靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。     

PTEN和p27Kip1共表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的　通过腺病毒介导转染前列腺癌PC 3细胞 ,探讨人 10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白类似物 (PTEN)和p2 7Kip1对肿瘤细胞增殖和凋亡等方面的影响及二者的协同作用。方法　构建携带人PTEN和p2 7Kip1基因的腺病毒载体 ,体外转染PC 3细胞 ,通过RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达。采用细胞生长试验、流式细胞仪检测PC 3转染前后细胞增殖、细胞周期和早期凋亡率的变化。结果　病毒滴度Ad PTEN为 1 8× 10 7pfu ml、Ad p2 7Kip1为 1 2× 10 9pfu ml,RT PCR检测有PTEN mRNA(46 2bp)和p2 7Kip1 mRNA (32 0bp) ,Westernblot检测有PTEN蛋白 (6 0KD)和P2 7蛋白 (2 7KD)特异表达 ,可明显抑制PC 3细胞的增殖 ,诱导细胞凋亡 ,联合基因治疗组与单基因组相比差异有显著意义。结论　成功构建携带人PTEN和p2 7Kip1的重组腺病毒载体 ,在前列腺癌细胞株PC 3得到了稳定、特异的高表达 ,联合基因疗法有望成为治疗前列腺癌的有效方法。     

SLP-2对前列腺癌PC-3细胞增殖和早期凋亡的影响

目的探讨SLP-2（stomatin-like protein2）基因对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法合成和构建SLP-2沉默和过表达载体,用Lipofectamine TM2000分别转染5组人前列腺癌PC-3细胞：pcDNA3．1-SLP-2组,空质粒pcDNA3-1组,siRNA—SLP-2组,siRNA阴性对照组以及空白对照组。采用Q-PCR和Western-Blot分别检测PC-3细胞中SLP-2的mRNA和蛋白表达量;用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测PC-3细胞增殖;采用细胞线粒体膜电位JC-1试剂盒检测PC-3细胞的早期凋亡情况。结果转染pcDNA3．1-SLP-2质粒和siRNA-SLP-2后PC-3细胞SLP．2基因mRNA表达水平分别为（324．884±16．508）和（0．195±0．016）,蛋白表达水平分别为（5．013±0．284）和（0．296±0．011）,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;转染pcDNA3-1-SLP-2基因48h、72h、96h后Pc。3细胞增殖吸光度值（OD值）分别为（0．714±0．007）、（1．103±0．018）、（1．348±0．018）,均显著高于空白对照组（P〈0．05）。采用siRNA沉默SLP．2基因48h、72h、96h后PC-3细胞增殖率分别为（0．571±0．004）、（0．875±0．010）、（1．044±0．008）,均显著低于空白对照组（P〈0．05）;细胞凋亡结果显示,转染pcDNA3．1-SLP．2和siRNA-SLP-2的PC-3细胞早期凋亡率分别为（2．433±0．577）和（9．197±0．602）,与空白对照组（4．993±0．710）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论SLP-2可促进人前列腺癌PC-3细胞的增殖,并抑制细胞的早期凋亡。     

三氧化二砷诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡P_(38)信号通路的研究

目的:探讨P38信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中的作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol/L)As2O3作用PC-3细胞24、48、72 h后的细胞生长抑制情况。Western印迹检测As2O3作用PC-3细胞后P38信号转导通路的表达。Annexin V/PI双染色法检测As2O3作用PC-3细胞后细胞凋亡,同时检测应用P38通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后As2O3诱导PC-3细胞凋亡的变化。结果:As2O3诱导PC-3细胞凋亡呈现时间、剂量依赖性。As2O3可以使P38信号通路蛋白快速磷酸化,激活P38信号通路。2、10、20μmol/L As2O3作用PC-3细胞24 h后,PC-3细胞凋亡率分别为(18.9±0.43)%、(24.7±0.29)%和(49.7±1.79)%。应用P38信号通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后,PC-3细胞凋亡率分别降低为(14.8±0.81)%、(22.1±0.51)%和(39.6±1.74)%,抑制P38信号通路可以显著降低As2O3诱导PC-3细胞的凋亡(P<0.05)。结论:P38信号通路在As2O3诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中有表达,干扰P38信号通路可影响As2O3诱导PC-3细胞凋亡,提示P38信号通路参与了As2O3诱导的PC-3细胞凋亡。     

槲皮素对前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的:研究槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)的槲皮素处理,MTT法检测槲皮素对细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:槲皮素能抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,浓度由低到高,其24 h的抑制率(%)分别为3.01±1.32、4.84±1.73、20.35±1.30、16.78±1.89、27.25±4.01,48 h的抑制率(%)分别为10.18±1.16、6.22±0.04、24.29±4.19、22.4±4.26、41.42±5.43,当药物浓度>150μmol/L时P<0.05,具有统计学意义;流式细胞术显示PC-3细胞凋亡率随槲皮素浓度升高和作用时间延长而增加(P<0.05),其中浓度150μmol/L和200μmol/L组,24 h的凋亡率(%)分别19.10±0.28、26.55±0.78,48 h的凋亡率(%)分别为27.65±1.06、38.30±5.96;电镜观察到细胞的典型凋亡形态学变化。结论:在适当的条件下,槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,同时可诱导PC-3细胞凋亡,其具体作用机制有待进一步深入研究。     

葡萄籽提取物对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用

目的:观察葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用。方法:经预试选用不同浓度(100、200、300μg/ml)的GSE分别作用PC-3细胞24、48、72h,以原代培养的1～3日龄SD大鼠肾细胞作为正常对照;采用四唑氮蓝(MTT)显色法检测GSE对PC-3细胞和SD大鼠肾细胞的生长抑制作用。结果:GSE以浓度和时间依赖性方式抑制PC-3细胞生长(P<0.01),对原代培养SD大鼠肾细胞生长仅有轻度抑制作用。结论:GSE可抑制前列腺癌PC-3细胞生长,有可能成为治疗前列腺癌的一种新药物。     

人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

目的探讨人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用。方法通过血清药理学的方法，制备人参胡核汤高、中、低剂量及空白组的血清。各组与PC-3细胞作用48h、72h后，光镜观察细胞形态学改变；MTT法观察细胞增殖的抑制率；RT-PCR技术检测前列腺特异性抗原（PSA）表达。结果人参胡核汤含药血清各组作用48h、72h后，表现出不同程度的细胞皱缩，边缘毛糙，细胞核固缩或碎裂，细胞体积缩小；各组均可抑制PC-3细胞增殖；降低PSA表达水平。上述指标中，以人参胡核汤含药血清高剂量组作用48h的效果最为明显。结论人参胡核汤含药血清可使PC-3细胞的形态发生改变、抑制PC-3细胞增殖、降低PSA的表达。     

三氧化二砷对前列腺癌细胞株PC-3生长影响的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株PC 3生长的影响及其机制。　方法 :通过光学显微镜观察As2 O3 处理前后培养的PC 3细胞生长和形态的变化 ,采用MTT法了解不同浓度As2 O3 作用后PC 3细胞的生长抑制曲线 ,应用流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染法分析不同浓度As2 O3 处理的PC 3细胞的凋亡情况。　结果 :As2 O3 作用后 ,PC 3细胞形状变圆 ,体积变小 ,胞质透亮度下降 ,部分细胞脱落悬浮于培养基中。在7.81 2 5、1 5 .6 2 5、31 .2 5 0、6 2 .5 0 0、1 2 5、2 5 0、5 0 0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8h和 72h后 ,MTT法检测细胞生长抑制率分别为(0 .0 6± 0 .99)、(1 5 .0 1± 1 .1 2 )、(2 9.2 1± 1 .31 )、(34.32± 1 .1 4 )、(4 0 .5 1± 1 .81 )、(6 9.39± 1 .74 )、(73.1 9± 2 .4 1 ) %和(0 .0 4± 1 .5 1 )、(1 6 .1 9± 1 .0 4 )、(4 3.6 1± 1 .1 2 )、(5 6 .6 6± 1 .2 3)、(73.1 3± 2 .6 1 )、(85 .2 2± 1 .74 )、(91 .4 1± 2 .81 ) %。用流式细胞仪检测经过 0 (对照组 )和 0 .1、1 .0、3.0、5 .0、2 0 .0、5 0 .0 μmol/LAs2 O3 作用 4 8、72h后的PC 3细胞 ,凋亡率分别为 0 .87%、5 .33%、8.94 %、9.6 6 %、1 2 .5 6 %、4 5 .5 9%、6 9.0 9%和 0 .1 3%、1 3.4 9%、     

基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR及Western印迹验证STIM1抑制表达有效性,并采用Western印迹检测PC-3细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,survivin、激活型Caspase-3的表达水平。结果:倒置显微镜观察发现PC-3细胞病毒转染效率80%。转染1周后,RT-PCR及Western印迹显示STIM1被有效抑制。抑制STIM1表达后,对照组Bcl-2/Bax比率为1.24,干扰组PC-3细胞Bcl-2/Bax比率为0.31,比率显著下降;干扰组PC-3细胞survivin表达明显降低,相对表达量为对照组的0.14倍;Caspase-3裂解激活相对表达量为对照组的1.52倍(P0.05)。结论:STIM1在前列腺癌PC-3细胞中可视为致癌基因,抑制其表达可通过下调Bcl-2/Bax比率,降低survivin表达,激活Caspase-3级联通路,诱导细胞凋亡。     

参附注射液对前列腺癌PC-3细胞凋亡诱导的影响

目的:研究参附注射液(SF)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及可能机制。方法:实验设立对照组和SF 50、100、200μl/ml组,Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测p53 mRNA表达。结果:与对照组比较,作用24、48、72 h后,SF 50、100、200μl/ml组PC-3细胞存活率显著减少(P均0.05)。SF各组24 h存活率分别为(93.76±2.63)%、(81.21±1.80)%、(18.01±3.84)%;48 h存活率分别为(94.67±1.11)%、(78.33±2.89)%、(10.34±1.44)%;72 h存活率分别为(91.30±0.47)%、(36.67±1.56)%、(1.33±0.32)%,呈浓度和时间依赖性。作用48 h后,p53 mRNA表达明显升高(P0.05)。结论:SF可以诱导PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与p53表达增高相关。     

星形孢菌素对前列腺癌细胞株PC-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素(ST)对前列腺癌细胞株PC-3增殖及凋亡的影响。方法:以ST(10-8mol/L)处理体外培养的PC-3细胞株。采用Western印迹检测细胞周期蛋白cyclin A、cyclin D1表达的变化。通过MTT实验、平板克隆实验检测ST对PC-3细胞增殖能力的影响。流式细胞仪检测各组细胞凋亡的情况。光镜观察细胞形态学的改变。结果:PC-3细胞经ST处理后cyclin A、cyclin D1蛋白表达明显降低。MTT实验结果显示ST对PC-3细胞的抑制作用自48 h后(19.35%)有显著性(F=31.06,P<0.01)。平板克隆实验结果显示组细胞克隆形成率ST组[(37.10±3.43)%]明显低于对照组((64.80±4.34)%,χ2=14.59,P<0.05]及DMSO组[(62.80±4.36)%,χ2=12.50,P<0.05]。流式细胞术结果显示ST组凋亡率(19.6±2.20)%与对照组(5.33±1.40)%和DMSO组(5.50±0.96)%比较显著增加(F=104.36,P<0.01)。光镜下可见:与对照组及DMSO组比较ST组细胞生长状态明显变差,细胞变圆,边缘模糊。结论:ST可以抑制前列腺癌细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡。     

强力霉素抑制前列腺癌细胞PC-3增殖的体外研究

目的研究强力霉素对雄激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3增殖能力的影响及其机制。方法采用MMT法观察强力霉素对前列腺癌细胞PC-3增殖能力的影响，应用流式细胞术(FCM)和透射电镜观察强力霉素对前列腺癌细胞周期的影响和超微结构的改变。结果不同浓度的强力霉素均能抑制PC-3细胞的增殖，细胞周期的改变表现为S期明显受到抑制，G1～S期阻滞。超微结构的改变表现为线粒体的肿胀、空泡化，粗面内质网脱颗粒，且以上改变均具有剂量依赖性。结论强力霉表演是通过抑制DNA的合成和影响细胞增殖时的能量和物质代谢来抑制前列腺癌细胞的恶性增殖，有可能应用于前列腺癌的治疗。     

Effects of TRPM8 on the proliferation and motility of prostate cancer PC-3 cells

We investigated the effects of transient receptor potential M8 (TRPM8) channel on the proliferation and motility of androgen-independent prostate cancer PC-3 cells. After being permanently transfected with an empty vector and cDNA encoding the TRPM8 protein, cells were analysed for cell cycle distribution and motility using flow cytometry and scratch assay. Immunocytochemistry and Ca²⁺ imaging analysis revealed the overexpression of functional TRPM8 channel on both endoplasmic reticulum and plasma membrane of PC-3-TRPM8 cells. Cell cycle distribution and scratch assay analysis revealed that TRPM8 induced cell cycle arrest at the G₀/G₁ stage (P < 0.05) and facilitated the cell apoptosis induced by starvation (P < 0.05). Furthermore, TRPM8 inhibited the migration of PC-3-TRPM8 cells (P < 0.01) through the inactivation of focal-adhesion kinase. It appears that TRPM8 was not essential for the survival of PC-3 cells; however, the overexpression of TRPM8 had negative effects on the proliferation and migration of PC-3 cells. Thus, TRPM8 and its agonists may serve as important targets for the treatment of prostate cancer.     

TRPM8对前列腺癌细胞PC-3细胞增殖和迁移影响的研究

目的 探讨TRPM8对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖和迁移能力的影响. 方法 PC-3细胞分别转染空载体pcDNA3和目的 基因TRPM8,筛选稳定表达细胞株;分别通过免疫荧光和钙成像检测TRPM8蛋白表达、分布以及功能;通过流式细胞术和划痕实验检测TRPM8对PC-3细胞周期和细胞迁移率的影响. 结果 免疫细胞化学和钙成像提示PC-3-TRPM8细胞表达有功能的TRPM8通道;TRPM8能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与PC-3和PC-3-vector细胞相比,处于G0/G1期的PC-3-TRPM8细胞显著增加(71.89%±3.43% vs 54.67%±4.59%、51.48%±3.54%,P＜0.05),易化饥饿诱导的细胞凋亡(12.56%±1.78% vs 4.67%±1.49%、5.28±1.35%,P＜0.05),并抑制细胞迁移(P＜0.01). 结论 TRPM8并不为PC-3细胞存活所必需,相反,高表达的TRPM8能抑制PC-3细胞的增殖和迁移,可能为前列腺癌治疗的一个新靶点.     

正常前列腺基质细胞抑制前列腺癌细胞系PC-3增殖的体外实验研究

目的 探讨前列腺癌发病的基质－上皮相互作用机制。方法 体外培养前列腺基质细胞和前列腺癌（Pca)细胞系PC－3。分别取已用于培养液作为另一种细胞的条件培养液,观察条件培养液对细胞增殖的影响。用双层软琼脂分析法混合培养前列腺基质细胞和PC－3细胞。用MTT法检测不同浓度TGFβ1对PC－3细胞增殖率的影响。用免疫组化SP法研究基质中平滑肌细胞的比例。用RT－PCR方法检测基质细胞TGFβ1的表达。结果 PC－3细胞的增殖在混合培养时受到抑制。混合培养3周PC－3细胞的增殖率对照组的41％（P＜0．01）。PC－3细胞的增殖在加入TGFβ1后受到抑制,随TGFβ浓度的增加,对PC－3细胞的抑制作用增强。随TGFβ1作用时间的延长,相同浓度的TGFβ1抑制效应更显著（P＜0．01）。前列腺基质细胞表达大量的TGFβ1。结论 前列腺基质细胞可以通过分泌TGFβ1抑制PC－3的增殖。前列腺癌的基质可能存在病变,使癌变的上皮逃脱基质的抑制作用。     

染料木黄酮对去势抵抗性前列腺癌VCaP细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(GDN)对去势抵抗性前列腺癌细胞VCa P增殖的抑制作用及可能机制。方法:以不同浓度(0、12.5、25、50、100、200μmol/L)的GEN处理去势抵抗性前列腺癌细胞VCaP,分别在24、48、72 h以CCK-8法测定细胞增殖;以流式细胞术检测细胞周期;以免疫荧光法检测Ki-67表达水平;以Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA、P53及PSA表达水平。结果:12.5、25、50、100、200μmol/L GEN作用于VCaP细胞72 h后,对VCaP细胞的抑制率分别为(25.38±0.02)%、(31.14±0.29)%、(45.27±0.03)%、(52.19±0.05)%与(68.21±0.19)%,与对照组[(10.08±0.02)%]相比差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术显示GEN可导致VCa P细胞G2/M期阻滞(P0.05)。免疫细胞化学法检测显示GEN能够抑制细胞中Ki-67的表达。Western印迹显示去势抵抗性前列腺癌细胞内PSA、Cyclin D1、PCNA随着GEN浓度的增加逐渐下调,P53随着GEN浓度的增加逐渐上调(P0.05)。结论:GEN能够抑制体外培养的去势抵抗性前列腺癌细胞VCaP增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期并伴随相关周期蛋白表达的改变有关。     

3-溴丙酮酸对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其内在机制。方法:体外培养PC-3细胞,倒置显微镜下观察不同浓度3-BrPA对PC-3细胞形态学的影响;应用MTT法、细胞划痕和Transwell法检测不同浓度3-BrPA在不同时间段(24、48、72 h)对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响;应用Western印迹检测3-BrPA作用后各组PC-3细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和基质金属蛋白酶14、9、2(MMP-14、MMP-9、MMP-2)蛋白表达的变化。结果:在一定浓度范围内,随着3-BrPA浓度的升高,细胞形态的改变愈明显。MTT结果表明,随着3-BrPA浓度的增加、作用时间延长PC-3细胞抑制率增大(P<0.01)。细胞划痕和Transwell细胞侵袭实验显示:与对照组相比,培养24 h后25、50、100μmol/L 3-BrPA浓度组细胞划痕迁移愈合率降低,细胞侵袭数目减少,且培养48 h与24 h相比,各组细胞迁移愈合率和侵袭细胞数目均降低,表明细胞体外迁移率和侵袭细胞数目与3-BrPA作用浓度、作用时间有关,具有剂量和时间依赖性(P<0.01)。Western印迹检测结果表明:与对照组相比,25、50、100μmol/L 3-BrPA浓度组中GLUT1、MMP-14、MMP-9、MMP-2蛋白表达量明显降低(P<0.01)。结论:糖酵解抑制剂3-BrPA降低PC-3增殖、迁移和侵袭能力,可能与下调GLUT1、MMP-14、MMP-9及MMP-2蛋白表达有关。