经大鼠空肠回肠结肠黏膜的经时吸收方向和分泌方向的透过量和表观渗透系数。R123和CF在接受室的浓度用荧光分光光度计检测。结果:R123的透过性比较中,甘草组与生理盐水组组内比较,差异有统计学意义(F=5.602,P=0.000)。CF的透过性比较中,甘草组组内比较,差异有统计学意义(F=20.140,P=0.000)。结论:甘草对底物药物R123的影响可能与存在于肠黏膜的P-gp有关,这可能是甘草与药物产生协同作用的机制之一。     

应用Ussing Chamber技术评价甘草与海藻的配伍对大鼠肠黏膜P-gp的影响

 目的 评价甘草海藻配伍对大鼠肠黏膜P-糖蛋白（P-gp）的影响。方法 通过对大鼠口服甘草煎液、海藻煎液、甘草海藻合煎液及其合并液、生理盐水1周后,使用Ussing Chamber技术,评价罗丹明123（R123）和荧光素钠（CF）经大鼠空肠黏膜的经时吸收方向和分泌方向的透过量和表观渗透系数。R123和CF在接受室的浓度用荧光分光光度计检测。结果 4种药液均具有增加R123经吸收方向透过性的趋势,但仅海藻使R123吸收方向的透过性显著增加（P<0.05,与生理盐水组比较）。同时,海藻也使R123分泌方向的透过性显著增加（P<0.01,与生理盐水组比较）。但海藻与甘草合用后,合煎组与合并组使R123分泌方向的透过性显著减少（P<0.01,与生理盐水组比较）;另外,海藻与甘草的单煎液、合煎液、合并液对CF经空肠黏膜转运的吸收方向及分泌方向的透过性与生理盐水比较,均无显著性差异。结论 海藻可能不对P-gp起抑制作用。海藻中的某些成分可能改变了细胞膜通透性,从而增加了跨膜转运药物R123吸收分泌双方向的渗透,但对细胞间的药物转运影响不大。海藻和甘草合用后对肠黏膜P-gp起到了一定抑制作用,引起海藻和甘草中P-gp底物的一些毒性成分吸收增加,这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。     

大黄甘草汤及其组成生药对P-糖蛋白的抑制作用

研究表明，人黄甘草汤具有强的ATPase活性抑制作用，本次探讨了大黄甘草汤对P-糖蛋白（P-gp）的抑制作用。     

甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的 研究甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白（P-gp）功能和表达的影响,探讨甘草解毒的作用机制。方法 采用流式细胞仪检测经甘草黄酮类成分处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Western blotting法检测甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-gp表达的影响。结果 与对照组相比,甘草总黄酮5、10、50、100 μg/mL作用Caco-2细胞1 h后,使细胞内罗丹明123的荧光强度分别减少61.1%、56.3%、49.2%、45.4%;甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷、芹糖基异甘草苷在相同质量浓度,使细胞内罗丹明123的荧光强度减少了19.3%～37.9%。与对照组相比,甘草总黄酮10～400 μg/mL给药后72 h,使Caco-2细胞膜上P-gp的表达显著增加（P＜0.01）;甘草苷、异甘草苷、甘草素、芹糖基甘草苷5～400 μmol/L,异甘草素、芹糖基异甘草苷10～400 μmol/L对此也有显著作用（P＜0.01）。结论 甘草黄酮类成分增强Caco-2细胞P-gp的功能,上调P-gp的表达,促进细胞内有毒物质的外排,减少有毒物质在肠道的吸收,这可能是甘草配伍其他中药的解毒机制之一。     

用于多药耐药转运评价的P糖蛋白底物罗丹明123定量方法的建立

目的：建立用于多药耐药转运评价的P糖蛋白底物罗丹明123（R123）定量方法.方法：0.1 mL血浆样品用乙酸乙酯-二氯甲烷提取,用罗丹明6G作为内标,利用C18柱分离R123及R6G.结果：检测方式为多离子反应监测（MRM）,用于定量分析的离子R123 m/z：345.2 ～ 285.2,R6G m/z：443.3 ～415.2.样品运行时间4min,标准曲线的浓度范围：1～ 200ng/mL,最低检测限1 ng/mL.低浓度质控样品的日内精密度及日间精密度分别为6.7％和9.2％,中间浓度质控样品的日内精密度及日间精密度均小于3.4％,高浓度质控样品的日内精密度及日间精密度均小于2.1％.结论：液相质谱联用是用于检测血浆中R123含量的快速且灵敏的方法.     

芍药甘草汤对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的:研究芍药甘草汤(SGT)对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)的功能和表达的影响。方法:采用Caco-2单层细胞模型,以P-gp底物3H-地高辛为探针,P-gp抑制剂维拉帕米(Ver)为阳性对照药,测定SGT对Caco-2细胞P-gp功能的影响;用免疫组化法检测SGT对Caco-2细胞膜上的P-gp表达的影响。结果:在Caco-2模型上,3H-地高辛从基底侧(BL)到肠腔侧(AP)与肠腔侧(AP)到基底侧(BL)的表观渗透系数(apparent permeabilities,Papp)比值Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)约为27倍,证明3H-地高辛在Caco-2模型上的吸收方式为主动吸收。阳性药Ver与3H-地高辛联合时,明显增高了3H-地高辛在AP→BL方向的Papp(BL→AP)达3.82倍,但对BL→AP方向的转运影响不明显,说明Ver可明显抑制P-gp活性。SGT在1/25 IC5,1/5IC5,IC5浓度范围对P-gp底物3H-地高辛从AP→BL方向的转运分别促进了159.83%,217.95%,160.26%。1/25 IC5,1/5 IC5浓度下对3H-地高辛在BL→AP方向的转运分别促进了59.16%,50.73%,而相对于IC5浓度下SGT对3H-地高辛在BL→AP方向的转运则无影响。免疫组化结果显示SGT对P-gp的表达有抑制作用。结论:SGT可抑制P-gp的功能和表达,从而促进P-gp底物的吸收。     

甘草次酸18位差向异构体对P-gp底物罗丹明123在Caco-2细胞上跨膜转运的影响

 目的 研究甘草次酸18位差向异构体即18α-甘草次酸（α-GA）、18β-甘草次酸（β-GA）对P-糖蛋白（P-gp）底物罗丹明123在Caco-2细胞上跨膜转运的影响。方法 采用MTT法检测不同摩尔浓度的18α-甘草次酸、18β-甘草次酸及维拉帕米对Caco-2细胞生长抑制作用;建立Caco-2单层细胞模型,以P-糖蛋白底物罗丹明123（Rho-123）为荧光探针,评价甘草次酸18位差向异构体和P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对罗丹明123在Caco-2细胞上跨膜转运的影响。罗丹明123浓度采用酶标仪检测。结果 高浓度（10 μmol·L^-1）18α-甘草次酸瞬时作用于Caco-2细胞单层模型,或者干预单层模型72 h后,均使罗丹明123单位面积BL-AP侧累积转运量（transport B-A）增加,外排率（ER）增大,诱导P-糖蛋白底物罗丹明123外向转运;高浓度（10 μmol·L^-1）18β-甘草次酸瞬时作用于Caco-2细胞单层模型没有表现出诱导作用,但在干预Caco-2单层模型72 h后,表现出对罗丹明123外向转运的诱导;各实验药物均没有对罗丹明123 AP-BL侧转运产生影响。结论 跨膜转运实验结果表明,18α-甘草次酸、18β-甘草次酸能诱导P-糖蛋白的外向转运,加速P-糖蛋白底物的外排,可能是甘草酸制剂增强肝脏解毒的机制之一。     

甘草配伍芫花对大鼠心肝肾功能及组织形态的影响

目的：观察中药十八反中甘草与芫花同用对大鼠心、肝、肾功能及形态的影响。方法：取单味甘草及单味药芫花各100g，分别加水200m1煎煮浓缩药液至50m1，配伍组将甘草及芫花各100g加水400ml，煎煮浓缩药液至50m1。20只大鼠分成甘草组、芫花组、甘草加芫花组及对照组4组，每组各5只大鼠，采用灌胃法，药物剂量按0．2m1／10g大鼠计算，每日灌胃1次，连续7d；对照组灌服生理盐水。观察大鼠心、肝、肾功能及形态的变化。结果单纯芫花对动物肝功能及心肌酶谱等指标有一定影响，但配伍甘草后对以上指标的影响有加重的趋势，对大鼠心、肝、肾组织形态有一定影响。结论：甘草、芫花同用后可能存在着配伍禁忌。     

Isolation of flavonoids, a biscoumarin and an amide from the flower buds of Daphne genkwa and the evaluation of their anti-complement activity

As part of an ongoing study aimed at identifying the anti-complement active compound from the flower buds of Daphne genkwa, ten flavonoids, one biscoumarin and one amide were isolated. Their structures were identified from spectroscopic and physicochemical data as genkwanin 5-O-beta-d-primveroside (1), apigenin 7-O-beta-d-glucuronide (2), genkwanin 5-O-beta-d-glucopyranoside (3), apigenin 5-O-beta-d-glucopyranoside (4), genkwanin (5), apigenin (6), luteolin 7-methyl ether (7), luteolin (8), daphnoretin (9), velutin (10), 7-methoxyacacetin (11) and aurantiamide acetate (12). Among them, compounds 9, 10 and 12 were isolated from this plant for the first time. The anti-complement activity of these compounds was tested against the classical pathway of the complement system. Among the compounds, daphnoretin (9) exhibited significant anti-complement activity with an IC(50) value of 11.4 microm, whereas the other compounds were not active in the assay.     

芫花根总黄酮含药血清对小鼠细胞免疫功能的影响

目的建立小鼠血清中芫花根总黄酮(TFRD)各成分的HPLC测定方法,探讨TFRD含药血清对正常小鼠细胞免疫功能的影响。方法HPLC法测定小鼠单次ig给药后不同时间点血药浓度;M TT法检测多次ig给药后含药血清对正常小鼠脾淋巴细胞增殖、NK与LAK细胞杀伤活性和腹腔巨噬细胞的吞噬功能等细胞免疫功能的影响。结果单次ig TFRD后血药浓度在20~30 m in达到高峰;TFRD含药血清能促进脾淋巴细胞增殖,增加NK和LAK细胞杀伤活性,增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力。结论TFRD含药血清能增强正常小鼠细胞免疫功能。     

黄芫花乙醇对早期孕妇血浆和蜕膜中雌激素、前列腺素和孕酮受体含量的影响

本研究观察了使用黄芫花乙醇注射液抗早孕时,孕妇外周血中雌二醇(E_2)、孕酮(P)、前列腺素(PGE_2)、前列腺素F_(2α)(PGF_(2α))含量与蜕膜组织中PGE_2及PGF_(2α)和孕酮受体(PR)含量的变化。结果表明黄芫花乙醇注射液可使蜕膜组织变性、坏死,同时使其PGE_2、PGF_(2α)含量增加,PR含量降低,而外用血中PGE_2、PGF_(2α)含量不变,E_2、P含量减少。提示:黄芫花乙醇注射液抗早孕的主要环节可能是使蜕膜变性、释放前列腺素,从而干扰维持早孕的因素,达到终止妊娠目的。     

Effect of exogenous ATP on Momordica charantia Linn. (Cucurbitaceae) induced inhibition of D-glucose, L-tyrosine and fluid transport across rat everted intestinal sacs in vitro

Momordica charantia (MC) is a common oriental vegetable with known antidiabetic, laxative and antimicrobial properties. This study investigates the effects of aqueous fruit extract of MC on the transport of d-glucose, l-tyrosine and fluid across rat-everted intestine in vitro. Everted intestinal sacs from rats were mounted in an organ bath containing Krebs-Henseleit bicarbonate buffer. Graded concentrations (1.5-12mg/ml) of MC fruit extract were incubated in the mucosal solution with and without exogenous ATP in the mucosal bathing fluid. The serosal appearance and mucosal disappearance of d-glucose, l-tyrosine and the fluid absorptive capacity of the intestine were significantly inhibited (p<0.05) with increasing graded concentrations of MC. The concentration of d-glucose accumulated or metabolized by the enterocytes in the intestinal tissues were significantly higher (p<0.05) when incubated with MC. Increasing graded concentrations of exogenous ATP (25-200 microM) were incubated with 3.0mg/ml MC to confirm inhibition of the ATP-dependent active transport of d-glucose, l-tyrosine and fluid across rat enterocytes. It was found that increasing concentrations of mucosal ATP from 25 to 100 microM significantly (p<0.05) reverses the MC-depression of the d-glucose, l-tyrosine and fluid uptake across rat everted intestinal sacs. It is hypothesized that bioactive phytochemicals such as saponins in MC fruit extract inhibits the active transport of d-glucose, l-tyrosine and fluid across rat intestine by inhibiting the production of ATP responsible for the active transport of these molecules. It is likely that MC can be a potential alternative drug therapy of postprandial hyperglycaemia via inhibition of glucose uptake across the small intestine.     

体外压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放影响的研究

目的:通过体外实验探讨压力刺激对大鼠筋膜组织成纤维细胞形态和MMP-1、MMP-3合成释放变化的影响,为推拿基本力学刺激"舒筋散结"的治疗作用提供细胞生物学方面的实验依据。方法:体外培养大鼠筋膜组织成纤维细胞,对细胞实施100KPa和200KPa压力刺激后,观察细胞形态的变化和检测细胞MMP-1、MMP-3合成释放的变化。结果:筋膜组织成纤维细胞接受压力作用后,100KPa压力组细胞发生回缩,细胞间隙加大,200KPa压力组出现回缩成圆形并漂浮的细胞,细胞形态缩小;100KPa和200KPa压力组MMP-1合成释放呈增加趋势,但均无显著性差异(P>0.05;P>0.05);MMP-3合成释放减少,差异均有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。结论:压力刺激对筋膜组织成纤维细胞MMP-1、MMP-3合成释放的影响和对细胞形态的影响,可能是推拿良性发挥"舒筋散结"作用的细胞生物力学原理之一。