血清游离β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的 建立血清游离β-HCG时间分辨荧光免疫分析法.方法 采用双抗体夹心一步法建立游离β-HCG试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的可测范围为3～200 ng/mL,灵敏度为0.12 ng/mL,CV分别为4.23%和5.73%,与hLH、hFSH、hTSH的交叉反应低,与2000 U/L的hCG的交叉反应结果小于100 ng/ml.51份血样用本试剂盒与国外同类试剂同时检测,其相关系数为0.95.结论 时间分辨荧光免疫分析法是目前血清游离β-HCG检测中最灵敏的方法.该分析法稳定性好,具有很好的应用前景.     

C-肽时间分辨免疫荧光分析方法的建立

目的 探讨抗-C-肽-Eu3+双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析技术(TRIFMA),建立新的C-肽检测技术,提高C-肽检测方法的灵敏度.方法 用抗-C-肽包被反应孔,依次加入一定体积标准品及待测样本,其中的C-肽与已包被的抗-C-肽-C-肽复合物,再加入标志物(抗-C-肽-Eu3+),形成C-肽-Eu3+的复合物.复合物上的Eu3+被增强液解离到溶液中,并与增强液中的有效成分形成高荧光强度的螯合物,荧光强度与标准品、待测样本中的C-肽浓度成正比.结果 本方法最低检测值为0.5μg/ml,检测范围为0.5～45.0μg/ml,并与胰岛素、胰岛素原无交叉反应.结论 用于快速准确协助判断胰岛B细胞功能,区分胰岛素依赖型糖尿病和非依赖型糖尿病,诊断胰岛素瘤等有指导性意义.     

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。     

乙肝五项时间分辨免疫荧光分析与PCR-HBV定量的关系

目的 研究乙肝血清标志物时间分辨免疫定量检测结果与HBV-DNA定量之间的关系.方法 将 200例血清标本同时采用时间分辨免疫荧光定量和实时荧光定量PCR 技术,对乙肝五项含量和HBV - DNA 含量分别进行检测, 按照不同的乙肝病毒标志模式情况分组后,进行乙肝病毒标志物与HBV-DNA的分析研究.结果 乙肝病毒标志物 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性组HBV–DNA检出率为98.7%, HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性组检出率59.3%, HBcAb单项阳性组检出率50%,HBsAb阳性组检出率0,全阴性组检出率0.结论 时间分辨免疫荧光分析与HBV–DNA关系密切,两者联用能更好的满足临床需求.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒.方法采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA 试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价.结果试剂盒的可测范围为l～1 000 U/ml,灵敏度为0.17 U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%～5.9%,3.7%～6.5%.与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应.稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7 d.426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～12 U/ml.用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995.结论试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

人甲胎蛋白时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的 研制人甲胎蛋白(hAFP)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立AFP TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果 试剂盒的可测范围为1~1 000U/ml, 灵敏度为0.17U/ml,精密度良好,批内和批间的精密度分别为3.3%~5.9%,3.7%~ 6.5%。与CEA、CA12-5、CA19-9、CA15-3、白蛋白无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年,37℃稳定7d。426份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0~12U/ml。用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测60份血清标本,其相关系数为0.995。结论 试剂盒各项指标(灵敏度、精密度、特异性、稳定性、准确度)均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:血清超敏C-反应蛋白(CRP)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法的建立. 方法: 采用双抗体夹心法检测血清CRP水平(1株抗CRP的单抗用于包被微孔板,另1株抗CRP的单抗用于Eu3 标记). 结果: TRFIA的线性测量范围为1～1000 mg/L,灵敏度为0.06 mg/L,批内和批间精密度分别为4.0%～7.2%,6.7%～10.8%. 与人IgG和白蛋白未见明显的交叉反应. 109份血清标本用本方法与国外试剂盒同时检测,其相关系数为0.916. 结论: CRP-TRFIA各项指标均达到临床检测要求,可替代国外产品试剂盒,用于临床血清CRP的测定.     

游离雌三醇在早产预测诊断中的价值

早产是新生儿发病和死亡的主要原因．其严重的后遗症给家庭和社会带来沉重的负担。因此。早产是一个长期困扰产科工作者的问题。人们一直在寻找简便可靠的指标以早期、准确诊断乃至预测早产的发生，从而指导临床处理。近年来。游离雌三醇(uE3)作为早产的一个预测诊断指标．受到很多关注。我院2000年1月至2002年1月对门诊或住院的150例孕妇进行uE3检测，探讨uE3对早产预测诊断价值。     

时间分辨免疫荧光分析检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测.本研究者在建立一种灵敏度高、特异性强、操作简便的检测方法.方法 以Eu-DTTA{N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠}为示踪物,建立了用TRFIA检测乙型肝炎血清学标志物乙型肝炎病毒表面抗原的方法.结果 所建立的标准曲线分析范围分别为0.2～300 ng/ml,分析灵敏度为0.05 ng/ml,检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与免疫放射测定同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%.结论 TRFIA分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,价格适中,十分适合临床推广应用.     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白(Hb)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂,探讨在大便潜血(FOB)检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0.8ng/mL或32ng(Hb)/g(粪便),线性范围为0.8～1000ng/mL或32～40000ng(Hb)/g(粪便)。分析内和分析间变异系数分别为3.4%～8.9%和5.2%～13.4%。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析(GICA)试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100%,GICA法的灵敏度和特异性分别为95.6%、100%。结论Hb-TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。     

CA125时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 研制CA125时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立CA125 TRFIA试剂盒。对试剂盒各项指标进行评价。结果 该试剂盒的工作范围为10～600U／ml,分析灵敏度为1．07U／ml，批内、批间的精密度分别为4．5％～8．1％，6．9％～11．5％。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年，37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～37U／ml。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测，其相关系数为0．939。结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒。方法应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估。结果对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5。用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%～7.8%,6.9%～8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒。     

人生长激素的时间分辨荧光免疫分析及其诊断试剂研制

 [目的]利用时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）技术,建立人生长激素（human growth hormone,hGH）的快速检测方法并研制其诊断试剂.[方法]采用双抗体夹心法（一株抗GH的单抗用于包被微孔板,另一株抗GH的单抗用于Eu^3＋标记）建立hGH-TRFIA.[结果]hGH-TRFIA的线性测量范围为0.1×10^-3 100×10^-3U/L,灵敏度为0.036×10^-3U/L,批内和批间的变异系数分别为5.3%～8.6%和7.6%～12.8%.与促甲状腺激素（TSH）、卵泡生成素（FSH）、人胎盘催乳素（LH）和黄体生成素（HPL）均无交叉反应.将43份血清标本用本法与Wallac试剂盒同时检测相关系数（r）为0.957.[结论]hGH-TRFIA可作为一种具有灵敏度高、特异性强和测量范围宽的新方法,用于临床GH水平的测定.     

时间分辨荧光免疫法定量检测CA125试剂盒临床应用研究

目的对自制CA125定量测定试剂盒（时间分辨荧光免疫法）进行临床应用研究，为该试剂盒的临床应用提供科学依据。方法按照自制试剂盒操作说明书对收集的410份血清进行测定，以电化学发光CA125定量测定试剂盒（Roche公司）为对照试剂，微粒子酶联免疫定量测定药盒（ABBOTT公司）为复核试剂，对测定的结果进行统计学分析。结果以电化学发光法为对照试验，其阳性符合率为98．35％，阴性符合率为98．81％，检验差异无统计学意义（P〉0．05）；相关系数为0．937，相关性良好；ROC曲线下面积为0．998。结论本试剂盒检测性能能满足临床应用的需要。     

时间分辨荧光免疫分析仪测量时间稳定性的研究与设计

时间分辨荧光免疫分析仪的测量精度取决于微弱荧光信号的测试精度,而测量时间不稳定将导致测量的荧光信号强度发生波动。针对影响测量时间精度的3个因素（时基信号误差、触发误差、量化误差）,采用TX2108带温度补偿的晶体振荡器作为时基信号源,减小时基信号误差;采用RISC结构的高速单片机及性能稳定的74HC系列外围器件,减小触发误差;采用双游标法使测时分辨力提高3个数量级,减小量化误差。实验表明：在保证同样测量精度的前提下,所需测量次数由1 000次减少到120次。     

应用PVA构建妊娠相关血浆蛋白A固相时间分辨荧光免疫试剂

目的:合成(SA)z-(Bio)x-PVA-(BCPDA)y-Eu3+复合物,并用于构建妊娠相关血浆蛋白A固相时间分辨免疫荧光试剂。方法:用PVA作为载体结合BCPDA-Eu3+和生物素-亲和素,以双抗体夹心法原理,结合生物素标记抗体和包被抗体建立PAPP-A时间分辨免疫荧光试剂,并进行方法学评价。结果:成功的合成了活性的(SA)z-(Bio)x-PVA-(BCPDA)y-Eu3+复合物,构建PAPP-A试剂检测灵敏度为0.7mIU/L;批内变异系数在3.89%~4.96%之间,批间变异系数在7.35%~9.27%之间。结论:合成的(SA)z-(Bio)x-PVA-(BCPDA)y-Eu3+复合物较高的反应活性,可以用于多种试剂的构建。构建的PAPP-A试剂灵敏度高,具有潜在的临床应用价值。