肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶表达与地塞米松的干预效应

目的：探讨炎症细胞与地塞米松对基质金属蛋白酶活性的影响及基质金属蛋白酶在肺纤维化中的作用。方法：①实验于2004-04／07在解放军兰州军区总医院动物实验中心和呼吸内科实验室、血液科实验室完成。选用32只普通Wistar大鼠。随机将动物分为3组：对照组（n=8），肺纤维化组（n=12），治疗组（n=12）。②肺纤维化组和治疗组按5mg／kg经气管内灌注博莱霉素溶液0．3mL制备大鼠肺纤维化模型，对照组则给予0．3mL生理盐水，治疗组每日腹腔注射地塞米松0．4mL（5mg／kg），对照组及肺纤维化组则每日腹腔注射0.4mL生理盐水。（3）在实验第3，7，14、27天分别处死后，收集肺泡灌洗液，行细胞计数和分类；聚丙烯酰胺明胶酶谱法鉴定肺泡灌洗液中基质金属蛋白的活性变化；羟脯氨酸法测定肺组织胶原含量的变化。结果：大鼠32只均进入结果分析。①病理组织切片示肺纤维化组肺损伤明显，出现典型肺纤维化改变；治疗组肺损伤和纤维化程度明显减轻。②治疗组肺泡灌洗液粒细胞学分类在第7，14天分别比肺纤维化组降低了51．6％和62．4％（P〈0．05）；第14天治疗组肺胶原总量比肺纤维化组降低了17．8％（P〈0．05）。（3）聚丙烯酰胺明胶酶谱示基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9在两组中活性带均增强，但治疗组活性带的强度比肺纤维化组明显减弱。结论：炎症细胞能增强基质金属蛋白酶的活性，基质金属蛋白酶活性增强进一步促进了纤维化的发展，而地塞米松则抑制了基质金属蛋白酶活性增强，减轻了肺纤维化程度。     

地塞米松对高氧肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

目的 观察地塞米松对高氧暴露大鼠肺组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)表达的影响,探讨地塞米松治疗高氧肺损伤的作用机制。方法 2周龄Wistar大鼠32只,随机分为空气组和高氧组(各16只)。高氧暴露7 d后,取两组大鼠各8只检测支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量和肺湿/干重比(W/D),并观察肺组织病理学改变。余16只大鼠行肺组织培养,空气组8只作为空气对照组,高氧组8只各设高氧对照组,高氧 地塞米松1×10-8、1×10-6和1×10-4mol/L组,培养24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达。结果①与空气组相比,高氧组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润;BALF中蛋白含量、W/D明显增高。②高氧对照组MMPs、TIMPs mRNA表达和MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值较空气对照组明显增高。③地塞米松能剂量依赖性下调MMP-2、MMP-9 mRNA表达;对TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达有一定程度的抑制效应;随地塞米松浓度的增加,MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值亦逐渐降低。结论 地塞米松下调MMPs mRNA表达,调节MMPs/TIMPs之间的失衡,可能是其减轻高氧肺损伤的机制之一。     

内皮素受体拮抗剂对博莱霉素所致肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶表达的影响

目的 探讨内皮素受体拮抗剂BQ-123对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1表达的影响.方法 实验分为模型组、治疗组及对照组三组.模型组用博莱霉素5 mg/kg气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,治疗组予以内皮素受体拮抗剂BQ-123 50 μg/kg每周2次腹腔注射,对照组以等量生理盐水替代.造模后第28天处死大鼠,用半定量逆转录聚分酶链反应(RT-PCR)测定基质金属蛋白酶-1 mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定基质金属蛋白酶-1蛋白的表达.结果 模型组基质金属蛋白酶-1 mRNA表达显著低于对照组(P＜0.01),治疗组较之模型组明显增加(P＜0.01).ELISA检测提示模型组基质金属蛋白酶-1蛋白含量低于对照组(P＜0.05),治疗组蛋白含量较之模型组明显增加(P＜0.01).结论 肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1水平降低,应用内皮素受体拮抗剂治疗可提高基质金属蛋白酶-1的表达.     

羟苯磺酸钙对糖尿病大鼠肾小球中基质金属蛋白酶-2/组织金属蛋白酶抑制物-2及Ⅳ型胶原表达的影响

[目的]观察羟苯磺酸钙对糖尿病大鼠肾小球基质金属蛋白酶-2/组织金属蛋白酶抑制剂-2以及Ⅳ型胶原表达的影响.[方法]采用单肾切除及单次腹腔注射1%STZ(65 mg/kg体重)制作大鼠DM模型,大鼠经羟苯磺酸钙或蒸馏水灌胃12周后,观察各组大鼠肾脏超微结构的改变以及BG、Upro、Cc 、BUN和肾重/体重的变化;免疫组化检查肾小球基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制剂以及Ⅳ型胶原表达的变化.[结果]12周时,糖尿病模型(DM)组与单肾切除对照组(NC)组相比,肾重/体重、BG、BUN、Cc及Upro显著增高(P＜0.05), 羟苯磺酸钙治疗组(DD组)与DM组相比,除Cc变化不明显外, 肾重/体重、BG、BUN及Upro均不同程度降低;电镜显示NC组大鼠肾小球细胞外基质与系膜细胞分布正常,毛细血管腔开放;DM组肾小球系膜区基质增多及系膜细胞增生,同时毛细血管部分塌陷,肾小囊部分粘连;DD组上述病理改变均有不同程度的减轻;肾脏免疫组织化学显示DD组MMP-2、TIMP-2和Col-Ⅳ明显低于DM组,但DD和DM组MMP-2、TIMP-2和Col-Ⅳ均显著高于NC组.[结论]羟苯磺酸钙能改善糖尿病大鼠肾功能,通过抑制Col-Ⅳ的过度积聚来改善糖尿病微血管病变,并且可能与抑制糖尿病大鼠肾脏TIMP-2表达有关.     

特发性肺纤维化患者支气管肺泡灌洗液及血清可溶性细胞粘附分子-1、基质金属蛋白酶-2表达水平及临床意义

目的 探讨特发性肺纤维化(IPF)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清中可溶性细胞粘附分子-1(sICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的水平及其临床意义。方法 选取我院收治的IPF患者118例为IPF组,同期健康体检者63例为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组BALF和血清中sICAM-1和MMP-2水平,分析IPF的相关影响因素;采用GAP分期标准对IPF患者进行疾病严重程度分期,Ⅰ期38例,Ⅱ期47例,Ⅲ期33例,比较不同疾病分期患者BALF和血清中sICAM-1、MMP-2水平、胸部高分辨CT(HRCT)评分差异,分析IPF患者BALF与血清中sICAM-1和MMP-2水平与其胸部HRCT评分的关系。结果 与对照组相比,IPF组BALF及血清中sICAM-1、MMP-2表达水平均升高(P<0.05);年龄≥60岁、有吸烟史、BALF和血清中sICAM-1、MMP-2过度表达是IPF发生的独立危险因素(P<0.05);与Ⅰ期、Ⅱ期IPF患者相比,Ⅲ期IPF患者BALF和血清中sICAM-1、MMP-2表达均升高(P<0.05); IPF...     

大鼠心肌梗死后心肌胶原及基质金属蛋白酶表达与辛伐他汀的干预

目的：观察大鼠急性心肌梗死后心肌局部基质金属蛋白酶2和9的变化与胶原代谢的关系,并探讨药物辛伐他汀的干预作用.方法：[1]实验于2004-12/2005-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管病实验室完成.选用健康雌性Wistar大鼠50只.[2]辛伐他汀干预组和心肌梗死组均制成心肌梗死模型（结扎左冠状动脉前降支）.假手术组：仅在左冠状动脉前降支下留置丝线,不结扎,余与造模相同,以40mg/kg清水灌胃,持续4周.辛伐他汀干预组：术前1 h给以药物辛伐他汀40mg/kg灌胃,以后每天按上述剂量灌胃持续4周.心肌梗死对照组：以40 mg/kg清水灌胃,持续4周.[3]4周后尾静脉抽血化验血脂后处死,心脏称质量,采用反转录聚合酶链反应法检测左室非梗死区心肌基质金属蛋白酶2和9的mRNA表达,免疫组化测定左心室非梗死区心肌Ⅰ型胶原产量.[4]各组均数比较采用方差齐性检验（Levene检验）,方差分析.结果：实验过程中死亡16只,最终进入结果分析34只.[1]实验4周后,大鼠左室心肌基质金属蛋白酶2和9 mRNA及Ⅰ型胶原表达：心肌梗死对照组和辛伐他汀干预组明显高于假手术组（1.21&;#177;0.22,0.82&;#177;0.16,0.51&;#177;0.13;0.98&;#177;0.20,2.64&;#177;0.22,0.43&;#177;0.13;2.64&;#177;0.22,1.53&;#177;0.13,0.96&;#177;0.15.P＜0.01）.[2]大鼠左室心肌基质金属蛋白酶2和9 mRNA Ⅰ型胶原表达：辛伐他汀干预组明显低于心肌梗死对照组（P＜0.01）.[3]心脏质量和心脏质量/体质量：心肌梗死对照组和辛伐他汀干预组明显高于假手术组（P＜0.01）,辛伐他汀干预组明显低于心肌梗死对照组（P＜0.01）.[4]血脂水平：各组差异不明显（P＞0.05）.结论：辛伐他汀可减少梗死后左室非梗死区Ⅰ型胶原的沉积,改善梗死后的心室重构,该作用发挥可能与其抑制梗死后心肌局部基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达有关,而与其降脂作用无关.     

大肠癌中基质金属蛋白酶9与Ⅳ型胶原的表达与侵袭转移的关系

【目的】探讨基质金属蛋白酶9（MMP9）在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌侵袭转移关系，基底膜（BM）的状态与大肠癌发生发展的关系。【方法】采用链霉卵白素过氧化物酶（SP法）免疫组织化学方法检测51例大肠癌、15例肠腺瘤、10例正常肠粘膜MMP9的表达与Ⅳ型胶原蛋白的表达情况。【结果】51例大肠癌MMP9阳性率84．3％，明显高于正常肠粘膜（20．0％）和肠腺瘤（26．7％）（P〈0．05和P〈0．01）；MMP9的表达与大肠癌的分化程度、淋巴结转移及Dukes分期密切相关（P〈0．05或P〈0．01）；正常肠粘膜和肠腺瘤组织中，基底膜Ⅳ型胶原连续完整，大肠癌基底膜Ⅳ型胶原分布间隔缺损者明显高于肠粘膜和肠腺瘤（P〈0．01）。【结论】MMP9对肠癌基底膜破坏起着十分重要作用，且可作为预测大肠癌侵袭、转移的重要指标。     

大鼠心肌梗死后心肌胶原及基质金属蛋白酶表达与辛伐他汀的干预

目的:观察大鼠急性心肌梗死后心肌局部基质金属蛋白酶2和9的变化与胶原代谢的关系,并探讨药物辛伐他汀的干预作用。方法:①实验于2004-12/2005-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管病实验室完成。选用健康雌性Wistar大鼠50只。②辛伐他汀干预组和心肌梗死组均制成心肌梗死模型(结扎左冠状动脉前降支)。假手术组:仅在左冠状动脉前降支下留置丝线,不结扎,余与造模相同,以40mg/kg清水灌胃,持续4周。辛伐他汀干预组:术前1h给以药物辛伐他汀40mg/kg灌胃,以后每天按上述剂量灌胃持续4周。心肌梗死对照组:以40mg/kg清水灌胃,持续4周。③4周后尾静脉抽血化验血脂后处死,心脏称质量,采用反转录聚合酶链反应法检测左室非梗死区心肌基质金属蛋白酶2和9的mRNA表达,免疫组化测定左心室非梗死区心肌I型胶原产量。④各组均数比较采用方差齐性检验(Levene检验),方差分析。结果:实验过程中死亡16只,最终进入结果分析34只。①实验4周后,大鼠左室心肌基质金属蛋白酶2和9mRNA及I型胶原表达:心肌梗死对照组和辛伐他汀干预组明显高于假手术组(1.21±0.22,0.82±0.16,0.51±0.13;0.98±0.20,2.64±0.22,0.43±0.13;2.64±0.22,1.53±0.13,0.96±0.15,P<0.01)。②大鼠左室心肌基质金属蛋白酶2和9mRNAI型胶原表达:辛伐他汀干预组明显低于心肌梗死对照组(P<0.01)。③心脏质量和心脏质量/体质量:心肌梗死对照组和辛伐他汀干预组明显高于假手术组(P<0.01),辛伐他汀干预组明显低于心肌梗死对照组(P<0.01)。④血脂水平:各组差异不明显(P>0.05)。结论:辛伐他汀可减少梗死后左室非梗死区I型胶原的沉积,改善梗死后的心室重构,该作用发挥可能与其抑制梗死后心肌局部基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的表达有关,而与其降脂作用无关。     

脑出血大鼠脑组织膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达及益气活血中药的干预效应

目的:观察益气活血中药对脑出血大鼠脑组织中膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达量的影响,从脑出血损伤区微血管系统重建的角度,探讨益气活血中药治疗脑出血的作用机制。方法:实验于2006-03/10在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成。实验材料:补阳还五汤全方(黄芪,当归,赤芍,红花,川芎,地龙,桃仁按20∶3∶3∶3∶2∶3∶3的比例);补阳还五汤益气成分(黄芪按上述比例);补阳还五汤活血成分(当归,赤芍,地龙,川芎,桃仁,红花按3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)。用蒸馏水两次水煎,分别浓缩为1.54,0.81和0.73g/mL。实验分组:155只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组、活血组。正常对照组5只大鼠,其余每组30只,再随机分为术后灌胃2,4,7,14,21,28d6个观察时间点,各个时间点5只大鼠。实验干预:造模:采用立体定位技术将胶原酶Ⅶ注入大鼠大脑右苍白球制成脑出血大鼠模型。假手术组大鼠仅注入2μL生理盐水,其余手术过程相同。给药:正常对照组:普通饲养,自由饮水;假手术组和模型组术后予蒸馏水灌胃2次/d,2mL/次;益气活血组、益气组、活血组分别给予补阳还五汤全方、补阳还五汤益气成分、补阳还五汤活血成分30.80,16.20,14.60g/(kg·d)(按体表面积计算为临床70kg成人剂量的3倍)灌胃,2次/d,2mL/次。各组大鼠分别于灌胃2,4,7,14,21,28d麻醉下取脑,制备切片;正常组动物于28d处死。实验评估:免疫组织化学染色方法检测各组灌胃不同时间脑组织基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9和膜型基质金属蛋白酶的阳性微血管数。结果:155只大鼠均进入结果分析。①正常组、假手术组皮质偶见膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达。②模型组膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2呈双峰表达,4d为最高峰,至14～21d再有小高峰出现。③益气活血组给药4d时,膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2为表达低谷,低于模型组(P<0.01)、益气组和活血组(P<0.05);在中后期,益气活血组膜型基质金属蛋白酶表达高峰为7～14d,较模型组提前出现,21d后与模型组比,各治疗组膜型基质金属蛋白酶已表达极少(P<0.01);益气活血组基质金属蛋白酶2在7d后一直呈高水平维持,高于其他各组(P<0.05),28d后开始逐渐下降。④模型组基质金属蛋白酶9在造模后4d达最高峰(P<0.01),两周后几乎无表达。益气活血组基质金属蛋白酶9高峰推迟至7d出现(P<0.05),之后逐渐下降。结论:益气活血中药可通过调节脑出血后膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达,改善出血后脑组织的微环境,有利于微血管系统重建,促进组织修复。     

基质金属蛋白酶及其抑制因子与心血管疾病

细胞外基质作为血管壁及心脏的主要成分在血管及心脏的重构中起着重要作用。细胞外基质的合成与降解主要受基质金属蛋白酶及其抑制因子的调控。因此，基质金属蛋白酶及其抑制因子的失平衡，可造成基质胶原的改变和基质胶原网的破坏，从而导致血管及心肌的重构。     

Kininase II in bronchoalveolar lavage fluid and serum of patients with pulmonary disorders

In 68 patients with pulmonary diseases such as lung cancer (n = 32), sarcoidosis (n = 21) and chronic bronchitis (n = 15), kininase II (EC .4.15.1) (KII) was fluorimetrically (F-LKII) and the albumin concentration (LALB) spectrophotometrically measured in native unconcentrated bronchoalveolar bronchoalveolar fluid. For comparison in serum, the KII was also spectrophotometrically (SP-KII) and fluorometrically (F-SKII) determined. In all patients, the mean SD F-LKII activity was 0.2 ± 0.4 U/L, the LALB concentrations 0.17 ± 0.44 g/L, and the resulting specific F-LKII activity was 3±3 U/g LALB. The highest elevations of LALB concentrations were determined in lung cancer. The highest activities of F-LKII, F-SKII, and SP-SKII were observed in sarcoidosis. A significant linear relation was found between F-LKII and LALB (R = 0.60, P < 0.0002) and also between F-SKII and SP-SKII (R = 0.88, P < 0.0001), but no relation could be established between F-SKII and F-LKII, indicating that the KII measured in lavage was not identical with the KII found in serum.     

特发性肺纤维化患者支气管肺泡灌洗液中特异性蛋白标记物研究

目的 分析特发性肺纤维化(IPF)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白质谱变化,寻找特异性蛋白标记物,评价这些标记物对IPF的诊断价值及临床应用前景.方法 收集IPF患者及对照组BALF标本,应用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选差异蛋白.通过非线性支持向量机方法建立诊断模型,并留一交叉验证法评估各模型的预测效果.结果 IPF患者BALF中筛选出8个表达有显著差异的蛋白质峰,其中检测效率最高的4个低表达蛋白质峰质荷比(m/z)分别为1947.634、1975.519、2488.535及4950.230.以这4个蛋白质峰组合建立诊断模型,其特异性和敏感性均为100%.结论 应用SELDI-TOF-MS技术分析获得的低分子量蛋白质峰在诊断中具有较高的灵敏度和特异性,这些小分子可能在IPF发病中起重要作用.     

流式细胞仪检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部疾患的诊断价值

目的用流式细胞术免疫荧光三色分析法检测肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群,探讨其对肺部恶性肿瘤的意义。方法采用流式细胞术与CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP三色荧光抗体检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群,以SSC/CD3-PerCP圈出T淋巴细胞群,分析肺良性与恶性疾病患者肺泡灌洗液中TH(CD3 CD4 )及Ts(CD3 CD8 )细胞占T淋巴细胞的百分比。结果肺良性疾病组Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%,TH细胞占(49.28±12.88)%,TH/Ts比值为1.13±0.29;肺恶性肿瘤组Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%,TH细胞占(34.57±6.65)%,TH/Ts比值为0.54±0.19。与良性病变组比较,恶性组TH下降(P<0.05),TH/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01)。结论流式细胞术可用于检测肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群,有助于分析患者肺泡局部细胞免疫功能。     

探讨支气管肺泡灌洗辅助治疗严重肺挫伤的临床观察

肺挫伤在临床常见于各种胸部损伤,如交通事故、胸部挤压或撞击及高处坠落等原因均可引起肺挫伤。肺挫伤后,会导致局部严重水肿和出血,且常与血气胸及肺出血等多种疾病同时发生,故病情复杂,对患者呼吸系统及循环系统造成极大的威胁,早期若未能正确及时处理,可导致严重后果。肺挫伤的致死率可达10%～25%〔1〕。     

特发性肺纤维化的HRCT表现与肺功能及支气管肺泡灌洗液细胞学相关性研究

目的认识特发性肺纤维化(IPF)的HRCT影像表现,探讨各征象与肺功能各项指标、支气管肺泡灌洗液细胞学之间有无相关性。方法选取符合IPF诊断标准的患者31例,进行吸气后屏气HRCT扫描,并进行肺功能测定,其中26例患者进行了支气管肺泡灌洗检查。对其中14例患者进行HRCT追踪随访。结果HRCT扫描出现最多的征象是网格影(96.8%)、蜂窝影(74.2%);磨玻璃影与FEV1、FEV1/FEV轻度负相关,网格影与DLco显著负相关,蜂窝影和CT总评分与FVC、FEV1、TLC和DLco均具有很好的负相关性,PaO2与磨玻璃影和CT总评分呈显著负相关。支气管肺泡灌洗液中性粒细胞与磨玻璃影轻度正相关,嗜酸细胞与网格影和CT总评分呈轻度正相关。结论在IPF的HRCT诸多征象中,网格影和/或蜂窝影最具有诊断意义。HRCT主要征象与肺功能参数间有一定的相关性,磨玻璃影反映了肺功能通气障碍,网格影反映了肺功能的弥散障碍,蜂窝影的出现说明了肺的通气功能和弥散功能均受累,CT总评分能很好反映肺功能变化。磨玻璃影与支气管肺泡灌洗液中性粒细胞轻度正相关,嗜酸细胞与网格影和CT总评分呈轻度正相关。