大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的：探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl—2，Fas／FasL表达变化的关系．方法：建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片，HE染色分析肾组织病理损伤程度，用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化，SABC免疫组化方法检测Bcl—2，Fas与FasL蛋白表达的变化．结果：缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管，肾小管上皮细胞凋亡指数增加，且随缺血再灌注时间延长而进一步上升，48h达高峰(P＜0．05).Bcl—2蛋白在对照组呈弱阳性表达，缺血30min，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，48h达高峰(P＜0.05)，并以远曲小管为主．Fas，FasL蛋白在对照组呈阴性表达，缺血30，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，以72h时达高峰(P＜0.05)，多表达在远曲小管．HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶，以近曲小管为主，坏死灶周围有炎性细胞浸润．结论：肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡，Bcl—2，Fas／FasL系统可能在肾小管上皮细胞凋亡过程中发生着重要的调控作用．     

骨形态形成蛋白-7在实验性肾间质纤维化大鼠模型中作用的研究

目的：观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中骨形态形成蛋白-7(BMP-7)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾间质纤维化的关系．方法：60只Wistar大鼠随机分为正常大鼠组、假手术组和单侧输尿管梗阻组．分别于术后1d、3d、7d、14d处死大鼠．采用RT-PCR检测BMP-7mRNA、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达水平．用免疫组化检测肾小管间质中BMP-7、TGF-β1蛋白的定位和表达及其与输尿管梗阻后肾间质损害的关系．结果：与时照组相比，BMP-7mRNA于术后第1天即出现表达下降并随梗阻时间延长递战，而TGF-β1mRNA则随着梗阻时间延长增加(P均＜0.05)．BMP-7蛋白在对照组中高度表达，髓质区表达明显高于皮质区，主要分布在肾小管及肾间质，肾小球内基本无表达．在梗阻组BMP-7蛋白表达呈进行性下降，而TGF-β1蛋白表达则逐渐增加(P均＜0.01)．结论：BMP-7蛋白于肾小管间质病变早期即出现表达下调，早于肾间质纤维化的出现，且随间质病变进展进行性下降．BMP-7表达下调可能参与介导肾小管间质损害的发生发展。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化大鼠细胞增殖的影响

目的 观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏细胞增殖的影响,探讨其拮抗肾间质纤维化的作用机理.方法 采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为鳖甲煎丸组、缬沙坦组、模型组,并设假手术组.观察梗阻侧肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白及基因的表达,同时检测肾间质细胞和肾小管细胞的增殖、凋亡以及细胞周期的变化.结果 模型组及各治疗组大鼠肾脏中PCNA的蛋白及mRNA的表达和肾间质、肾小管细胞PCNA阳性细胞率、细胞凋亡率较假手术组明显升高(P＜0.05,P＜0.01),鳖甲煎丸组、缬沙坦组的表达均低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),但是细胞凋亡与增殖的比值模型组较假手术组显著降低(P＜0.05),2治疗组较模型组显著升高(P＜0.05).与假手术组相比,模型组处于S期的细胞比例显著增多(P＜0.01),处于G0/G1期的细胞比例显著减少(P＜0.01),与模型组比较,2治疗组S期的细胞比例明显降低(P＜0.05),G0/G1期的细胞比例明显增加(P＜0.01),G2/M期变化不明显.结论 鳖甲煎丸能够下调肾间质纤维化大鼠肾间质细胞PCNA的蛋白及mRNA表达,促进肾间质细胞凋亡,抑制其增殖,阻止其由G0/G1期进入S期,对肾脏起到保护作用.     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾刀、管上皮细胞转分化实验研究

目的：通过观察人参皂苷Rgl对转化生长因子-β1（TGF—β1）诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rgl在肾小管纤维化形成方面的作用。方法：将NRK52E细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF—β1诱导组（5ng／mLTGF—β1）,人参皂苷Rgl与TGF—β1共同干预组（5ng／mLTGF—β1的基础上分别加入10、20、40μg／mL的人参皂苷Rgl）,培养72h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rgl对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响.结果：TGF—β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异（P〈0.05）,人参皂苷Rgl能抑制TGF—β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论：人参皂苷Rgl能抑制TGF—β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠SnoN和Ski表达的影响

目的：探讨血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻所致大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、血府逐瘀胶囊治疗组，采用单侧输尿管结扎术（UUO）建立大鼠肾间质纤维化模型。术后21d取各组大鼠肾组织HE染色及六胺银染色（PASM），观察肾组织病理变化；检测大鼠血肌酐和尿素氮含量，观察肾功能变化；放射免疫法检测肾组织中Ⅲ型前胶原含量，观察肾纤维化程度；Western blot检测肾组织中核转录共抑制因子SnoN与Ski蛋白表达水平，观察TGF—β1／Smad信号转导通路中逆向调控信号分子表达水平的变化。结摹：与假手术组比较，模型组大鼠肾小管基底膜明显增厚，部分肾小管上皮细胞变性，肾小管萎缩，管腔显著扩张，。肾间质明显增宽；血肌酐与尿素氮含量以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量显著增加：SnoN、Ski蛋白表达显著减少。血府逐瘀胶囊治疗组大鼠梗阻侧肾组织的病理变化明显改善，血肌酐与尿素氮水平以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量明显降低，SnoN蛋白表达水平显著增加，而Ski蛋白表达没有改变。结论：血府逐瘀胶囊可通过恢复SnoN蛋白表达水平，抑制TGF—β1，靶基因的活化，从而改善UUO大鼠的。肾功能和肾间质纤维化程度。     

人参皂苷Rg1抑制NLRP3/Caspase-1通路抵抗肾纤维化的作用研究

目的：通过体内外实验探讨人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK2纤维化细胞株中炎症及其抗纤维化的机制。方法：将HK2细胞诱导分组为对照组、纤维化模型组（2 ng/mL的TGF-β1诱导纤维化）、低剂量人参皂苷Rg1治疗组（2 ng/mL的TGF-β1+15μg/mL人参皂苷Rg1）、高剂量人参皂苷Rg1治疗组（2 ng/mL的TGF-β1+45μg/mL人参皂苷Rg1）;Western印迹及免疫荧光检测结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-1）表达水平；Western印迹检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)表达水平；透射电镜检测细胞焦亡水平。动物研究将大鼠诱导分为对照组、模型组（单侧输尿管梗阻）、低剂量人参皂苷Rg1治疗组（单侧输尿管梗阻大鼠+50 mg/kg人参皂苷Rg1）、高剂量人参皂苷Rg1治疗组（单侧输尿管梗阻大鼠+100 mg/kg人参皂苷Rg1）;Western印迹检测肾组织中蛋白表达水平；苏木精-伊红（HE）及Masson检测肾脏病理...     

维甲酸对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用

目的 探讨维甲酸（at-RA）对单侧输尿管梗阻大鼠（UUO）肾间质纤维化的影响.方法将26只大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,结扎单侧输尿管造成梗阻性肾病模型.术后9天处死大鼠,取梗阻侧肾做组织学检查,HE染色,用免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）.结果维甲酸显著减轻肾小管间质损害,治疗组肾间质炎细胞浸润和肾间质CTGF、α-SMA表达显著低于对照组.结论维甲酸减轻UUO模型大鼠肾小管间质损害和炎细胞浸润,降低CTGF表达,抑制α-SMA表达,从而减轻肾间质纤维化.     

依那普利对大鼠肾间质纤维化中肾小管上皮细胞凋亡的作用

目的：观察依那普利对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响,探讨依那普利抗肾间质纤维化的 作用机制。方法：将24只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)和依那普利治疗组(n=8)。对模型组和依 那普利治疗组大鼠行左侧输尿管结扎术,建立单侧输尿管梗阻(unilateral urethral obstruction,UUO)模型。术后14 d处 死大鼠,留取梗阻侧肾组织分别进行HE和Masson染色,观察各组大鼠肾组织病理改变,用脱氧核糖核苷酸末端转移 酶介导的缺口末端标记法[terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated (dUTP) nick end-labeling,TUNEL]染色检查肾小 管上皮细胞凋亡,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测Fas相关死亡结构域(Fas-associated death domain,FADD)、凋亡蛋 白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的 蛋白表达。结果：HE染色、Masson染色显示模型组肾间质损伤指数、肾间质纤维化指数均较假手术组明显增高(均 P<0.05),依那普利治疗组肾间质损伤指数、肾间质纤维化指数均较模型组明显降低(均P<0.05)。TUNEL染色显示模 型组肾小管上皮细胞凋亡计数较假手术组明显增多(P<0.05),依那普利治疗组肾小管上皮细胞凋亡数较模型组明显减 少(P<0.05)。免疫组织化学及蛋白质印迹法显示模型组肾组织FADD,APAF-1和CHOP的蛋白表达均较假手术组明显 增多(均P<0.05),依那普利治疗组肾组织FADD,APAF-1和CHOP的蛋白表达均较模型组明显降低(均P<0.05)。结论： 依那普利可通过抑制UUO大鼠的肾小管上皮细胞凋亡而起到抑制肾间质纤维化的作用。     

Smad6、7蛋白表达与梗阻性肾病小管间质损伤关系的实验研究

目的 研究Smad6，7蛋白表达与梗阻性肾病小管间质损伤的关系。方法 32只Wistar大鼠随机分为单侧输尿管梗阻组和假手术组（对照组），于术后3、7、14、21d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测TGF－β1 mRNA表达水平；用免疫组化和Western杂交分别检测Smad6,Smad7蛋白的定位和表达；DNA处断末端标记原位检测肾小管细胞凋亡数；图像分析小管细胞和肾小球毛细血管球囊平均卡规直径的变化。判断纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量。结果 与对照组相比，梗阻肾组织TGF－β1 mRNA表达显著增高，并伴有明显的肾小管和肾小球毛细血管球囊萎缩、小管细胞的凋亡，以及肾组织羟脯氨酸含量增高。Smad6、7蛋白主要在肾小球和皮质肾小管上皮细胞内表达。输尿管梗阻后，Smad6、7蛋白表达明显下降，该Anti-Smad蛋白下调与小管间质损伤呈明显相关。结论 TGF－β1信号通路参与了梗阻性肾病小管间质损伤的进程，Anti-Smad蛋白表达下降可能是该模型TGF－β1致伤作用加重的主要原因。     

反义金属蛋白酶组织抑制剂-1对大鼠肾小管间质损害的治疗作用

目的　探讨金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP 1)参与肾小管间质损害的机制及防治措施。方法　分 3组通过输尿管逆行注射将等体积生理盐水、空载体、反义TIMP 1基因全长逆转录病毒载体分别导入单侧输尿管梗阻大鼠的肾脏 ,检测肾外源基因的表达 ,观察肾小管间质损害的变化。结果　反义TIMP 1基因可以在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质细胞表达。反义TIMP 1组单侧输尿管梗阻术后较盐水组和空载体组大鼠梗阻肾组织内TIMP 1蛋白质表达明显减少 (3d :0 75± 0 0 7vs1 18± 0 12、1 14± 0 14 ,P <0 0 5 ;7d :2 0 2± 0 16vs 4 0 7± 0 5 7、4 13± 0 6 0 ,P <0 0 1)。免疫组化显示反义TIMP 1组肾小管间质的增殖细胞核抗原和α 平滑肌肌动蛋白抗原表达下调。与两对照组相比 ,反义TIMP 1组肾间质相对面积明显下降 (3d :6 0± 0 7vs8 2± 1 2、8 2± 1 3,P <0 0 1;7d :16 2±1 1vs 2 1 2± 2 6、2 1 0± 2 4 ,P <0 0 1)。结论　反义TIMP 1可能通过抑制肾间质TIMP 1的过度表达减轻肾小管间质病变     

人参皂甙Rg1对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的作用研究

目的观察人参皂甙Rg1对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法将雄性SD大鼠80只随机分为4组:UUO组、人参皂甙Rg1组(Rg1)、氯沙坦组(ARB)和假手术组(SOR)。从术后24 h开始,Rg1组予人参皂甙Rg1溶液腹腔注射50 mg/(kg.d),其余3组予以同等体积生理盐水腹腔注射;ARB组予氯沙坦溶液20 mg/(kg.d)灌胃,其余3组予以同等体积生理盐水灌胃,连续14 d。术后第3 d、7 d、14 d处死各组大鼠,行HE、Masson和PAS染色,动态观察肾间质病理学改变。采用荧光定量PCR、Western蛋白印迹、免疫组织化学方法从mRNA和蛋白质水平观察各组肾脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果UUO组呈进行性肾间质纤维化改变,包括小管的萎缩、扩张、炎细胞浸润、肾间质胶原的沉积。Rg1组和ARB组上述肾脏病理损害明显减轻。UUO组肾脏组织TGF-β1的表达量较SOR组升高(P<0.05),尤以7~14 d明显。Rg1组和ARB组TGF-β1的表达量与UUO组比较有明显的下降(P<0.05)。结论人参皂甙Rg1对UUO所致的大鼠肾间质纤维化的形成有明显的抑制作用,其作用机制可能与降低TGF-β1的表达有关。     

Ginsenoside Rb1, a panoxadiol saponin against oxidative damage and renal interstitial fibrosis in rats with unilateral ureteral obstruction

Objective:To investigate the possible protective effect and mechanism of ginsenoside Rb1 against oxidative damage and renal interstitial fibrosis on rats with unilateral ureteral obstruction(UUO). Methods:In total,80 male rats were randomly divided into 4 groups,20 in each group:the sham operated group (SOR),UUO group,UUO with ginsenoside Rb1 treatment group(treated with intraperitoneal injection of 50 mg/ kg daily) and UUO with Losartan treatment group(as the positive control,treated with 20 mg/kg by ga...     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

人参皂甙Rb1对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的抗氧化保护作用

目的观察人参皂甙Rb1对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠氧化应激和肾间质纤维化的影响。方法将雄性SD大鼠60只随机分为UUO组、Rb1治疗组、假手术（SOR）组,科素亚（ARB）组。每组15只,术后3、7、14d每组随机选择5只大鼠处死。比色法检测肾脏组织匀浆OH·、MDA、SOD,行HE和Masson染色动态观察肾脏病理学改变。结果与SOR组相比,UUO组大鼠术后3、7、14d,OH·、MDA高于SOR组,SOD低于SOR组。Rb1治疗组大鼠OH·、MDA水平均不同程度低于UUO组,SOD水平均不同程度高于UU0组;其疗效与ARB组相似。与UUO组相比,Rb1能显著减少UUO大鼠胶原在肾间质的沉积,改善肾脏病理损害。相关分析显示,OH·、MDA的表达与间质相对面积呈正相关,SOD的表达与间质相对面积呈负相关。结论人参皂甙Rb1能抗肾间质纤维化;其机制与其抗氧化应激有关。     

人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响

目的 分析人参皂苷Rh2（G-Rh2）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 SPF级,雄性,SD大鼠30只,随机分为对照组（Control组）、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型,Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后,G-Rh2药物干预组给予G-Rh2（20 mg·kg-1 ·d-1）连续灌胃12周,Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态,Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度,TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;Western blot检测大鼠肾组织CollagenI、CollagenIII、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平;免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果 与Control组相比,DN组肾组织纤维化程度加重,细胞凋亡指数升高（P<0.01）,CollagenI、CollagenIII、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调（P<0.01）,Bcl-2表达下调（P<0.01）;与DN组相比,G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度,细胞凋亡指数,CollagenI、CollagenIII、Cleaved-caspase-3、DDR1表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2表达显著升高（P<0.05）。结论 G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠肾间质纤维化干预作用的研究

目的:动态观察白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化及肾功能的影响。方法:将72只大鼠随机等分为3组:假手术(SOR)组、单侧输尿管结扎(UUO)组和IL-1ra处理(Tre)组,UUO组和Tre组制备UUO模型,SOR组术式同UUO组但不结扎输尿管。Tre组每天给予的10%IL-1ra溶液腹腔注射,而另两组则腹腔注射等体积无菌注射用水。各组分别在术后第1、3、7和14天随机处死6只大鼠,采血并取梗阻侧肾脏,行HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织a-SMA的表达,同时检测血液中肌酐、尿素氮的含量。结果:随着梗阻时间的延长,UUO组与Tre组肾间质纤维化的程度均高于SOR组,肾功能具有先恶化后好转的趋势(P<0.05);与UUO组相比,Tre组肾间质纤维化程度有所减轻,肾功能好转趋势也较UUO组明显,其差异从第7天起具有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1ra可延缓梗阻性肾间质纤维化进程,这一作用可能与其抑制白细胞介素1的促纤维化作用有关。     

傣药雅盼对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的 观察傣药雅盼对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号转导通路的影响,从而探讨该药对肾间质纤维化抑制作用的可能机制.方法 120只雄性大鼠行单侧输尿管结扎建立UUO大鼠模型,生理盐水灌胃或给药28 d后收集血清检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),处死大鼠,取其肾组织行HE染色和Masson染色,免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad2、Smad7在肾组织的表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达.结果 傣药雅盼各剂量组能降低大鼠BUN、Scr水平,并减轻肾小管-间质炎性细胞及肾间质纤维化程度,同时使TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),而Smad7 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 傣药雅盼备浓度组均可以在一定程度抑制Smad2 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达,通过干预TGF-β1/Smads信号转导通路抑制了TGF-β1在肾组织的表达从而对UUO大鼠肾间质纤维化.