小鼠病毒性心肌炎与心肌细胞凋亡的关系

实验通过给５周龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ｂ３ｍ病毒（ＣＶＢ３ｍ），诱发小鼠急性病毒性心肌炎（ＶＭＣ），感染病毒９天后处死小鼠，利用光镜、电镜及原位末端标记法对心肌组织进行检测，结果显示：ＶＭＣ检出率为９３．３３％，心肌细胞凋亡阳性率为８０．００％，凋亡细胞多分布于心内膜下、心外膜下心肌组织，血管内皮细胞和坏死病灶周围，提示细胞凋亡可能是小鼠ＶＭＣ的发病机制之一。     

病毒性心肌炎心肌细胞凋亡机制研究

在病毒性心肌炎的发病机制及病理生理过程中，关于心肌细胞是否发生凋亡，以及凋亡的诱导原因和重要程度，一直众说纷纭，没有确切定论。本文参考近年来一些文章的实验结果，介绍了病毒性心肌炎发生凋亡的情况，以及诱导凋亡出现的机制，主要概括为：在病毒的刺激下，炎症细胞分泌细胞因子，进而通过胞外受体，信号转导进入心肌细胞激活凋亡通路；此外，病毒直接侵入心肌细胞，诱导细胞凋亡发生。     

病毒性心肌炎心肌超微结构及细胞凋亡的电镜观察

目的研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌超微结构改变及细胞凋亡的形态学变化。方法本实验在接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC动物模型的基础上,用光学显微镜及电子显微镜观察心肌细胞的病变及心肌细胞凋亡。结果研究发现实验组小鼠在接种病毒5 d后光镜或电镜下可见心肌病变及炎细胞浸润,7~9 d病变达高峰,35 d时病变基本恢复。VMC小鼠在接种病毒后7~9d,电镜下可见心肌细胞呈凋亡样改变,并可见凋亡小体。结论实验组小鼠在接种CVB3后可引起VMC,VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象。     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎发生发展的关系

通过对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种ＣＶＢ３ｍ后３，６，９，１２，１５，３０天批随机处死小鼠，取心脏进行检测发现，感染后９－１５天，病毒性心肌炎检出率可达９２．３０％。感染后３－９天，心肌中可分离出病毒，而病毒核酸可持续存在于感染后３个。应用电镜，原位末端标记法及免疫组化法检测发现：ＶＭＣ鼠心肌中可见心肌细胞和血管内皮细胞凋主ＴＧＦ－β１和Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。     

小鼠病毒性心肌炎与细胞凋亡及氧自由基的关系

采用电镜技术及原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）对柯萨奇病毒Ｂ３（ＣＶＢ３）心肌炎小鼠不同时期心肌组织中细胞凋亡进行检测,并采用硫代巴比妥酸法检测外周血丙二醛（ＭＤＡ）。ＣＶＢ３感染１００只雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,ＶＭＣ发病率为８６％。各期病鼠心肌中均见到凋亡细胞,包括心肌细胞、血管内皮细胞及间质细胞。ＴＵＮＥＬ法检出率为７８．９４％,中、重度ＶＭＣ小鼠中阳性检出率明显高于轻度ＶＭＣ小鼠（Ｐ〈０．０５）。     

阿托伐他汀对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响研究

目的:阿托伐他汀钙(atorvastatin)对减少小鼠病毒性心肌炎(VMC)心肌细胞凋亡的影响.方法:4周龄小鼠146只按随机数字法分为4组:正常对照组(正常组,n=18);病毒性心肌炎组(VMC组,n=60);阿托伐他汀钙药物对照组(对照组,n=18);阿托伐他汀钙治疗病毒性心肌炎组(VMC药物治疗组,n=50).VMC组及VMC药物治疗组小鼠腹腔接种柯萨奇病毒,正常组及对照组未注射病毒,VMC组及VMC药物治疗组小鼠给予阿托伐他汀钙,连续用药2周.用药后3、7、10、14、21、30天,苏木素-伊红染色观察心肌组织炎症浸润程度,电镜观察心肌胶原纤维及各种细胞器的变化.缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况.反转录酶-聚合酶连锁反应(RT-PCR)及蛋白质印迹方法检测心肌脂肪酸合成酶(Fas)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达水平.结果:VMC组比VMC药物治疗组的30 天累计生存率低,差异有统计学意义(P=0.008).VMC药物冶疗组比VMC组在第10、14、21、30天的心肌病理组织学积分均减少,差异有统计学意义(P＜0.05).VMC药物治疗组比VMC组心肌损伤的病灶数量少,心肌线粒体和肌浆网改变也较同期VMC组轻.第14、21天VMC药物治疗组比VMC组凋亡指数降低,差异有统计学意义(P＜0.05).VMC组比正常组Fas mRNA和蛋白的表达均增加,VMC药物治疗组比VMC组Fas mRNA和蛋白的表达均减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:阿托伐他汀钙改善VMC小鼠生存率,改善组织病理学表现,其机制可能与通过下调Fas转录及表达,从而抑制心肌细胞凋亡有关.表明阿托伐他汀钙对VMC小鼠有明显的保护作用.     

小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡相关蛋白的表达

目的 探讨嗜鼠心肌Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ｂ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）诱导的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠病毒性心肌炎（ＶＭＣ）细胞凋亡的机制。方法 给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种０．１ｍｌ１００ＴＣＤ５０ＣＶＢ３ｍ，感染后批断脊处死小鼠，应用双重荧光染色技术、原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和共聚焦显微镜对小鼠心肌细胞凋亡及部分相关蛋白表达进行检测。结果 ＣＶＢ３ｍ可诱发小鼠ＶＭＣ。感染病毒后９～１２ｄ病变达到高峰，检出率达１     

中药芪芍五味合剂对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡和坏死的影响

取 2 4 0只 4周龄 Balb/ c雄性小鼠 ,随机等分为 6组 (每组 4 0只 ) ,即 :正常对照组 (A组 )、中药对照组 (B组 )、病毒对照组 (C组 )、中药治疗组 (D组 )、维生素 C治疗组 (E组 )、病毒唑治疗组 (F组 )。 A、B两组每只小鼠均腹腔接种 0 .1ml不含病毒的 Eagle's液 ,C～F组每只小鼠服腔接种 0 .1ml10 7.5TCID/ ml的柯萨奇 B3(CVB3)病毒液。根据分组分别给予不同的药物治疗。结果 :病毒性心肌炎时心肌细胞的凋亡率和坏死率均显著增加。心肌细胞凋亡高峰在CVB感染后 7～ 10天 ,而心肌坏死高峰出现在 CVB3感染后 14天 ,并且与组织形态学观察一致。应用中药黄芪、赤芍治疗后 ,心肌细胞凋亡率和坏死率均显著降低 (P <0 .0 5 ) ,维生素 C和病毒唑均可降低心肌细胞坏死率 ,但对心肌细胞凋亡影响不大。 CVB感染 3～ 7天内 ,各感染组心肌细胞凋亡率和坏死率均与心肌内病毒滴度呈正相关 (r =0 .76、P <0 .0 1,r=0 .5 4、 P <0 .0 5 ) ;而感染 10～ 30天 ,凋亡率及坏死率与病毒含量无相关性。各感染组心肌细胞凋亡率与坏死率均与心肌病理积分呈正相关 (r=0 .5 5、P <0 .0 5 ,r=0 .76、P<0 .0 1)。中药黄芪、赤芍、五味子可明显减轻病毒性心肌炎小鼠的病理损害程度 ,显著降低病毒性心肌炎心肌细胞凋亡率和坏死率 ,对     

重组人硫氧还蛋白对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨重组人硫氧还蛋白（rhTRX）对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法选用Balb／c小鼠23只，随机分为3组：对照组、硫氧还蛋白（TRX）保护组、病毒感染组。TRX保护组、病毒感染组给予腹腔注射100TCID5D柯萨奇B3病毒（CVB3）0．1ml，TRX保护组同时给予尾静脉注射rhTRX（2ml／kg），病毒感染组同时给予生理盐水作对照。7d后处死小鼠，光镜下观察心肌病理形态学变化，TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡，免疫组化法检测Fas、FasL蛋白的表达。结果光镜下可见病毒感染组小鼠出现局灶性心肌坏死和炎细胞浸润．对照组和TRX保护组心肌细胞未见异常：TUNEL染色发现病毒感染组小鼠心肌细胞凋亡百分比明显高于对照组和TRX保护组，差异有统计学意义（P〈0．01）；免疫组化检测发现病毒感染组Fas和FasL的表达明显高于对照组和TRX保护组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TRX通过降低Fas、FasL蛋白的表达，抑制细胞凋亡，从而减轻心肌细胞的损伤。     

急性病毒性心肌炎小鼠心肌中Calpain mRNA表达与心肌细胞凋亡的关系研究

目的检测CMpmn mRNA在柯萨奇病毒B3（Coxsackievirus B3,CVB3）急性心肌炎小鼠心肌组织中的表达,并分析其与心肌细胞凋亡的关系。方法以CVB3单次感染Balb／c小鼠建立急性病毒性心肌炎（n=10）模型,同时设立药物干预组（n=12）及药物对照组（n=10）;同期小鼠腹腔无菌注射等剂量不含病毒的DMEM液作为正常对照组（n=8）。以缺口末端标记法（TUNEL）检测各组心肌细胞凋亡情况,计数凋亡率。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测小鼠心肌组织中Calpain-1及Calpain-2 mRNA的表达。结果急性病毒性心肌炎组较正常对照组及药物对照组心肌组织内Calpain-1（P=0．02及P=0．04）和Calpain-2（P〈0．01及P=0．02）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦增高（P值均〈0．01）;药物对照组与正常对照组心肌组织内Calpain-1（P〉0．05）和Calpain-2（P〉0．05）mRNA及心肌细胞凋亡率均没有统计学差异（P〉0．05）;药物干预组较正常组心肌组织内Calpain-1（P〈0．01）及Calpain-2（P〈0．01）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高（P〈0．01）;药物干预组较急性病毒性心肌炎组心肌组织内Calpain-1（P=0．04）及Calpain-2（P〈0．01）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高（P〈0．01）。各实验组小鼠心肌组织中calpain-1及Calpain-2m RNA的表达水平分别与心肌细胞的凋亡呈正相关。结论柯萨奇B3病毒通过激活心肌组织内Calpain,导致心肌细胞的凋亡,从而参与病毒性心肌炎的发生。     

小儿病毒性心肌炎75例临床分析

目的 探讨小儿病毒性心肌炎的临床特点、治疗方法。方法 对该院1994年至1998年诊断为病毒性心肌炎的75例患者的临床资料进行回顾性分析。结果 75例全部治愈。结论 确诊需结合临床和辅助检查,治疗应采取综合措施,必要时使用激素、血管活性药物。     

病毒性心肌炎患儿脂质过氧化改变及抗氧化药物作用的研究

对62例病毒性心肌炎（VMC）患儿进行血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及肌酸激酶心肌同功酶（CK－MB)检测,并以超声心动图测定其射血分数（EF）。结果示VMC患儿发病1周内MDA升高,SOD下降,MDA与CK－MB呈正相关,与EF呈负相关;SOD与CK－MB呈负相关,与EF呈正相关。经大剂量维生素C治疗后,MDA和SOD于4－6周恢复正常。体外实验发现,维生素C可增强过氧化氢（H2O2）损伤心肌细胞的活力,减少乳酸脱氢酶（LDH）释放和MDA产生,维持SOD水平;参麦注射液（SMI）的作用优于维生素C。认为测定脂质过氧化水平有助于VMC患儿的病情评价,SMI和维生素C对氧自由基损伤心肌细胞有保护作用,SMI疗效优于维生素C。     

病毒性心肌炎患儿肾上腺皮质激素治疗前后血清抗心磷脂抗体的变化及意义

为了解病毒性心肌炎（VMC）患者抗心磷脂抗体（ACA）变化与心脏损害的关系，以及肾上腺皮质激素对ACA免疫球蛋白G（IgG)的影响，进行了动物实验和临床研究，将160只小鼠分为四组，A组不感染病毒，B组感染柯萨基病毒B3（CoxB3),C组感染CoxB3病毒早期加强的松，D组感染CoxB3病毒后期加强的松，测定其血清中ACAIgG。将92例VMC患儿分为常规治疗组和激素治疗组，两组治疗前均测定血清ACAIgG，心电图，肌酸激酶同工酶（CK－MB）和心脏功能[搏血指数（SI），心脏指数（CI），射血分数（EF），短轴缩短率（FS）]。并于治疗后1个月复查血清ACAIgG，结果显示，CoxB3感染小鼠ACAIgG阳性率均显著高于未感染小鼠，激素治疗后显著降低。VCM患儿ACAIgG阳性率显著升高，治疗1个月后阳性率显著下降，以激素治疗组下降明显。ACAIgG阳性VMC患儿的心电图ST－T异常率，CK－MB升高率，心功能降低率均显著高于ACAIgG阴性患和，提示VMC小鼠及患儿ACAIgG显著升高，ACAIgG阳性者病情显著重于阴性者，强的松能显著降低ACAIgG阳性率。     

胃癌及癌旁组织中bcl—2蛋白表达及其与细胞凋亡的关系

目的：研究胃癌及癌旁组织中ｂｃｌ－２蛋白的表达状态及其与细胞凋亡之间的关系。方法：采用免疫组织化学方法及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术对５０例胃癌及３３例癌旁组织中ｂｃｌ－２蛋白表达状态及凋亡细胞的密度和分布进行原位观察和比较。结果：胃癌组织中ｂｃｌ２蛋白的表达率、表达强度明显高于癌旁组织（Ｐ＜００５）。ｂｃｌ２蛋白在胃癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及临床分期无明显关系（Ｐ＞００５），与胃癌形态学分型及分化程度有关（Ｐ＜００５及Ｐ＜００１）。癌旁组织中的凋亡细胞指数高于胃癌组织（Ｐ＜００１）。ｂｃｌ２蛋白表达阴性胃癌及癌旁组织中凋亡细胞指数明显高于ｂｃｌ２阳性组（Ｐ＜００１）。结论：ｂｃｌ２蛋白对胃癌及癌旁组织中的细胞凋亡具有抑制性调控作用。在胃粘膜细胞恶性转化过程中可能存在细胞凋亡受抑制，ｂｃｌ２蛋白表达异常增加可能是细胞凋亡受抑的机制之一。细胞凋亡调控异常在胃癌发病中可能起重要作用     

病毒性心肌炎病程中小鼠血清白细胞介素2及白细胞介素10浓度的变化

目的 :观察白细胞介素 - 2 ( IL- 2 )及白细胞介素 - 1 0 ( IL- 1 0 )在急性病毒性心肌炎 ( VMC)小鼠病程中的变化。方法 :用 Cox B3 病毒感染 Balb/c小鼠 ,建立心肌炎模型 ,接种后 4、7、1 4、2 1 d,用 ELISA试剂盒检测血清 IL- 2 ,IL- 1 0 ,并对心肌组织进行病理学检测。结果 :在接种病毒后 4d,小鼠血清 IL- 2低于正常组 ,在第 1 4、2 1天 ,血清 IL- 2水平高于正常组 ,血清 IL- 2水平与病理严重程度密切相关 ;IL- 1 0在接种病毒后逐渐下降 ,在第 1 4、2 1天 ,明显低于正常组。结论 :IL- 2 ,IL-1 0在 VMC病程中起不同的作用 ,VMC时细胞免疫紊乱与细胞因子平衡失调有关     

病毒性肝炎患者血中一氧化碳的测定及临床意义

目的了解不同程度病毒性肝炎患者静脉血中碳氧血红蛋白(COHb)的变化并分析其临床意义,探讨一氧化碳(CO)在肝脏疾病中的作用。方法采用双波长分光光度法测量不同程度病毒性肝炎患者血中COHb的浓度,并与正常对照组进行比较,对各组间COHb水平进行统计学分析。结果病毒性肝炎患者组血中COHb水平较正常对照组有显著性差异,病毒性肝炎重度组COHb水平与血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)统计分析显示具有正相关性。结论不同程度病毒性肝炎患者血中COHb水平的改变提示CO在肝脏炎性疾病中发挥一定的作用。     

氧化应激与糖尿病心肌细胞凋亡

氧化应激是糖尿病重要的病理生理过程.氧化应激所导致的心肌细胞凋亡是糖尿病患者非缺血性心力衰竭发生的重要原因.线粒体功能障碍、NADH氧化酶异常以及晚期糖基化终末产物增加是心肌细胞活性氧簇的主要来源.产生的活性氧簇通过直接激活线粒体凋亡途径、肿瘤坏死凶子(TNF)α激活死亡受体途径、P53凋亡途径以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径,促进心肌细胞凋亡.但是目前针对糖尿病心脏病的抗氧化治疗效果并不理想,因此有必要进一步研究氧化应激导致心肌细胞凋亡的机制,以发现治疗糖尿病心脏病的新方法.     

米非司酮与利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响

目的　探讨米非司酮和利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞凋亡形态学和凋亡率的影响。方法　应用光学显微镜观察细胞生长状态 ;应用电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构 ,应用 TUNEL法观察细胞凋亡率。结果　两种抗孕激素以浓度 1× 10 - 6 mol/ L、培养 4 8小时 ,异位子宫内膜间质细胞开始出现早期细胞凋亡变化 ,随作用时间延长和浓度增加 ,细胞凋亡形态学变化更趋明显 ,细胞凋亡率增加 ,利洛司酮诱导细胞凋亡作用大于米非司酮。结论　抗孕激素米非司酮和利洛司酮以时间和剂量依赖性方式促进异位子宫内膜间质细胞的凋亡 ;利洛司酮诱导异位内膜细胞凋亡的作用高于米非司酮     

酮替芬对小鼠病毒性心肌炎的作用研究

目的研究肥大细胞膜稳定剂酮替芬对脑心肌炎病毒（EMCV）心肌炎的作用。方法4周龄DBA／2小鼠经腹腔接种EMCV制成病毒性心肌炎模型,评价灌胃给予酮替芬对小鼠病毒性心肌炎的作用。观察小鼠在接种EMCV后14d生存率的变化。小鼠心肌切片HE、Masson trichrome染色,观察心室肌坏死和炎症细胞浸润面积的变化。荧光定量RT—PCR检测小鼠心脏促炎细胞因子（IL-6、TNF—α）和肥大细胞蛋白酶类胰蛋白酶及糜蛋白酶（mMCP-4、mMCP-5、mMCP-6）mRNA表达。结果酮替芬治疗使小鼠的14d生存率明显改善（75％比25％,P〈0．01）;小鼠心脏／体重比值显著改善（P〈0．05）;小鼠左心室坏死和炎症细胞浸润面积明显减少（P〈0．05）;IL-6、TNF—α、mMCP－4、mMCP－5及mMCP－6mRNA的表达明显下调（P〈0．05）。结论酮替芬可改善EMCV心肌炎小鼠的心肌炎症和生存率,其作用机制可能与下词心肌促炎细胞因子和肥大细胞特异蛋白酶类胰蛋白酶和糜蛋白酶的表达有关。