RCR Ribotying在细菌分子流行病学研究中的应用

细菌流行病学鉴定的分子标记技术迅速发展 ,常以染色体或染色体外ＤＮＡ为材料 ,产生特异的或随机的多态性。如ＤＮＡ限制性片段长度多态性分析 (ＲＦＬＰ)、脉冲凝胶电泳技术是非常有效的 ,但二者都受到耗时及需要昂贵设备等因素的限制 ,不适于临床实验 ;ｒＲＮＡ基因的ＤＮＡ探针技术也适于流行病学研究 ,但操作较烦琐 ;Ｓｔｕｌｌ[4 ] 等率先把ｒＲＮＡ基因的限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)分析应用于实践 ,并称为ｒｉｂｏｔｙｐｉｎｇ。利用ｒＲＮＡ为基础的广谱探针 ,分析Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交后呈现的染色体探针指纹谱 ,已被众多研…     

载脂蛋白E基因型在老龄人中频率分布及与痴呆发病关系

为了解中国正常老年人中ＡｐｏＥ基因型的分布情况，分析Ａｐｏ Ｅε４基因型与老年痴呆症状发生的相关性，我们随机选择８４例老龄人作对象，分离其白血细胞基因组ＤＮＡ，用ＰＣＲ技术扩增ＡｐｏＥ带有多态性位点的第四外显子片段，根据限制性酶切片段长度多态性分析方法检测其基因型。     

听力对噪声敏感与不敏感者随机扩增DNA多态性初步分析

目的探讨听力对噪声敏感者与不敏感者在ＤＮＡ水平是否存在差异。方法按病例对照的研究设计在噪声作业工人中收集典型的听力对噪声敏感者与不敏感者,采用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）指纹图技术分析ＤＮＡ的多态性,观察ＤＮＡ多态性在两组间分布的差异。结果１９名敏感工人与２０名不敏感工人的年龄、性别、噪声暴露水平和噪声作业工龄均衡,而敏感组工人的听力改变明显高于不敏感组。敏感组工人８００ｂｐ的ＲＡＰＤ扩增片段阳性出现的频率（１８／１９）明显高于不敏感组（１３／２０）,Ｐ＜００５,而１０００ｂｐＲＡＰＤ扩增片段的阳性分布频率在两组间无显著差异（１４／１９ｖｓ１８／２０）。结论噪声敏感个体和不敏感个体的ＤＮＡ存在差异,ＲＡＰＤ是寻找这种差异的途径之一。     

亚洲璃眼蜱基因组多态DNA的研究

我们首先报道了ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术研究微小牛蜱ＤＮＡ的多态性。本文则用３个引物＂Ｐｚ＂（ＣＧＧＣＣＣＧＧＴＡ）、＂Ｐｗ＂（ＣＧＧＣＣＣＣＧＧＴ）和＂Ｐｙ＂（ＣＴＧＣＡＧＧＡＣＡ）对亚洲璃眼蜱基因组ＤＮＡ作ＲＡＰＤ－ＰＣＲ，均能扩增出多态性ＤＮＡ图谱；各引物扩增的ＤＮＡ片段的分子大小是：＂ｐｚ＂为１３８０、１２３０、９５５、９１２、８７１、７９４、７４１、６６８、６４６、５６２、５３７、４４２；＂ｐｗ＂为９５５、７２４、６６８、５６２、５３７、４５７、２７９；＂Ｐｙ＂为１０７２、９１２、８３２、７９４、６１２、５８２、５６２、５３７、４２２、３８５。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术简便、快速，并能在ＤＮＡ水平上揭示其差异和进化关系，可发展成为理想的蜱类分类学技术之一。     

应用随意引物PCR技术克隆猪带绦虫特异的基因探针

筛选和克隆猪带绦虫基因组特异的ＤＮＡ片段作为探针，建立脑囊虫病的基因诊断方法。以一１９ｎｔ的寡核苷酸为探针，通过随意引物ＰＣＲ反应扩增猪带绦虫基因组ＤＮＡ，分离出数个不同大小的扩增片段。分别以其中０．７，０．８ｋｂ片段为探针作ＤＮＡ斑点杂交分析，证实此２片段为猪带绦虫基因组所共有，在人和猪基因组中未发现有同源序列存在。猪带绦虫基因组特异ＤＮＡ探针的分离和克隆将使猪带绦虫所致寄生虫病的基因诊断成为可能。     

AFLP技术及其应用

介绍扩增的片段长度多态性技术及其在分子流行病学中的应用，对近年来ＡＦＬＰ技术在几种病原菌的应用进行综述，并与其它分子流行病学方法进行比较。ＡＦＬＰ具有其它基因指纹图谱方法的优点，并且相对快速、简便，结果可重复，分辨力高。ＡＦＬＰ是一种基于ＰＣＲ的高分辨ＤＮＡ指纹方法，必将广泛应用于微生物的分型与鉴定。     

石棉及电焊烟尘相关肺癌组织K-ras基因突变的研究

为了解石棉及电焊烟尘相关肺癌的Ｋ－ｒａｓ基因突变情况,并与非职业肺癌的Ｋｒａｓ基因突变特点比较,进一步探讨石棉及电焊烟尘的致癌机理。收集８例非职业肺癌组织、９例石棉相关肺癌组织及４例电焊烟片段长度多态性分析,单链构象多态性分析及ＤＮＡ真接测序分析。     

用PCR—SSCP方法检测间皮瘤组织中p53基因点突变

为研究石棉纤维在人恶性间皮瘤病因学中的作用，检查了青石棉污染区１２例间皮瘤ＤＮＡ样品的ｐ５３基因点突变。应用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了ｐ５３基因５，６，７，８外显子的４个ＤＮＡ片段，结果显示：４例有异常移动的单链ＤＮＡ电泳带，其中２例位于外显子５，２例位于外显子６。提示：这些病例的ｐ５３基因存在点突变     

DNA指纹片段长度的计算方法

ＤＮＡ指纹实验得到的原始数据是各ＤＮＡ片段在凝胶上的迁移距离 ,而我们通常感兴趣的则是各ＤＮＡ片段的长度 ,因此需要通过迁移距离来计算其片段长度。由于ＤＮＡ片段越长 ,在凝胶上的迁移距离越短 ,将一组已知长度的标记 (ｍａｒｋｅｒ)在一块凝胶上电泳就为这块凝胶提供了校正的手段。如果将长度标记简单地用于鉴别与之迁移同样距离的其他片段 ,则几乎不存在什么问题。但如要估计与之迁移距离不同的其他片段的长度 ,则需要采用一些其他的计算方法。一、材料与方法本实验采用片段长度已知的标记λ ＤＮＡ/ＥＣｏＲⅠ ＨｉｎｄⅢ作为实…     

低密度脂蛋白受体基因多态性与血脂、肥胖及高血压的关系

低密度脂蛋白受体 (ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ ,ＬＤＬ Ｒ )是Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ和Ｂｒｏｗｎ等在研究家族性高胆固醇血症患者的发病机制时发现的。低密度脂蛋白受体基因突变可导致家族性高胆固醇血症[1] 。然而 ,低密度脂蛋白受体位点存在多种轻微变异的等位基因 ,这些轻微变异可能影响ＤＮＡ序列中的酶切位点 ,因而有可能用限制性片段长度多态性 (ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙ ｍｏｒｐｈｉｓｍ ,ＲＦＬＰ)的检测方法加以识别。近年来 ,对人群中ＬＤＬ Ｒ基因多态性…     

利用限制性片段长度多态性分析检测乙醛脱氢酶基因2的基因型

人类摄入酒精主要通过Ⅰ型酒精脱氢酶和乙醛脱氢酶共同催化。为建立乙醛脱氢酶基因２（ＡＬＤＨ２）的基因型检测方法，本研究应用限制性片段长度多态性分析法（ＲＦＬＰ－ＰＣＲ）测定ＡＬＤＨ２的基因型。根据ＡＬＤＨ２的基因序理资料，设计一含一个碱基替代的限制性内切酶ＭｂｏⅡ的可识别位点。随后ＤＮＡ模板在下列条件扩增；变性；９４，１ｍｉｎ，退火；５７℃，３ｍｉｎ，延伸；７２℃１ｍｉｎ。３５个循环。聚合酶链反应产     

地高辛标记布氏杆菌544ADNA探针的制备及其应用

作者应用自构键的ｐＢＣ_４重组质粒，经Ｋｐｎｌ和ＢａｍＨ_１双酶切回收０．２２ｋｂ的Ｂｒ．ａｂｏｒｔｕｓ５４４ＡＤＮＡ片段，将此片段纯化后采用地高辛标记方法制备探针。点杂交结果表明：此探针检测布氏杆菌ＤＮＡ的灵敏度达５ｐｇ，对中国１９型布氏杆菌ＤＮＡ杂交出现强的杂交信号而对５种革兰氏阴性菌ＤＮＡ以及人白细胞ＤＮＡ没有产生杂交反应，具有特异性强、敏感性高、简便易行等特点。为进一步用于实验室诊断人、畜布氏杆菌病和流行病学的调查提供了有效的手段。     

林县食管癌组织和非癌食 管组织差异DNA片段的克隆研究

目的寻找食管癌发生的相关基因，为食管癌易感个体的筛查和早期诊断提供分子标志物。方法对来源于食管癌高发区河南省林县的１２例配对食管癌组织和非癌食管组织ＤＮＡ，应用随机引物聚合酶链反应（ＡＰ－ＰＣＲ）技术分离差异ＤＮＡ片段，进行克隆、测序和序列分析。根据序列的酶切位点分析，选择ＤｒａⅠ和ＨｉｎｄⅢ内切酶，对配对的食管癌组织和非癌食管组织ＤＮＡ酶切，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析。结果１２例配对食管癌组织和非癌食管组织中，３例癌组织有１．０ｋｂ左右的差异随机扩增片段，而相应的非癌组织缺如。其中的１１Ｔ差异ＤＮＡ片断经测序和序列的同源性分析，基因文库内无同源序列。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交显示，配对的食管癌组织和非癌食管组织有明显差异。结论１１Ｔ差异ＤＮＡ片段是食管癌变过程中所发生的改变。是否为一个新的候选癌基因或癌基因标志物，需要进一步研究     

石蜡包埋尘肺病例肺癌组织DNAPCR产物的纯化

建立了石蜡包埋尘肺病例肺癌组织ＤＮＡ的ＰＣＲ产物的电泳纯化方法，解决了石蜡包埋尘肺组织ＤＮＡ纯化困难、降解严重所导致的聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）特异性差的问题，所得产物可应用于单链多态性分析（ＳｉｎｇｌｅＳｔｒａｉｎＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）和序列测定等分子生物学研究。     

石蜡包埋的石棉肺癌组织的基因组DNA的快速提取法

建立了从少量石蜡包埋的组织切片中快速提取石棉肺癌组织中的基因组ＤＮＡ的水煮脱蜡法，克服了传统的二甲苯脱蜡法的周期长、成本高和毒性大的缺点。所得到的基因组ＤＮＡ中，长片段占较大的比例，总量可足够用作１０～２０次ＰＣＲ扩增反应的模板，并可用于其它分子生物学研究     

鼠疫PCR技术的研究进展

多聚酶链式反应（ＰＣＲ），是近年发展起来的一种体外扩增特异ＤＮＡ片段的技术。借助ＰＣＲ，可在几个小时内，将ＤＮＡ序列扩增２×１０５～２×１０６倍［１］。需要扩增的ＤＮＡ样品可以是纯净的，也可以是多种生物物质的异常复杂的混合物的一小部分，这种ＤＮＡ可以...     

中国七日热型、澳洲型钩端螺旋体分子流行病学调查

确定耕牛是否是七日热型,澳洲型钩端螺旋体的传染源。方法自钩端螺旋体病患者血液及耕牛尿中分离出的１２株七日热型、澳洲型钩端螺旋体野生株染色体ＤＮＡ用限制性内切酶ＥｃｏｒⅠ酶切后,进行染色体ＤＮＡ限制性内切酶图谱及１６Ｓ＋２３ＳｒＲＮＡ基因限制性内切酶片段长度多态性分析。结果自然 钩端螺体病患者血液及耕牛尿中分离的同一血清型的钩端螺旋体野生株的染色体ＤＮＡ酶谱及核糖核酸型相同。血清型不同的钩端螺旋体型     

甲苯的生物监测和人类DNA多态性

甲苯的生物监测和人类ＤＮＡ多态性ＴｏｓｈｉｈｉｒｏＫａｗａｍｏｔｏｅｔａｌ．本文研究了接触甲苯工人的醛脱氢酶２（ＡＬＤＨ２）遗传多态性对饮酒量和甲苯代谢的影响。ＡＬＤＨ２的基因型分成三组，分别是正常纯合子基因型ＡＬＤＨ２（ＮＮ）、无活性纯合子基因型（...     

应用连接介导PCR法于线粒体DNA的测序

目的 简化ＤＮＡ测序方法，优化条件，以适用于线粒体ＤＮＡ的测序。方法 应用Ｍａｘａｍ Ｇｉｌｂｅｒｔ化学断反应和连接介导ＰＣＲ（Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａｔｅｄ ＰＣＲ，ＬＭＰＣＲ）来测定线粒体ＤＮＡ的序列。结果 读取的１４０ｂｐ的核苷酸序列，输入基因库，确定为线粒体ＤＮＡ重链８０５１～８１９０片段的序列，符合率为７０．７％（９９／１４０）。结论 该方法改进的成功，对进一步进行线料体ＤＮＡ氧化损     

人类免疫缺陷病毒1感染相关的基因多态性在中国汉族人群中的分布

目的：调查中国汉族人群中人类免疫缺陷病毒１（ＨＩＶ－１）感染相关的ＣＣＲ５Δ３２、ＣＣＲ２－６４１和ＳＤＦ１－３‘Ａ等位基因突变频率和多态性的特点。方法：以１２５１例汉族人群为研究对象,应用ＰＣＲ、ＰＣＲ／ＲＦＬＰ（聚合酶链反应／限制性片段长度多态性分析）和ＤＮＡ直接测序等方法进行检测,并用统计学方法进行分析。结果：发现中国汉族人群中存在ＣＣＲ５Δ３２等位基因突变（均为杂合子基因型）,突变频率为１