溶血磷脂酸及其受体和IL-6 IL-8在乳腺癌进展中的表达变化与意义

  目的  探讨溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid, LPA)及其受体和IL-6与IL-8在乳腺癌进展中的表达及临床意义。  方法  采用半定量RT-PCR方法检测乳腺肿瘤组织和瘤旁组织中LPA受体的表达水平。采用LPA生化测定法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测乳腺肿瘤患者和健康妇女的血浆LPA、IL-6和IL-8水平。  结果  术后复发转移乳腺癌患者血浆LPA、IL-6、IL-8的表达水平均显著高于局限期乳腺癌和良性乳腺肿瘤患者及健康妇女(P均 < 0.05);LPA1在乳腺癌组织中的表达水平显著高于良性乳腺肿瘤组织和正常乳腺组织(P < 0.05);乳腺癌患者血浆LPA水平与IL-6和IL-8水平均呈正相关(P均 < 0.01)。  结论  LPA对乳腺癌患者内源性IL-6和IL-8的表达可能具有上调作用, 检测LPA、IL-6和IL-8的表达水平对乳腺癌的转移可能有一定的预测作用, 尤其是骨转移。      

胃癌组织中CD1a+树突状细胞密度和血管内皮生长因子表达及其相关性

  目的  探讨胃癌组织中CD1a+树突状细胞密度和VEGF表达及其与胃癌临床病理特征间的关系, 并探究其在胃癌组织中表达的相关性。  方法  采用免疫组织化学双染法检测60例胃癌组织及相应癌旁组织中CD1a+DCs、VEGF的表达。  结果  胃癌组织中CD1a+DCs浸润密度略低于癌旁组织(P > 0.05), 但差异无统计学意义; 胃癌中CD1a+DCs密度与浸润深度、肿瘤分化、TNM分期程度有关(P < 0.05)。胃癌组织VEGF的阳性表达率明显高于癌旁组织(P < 0.01), 胃癌中VEGF的表达与肿块大小(P < 0.05)、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期程度有关(P < 0.01)。CD1a+DCs与VEGF表达呈负相关(r=-3.08, P < 0.01)。  结论  CD1a+DCs随着胃癌恶性程度增加和肿瘤的进展而减少; VEGF在胃癌组织中高表达, VEGF的表达随着胃癌的进展而增高, 对其表达与检测有助于判断胃癌的预后。      

大细胞肺癌中VEGF的表达与DCs Treg分布的相关性研究

  目的  探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在大细胞肺癌（large cell lung cancer, LCLC）肿瘤组织中的表达及树突状细胞（dendritic cells, DCs）、调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）在肿瘤组织和癌旁正常组织中的分布情况, 探讨VEGF的表达情况、DCs与Treg的分布情况之间的相关性, 及DCs、Treg分布与患者临床特征间的关系。  方法  收集天津医科大学附属肿瘤医院自2000年5月至2010年10月手术切除的原发性LCLC标本75例, 其中27例癌旁正常组织作为对照。采用免疫组织化学法检测LCLC标本中VEGF的表达、未成熟DC细胞（CD1a+DC）、成熟DC细胞（CD83+DC）及Treg细胞（Foxp3+T细胞）的分布, 并分析它们之间的相关性及与患者临床特征的关系。  结果  75例癌组织中VEGF的阳性率为94.7%（71/75）; CD1a+ DC、CD83+DC在癌组织中的分布均显著低于癌旁正常组织（P=0.005、P < 0.001）; Foxp3+T在癌组织中的分布显著高于癌旁正常组织（P < 0.001）。CD83+DC的分布在VEGF阳性组明显低于VEGF阴性组（χ2=7.802, P=0.020）; CD1a+DC与Foxp3+T的分布呈正相关（r_s=0.246, P=0.033）。CD83+DC的分布在不同T分期间存在差异, 随着T分期增高其数量降低（χ2=11.043, P=0.011）。  结论  LCLC组织中VEGF高表达与成熟DC数量的减少相关, 而未成熟DC的分布与Treg细胞的分布呈正相关。      

IL-23和IL-17在结直肠癌患者中的表达及意义

  目的  检测结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中IL-23、IL-17的含量,探讨其与临床病理特征的相关性。  方法  24例对照组和56例结直肠癌患者组。用ELISA法检测患者和对照组外周血及患者正常黏膜组织与肿瘤组织培养液中的IL-23、IL-17水平。  结果  结直肠癌患者外周血和肿瘤组织培养液中IL-23和IL-17水平分别高于相应的对照组（P < 0.01）和正常黏膜组（P < 0.05）。结直肠癌患者外周血中IL-17水平与淋巴结转移情况及TNM分期相关（P < 0.05）,但IL-23水平与患者各项临床病理参数无相关性（P>0.05）。肿瘤组织培养液中IL-17水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及TNM分期相关（P < 0.05）,而IL-23水平仅与TNM分期相关（P < 0.05）。  结论  IL-23和IL-17可能参与了结直肠癌进展的免疫病理过程。      

肺癌患者外周血调节性T细胞和IL-10的检测及其意义

  目的  探讨肺癌患者外周血调节性T细胞和IL-10检测的诊断意义及与临床特征相关性。  方法  采用流式细胞仪检测60例肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞的表达水平, 同时采用ELISA法检测IL-10的表达水平。并随机选30例健康体检者作为对照组。  结果  肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平明显高于健康对照组（P < 0. 05）; CD4+CD25+T细胞与IL-10的检测结果呈正相关; 肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平与临床分期有关（P < 0. 05）, 与病理类型无关（P>0. 05）。  结论  检测肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平, 有助于肺癌患者病情的评估和治疗。      

食管癌组织中共刺激分子与白介素-10 mRNA的表达

目的研究食管癌组织中共刺激分子CD80、CD86 mRNA的表达以及与TGF-β1、IL-10 mRNA表达水平的关系,探讨食管癌组织中树突细胞免疫功能降低及食管癌发生免疫逃逸的原因。方法应用逆转录聚合酶链反应(PT-PCR)技术,检测62例食管癌患者癌组织中CD80、CD86及TGF-β1、IL-10 mRNA的表达。以16例正常食管黏膜组织作为对照。结果食管癌组织中,CD80、CD86 mRNA的表达分别为0．631±0．212和0．530±0．210,均低于正常食管黏膜组织(P值分别为0．038和0．0002);Ⅰ、Ⅱ期患者高于Ⅲ、Ⅳ期患者(CD80:P=0．029;CD86:P=0．045);高中分化者高于低分化者(CD80:P=0．046;CD86:P=0．044)。食管癌组织中,TGF-β1、IL-10的mRNA表达分别为1．273±0．086和1．182±0．073,均高于正常食管黏膜组织(P值均为0．0001),且分别与CD80、CD86的mRNA表达呈负相关(P=0．0001)。结论食管癌组织中,CD80、CD86 mRNA的表达降低与TGF-β1、IL-10 mRNA的高表达呈负相关,癌组织内TGF-β1、IL-10 mRNA的表达增强是导致CD80、CD86 mRNA表达降低的重要影响因素,可能是引起DC功能缺陷和食管癌细胞发生免疫逃逸的原因之一。     

子宫内膜癌组织和血清中的CD26表达及其诊断价值

  目的  探讨人正常子宫内膜增生期、分泌期和子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)的病理不同分级组织中的CD26表达及血液中可溶性CD26(soluble CD26，sCD26)表达对EC发生、发展的诊断价值。  方法  收集2014年1月至2015年12月南通大学附属医院行诊断性刮宫或行手术治疗患者的子宫内膜组织标本，其中正常子宫内膜增生期和分泌期标本各30例、Ⅰ型EC的G1、G2、G3级组织标本各40例。应用免疫组织化学法检测组织中的CD26表达和验证其表达水平后，采集2016年1月至2017年9月经门诊体检的健康育龄女性和住院治疗Ⅰ型EC患者的血液标本，其中增生期及分泌期各20例、Ⅰ型EC的G1、G2级各20例、G3级15例。ELISA法检测其血清中sCD26表达。  结果  免疫组织化学法检测结果显示正常子宫内膜组织中分泌期的CD26表达水平>增生期(P < 0.05)；Ⅰ型EC的G3级组织中的CD26表达水平>G2级>G1级(P < 0.05)。ELISA结果显示sCD26与Ⅰ型EC病理分级呈正相关(P < 0.05)。  结论  Ⅰ型EC组织及血清中的CD26表达水平与疾病进展呈正相关，血清中sCD26表达可作为EC诊断的标记物。      

抗CD47单克隆抗体对卵巢癌细胞靶向治疗的体外研究

  目的   探讨抗CD47单克隆抗体在体外对巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞作用的影响。  方法   收集天津医科大学附属肿瘤医院2011年6月至2011年12月手术切除的卵巢组织样本45例(包含卵巢癌组织样本39例, 正常卵巢组织样本6例), 获得的组织细胞通过流式细胞术分析CD47的表达水平, 通过细胞功能学实验观察抗CD47单克隆抗体在体外对小鼠巨噬细胞吞噬卵巢癌细胞的靶向治疗作用。  结果   流式细胞术分析显示, 卵巢癌细胞系SKOV-3细胞和卵巢癌组织细胞中CD47表达水平均明显高于正常人卵巢上皮细胞, 差异具有统计学意义(P < 0.01), 且与疾病的分化程度相关(P < 0.05)。细胞功能学实验结果显示, 抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌细胞的吞噬作用, 各实验组(1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)分别较空白对照组吞噬指数显著增加, 并且随抗体浓度的增加吞噬指数呈浓度依赖性, 差异均具有统计学意义(P < 0.01)。统计学分析显示, 10μg/mL浓度组吞噬指数达到峰值, 同20μg/mL浓度组吞噬指数无显著性差异(P > 0.05)。  结论   CD47高表达于卵巢癌组织细胞, 且与组织分化程度相关。抗CD47单克隆抗体在体外可促进巨噬细胞对卵巢癌肿瘤细胞的吞噬作用, 为卵巢癌的靶向治疗提供了实验依据。      

食管癌及其区域淋巴结组织树突状突细胞与Th1/Th2细胞因子表达的研究

目的:检测食管癌组织及其区域淋巴结中树突状淋细胞(DC)及Th1/Th2细胞因子的表达,探讨食管癌发生及与免疫逃逸的关系.方法:采用流式细胞术检测57例食管癌组织、癌旁组织,16例食管炎性组织,62枚区域淋巴结中DC CD1a、CD83及共刺激因子CD80、CD86的表达,ELISA法检测组织匀浆中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ,Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平.结果:57例食管癌组织中CD1A、CD83、CD80及CD86的表达分别为7.34±1.59、2.87±0.55、5.75±1.06和27.34±7.21,显著低于炎性、正常和癌旁组织;癌组织中IL-2、IFN-γ表达水平分别为8.94±1.72、9.34±2.16,低于炎性、正常和癌旁组织;IL-4、IL-10的水平分别为5.24±0.35、5.3±1.02,高于炎性、正常和癌旁组织(P<0.05,P<0.01).区域淋巴结组织中CD1A、CD83、CD80及CD86的表达在有转移癌者明显低于无转移癌者;IL-2、IFN-γ表达水平降低;IL-4、IL-10的水平增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论:食管肿瘤组织和区域淋巴结内DC的减少及Th1/Th2失调,可能是食管肿瘤发生免疫逃逸的原因.     

miR-30通过调节CD90表达抑制肝细胞肝癌

  目的  miRNA能通过转录后调节靶基因的表达量,并在致癌过程中发挥抑癌或促癌作用。研究发现miR-30家族在人类肿瘤中起着重要作用,并参与维持干细胞特性的上皮细胞间质化过程,本研究主要识别miR-30家族与肝细胞肝癌的关系。  方法  应用qRT-PCR实验方法检测93例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁正常组织中miR-30c,miR-30b和miR-30e表达水平,另对121例肝细胞肝癌患者癌组织进行miR-30家族的表达及CD90免疫组织化学表达检测,分析miR-30家族与CD90在肝细胞肝癌中的相关性。  结果  本研究发现miR-30c(P < 0.001)、miR-30b(P=0.004)和miR-30e(P < 0.001)与癌旁正常组织相比,癌组织中表达显著下调。CD90蛋白在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.007)。MiR-30c(P=0.032)和miR-30e(P=0.015)在CD90阴性表达的患者中表达水平显著高于CD90阳性表达的患者。  结论  miR-30家族在肝细胞肝癌中可作为抑癌miRNA,并通过调节CD90蛋白来发挥这一作用。      

幽门螺杆菌感染对胃癌患者外周血MODCs功能的影响

  目的   分析Hp阳性和Hp阴性的胃癌患者外周血单核细胞来源树突状细胞（MODCs）功能的差异性及其临床意义。   方法   用尿素14C呼气试验对解放军第一七四医院2011年1月至2012年10月收治的84例胃癌患者进行Hp感染状态鉴定,分别采集Hp阳性和阴性胃癌患者外周血,分离外周血单个核细胞,采用经典方法（rhGM-CSF、rhIL-4联合rhTNF-α）诱导产生DCs,采用流式细胞仪检测DCs表型,采用LDH释放法检测DCs致敏T细胞对胃癌细胞的毒性杀伤作用,采用ELISA方法检测细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平。   结果   两组MoDCs成熟过程形态变化无差异,Hp阳性组MoDCs表面标记分子CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR平均表达百分率均高于Hp阴性组,其中CD80、CD83、CD86的表达水平差异有统计学意义,CD1a、HLA-DR差异无统计学意义。Hp阳性组DCs致敏T淋巴细胞对胃癌细胞杀伤率和IL-12、IFN-γ的分泌水平均高于Hp阴性组（P < 0.05）。   结论   Hp感染状态不影响胃癌患者外周血MoDCs成熟过程形态变化,Hp感染的胃癌患者MoDCs成熟和活化水平更高      

CD151和MMP-7在结直肠癌中的表达及其临床意义

  目的  探讨人类白细胞分化抗原151（CD151）和基质金属蛋白酶-7（MMP-7）在结直肠癌中的蛋白表达,及其与结直肠癌发生、发展、转移的关系。  方法  采用免疫组织化学染色法检测结直肠癌组织中CD151和MMP-7的蛋白表达,阐明二者与患者临床病理特征之间的关系。  结果  CD151和MMP-7在大肠正常组织中表达的阳性率分别为5%（1/20）和15%（3/20）,在结直肠癌组织中表达的阳性率分别为78%（39/50）和72%（36/50）,CD151和MMP-7在大肠正常组织和结直肠癌组织中的表达差异有统计学意义（χ2=31.086,P<0.05;χ2=18.811,P<0.05）。两种蛋白的阳性表达率与结直肠癌患者的年龄、性别、部位无关联（P>0.05）,但与淋巴结转移、浸润深度、远隔器官转移、肿瘤分化程度、Dukes分期有密切关系（P<0.05）。结直肠癌中CD151和MMP-7两种蛋白的表达强度具有相关性（r_s=0.314,P=0.026）。  结论  CD151和MMP-7在结直肠癌组织中异常高表达并与其发生、发展及浸润转移有密切关系,联合检测可作为判断结直肠癌生物学行为的重要指标。      

榄香烯对肿瘤恶病质小鼠细胞因子TNF-ɑ IL-6和骨骼肌UPP信号通路的调节作用

  目的  研究通过建立肿瘤恶病质小鼠模型,研究榄香烯对肿瘤恶病质骨骼肌萎缩的缓解作用及其可能的机制。  方法  C57BL/6小鼠皮下注射Lewis肺腺癌肿瘤细胞建立肿瘤恶病质模型。随机分为健康组、恶病质模型组、醋酸甲地孕酮组和榄香烯组。榄香烯口服乳等治疗14 d后,测量小鼠每日饮食量、肿瘤重量、去瘤体重、腓肠肌和胫骨前肌重量、肝脏重量,H & E染色检测腓肠肌肌丝横截面积,ELISA法检测血清IL-6和TNF-α水平,Western Blot检测腓肠肌中MAFBx、MURF-1的蛋白表达水平。  结果  榄香烯组小鼠饮食量、去瘤体重及腓肠肌加胫骨前肌总重量较恶病质模型组增加,腓肠肌横截面积较恶病质模型组面积增大,IL-6及TNF-α水平较恶病质模型组明显下降,MAFBx、MURF-1的蛋白表达水平明显低于恶病质模型组（P < 0.05）。同时,相对于醋酸甲地孕酮组,榄香烯组小鼠腓肠肌横截面积增大,IL-6及TNF-α水平降低,MAFBx、MURF-1的蛋白表达受到抑制（P < 0.05）。  结论  榄香烯可减轻肿瘤恶病质的骨骼肌萎缩,其机制可能与减少小鼠的能量消耗、降低血清TNF-α和IL-6水平、降低骨骼肌MAFBx、MURF-1的蛋白表达水平、调节UPP信号通路的活性有关。      

骨肉瘤CD133 CD117 Ki-67的表达及与临床病理因素和危险度的相关性研究

  目的  研究骨肉瘤组织CD133、CD117及Ki-67在蛋白水平的表达情况及其与临床病理因素和危险度的关系。  方法  应用免疫组织化学PV-9000二步法检测55例骨肉瘤组织标本中CD133、CD117和Ki-67的表达,并与临床病理学指标和术后无瘤生存期进行比较分析,对照组为20例骨软骨瘤。应用SPSS 17.0软件统计分析,检验标准为P＜0.05具有统计学意义。  结果  骨肉瘤组织CD133、CD117、Ki-67蛋白表达阳性率显著高于良性的骨软骨瘤组织,差异有统计学意义（分别为P=0.016、P=0.008、P＜0.001）;CD133或Ki-67蛋白阳性表达骨肉瘤患者平均生存时间及平均转移时间短于CD133或Ki-67蛋白阴性骨肉瘤患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;CD133、Ki-67在外科分期和远处转移对骨肉瘤患者预后有影响,其中CD133是外科分期及远处转移而影响骨肉瘤患者预后的独立因素。  结论  CD133和Ki-67表达可能在骨肉瘤发生、发展过程中起重要作用,有望成为判断其预后的指标。      

肝细胞肝癌NTS的表达与炎症微环境形成和肿瘤上皮间质转化及预后的相关性研究

  目的  利用免疫组织化学染色法(IHC)检测肝细胞肝癌(HCC)中神经降压素(NTS)的表达，并探讨HCC中NTS/IL-8通路的激活与炎性微环境形成和肿瘤上皮间质转化(EMT)及临床预后的关系。  方法  收集本院2007年11月至2009年7月期间进行部分肝切除术后确诊为肝细胞癌(HCC)、随访资料完整的肝癌患者64例。采用IHC法检测肝癌及相应癌旁正常组织中NTS，多种炎症因子和EMT相关蛋白的表达情况，包括IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、E-cadherin，β-Catenin和Vimentin的表达水平，并比较不同NTS表达对HCC患者总生存时间(OS)的影响。  结果  NTS在HCC中表达率为17.19%(11/64)，NTS阳性HCC标本中IL-8阳性率较NTS阴性标本明显增加(90.91% vs. 41.17%)，二者表达呈正相关(R2=0.298，P=0.006)。NTS和IL-8双阳性(NTS+ IL-8+)HCC标本中，VEGF和MMP-9表达显著增加。同时，NTS+IL-8+HCC细胞EMT特征明显，表现为E-Cadherin表达降低和Vimentin表达升高。在肿瘤中NTS和IL-8共表达与患者的临床疗效呈正相关，术后NTS+IL-8+HCC患者的死亡率比非NTS和IL-8共表达的患者高2.5倍(P=0.022)。NTS+IL-8+HCC患者的OS显著缩短[(24.65±4.45)个月vs.(75.79±16.32)个月，P=0.013)]，而死亡风险明显升高，其预期危险比(HR)为3.457。  结论  在部分HCC中存在NTS/IL-8炎症通路的异常活化，NTS的高表达与炎症微环境形成和肿瘤EMT与肝癌患者预后较差密切相关。      

附子多糖诱导肝癌患者外周血树突状细胞分化成熟的实验研究

  目的  探讨附子多糖是否能在体外诱导肝癌患者外周血单核细胞向树突状细胞分化并成熟表达细胞表面分子, 为进一步研究附子多糖抗肿瘤作用机制奠定基础。  方法  取肝癌患者外周血体外分离单个核细胞, 去除淋巴细胞后进行培养, 实验组加入低、中、高3种不同浓度的附子多糖, 另设加入GM-CSF、IL-4和TNF-α的阳性对照组和不加任何诱导剂的阴性对照组, 共培养10d。其间进行细胞计数、倒置显微镜下动态观察细胞形态、MTT法细胞活力检测、扫描电镜细胞成像、流式细胞仪检测细胞表型(CD80、CD83、CD86)等检测。  结果  中浓度附子多糖组能够诱导肝癌患者外周血单核细胞分化为树突状细胞, 并促进细胞增殖, 高度表达CD80、CD83、CD86等共刺激分子和表面标记物, 与阳性对照组相比, 两组结果比较无明显差异, 与高、低浓度附子多糖组和阴性对照组结果相比有显著差异。  结论  适当浓度附子多糖能够在体外有效诱导肝癌患者外周血单核细胞分化为树突状细胞并表达成熟表型, 从而作为第二信号活化T淋巴细胞, 激发肿瘤免疫。