艾灸对脾虚胃溃疡模型大鼠血清TFF及胃黏膜ERK1/2、PCNA的影响

目的 观察艾灸对脾虚胃溃疡模型大鼠血清三叶因子(TFF1、TFF2)、胃黏膜细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和增殖细胞抗原(PCNA)的影响,探讨艾灸促进胃黏膜增殖修复的可能机制。方法 将50只健康SD大鼠随机抽取10只为空白组,其余40只采用苦寒泻下法+无水乙醇灌胃建立脾虚胃溃疡大鼠模型,模型成立后随机分为模型组、四君子汤组、艾灸组和艾灸非穴位组,每组10只。各组予以相应处理,8 d后采用酶联免疫吸附法检测血清中TFF1、TFF2的含量,免疫印迹法检测胃黏膜组织p-ERK1/2蛋白的表达,免疫组化法测胃黏膜细胞PCNA的表达。结果 艾灸足三里、中脘等穴能明显提高胃黏膜损伤大鼠血清TFF1、TFF2的含量,增强胃黏膜损伤大鼠胃黏膜组织p-ERK1/2蛋白和PCNA的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 艾灸能促进脾虚胃溃疡大鼠损伤胃黏膜的增殖修复,其可能的机制是通过提高TFF1、TFF2的含量,激活TFF/ERK信号转导通路,增强PCNA的表达有关。     

不同浓度酒精对慢性饮酒大鼠胃黏膜细胞增殖的影响

目的：探讨不同浓度酒精刺激对慢性饮酒大鼠胃黏膜细胞增殖的影响及其在适应性细胞保护作用中的意义。方法：分别以l％、3％、6％、12％和24％(V／V)的酒精水溶液作为大鼠饮水的唯一来源，饮用3天后，再向胃内灌注100％酒精，观察大鼠胃黏膜的损伤情况。同时用免疫组化法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)的表达，应用计算机图像处理技术观察饮酒不同时程的大鼠胃黏膜的细胞增殖和凋亡以了解其细胞更新的情况。结果:与对照组相比，100％酒精灌胃后大鼠胃黏膜的损伤情况如下，饮用1％和3％酒精的大鼠差异无显著性，而饮用6％和12％酒精的大鼠的胃黏膜损伤显著性降低，但饮用24％酒精的大鼠差异无显著性。饮用6％和12％酒精的大鼠胃黏膜的细胞增殖显著增加，提示胃黏膜的细胞更新增强。结论：慢性饮酒大鼠胃黏膜的细胞更新增强可引起胃黏膜的适应性细胞保护作用，此作用和饮用的酒精浓度有关。     

温下肠腑方对大鼠大肠癌细胞周期素D1、增殖细胞核抗原表达的影响

目的探讨温下肠腑方对二甲基肼诱导的大鼠大肠癌细胞周期素D1（CyclinD1）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法予以大鼠1,2-二甲基肼腹腔注射,建立大鼠大肠癌模型,温下肠腑方灌胃给药干预,在第15、20、23周时间点,分别用免疫荧光组织化学法结合激光共聚焦显微镜扫描和免疫组织化学法观察中药对大鼠肠组织CyclinD1和PCNA表达的影响。结果在第15、20、23周时间点,与对照组比较,模型组大鼠肠组织CyclinD1蛋白和PCNA蛋白表达均显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;与模型组比较,温下方组Cyclin D1蛋白和PCNA蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论温下肠腑方能够显著降低肠癌动物模型肠组织Cy-clinD1、PCNA表达,提示温下肠腑方可能通过抑制CyclinD1、PCNA的表达而抑制肠癌细胞的增殖。     

TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响研究

目的：探究TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响,进一步揭示哮喘的发病机制。方法建立大鼠慢性哮喘模型,原代分离培养大鼠ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、TGF-β1组和TGF-β1＋PD-98059组,以CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法检测caveolin-1和p- ERK1/2蛋白表达。结果 TGF-β1组细胞增殖较正常组和哮喘组明显（均P＜0.01）;TGF-β1＋PD-98059组细胞增殖较TGF-β1组减低,但较哮喘组仍明显（均P＜0.05）。TGF-β1组p- ERK1/2表达量较正常组和哮喘组增加;TGF-β1＋PD-98059组p- ERK1/2表达量较TGF-β1组减少,但较哮喘组表达量仍有所增加（均P＜0.05）。TGF-β1组caveolin-1表达量较正常组和哮喘组减少（均P＜0.05）;TGF-β1＋PD-98059组caveolin-1表达量较TGF-β1组增加（P＜0.05）。结论 TGF-β1可以下调caveolin-1蛋白的表达量,激活ERK通路,从而促进哮喘大鼠ASMC的增殖,引起气道重塑。     

PCNA和Bcl-2在慢性胃炎中的表达

目的观察上皮增殖细胞核抗原（PCNA）及B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）在慢性萎缩性胃炎（CAG）和慢性浅表性胃炎（CSG）胃黏膜的表达状况，探讨其临床病理学意义及两者之间的相关性。方法免疫组化法检测各组胃黏膜PCNA，Bcl-2的表达。结果随着胃黏膜损伤程度的加重，PCNA，Bcl-2阳性表达递增，CAG与CSG及正常对照组相比，3组间差异均有显著性（P〈0．01）。结论胃黏膜损伤程度加重可能通过PCNA，Bcl-2的过度表达而促进细胞增殖和恶化。     

松果菊苷通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖观察

目的：考察松果菊苷对大鼠成骨细胞增殖的影响及作用机制。方法将不同浓度的松果菊苷（0.01,0.1,1.0,10.0,100 nmol/L）及MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059（20μmol/L）与成骨细胞共培养12,24,36,48,60 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。酶联免疫吸附法（ELISA）和qRT-PCR法检测细胞上清中和成骨细胞中骨钙素（BGP）和骨形态发生蛋白（BMP-2）的表达水平。Western blotting检测成骨细胞中Smad4、ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果松果菊苷能够促进大鼠成骨细胞的增殖,而且能诱导ERK 的磷酸化从而激活 MAPK/ERK 信号通路,并提高成骨细胞中 BMP-2和 Smad4的表达而激活BMP/Smad信号通路。加入PD98059后,松果菊苷诱导的BMP-2和Smad4表达及成骨细胞增殖均受到抑制。结论松果菊苷可通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠的成骨细胞增殖。     

雌二醇与ESR1靶向结合通过ERK信号通路调控软骨细胞的增殖

目的探讨雌二醇（E2）/ESR1（ERα）对C28I2软骨细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法应用Ad-Easy 腺病毒包装系 统构建和包装过表达腺病毒Ad-ESR1,Western blot及QPCR检测该基因在细胞中蛋白及RNA表达情况。在E2处理下,设立不 同病毒感染组处理C28I2细胞,Western blot 检测各处理组C28I2细胞的自噬、凋亡相关蛋白的表达及ERK信号通路的磷酸化 水平;免疫荧光实验观察细胞内自噬流的强弱;FCM检测各组细胞凋亡率及周期;QPCR检测mRNA水平增殖相关标志基因 （PCNA）、细胞周期蛋白B1（CyclinB1）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达。ERK特异性抑制剂处理细胞,Western blot检测抑 制ERK通路后自噬及凋亡相关蛋白表达,QPCR检测增殖相关标志基因表达。结果成功构建过表达腺病毒Ad-ESR1。过表达 ESR1 能够促进E2 处理后LC3 和ATG7 的表达,促进LC3 和LAMP1 在细胞质中共定位,抑制cleaved caspase3、cleaved caspase12的表达并且促进PCNA、cyclinB1和cyclinD1表达,且细胞内pERK明显减少;而干扰ESR1表达后,自噬相关蛋白表 达减少,自噬流减弱,凋亡蛋白表达增加,增殖标志基因表达下调,细胞内pERK相对增加。特异性抑制剂阻断ERK活化,E2/ ESR1诱导的自噬增加以及凋亡减少被抑制,增殖相关基因表达被抑制。结论E2与ESR1的靶向结合可促进软骨细胞的增殖, 其作用机制可能与抑制ERK信号通路活化从而促进自噬、抑制凋亡有关。     

艾灸、电针预处理对急性胃黏膜损伤大鼠TGF-α、PCNA的影响

目的：对比观察艾灸预处理和电针预处理两种不同方法对急性胃黏膜损伤大鼠转化生长因子（TGF-α）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响差异。方法将40只SPF级的SD大鼠随机的分为4组（空白组、模型组、艾灸预处理组和电针预处理组）,艾灸预处理组和电针预处理组选取“足三里穴”、“中脘穴”分别行艾灸和电针预处理8 d后,除空白组外造模,选用无水乙醇灌胃的方法（0.5 mL/100 g）制成大鼠急性胃黏膜损伤模型。造模1 h后,用20%乌拉坦（0.6 mL/100 g）进行腹腔注射麻醉,再取材。在光镜下观察大鼠的胃黏膜组织形态学的改变,免疫组化法检测胃黏膜TGF-α、PCNA的表达。结果与空白组相比较,模型组胃黏膜中TGF-α、PCNA的表达明显升高（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比较,艾灸预处理组和电针预处理组胃黏膜中TGF-α、PCNA的表达均有不同程度升高（P<0.05或P<0.01）;与艾灸预处理组相比较,电针预处理组胃黏膜中TGF-α的表达明显降低,具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,而胃黏膜中PCNA的表达则无明显差异（P>0.05）。结论艾灸预处理与电针预处理均可以减轻无水乙醇对胃黏膜造成的损伤,促进胃黏膜保护因子（TGF-α、PCNA）的表达,但艾灸预处理稍优于电针预处理。     

莪术醇通过蛋白激酶信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的 研究莪术醇（curcumol）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法 用不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）处理瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）作为不同浓度莪术醇组;用20 μmol/L 蛋白激酶（ERK）信号通路激活剂异丙肾上腺素盐酸盐（ISO）和160 mg/L莪术醇处理KF细胞,记为curcumol 160 mg/L+ISO组,Western blot检测KF细胞中增殖蛋白（Cyclin D1、PCNA）、纤维化标记蛋白（Col1A1、Col3A1、α-SMA）、凋亡蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3）、ERK信号通路蛋白（p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf）表达水平,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡率。结果 不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）均可降低细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白含量,抑制纤维化标记蛋白Col1A1、Col3A1、α-SMA蛋白表达,抑制细胞外调节ERK信号通路蛋白p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf表达,提高Bax、cleaved caspase-3表达量,抑制KF细胞增殖、胶原合成,促进细胞凋亡,抑制ERK信号通路（P<0.05）。ERK信号通路激活剂ISO（20 μmol/L）可逆转莪术醇（160 mg/L）对KF细胞增殖、凋亡、胶原合成和ERK信号通路的作用。结论 莪术醇通过ERK信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成。     

商陆皂苷甲对 IL －1β诱导的肾小球系膜细胞ERK 通路活化的影响

目的：观察商陆皂苷甲（ EsA）含药血清对大鼠肾小球系膜细胞（ rGMC）增殖及其对IL－1β诱导rGMC的ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达的影响,探讨EsA治疗肾小球系膜细胞增殖性疾病的可能机制。方法将SD大鼠随机分成对照组（0.5％羧甲基纤维素钠灌胃）,EsA（5 mg／kg）组,EsA （10 mg／kg）组,EsA （20 mg／kg）组,EsA （40 mg／kg）组,药物灌胃后,获取含药血清;取6代rGMC随机分成对照血清组,EsA （5 mg／kg）血清组, EsA （10 mg／kg）血清组,EsA（20 mg／kg）血清组,EsA（40 mg／kg）血清组,MTT法检测各组对rGMC增殖的影响;将rGMC分为对照组,IL－1β组,IL－1β＋EsA组,IL－1β＋U016组,IL－1β＋U0126＋EsA组,同步化后培养48 h, RT－PCR法检测各组ERK1／2 mRNA的相对表达量,Western blot法检测p－ERK1／2的表达并成像分析。结果EsA （5～10 mg／kg灌胃）含药血清抑制了细胞增殖（ P＜0.05,P＜0.01）;IL－1β组促进了rGMC的ERK1／2 mR-NA、p－ERK1／2表达（P＜0.05）,IL－1β＋EsA组、IL－1β＋U0126组,IL－1β＋U0126＋EsA组作用rGMC后,其ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达均降低（P＜0.05）。结论 EsA含药血清（5～10 mg／kg灌胃）可显著抑制rGMC的増殖,EsA（10 mg／kg）血清组作用48 h效果最佳;EsA通过下调p－ERK1／2表达,抑制了IL－1β诱导的rGMC增殖,ERK1／2通路是EsA抑制rGMC增殖通路之一。     

Proliferation in rat gastric mucosal cells induced by chronic ethanol feeding through the ROS/BMK1 pathway

Objective： To investigate the correlation between the gastric mucosal cell proliferation and low-concentration alcohol intake in a chronic drinking rat model, and to investigate the possible role of ROS/BMK1 pathway in this process. Methods： SD rats were randomly divided into 4 groups： control group, administered with tap water; ethanol group, with 6% ethanol in the drinking water; quercetin group, with quercetin （100 mg/kg） by intragastric gavage twice a day; ethanol＋quercetin group, administered with quercetin combined with 6% ethanol. The cell proliferation in rat gastric mucosa was analyzed by flow cytometery and proliferating cell nuclear antigen （PCNA） immunohistochemical staining. Activation of ERKs and BMK1 was evaluated by the expression and phosphorylation of these kinases using Western Blot analysis. Results： Compared to the controls, the cell proliferation in gastric mucosa of rats exposed to the ethanol for 7 d was enhanced, and the activation of BMK1 was also increased in this period. Otherwise quercetin, as a free radical scavenger, attenuated increased cell proliferation and activation of BMK1 in rat stomach treated with ethanol. However, no changes of ERKs expression and phosphorylation occurred in the rats in all groups. Conclusion： These results suggested that the ROS and BMK1 activation may be a central mechanism, which underlies cell proliferation in rat gastric mucosa stimulus with the chronic low-concentration ethanol.     

慢性饮酒大鼠胃粘膜的适应性细胞保护作用

目的：观察胃内灌注钝酒精对慢性饮酒大鼠胃粘膜的损害，并探讨慢性酒精刺激对大鼠胃粘膜细胞更新的影响及其在适应性细胞保护作用中的意义。方法：以6％（V／V）的酒精作为大鼠饮水的惟一来源，分别在大鼠饮酒的不同时程内胃内灌注100％酒精，观察大鼠胃粘膜的损伤情况。同时用免疫组化和计算机图像处理技术观察饮酒不同时程的大鼠胃粘膜的细胞增殖和凋亡，了解其细胞更新的情况。结果：100％酒精灌胃后大鼠胃粘膜的损伤和对照组相比，饮酒后1天的大鼠胃粘膜改变差异无显著性，饮酒后3－14天大鼠的胃粘膜损伤有显著性降低，饮酒后28天的大鼠差异又无显著性。饮酒3－14天的大鼠有粘膜的细胞增殖和凋亡同步增加，提示在此时期内胃粘膜的细胞更新增强。结论：适当低浓度酒精反复刺激可以促进胃粘膜的细胞更新并引起大鼠胃粘膜的适应性细胞保护作用。     

慢性饮酒对大鼠胃粘膜氧自由基水平的影响

目的　探讨大鼠胃粘膜在慢性饮用低浓度酒精的不同时程 ,氧化应激水平的改变及其对胃粘膜细胞更新的影响。方法　以 6 % (v/v)酒精水溶液作为大鼠饮水的唯一来源 ,饮用 1、3、7、14及 2 8天后 ,分别测定胃粘膜匀浆中氧化应激的相关指标以及胃粘膜的DNA含量。结果　和对照组大鼠相比 ,饮用酒精 1天的大鼠胃粘膜氧化应激损伤、DNA含量没有改变 ;饮用 3、7和 14天酒精的大鼠胃粘膜其氧化应激损伤加重、DNA的含量明显增加 ;饮用 2 8天酒精的大鼠胃粘膜 ,氧化应激损伤加重、DNA的含量明显减少。结论　一定时程的低浓度酒精刺激可使大鼠胃粘膜受到氧化应激损伤 ,并导致胃粘膜细胞更新加快。     

慢性饮酒对大鼠胃粘膜细胞的凋亡与增殖的影响

目的 :研究大鼠慢性饮酒过程中胃粘膜的细胞凋亡和细胞增殖变化的规律 ,探讨慢性酒精刺激对胃粘膜的自我保护作用的影响。方法 :以 6% (V/V)的酒精作为大鼠饮水的唯一来源 ,利用流式细胞仪定量分析大鼠饮酒的不同时程内胃粘膜细胞的细胞周期和细胞凋亡 ,同时用免疫组化方法定性观察了大鼠胃粘膜的细胞增殖和凋亡情况。结果 :饮酒 3～ 2 8天的大鼠胃粘膜的细胞凋亡较对照组明显增加 ,在饮酒 3～ 14天的大鼠胃粘膜其细胞增殖也明显增加 ,提示在此时期内胃粘膜的细胞更新增强。结论 :长期低浓度酒精反复刺激可以促进胃粘膜的细胞凋亡并引起大鼠胃粘膜的自我保护作用减弱     

Ghrelin对大鼠急性胃粘膜损伤的保护作用

目的:研究Ghrelin对乙醇诱导的大鼠急性胃粘膜损伤的保护作用和可能机制。方法:大鼠随机分为4组:空白对照组、生理盐水组(NS组),0.5μg Ghrelin组(0.5μg GH组)和5μg Ghrelin组(5μg GH组)。75%乙醇灌胃建立急性胃粘膜损伤大鼠模型,NS组、0.5μg GH组和5μg GH组大鼠乙醇灌胃前1h分别给予NS、0.5μg Ghrelin和5μg Ghrelin腹腔注射。乙醇灌胃1h后处死大鼠,HE染色观察胃粘膜损伤程度并计算胃粘膜损伤指数,RT-PCR法检测胃粘膜环氧化酶-1(COX-1)和COX-2 mRNA的表达。结果:两个Ghrelin组大鼠胃粘膜损伤及炎症反应明显轻于NS组,各组大鼠胃粘膜COX-1 mRNA表达比较无统计学差异,两个Ghrelin组大鼠胃粘膜COX-2 mRNA的表达明显低于NS组,且呈量效关系(P<0.01,P<0.05)。结论:Ghrelin对乙醇诱导的大鼠急性胃粘膜损伤有明显的保护作用,其机制可能是抑制COX-2的过度表达。     

英连金化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠PG-ⅠBigET-1、VEGF表达的影响

目的:观察英连金化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠的作用机理研究。方法:将120只大鼠随机分为空白组、模型组、中药大、中、小剂量组及胃复春组。采用N-甲基-N-硝基N-亚硝基胍(MNNG)溶液自由饮用,乙醇溶液灌胃,配合饥饱失常等综合方法诱导造模12周。造模成功后分组治疗,第24周后处死全部实验大鼠进行TUNEL细胞凋亡检测以及胃蛋白酶原Ⅰ(PG-Ⅰ)、内皮素(Big ET-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)等指标检测观察其改变情况。结果:空白组、中药治疗组、胃复春组与模型组比较血浆Big ET-1含量明显降低,胃黏膜组织VEGF阳性率明显降低,血清PG-Ⅰ含量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:英连金化浊解毒方能够降低癌前病变大鼠血浆Big ET-1含量及胃黏膜VEGF蛋白的表达率,提高血清PG-Ⅰ含量,恢复正常胃黏膜及腺体细胞的功能。     

幽门螺杆菌培养上清液对大鼠胃黏膜上皮细胞增殖的影响

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)的代谢产物在胃黏膜上皮细胞增殖中的作用.方法:用液体培养的方法培养产毒Hp菌株NCTC11637,然后提取上清液,用浓缩上清液(concentrated broth culture supernatant,CCS)灌鼠胃.采用放射免疫方法测定血请胃泌素,用免疫组织化学SP(streptavidin/perosidase)法检测胃黏膜增殖细胞核抗原 (proliferation cell nuclear antigen,PCNA)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达.结果:灌服CCS组与对照组比较,胃黏膜PCNA标记指数阳性率升高、差异具有显著性,胃黏膜细胞表皮生长因子受体在灌服CCS组有4/8阳性,对照组无1例阳性;血清胃泌素升高,但统计学上差异无显著性.结论:产毒Hp培养上清液可以促进胃黏膜上皮细胞的增殖,可能促进胃癌的发生.     

缺血后处理对再灌注损伤大鼠胃黏膜细胞ERK表达的影响

目的探讨缺血后处理（ischemic post-conditioning,I-postC）对大鼠胃黏膜再灌注（GI-R）损伤的影响及细胞机制。方法制备胃缺血后处理模型。实验分为3组（n=6）：假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I-R组）、缺血后处理组（I-postC组）。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法（TUNEL）检测胃黏膜细胞的凋亡,用免疫组化方法检测胃黏膜细胞增殖及凋亡相关基因p-ERK的表达。结果与Sham组相比,I-R组胃黏膜细胞凋亡增加及增殖减少,p-ERK表达下调;与I-R组相比,缺血后处理显著降低胃黏膜细胞凋亡率,同时可以增加胃黏膜增殖率及p-ERK的表达。结论缺血后处理可抑制胃黏膜细胞凋亡,促进细胞增殖。其机制可能与p-ERK的表达上调有关。