儿童再生障碍性贫血骨髓间充质干细胞GATA-2基因表达的研究

目的 本研究旨在探索儿童再生障碍性贫血（AA）骨髓间充质干细胞（MSC）GATA-2基因的表达及意义.方法 采集38例AA患儿骨髓标本及20例正常儿童骨髓标本,分离骨髓单个核细胞后体外扩增培养骨髓基质细胞,实时定量PCR（QRT-PCR）方法检测AA儿童免疫抑制治疗前后GATA-2基因表达的变化.结果 AA儿童免疫抑制治疗前GATA-2基因表达水平明显低于正常对照组（P＜0.05）,免疫抑制治疗2年后对治疗有反应的AA儿童GATA-2表达水平高于发病时,且与正常对照组表达水平无统计学差异（P〉0.05）.结论 GATA-2基因的低表达可能影响AA患儿骨髓微环境的造血调控作用.     

骨髓衰竭患者骨髓间充质干细胞细胞因子的表达变化及其意义

本研究旨在探索再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓间充质干细胞（MSC）多种细胞因子的表达及其意义。用半定量RT-PCR方法在mRNA水平上检测AA和MDS患者骨髓间充质干细胞IL-1β、SCF、G-CSF的表达;用实时定量PCR（RQ-PCR）在mRNA水平上检测AA和MDS患者骨髓间充质干细胞TPO的表达。结果表明,AA组SCF的表达明显低于正常对照组（p〈0.05）,TPO的表达较正常对照组明显升高（p〈0.05）,IL-1β的表达与正常对照组相比无明显差异（p〉0.05）。MDS组SCF的表达明显低于正常（p〈0.05）,而IL-1β、TPO的表达与正常对照组相比无统计学差别（p〉0.05）。AA和MDS两组之间IL-1β、SCF、TPO的表达均无明显差异（p〉0.05）。各组均未见G-CSF的表达。结论：AA患者骨髓间充质干细胞SCF和TPO的表达存在明显异常,MDS患者骨髓间充质干细胞SCF的表达也存在异常。     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞的生物学特点

为了观察和比较再生障碍性贫血患儿、正常同年龄段儿童和胎儿3种来源的骨髓间充质干细胞（MSC）的体外增殖能力及表面标志的表达,利用体外培养的方法从再生障碍性贫血患儿的骨髓分离培养MSC,以胎儿和儿童的MSC作为对照;通过对细胞形态和生长特性的观察,并用流式细胞术和免疫细胞化学方法进行检测以比较三者之间的异同.结果表明：从再生障碍性贫血患儿骨髓中分离、培养、扩增得到了MSC,与胎儿和正常儿童骨髓来源的MSC在细胞形态、流式表达模式和免疫细胞化学表达方面基本一致,但再生障碍性贫血患儿骨髓MSC的体外扩增能力有别于胎儿及正常儿童.虽然在早期培养时再生障碍性贫血患儿的骨髓MSC具有与正常儿童相似的扩增速度,但当群体倍增值（population doubling,PD）达20之后基本不再有增殖能力了,而正常儿童和胎儿来源的MSC却可稳定扩增到30 PD.结论：再生障碍性贫血患儿骨髓MSC在表面抗原标志方面与对照组相比无明显异常,但体外增殖能力弱于对照组.     

多发性骨髓瘤间充质干细胞对树突状细胞功能的影响

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓来源的间充质干细胞（MSC）对树突状细胞（DC）分化、成熟和细胞因子分泌及其对DC辅助T细胞杀伤骨髓瘤细胞作用的影响。方法将从MM患者骨髓来源的MSC、正常供者外周血来源的DC及骨髓瘤细胞系U266细胞进行混合培养。流式细胞术测定DC的免疫表型,ELISA法测定上清液IL-12的含量,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术测定骨髓瘤细胞凋亡比例。结果MSC能抑制rhTNF-α诱导的不成熟和成熟DC的CD1a、CD11c、CD80、CD86和HLA-DR表达（P〈0.01）,并显著减少成熟DC分泌IL-12（P〈0.01）。MSC可以下调成熟DC的CD83表达,使其趋于不成熟状态（P〈0.01）。与未加入MSC组相比,MSC混合培养组凋亡骨髓瘤细胞明显减少（P〈0.01）;比较MM患者与正常供者骨髓来源的MSC对DC辅助T细胞诱导骨髓瘤细胞凋亡的影响,前者U266细胞凋亡比例比后者明显减少（P〈0.01）。结论MM患者骨髓来源的MSC可以抑制DC的分化、成熟和分泌细胞因子;无论是MM患者或正常供者骨髓来源MSC均可以抑制DC辅助T细胞对骨髓瘤细胞的凋亡诱导作用,且MM患者来源的MSC的作用更强。     

骨髓增生异常综合征患者间充质干细胞对T细胞的免疫抑制作用

本研究比较来源于正常志愿者和骨髓增生异常增生综合症一难治性贫血（MDS—RA）患者骨髓间充质干细胞（MSC）免疫抑制作用的区别。培养12例正常志愿者和12例MDS患者的骨髓MSC，比较两组MSC的形态、细胞表型、细胞因子的表达，通过植物血凝素（PHA）刺激的T细胞增殖试验、混合淋巴细胞反应和T细胞周期检测、T细胞凋亡检测等比较两组MSC对T细胞的抑制作用的区别。结果表明：两组MSC的形态、表型基本相同；MDS患者来源的MSC对PHA和同种异体抗原诱导的T细胞的抑制作用均低于正常志愿者来源的MSC；加入正常志愿者的MSC后有更多的T细胞阻滞在G0／G1期，但MDS来源的MSC的这种作用较弱；MDS来源的MSC抑制T细胞活化的能力也下降，但是抑制T细胞凋亡的能力增强。另外，MDS来源的MSC表达转化生长因子（TGF—β1,3）、FasL较正常志愿者MSC表达的明显减弱，而TGF—B2的表达却增加。结论：虽然MDS来源的MSC在形态、增殖和细胞表型上基本正常，但其对T细胞的抑制作用减弱，其异常是否与MDS的发病机制有关需要进一步的研究。     

细胞间黏附分子 1 通过活化 MAPK 通路调节小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化简

本研究旨在探讨细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）调节小鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）向脂肪细胞分化的分子机制.分别将小鼠ICAM-1重组逆转录病毒MIGR1-ICAM-1和空载体逆转录病毒MIGR1感染小鼠间充质干细胞系C3H10T 1/2细胞,获得稳定高表达ICAM-1的C3H10T 1/2细胞（MIGR1-ICAM-1/MSC）和对照组细胞（MIGR1/MSC）.通过Western blot检测P38,ERK和JNK通路的活化情况,观察MIGR1-ICAM-1/MSC和MIGR1/MSC向脂肪细胞的诱导分化.实验组加入P38、ERK及JNK 3种信号通路抑制剂后进行培养并观察其成脂肪分化情况.以原位油红染色观察脂滴,应用real-time PCR检测成脂分化关键转录因子C/EBPα和PPARγmRNA的表达水平.结果显示,ICAM-1过表达可活化MSC的P38、ERK及JNK通路;原位油红染色及real-time PCR检测结果显示对ERK通路活化抑制可导致MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平上调,脂滴变大,脂肪数量增加（P＜0.01）;阻断P38通路后MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数量更小、更少（P＜0.01）.结论：ICAM-1可能通过活化ERK信号通路抑制MSC的成脂分化,通过活化P38通路维持小鼠MSC成脂分化能力.     

骨髓脂肪细胞促进多发性骨髓瘤细胞生存并上调抗药性

目的：探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓微环境中脂肪细胞（Ad）在MM发生、发展中的作用。方法：油红O染色分析正常供者（HD）及初诊MM(ND-MM)患者骨髓涂片中骨髓脂肪细胞（BMA）含量。分别收集正常供者及初诊MM患者间充质干细胞（MSC），采用体外共培养试验探讨MM细胞对MSC成脂分化的影响以及BMA在MM细胞生存和耐药中的作用。实时定量PCR法检测MSC及MSC衍生Ad中成脂及成骨分化相关基因PPAR-γ、DLK1、DGAT1、FABP4、FASN和ALP表达，蛋白印迹法检测含或不含PPAR-γ抑制剂G3335共培养上清中IL-6、IL-10、SDF-1α、TNF-α和IGF-1水平。结果：油红O染色结果显示，与正常对照相比，ND-MM骨髓涂片阳性BMA显著增多，且与疾病状态相关，治疗有效者骨髓BMA含量下降；MM细胞明显上调了MSC成脂分化相关基因PPAR-γ、DLK1、DGAT1、FABP4和FASN的表达水平，而成骨分化相关基因ALP则明显下调。在MM骨髓微环境中MM细胞与MSC相互作用的直接后果是以成骨细胞为代价促进MSC向Ad分化，且该类Ad的细胞因子分泌谱发生变化。P...     

Notch配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞中表达研究

本研究检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平,探讨其与MDS发病的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测38例M DS患者和16例正常对照者骨髓间充质干细胞中Delta-like-1和Jagged-1的基因表达水平。结果表明,MDS患者的Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平较正常对照组均明显升高（P〈0.05）。在WHO分组中,RA/RARS、RCMD及RAEB组Delta-like-1的表达量均高于正常对照组（P〈0.05）,RARB组Jagged-1与正常对照组差异有显著性（P〈0.05）。Delta-like-1表达与骨髓原始细胞比例有显著相关性（r=0.502,P〈0.05）。伴染色体异常MDS组Deltalike-1和Jagged-1 mRNA表达水平较无染色体异常MDS组明显升高（P〈0.05）。在IPSS分组中,较高危组Deltalike-1表达显著高于较低危组（P〈0.01）,而Jagged-1表达在两组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：MSC中Delta-like-1和Jagged-1高表达可能参与了M DS的发病过程。     

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病患者CD4＋T细胞亚群转录因子表达的变化及其临床意义

本研究通过检测CD4＋T细胞亚群特异性转录因子的mRNA（T-bet、GA TA-3、Foxp3、RORγt）在再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）和急性髓系白血病（AML）患者外周血中的表达变化,探讨3种疾病的细胞免疫状态及其作用机制.采用实时荧光定量方法检测AA组23例、MDS组42例、AML组17例和正常组16例外周血单个核细胞（PBMNC）中转录因子的T-bet、GA TA-3、Foxp3、RORγt mRNA表达并进行对比分析.结果显示：与正常组比较,AA组患者T-bet、RORγt mRNA的表达均显著增高（P＜0.01）,GATA-3、Foxp3表达减低（P＜0.01）.MDS组T-bet、GATA-3 mRNA表达无显著性变化,而Foxp3、RORγt表达均显著增高（P＜0.05）;MDS-RA组T-bet、RORγt表达均较正常组升高（P＜0.01）,GA TA-3表达显著性减低（P＜0.05）,Foxp3较正常组无显著性差异;MDS-RAEB和AML组T-bet、RORγt表达均低于正常对照（P＜0.05）,而GA TA-3、Foxp3mRNA表达均高于正常对照组（P＜0.01）.结论：AA、MDS不同阶段以及AML患者外周血中CD4＋T细胞转录因子表达水平不同,提示细胞免疫状态有差异,在AA和MDS早期阶段,异常免疫介导的造血细胞过度凋亡在骨髓衰竭中可能起重要作用,而在MDS晚期阶段和在AML时,恶性克隆的大量积聚可能是其主要原因.     

一氧化氮在人骨髓间充质干细胞抑制淋巴细胞异基因增殖反应的初步研究

本研究探讨一氧化氮在骨髓间充质干细胞（MSC）抑制淋巴细胞增殖中的作用及机制。从人骨髓中分离培养MSC,预先接种在培养板上,建立混合淋巴细胞培养（MLC）体系,利用CCK-8法检测淋巴细胞增殖情况,并用Griess法检测培养体系NO的产生,real—timePCR检测淋巴细胞FOXP3mRNA表达水平。结果表明：MSC干预组淋巴细胞增殖活性下降,其OD值为0．49±0．03,NO含量明显升高为（21．05±1．14）μmol／L,淋巴细胞FOXP3mRNA表达水平为（1．56±0．34）％,而无MSC的MLC组NO含量为（3．30±0．36）μmol／L,FOXP3表达水平为（0．74±0．15）％,两组相比具有显著性差异。结论：MSC产生的NO上调淋巴细胞FOXP3mRNA的表达水平,从而抑制淋巴细胞增殖。     

儿童急性髓细胞性白血病中SOX4表达水平及其临床意义研究

目的 研究儿童急性髓细胞性白血病(AML)中性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平及其的临床意义。方法 前瞻性选择2014年4月至2017年12月期间在河北北方学院附属第一医院首次诊断为AML的45例患儿作为AML组,同期接受骨髓穿刺活检并证实为正常骨髓、一般资料与AML患儿匹配的20例儿童作为对照组。检测AML组和对照组骨髓组织中SOX4的表达;分析AML组中不同临床病理特征患儿骨髓中SOX4表达水平的表达。根据AML组中SOX4表达分为SOX4阳性组和SOX4阴性组,比较两组患儿增殖、侵袭基因[细胞周期蛋白D(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-9(MMP9)、神经性钙粘附蛋白(N-cadherin)、上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin)]表达水平;随访AML患儿的生存情况。结果 AML组骨髓中SOX4的阳性表达率及mRNA表达水平均明显高于对照组(P <0. 05),且AML组外周血白细胞计数≥100×109/L患儿骨髓中SOX4的阳性表达率明显高于外周血白细胞计数<100×109/L患儿(P <0. 05);AML组中SOX4阳性表达患儿骨髓中cyclin D1、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平明显高于SOX4阴性表达患儿,p21、E-cadherin的mRNA表达水平明显低于SOX4阴性表达患儿,总生存时间短于SOX4阴性表达患儿(P <0. 05)。结论 儿童AML骨髓中SOX4高表达与增殖侵袭基因表达的变化、生存时间的缩短有关。     

T细胞亚群及细胞因子网络与小儿再生障碍性贫血的相关性

目的检测再生障碍性贫血（AA）患儿体内T细胞亚群及细胞因子的表达，进一步阐明儿童从的发病机制。方法分别采用流式细胞分析和酶联免疫吸附法检测35例从患儿及30例正常儿童外周血T细胞亚群，白细胞介素-18和白细胞介素-3水平。结果与正常对照组比较，AA患儿外周血中CD4^＋水平降低，CD8^＋水平升高，CD4^＋／CD8^＋比值降低；白细胞介素-18、肿瘤坏死因子-α水平升高，而白细胞介素-3水平降低，差异均有显著性（P〈0．01或P〈0．05）。结论AA患儿体内存在免疫调节机制异常和细胞因子网络失衡，对其体内T细胞亚群及细胞因子的检测有助于阐明儿童从的发病机制及探索新的治疗方法。     

骨髓间充质干细胞对大鼠失血性休克后急性肺损伤的保护作用研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞（MSC）对失血性休克后急性肺损伤（ALI）大鼠的治疗作用及机制.方法 以雄性Wistar大鼠作为供体提取MSC.将36只雄性Wistar大鼠通过气管内注射细菌脂多糖建立大鼠ALI模型,并将其中18只大鼠通过静脉注射MSC予以治疗（MSC组）,余18只为ALI组,同时以8只健康Wistar大鼠作为对照组.其中ALI组及MSC组各取10只大鼠用于大鼠生存时间比较,另每组8只与对照组大鼠进行肺湿/干重比、肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1 （TGF-β1）、Claudin-4含量监测,并通过Western blotting及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织中Claudin-4蛋白及mRNA表达变化. 结果 ALI组和MSC组中大鼠的48 h生存情况比较差异具有统计学意义（x2=5.05,P＜0.05）.ALI组和MSC组大鼠肺组织的湿/干重比及TNF-α较对照组均明显增加,且ALI组大鼠增高更为明显（P均＜0.05）;而对照组及MSC组大鼠的TGF-β1及Claudin-4水平较明显高于ALI组,且MSC组更为显著（P均＜0.05）.RT-PCR结果显示对照组大鼠Claudin-4 mRNA水平高于ALI组,但是明显低于MSC组（P均＜0.05）,与Western blotting结果检测结果一致. 结论 MSC治疗通过上调肺组织中Claudin-4的表达可以减轻大鼠失血性休克后ALI.     

急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中CCL2 mRNA的表达

背景：临床工作中希望能够根据骨髓CCL2表达对急性淋巴细胞白血病患者进行危险分层和预后判断。目的：观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中CCL2 mRNA的表达情况。方法：初诊50例急性淋巴细胞白血病患者为实验组,30例非血液肿瘤患者为对照组。初诊急性淋巴细胞白血病患者化疗2个疗程后按疗效分为完全缓解组43例,未完全缓解组7例。实验抽取研究对象骨髓5mL,采用半定量聚合酶链反应法检测CCL2 mRNA表达。结果与结论：①初诊急性淋巴细胞白血病组CCL2 mRNA表达水平明显高于对照组（P〈0.05）;完全缓解组CCL2 mRNA水平明显低于未完全缓解组（P〈0.01）;完全缓解组治疗后CCL2 mRNA表达水平明显低于治疗前（P〈0.01）。未完全缓解组治疗2个疗程后CCL2 mRNA表达水平无明显下降（P〉0.05）。②前B-急性淋巴细胞白血病患者骨髓CCL2 mRNA表达水平明显高于普通B及T系急性淋巴细胞白血病患者（P〈0.05）。初诊时白细胞≥50×10^9L^-1急性淋巴细胞白血病患者CCL2 mRNA表达水平明显高于白细胞〈10×10^9L^-1及10×10^9L^-1≤白细胞〈50×10^9L^-1组（P〈0.05）,10×10^9L^-1≤白细胞〈50×10^9L^-1组明显高于白细胞〈10×10^9L^-1组（P〈0.01）。结果表明急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞能分泌CCL2,骨髓CCL2 mRNA表达水平与患者初诊时的白细胞计数及免疫分型有一定的关系,在一定程度上能反映患者的近期疗效。     

急性白血病儿童骨髓间充质干细胞的生物学特点的初步研究

本研究探讨密度梯度离心法加贴壁法方式培养白血病儿童骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcell,MSC）的条件并观察其体外增殖能力、生长曲线、多向分化等生物学特性。通过密度梯度离心、贴壁法分离白血病患儿的MSC,观察细胞的形态变化及生长曲线、流式细胞术测定其CD29、CD105、CD45、CD34、CD14、HLA—DR等表达,通过成脂、成骨诱导研究其多向分化能力。结果表明：密度梯度离心法联合贴壁法可以培养出白血病儿童骨髓来源的MSC,初诊白血病儿童骨髓来源的MSC培养成功率为57．1％,缓解白血病儿童骨髓来源的MSC成功率为41．2％,接种密度越大成功率越高,初诊白血病儿童的MSC形成集落数目较多且生长较快。形态学观察显示,骨髓间充质干细胞接种24小时即贴壁,呈集落生长,形态多样;3天后贴壁细胞增殖,逐渐以梭形细胞为主;2—3周细胞基本达80％-90％融合,第3代后细胞呈均匀一致的长梭形。细胞传代后3天内处于潜伏期,3天后进入生长期,8天后进入平台期。检测第2代后细胞免疫表型显示,MSC的CD29、CD105表达率达95％以上,CIM5、CD34、CD14、HLA．DR极低表达或不表达。MSC能成功诱导成脂肪细胞及成骨细胞,油红O染色和茜素红染色为阳性。在合适的条件下冻存对细胞影响不大。结论：①白血病患儿骨髓培养出的贴壁细胞是MSC,骨髓含量在1ml以上且方法得当可以培养出MSC;②初诊的白血病患儿的骨髓相对容易培养出骨髓间充质干细胞,形成的集落较缓解期白血病患儿多,增长速度较快;⑧白血病儿童来源的MSC具有MSC的共同生物学特性。     

多药耐药基因转染人骨髓间充质干细胞及对其化疗保护作用的实验研究

目的探讨逆转录病毒介导多药耐药基因（mdr1）体外转染人骨髓间充质干细胞（MSCs）能否提高其对化疗药物的耐受性。方法采用percon密度梯度离心法自骨髓中分离MSC并进行纯化和扩增；脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞，获得的病毒上清感染MSC，流式细胞术测定mdr1基因编码产物P-糖蛋白（P-g170）的表达水平；罗丹明（Rh123）排泌试验检测P-g170的功能活性；MTT法测定转染MSC对化疗药物耐受性。结果mdr1基因导入骨髓MSC后稳定表达P-g170的阳性细胞百分率为33．9％，对照组为0．7％；Rh123排泌试验证实P-g170具有功能活性；转染MSC对多种化疗药物的耐受性明显强于未转染MSC。结论mdr1基因体外转染人骨髓MSC可明显提高MSC对多种化疗药物的耐受性，为有效提高大剂量化疗在肿瘤治疗中的应用提供了有力依据。     

3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞体外成脂及脂肪细胞功能的比较研究

目的:探讨3T3-L1细胞与人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外成脂及脂肪细胞功能的差异。方法:用密度梯度离心和贴壁培养的方法分离纯化人骨髓MSC,在倒置显微镜下观察细胞形态,体外向脂肪方向诱导分化,并通过油红O染色和吸光度值(OD值)检测其分化程度;qRT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)mRNA表达水平;通过诱导的脂肪细胞与THP-1细胞共培养,加入1μg/ml的阿糖胞苷,在48 h测定其对肿瘤细胞的化疗抵抗作用。结果:通过油红O染色和测定吸光度值发现,3T3-L1细胞组脂质聚集量多于MSC组,且OD值大于MSC组(P0.05);qRTPCR结果显示,3T3-L1来源的脂肪细胞的成脂基因PPARγ、FABP4和C/EBPαmRNA的相对表达量高于人骨髓MSC的脂肪细胞(P0.05);共培养实验结果表明,含脂肪细胞组THP-1细胞存活数较对照组多(P0.05),且3T3-L1细胞组与MSC组之间具有统计学差异(P0.05)。结论:3T3-L1细胞的体外成脂能力比人骨髓MSC强;脂肪细胞具有促使THP-1细胞耐受化疗的作用,且在3T3-L1细胞组的作用大于人骨髓MSC组。     

大鼠颌骨来源骨髓间充质干细胞中Cbfα1/p56亚型的表达

背景：与来源于中胚层间充质的躯干四肢骨不同,颌骨来源于颅神经嵴外胚间充质,具有独特的膜内成骨机制。核心结合因子Cbfα1是骨分化的关键性转录因子,但其p56亚型在颌骨组织中的作用尚不明确。目的：研究Cbfα1/p56亚型在大鼠颌骨来源骨髓间充质干细胞中的表达及意义。方法：原代培养大鼠颌骨和髂骨来源的骨髓间充质干细胞,采用ELISA法检测骨髓间充质干细胞中的碱性磷酸酶活性,荧光定量PCR法检测骨髓间充质干细胞中Cbfα1/p56和p57亚型的mRNA相对表达量。结果与结论：成功培养出大鼠颌骨和髂骨来源的骨髓间充质干细胞,颌骨来源骨髓间充质干细胞的增殖能力及碱性磷酸酶活性明显高于髂骨;在培养第6天,颌骨来源骨髓间充质干细胞的Cbfα1/p56亚型mRNA相对表达量高于髂骨来源骨髓间充质干细胞（P〈0.05）,而Cbfα1/p57亚型在各培养时间点的mRNA相对表达量两组间差异均无显著性意义（P〉0.05）。结果提示Cbfα1/p56亚型对颌骨来源骨髓间充质干细胞的早期成骨分化具有重要意义。     

间充质干细胞分泌TGF-β1抑制异体T细胞反应性

为探讨骨髓间充质干细胞（MSC）诱导异体T细胞反应性下降的机制。应用流式细胞术检测了异体T细胞与骨髓间充质干细胞共培养前后CD4，CD8，CD25和CD28等的变化，同时应用RT-PCR测定MSC是否表达IL-4，IFN-γ和TGF-β1等细胞因子，并用ELISA的方法验证培养上清中蛋白的存在。结果显示，异体T细胞与MSC共培养后，CD8^ 细胞增多，CD25^ 细胞减少，RT-PCR检测结果证明MSC高表达TGF-β1基因，但不表达IL-4和IFN-γ基因，ELISA证实MSC培养上清存在TGF-β1蛋白，其72小时分泌量约为1ng/ml。结论：骨髓MSC在体外可使异体T细胞对异体抗原的反应性减低，这种作用体现在细胞亚群的改变与MSC分泌TGF-β1有关，这一研究结果为预防HLA不相同合骨髓移植中GVHD的发生提出一条新的思路。     

VEGF-Notch信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓MSC增殖和凋亡的作用

目的:评估VEGF-Notch信号通路对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)增殖和凋亡的调节作用。方法:收集再生障碍性贫血患者骨髓标本,进行骨髓MSC分离及鉴定,应用Western blot检测AA患者骨髓(BM)中VEGF-Notch信号通路相关蛋白(VEGF,VEGFR,Notch-1,Jagged1,Delta-like1和hes1)的表达。在MSC培养体系中分别加入VEGF(100 ng/ml)和DAPT(γ-secretase inhibitor)(10μmol/L),以活化和抑制MSC中的VEGF-Notch信号传导。利用细胞计数试剂盒8和流式细胞术评估AA患者MSC的细胞增殖、凋亡和细胞周期;应用油红0染色法检测成脂分化。结果:AA患者MSC中VEGF-Notch信号通路受到明显抑制(P 0.05)。VEGF和DAPT的干预分别激活和抑制AA患者MSC中的VEGF-Notch信号传导。CCK8检测结果显示,VEGF的干预明显促进MSC的增殖(P 0.05)。流式细胞仪检测显示,VEGF通过阻断S期细胞显著抑制MSC的凋亡(P 0.05)。结论:VEGF-Notch信号通路的激活有可能恢复AA患者MSC的增殖功能。