非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其意义

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的诊断价值.方法 用半巢式和混合聚合酶链式反应(PCR)方法,联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3)检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况.结果 ①采用FR3A引物,44例B-NHL有37例出现克隆性IgH基因重排,检测率为84%(37/44);采用FR2A引物,有27例出现克隆性IgH基因重排,检测率为61% (27/44);采用FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3)与J区(JHb、JHc)引物,有34、33例出现克隆性IgH基因重排,检测率为77%、75% (34/44、33/44);结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3),总检测率为95%(42/44).②15例T-NHL有4例出现克隆性IgH基因重排,而5例LRH未出现克隆性IgH基因重排.③1例免疫组化未分型的NHL经PCR检测后明确了分型,为B细胞性淋巴瘤.结论 联合采用多对引物可提高检测阳性率;IgH基因克隆性重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义.     

IgH基因重排在B淋巴瘤微小残留病中的应用

目的探讨IgH基因重排在B细胞淋巴瘤临床诊治中的应用.方法应用半巢式PCR技术对IgH基因的CDRⅡ区和CDRⅢ区进行基因重排检测.共检测45例骨髓标本.其中正常标本8例,淋巴瘤标本37例(B细胞淋巴瘤27例,T细胞淋巴瘤10例).结果 8例正常标本未检测到FR2A或FR3A的重排;27例B细胞淋巴瘤中,23例(85.2%)可检测到FR2A或FR3A重排,其中FR2A重排16例(59.3%),FR3A重排20例(74.1%),FR2A、FR3A均有重排者13例(48.1%);10例T淋巴瘤中FR2A重排1例,FR3A重排3例.骨髓穿刺检查:27例B淋巴瘤中5例原幼淋细胞>5%,FR2A和FR3A阳性各4例;22例原幼淋细胞<5%者,FR2A阳性12例,FR3A阳性16例.结论单克隆性IgH重排对鉴别淋巴系统肿瘤及检测骨髓中的微小残留病变有一定参考价值.     

基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用

目的:建立基于克隆性分析技术的B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术,探讨B淋巴细胞免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排在恶性淋巴瘤临床诊断中的应用. 方法: 从组织蜡块中切取组织片5～10张,提取基因组DNA,PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果. 结果:20例良性淋巴组织反应性增生病例中, 淋巴细胞IgH及TCR基因重排均为阴性;18例T细胞非何杰金氏淋巴瘤中TCRγ基因重排12例, TCRβ基因重排3例,未见有IgH基因重排;32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性,有2例TCRγ和IgH基因重排均阳性;3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排;IgH及TCR基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义(P<0.05). 结论:应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段,且适用于石蜡标本以进行回顾性研究.     

Analysis of ocular adnexal hyperplastic lesions lymphatic organization gene rearrangement

目的 探讨眼附属器淋巴组织增生性病变的免疫球蛋白重链(IgH)基因重排特点及应用价值.方法 收集22例眼附属器淋巴组织增生性病变,其中淋巴瘤8例,非典型淋巴组织增生病变6例,反应性增生的淋巴组织8例.运用标准试剂盒提取DNA,采用半巢氏PCR技术、2对引物进行IgH基因重排检测,同时运用免疫组化2步法标记抗体(LCA,CD3 CD20,CD79a,CD45RA,CD45RO,Bcl-2等).结果 6例非典型淋巴组织增生性病变中IgH基因单克隆重排4例阳性(67%),8例淋巴瘤中IgH基因单克隆重排8例阳性(100%),反应性增生的淋巴组织基因重排阴性.所有12例病例均经免疫组织化学染色,全部为非霍奇金B细胞淋巴瘤,其中黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT)B细胞淋巴瘤8例,弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)2例,滤泡性淋巴瘤(FL)1例,淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)1例.结论 基因重排检测是眼附属器疑难淋巴组织增生性病变和淋巴瘤鉴别诊断的有效方法,可以有效地提高诊断的准确率.     

眼附属器淋巴组织增生性病变基因重排分析

目的探讨眼附属器淋巴组织增生性病变的免疫球蛋白重链(IgH)基因重排特点及应用价值。方法收集22例眼附属器淋巴组织增生性病变,其中淋巴瘤8例,非典型淋巴组织增生病变6例,反应性增生的淋巴组织8例。运用标准试剂盒提取DNA,采用半巢氏PCR技术、2对引物进行IgH基因重排检测,同时运用免疫组化2步法标记抗体(LCA,CD3 CD20,CD79a,CD45RA,CD45RO,Bcl-2等)。结果 6例非典型淋巴组织增生性病变中IgH基因单克隆重排4例阳性(67%),8例淋巴瘤中IgH基因单克隆重排8例阳性(100%),反应性增生的淋巴组织基因重排阴性。所有12例病例均经免疫组织化学染色,全部为非霍奇金B细胞淋巴瘤,其中黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT)B细胞淋巴瘤8例,弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)2例,滤泡性淋巴瘤(FL)1例,淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)1例。结论基因重排检测是眼附属器疑难淋巴组织增生性病变和淋巴瘤鉴别诊断的有效方法,可以有效地提高诊断的准确率。     

B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排的检测

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在B细胞性淋巴瘤(B-NHL)中的诊断价值。方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法检测B细胞淋巴瘤30例．淋巴结反应性增生(RH)10例及T细胞淋巴瘤(T-NHL)2例的IgH基因重排。结果 30例B-NHL中，22例(73．3％)出现IgH基因克隆性重排，而RH及T-NHL均未出现IgH基因重排。结论 B细胞淋巴瘤中存在B细胞单克隆增生，支持肿瘤单克隆起源学说；IgH基因克隆性重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和反应性增生以及T细胞和B细胞淋巴瘤有重要意义。     

眼附属器淋巴组织增生性病变基因重排分析

目的 探讨眼附属器淋巴组织增生性病变的免疫球蛋白重链（IgH）基因重排特点及应用价值。方法 收集 22 例眼附属器淋巴组织增生性病变,其中淋巴瘤 8 例,非典型淋巴组织增生病变 6 例,反应性增生的淋巴组织 8 例。运用标准试剂盒提取 DNA,采用半巢氏 PCR 技术,采用 2 对引物进行 IgH 基因重排检测。同时运用免疫组化二步法标记（LCA,CD3,CD20,D79a,CD45RA,CD45RA,Bcl-2 等）抗体。结果 6 例非典型淋巴组织增生性病变中 IgH 基因单克隆重排 4 例阳性（67%）。8 例淋巴瘤中 IgH 基因单克隆重排 8 例阳性（100%）。反应性增生的淋巴组织基因重排阴性。所有 12 例病例均经免疫组织化学染色,全部为非霍奇金 B 细胞淋巴瘤,其中粘膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT)B 细胞淋巴瘤 8 例,弥漫大 B 细胞淋巴瘤(DLBCL)2 例,滤泡性淋巴瘤(FL)1 例,淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL）1 例。结论 基因重排检测是眼附属器疑难淋巴组织增生性病变和淋巴瘤鉴别诊断的有效方法,可以有效地提高诊断的准确率。     

皮肤假性淋巴瘤组织病理与基因重排特点

目的分析研究皮肤假性淋巴瘤(CPL)的组织病理、基因重排特点。方法对13例皮肤假性淋巴瘤的石蜡包埋组织,采用苏木精-伊红染色(HE染色法)、免疫组化SP法进行组织病理学检查,应用PCR行TCR-β和IgH基因重排检测。结果13例皮肤假性淋巴瘤组织病理示:真皮内淋巴样细胞大致呈带状浸润,无明显异形性,主要位于真皮浅层,细胞浸润与表皮之间有正常胶原带分隔。免疫组化显示浸润淋巴细胞呈混合型(CD20、CD3、CD45RO阳性)。13例CPL中,进行TCR-β基因重排时:10例出现smear带(76.9%),2例重排阳性(15.4%);IgH基因重排时:2例出现smear带(15.4%),无1例重排阳性(0%)。结论皮肤假性淋巴瘤的临床及组织病理表现形式多样;TCR-β和IgH基因重排检测,在诊断CPL方面具有重要价值。     

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因克隆性重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者检测外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体gamma基因(TCRγ)克隆性重排的意义.方法 对235例NHL患者进行了254例次血浆游离DNA提取,通过globin基因确定血浆游离DNA存在,通过PCR方法检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)基因克隆性重排.并与病理组织DNA及外周血单个核细胞DNA基因克隆性重排结果同时进行对比观察.结果 初发及复发患者220例中219例均成功提取到血浆游离DNA.B-NHL患者140例中IgH重排阳性118例(84.3%),TCRγ重排阳性1例(0.7%);T-NHL患者80例中TCRγ重排阳性44例(55%),IgH重排阳性2例(2.5%),IgH和TCRγ重排同时阳性4例(5%);34例临床缓解病例中仅3例(8.8%)提取出血浆游离DNA,但IgH和TCRγ重排均阴性.56例NHL患者血浆游离DNA IgH或TCRγ基因重排结果与病理组织结果一致(P＞0.05).67例NHL患者血浆游离DNA与外周血单个核细胞DNA IgH和TCRγ基因重排结果显示,血浆游离DNA阳性率高于单个核细胞DNA(P＜0.05).结论 采用血浆游离DNA检测NHL患者IgH和TCRγ基因克隆性重排具有较高的临床诊断价值,与病理标本高度一致;标本取材简单方便,对NHL的治疗反应监测也有重要参考价值.     

单克隆IgH基因重排检测在B-NHL诊断和随访中的意义

目的　评价单克隆IgH基因重排检测在恶性淋巴瘤 (B NHL)临床中的应用价值。方法　用半巢式PCR检测单克隆IgH基因重排。病例组为B NHL ,包括 6 9例石蜡包埋组织切片、治疗前 16例骨髓和 2 9例外周血、阳性者治疗后复查骨髓和外周血 ;对照组为 10例慢性淋巴结炎、3例T NHL和 2例HD。结果　对照组均阴性。病例组 :切片中单克隆IgH基因重排阳性率为 6 3.8% (44 / 6 9) ;骨髓和外周血阳性率分别为 43 .8%(7/ 16 )和 41.4% (12 / 2 9) ,细胞形态学检查未见异常细胞者阳性率分别为 33 .3% (3/ 9)和 31.3% (5 / 16 )。 16例同时采集骨髓和外周血者 ,阳性率分别为 43 .8% (7/ 16 )和 37.5 % (6 / 16 ) ,两者无统计学差异。治疗前单克隆IgH重排阳性者 ,6例完全缓解 (CR)后转阴 ,处于持续缓解状态 ,1例临床缓解后 13个月仍阳性 ,现在继续随访中 ,另 1例CR后持续阳性者 ,6个月后复发。结论　切片、骨髓和外周血中检测单克隆IgH基因重排可以作为B NHL诊断和随访微小残留病灶的辅助手段     

A study of Hodgkin/Reed-Sternberg cells using single cell polymerase chain reaction

Objective To investigate the characteristics of Hodgkin/Reed- Sternberg (H/R-S) cells found in patients with various types of Hodgkin’s disease (HD). Methods H/R- S cells were micropicked from frozen sections of tissues affected by HD. The DNA from these cells was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using immunoglobulin heavy chain gene FRⅢa/JH primers and light chain gene family- specific primers. Results A total of 52/135 (35. 8%) isolated cells showed the specific products in the reactions. IgH and V(κ4) rearrangements were repeatedly found in many cells from a lymphocyte predominance type sample; repeated V(κ4) and individual IgH/V(κ2,4) rearrangements and individual IgH, V(λ 3) / V(κ4) rearrangements were found in two different cases of the nodular sclerosis type; repeated IgH/ V(λ3) and individual V(λ2,4) rearrangements, repeated V(κ2,4) rearrangements, repeated V(κ4) and individual IgH/ V(κ3) rearrangements, repeated IgH and individual V(κ3) / V(λ4) rearrangements were detected in 3 cases of the mixed cellularity type. Repeated and individual IgH rearrangements were found in other 2 cases. Conclusion The H/R- S cells isolated from the lymphocyte predominance subtypes of HD have IgH and V(λ4) gene rearrangements. This suggests that the lymphocyte predominance type is a proliferation of neoplastic B cells. The cells isolated from the mixed cellularity and nodular sclerosis types derive from B lineage cells at various stages of differentiation because of the presence of their IgH, κ and/or λ gene rearrangements. To our knowledge, this is the first time that the λ gene rearrangement was detected in H/R- S cells.     

B细胞恶性肿瘤患者血浆游离DNA中IgH基因重排检测及临床意义

目的：探讨检测B细胞肿瘤患者血浆DNA 标本IgH基因重排对辅助诊断及判断预后的临床意义。方法：采集83例B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）、B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)及多发性骨髓瘤（MM）患者共110份血浆标本,提取血浆游离DNA,PCR检测IgH基因重排。结果：63例初发B细胞肿瘤患者IgH基因重排检测阳性率为77.8％,而缓解病例的阳性率为27.6％,初发患者检测阳性率显著高于缓解病例（P < 0.01）。结缔组织病、感染性疾病及健康人均呈阴性结果。IgH基因重排检测阳性率与B-NHL和MM的分期、血清β2-微球蛋白（β2-MG）和乳酸脱氢酶（LDH）水平无关（P > 0.05）。追踪检测16例患者显示12例初发检测阳性者治疗缓解后转为阴性,其中3例缓解后6～9月检测血浆IgH基因重排再次转为阳性,随后此3例患者均出现临床复发,检测转阳较临床复发提前1～4月。1例在初诊和完全缓解期间检测均为阳性ALL患者,经异基因干细胞移植后转为阴性;3例检测始终阳性的患者疗效不佳,始终未获缓解。结论：初治B细胞肿瘤患者血浆游离DNA中检测IgH基因重排阳性率高、特异性强、取材简便,有望用于B细胞肿瘤辅助诊断,追踪检测还有助于判断预后。 【关键词】 B细胞,肿瘤; 血浆,DNA; 免疫球蛋白, 重链;基因重排; PCR     

弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排与GCB分子亚型的相关性

目的: 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)bcl-2/IgH基因重排与分子亚型生发中心样(GCB)的相关性.方法:采用自行设计的半巢式PCR对60例DLBCL的bcl-2/IgH基因重排进行了检测,并对阳性产物进行克隆、测序.同时采用免疫组化SP法在组织微阵列上同步观测CD20,CD10,Bcl-6,黑色素瘤相关抗原(突变体)1 (MUM1)的表达,进行GCB和非生发中心样(non-GCB)分子分类.结果: 经常规法扩增bcl-2/IgH,有6/60例DLBCL bcl-2/IgH阳性;在6例阳性样本中,采用本组设计的半巢式PCR扩增,经克隆及测序证实5例bcl-2/IgH基因重排阳性,1例为人类第19号染色体BAC 331191基因的片段.60例DLBCL CD20表达全部阳性;CD10,Bcl-6, MUM1的阳性表达率分别为43.3%,46.7%,61.7%;GCB 32(53.3%)例,non-GCB 28(46.7%)例.bcl-2/IgH基因重排阳性的病例均属GCB分子亚型, 且与CD10表达有显著性相关(P=0.012),而与Bcl-6及MUM1表达无相关性.结论:使用本组设计的半巢式PCR可提高bcl-2/IgH基因重排检测的准确性.bcl-2/IgH基因重排的检测可协助确定部分GCB分子亚型的DLBCL.     

88例恶性淋巴瘤预后相关资料分析

目的：了解恶性淋巴瘤（ML）发病、病理及免疫分型特点，探讨基因分型在诊断中的作用。方法：通过标准链菌素生物素－过氧化物酶标记物法（SABC法）对病理标本进行免疫分型，PCR检测病理及骨髓标本IgH（FR2A，3A）和TCR（β，γ）基因重排，同时对临床及病理资料进行多因素分析。结果：（1）ML非霍奇金淋巴瘤（NHL）较霍奇金淋巴瘤（HL）发病率高，发病率随年龄增长而递增，60岁以上发病者占38．6％；其平均生存时间明显低于60岁以下者。（2）B－NHL发病率为68．6％，T－NHL为28．6％；B－NHL的3年生存率高于T－NHL。（3）低度恶性NHL占42％，中、高度恶性占58％；低度恶性组平均生存时间较中、高度恶性组长，但统计学上差异无显著性。生存期分析显示I－Ⅱ期NHL预后明显优于Ⅲ－Ⅳ期。（4）PCR检测病理及骨髓标本的IgH和TCR重排，B－NHL FR2A的阳性率分别为66.7%及56．2％；FR3A阳性率分别为90．4％及81．2％；T－NHL中TCRβ、γ阳性率分别为91．7％及75．0％；病理标本的阳性率略高于骨髓，T、B分型与免疫分型相符。结论：年龄，T、B分型和临床分期是影响NHL预后的重要因素；分子生物学检测作为辅助手段可以肯定免疫分型结果并补充其不足，骨髓及外周血检测除协助分型外可用于肿瘤微小残留病的监测。     

双色荧光原位杂交技术检测B系急性淋巴细胞白血病IgH基因重排

目的研究急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）中免疫球蛋白重链基因（IgH）重排的发生率,并分析其临床特点及其他细胞遗传学特征。方法选取158例初诊B-ALL患者的骨髓标本,应用短期培养法制备染色体悬液,采用R显带技术进行核型分析。选用位于14q32 IgH基因两端的序列特异性探针,应用荧光原位杂交技术（FISH）对158例患者的染色体悬液进行IgH基因重排检测。结果 158例中,检出IgH基因重排阳性11例（6.9%）,其阳性细胞比例为10.5%～88.2%。结合染色体核型分析发现,11例中同时伴随染色体核型异常的有9例,其中8例为复杂异常。9例染色体异常病例中明确累及14q32的有5例。不同染色体核型异常患者IgH基因重排阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）,其中染色体复杂异常患者IgH基因重排阳性率（14.5%）高于正常核型（3.8%）及非复杂异常（1.9%）。而不同性别、年龄及不同白细胞、血红蛋白、血小板水平患者IgH基因重排阳性率差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 IgH基因重排在B-ALL中有较高的发生率。FISH技术以其较高的敏感性和特异性对提高IgH基因重排的检出率起着重要的作用。     

淋巴细胞性白血病／淋巴瘤bcl—2基因重排的研究

目的：探讨ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排的临床意义。方法：应用多聚酶链反应技术检测９种恶性淋巴瘤细胞系和不同类型淋巴系统恶性肿瘤临床标本中ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排情况。结果：２种细胞系,１例慢性淋巴细胞白血病及６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）有ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排,其中,３６．４％滤泡型ＮＨＬ及１８．２％弥漫性ＮＨＬ有重排。ｂｃｌ－２基因断裂点绝大多数（８／９）位于主要断裂区（ＭＢＲ）。结论：ｂｃ     

Rearranged patterns of IgH and TcRY genes in patients with acute lymphoblastic leukemia

Summary The rearrangement of immunoglobulin heavy chain gene (IgH) and T cell receptor γ gene (TcRγ) was studied in 30 patients with acute lymphoblastic leukemia (ALL) by the polymerase chain reaction (PCR). 19 cases was found to have rearrangement of IgH gene, 12 of TcRγ. Most of IgH rearrangement was characterized by one or two specific bands while some had more than two. Rearrangement of TcRγ gene appeared as one specific band. A slight difference in number, size and lightness of bands was found among the patients. 4 different kinds of rearrangement were observed in the detection of IgH rearrangement in combination with TcRγ gene. The rearranged patterns of IgH and TcRγ gene as well as the clinical significance were discussed.