GAD在颞叶癫痫大鼠海马内源性促痫机制中的作用

目的:探讨GAD65、GAD67在颞叶癫痫发生后海马内源性促痫机制中的作用。方法:112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42),实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型,对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水。选取腹腔注射后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、7天、30天为研究的时间点,颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化,大鼠处死前进行EEG描记。用原位杂交方法检测不同时间点海马不同区域GAD65、GAD67mRNA的表达,免疫组织化学法检测GAD65、GAD67蛋白的表达。结果:实验组大鼠海马GAD65 mRNA及其蛋白的表达随时间呈逐渐增高趋势,致痫后48小时～30天,GAD65 mRNA及其蛋白表达较对照组增高(48小时P<0.05;7～30天P<0.01);海人酸致痫后6小时、24小时实验组大鼠海马的GAD67mRNA及其蛋白表达较对照组增高(分别为P<0.01、P<0.05)。结论:颞叶癫痫急性期海马GAD67表达的增高及慢性期海马GAD65表达的增高是癫痫发生后机体的内源性抗痫机制。     

颞叶癫痫大鼠不同时期海马细胞外氨基酸类递质的变化

目的探讨海人酸(Kainic Acid,KA)诱发颞叶癫痫大鼠不同时期海马CA3区细胞外谷氨酸(gluta-mate,GLU)、γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)、甘氨酸(glycine,GLY)、天冬氨酸(aspartic acid,ASP)、牛磺酸(taurine,TAU)等递质水平的变化。方法 21只SD大鼠随机分为对照组(9只)和KA组(12只)。KA组大鼠海马CA3区注射0.8μgKA,对照组海马CA3区注射同体积生理盐水,于1天(急性期)、7天(静止期)、30天(慢性期)对大鼠海马CA3区行微透析,用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)测定透析液中GLU、GLY、GABA、ASP、TAU含量的变化。结果急性期:与对照组相比,KA组CA3区细胞外GLU(P=0.004)、GLU/GABA(P=0.002)明显增高,GABA(P=0.001)、GLY(P<0.001)明显减少,ASP(P=0.23)、TAU(P=0.28)与对照组相比无明显差异。静止期:KA组GLU(P=0.003)、GLU/GABA(P<0.001)较对照组明显降低,而GABA(P<0.001)、ASP(P<0.001)、TAU(P<0.001)较对照组明显增高,GLY(P=0.49)与对照组相比无明显差异。慢性期:与对照组相比,KA组GLU(P<0.001)、GABA(P=0.013)、ASP(P<0.001)、TAU(P<0.001)、GLU/GABA(P<0.001)明显升高,GLY与对照组相比无明显差异(P=0.86)。结论海马CA3区兴奋性与抑制性氨基酸类递质失衡可能是癫痫发生发展的重要机制之一。     

大鼠颞叶癫痫点燃后海马zif268mRNA及其蛋白的时空表达变化

目的 探讨海马zif268mRNA及其蛋白的时空表达变化与颞叶癫痫脑损伤的关系. 方法 将雄性Wistar大鼠随机分为3组:其中正常组6只,假手术对照组(Sham组)和海人酸(KA)颞叶癫痫点燃组(TLE组)各36只,后两组按点燃后6h、24h、3d、7d、14d、21d时间点各分为6小组,每小组6只.采用KA杏仁核点燃建立经典颞叶癫痫模型,应用原位杂交和免疫组织化学方法分别检测海马神经元zif268mRNA及其蛋白的表达.结果 TLE组zif268mRNA表达在总体上和点燃后远期21d海马CA1、CA3区和齿状同(DG)均高于Sham组(P＜0.05).TLE组Zif268蛋白表达在总体上和远期21d海马DG表达低于Sham组(P＜0.05).回归分析提示颞叶癫痫与海马zif268mRNA表达呈正相关(β=0.286,P＜0.001),与Zif268蛋白表达呈负相关(β=-0.153,P＜0.001).结论 颞叶癫痫大鼠海马zif268mRNA及其蛋白的时空表达变化可能参与颞叶癫痫发病及其脑损伤过程.     

大鼠GAD65基因慢病毒载体的构建及其在MSCs中的表达

目的构建谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)重组慢病毒表达载体,感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行鉴定。方法 PCR法扩增GAD65基因,构建LV5-GFP-GAD65慢病毒载体;与包装质粒共转染293T细胞包装病毒;将慢病毒感染大鼠MSCs,荧光显微镜鉴定转染率,Western blot检测GAD65的表达。结果双酶切及测序结果表明LV5-GFP-GAD65慢病毒载体构建成功;包装病毒产生的病毒液滴度为5×107TU/ml;慢病毒感染大鼠MSCs的转染率高于90%,Western blot结果显示GAD65蛋白表达比对照组明显升高。结论 GAD65重组慢病毒载体构建成功,包装得到高浓度病毒液,感染大鼠MSCs能稳定过表达GAD65蛋白,为进一步探索侧脑室注射基因化的MSCs治疗癫痫奠定实验基础。     

伴海马硬化性内侧颞叶癫痫发病机制的研究进展

<正>伴海马硬化性内侧颞叶癫痫是最常见的癫痫综合征之一,发病人数日益增多,但其病因未明、发病机制仍不清楚,因此阐明其发病机制有利于对颞叶癫痫的理解,并为癫痫的早期风险评估、诊断、预后和治疗的临床工具开发提供依据。本文主要对其基本病理组织学特征,与癫痫相关基因,及其相关的病理生理过程等方面进行综述。     

依达拉奉对海人酸致颞叶癫痫大鼠海马神经元的保护作用

目的本实验观察依达拉奉对海人酸致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法选用成年健康雄性Wistar大鼠18只,体重260±20g。实验动物随机分为3组,①sham组(n=6):右侧海马CA3区注入等量的生理盐水;②KA模型组(n=6):右侧海马CA3区注入KA 4μg.kg-1(4μg/μl);③依达拉奉组(n=6):右侧海马CA3区注入KA 4μg.kg-1(4μg/μl)后,即刻给予依达拉奉10mg.kg-1.d-1腹腔注射。于大鼠注药或假手术后立即观察各组大鼠的行为学表现,于7d断头取脑,石蜡切片进行硫堇染色,于光学显微镜下观察注药对侧(左侧)海马CA1、CA3区及CA4门区组织形态学特征,并对其进行组织学分级。结果 Sham组大鼠注射对侧海马CA1、CA3和CA4门区无明显组织损伤,组织学分级多为0～1级,ND值为198±20.62和212±30.14;模型组KA致痫大鼠可见明显的组织损伤,组织学分级多为2～3级,ND值为79±13.72和90±14.98,与sham组相比,组织学分级显著升高(p<0.05),ND值显著降低(p<0.01)。依达拉奉组大鼠海马CA1区可见少量、散在性神经元坏死,组织学分级多1～2级,ND值为101±16.85和135±12.17。与模型组相比,组织学分级降低(p<0.05),ND值显著升高(p<0.05)。结论依达拉奉能够减轻KA致痫大鼠海马神经元的损伤,对神经元具有保护作用。     

PET在颞叶癫痫诊断中的作用

目的评价PET检查在颞叶癫痫病人术前诊断中的意义.方法20例顽固性颞叶癫痫病人术前均行脑电监测、头MRI及PET检查.结果20例脑电监测中有19例监测到棘波、尖波或棘慢波,1例正常.脑电异常位于一侧11例,位于双侧8例.20例头MRI检查中有14例正常,6例一侧海马萎缩,1例双侧萎缩,1例右额顶囊肿伴垂体微腺瘤.20例PET检查均表现局部脑组织代谢减低.一侧异常16例,双侧异常4例.20例手术病人中有16例行颞叶前部及海马切除,4例行选择性海马切除.结论PET检查对于颞叶癜痫的定位诊断敏感可靠,比MRI更有价值.     

颅内电极记录在定位颞叶癫痫致痫灶中的应用研究

目的：通过侵袭性的术前检查(颅内电极记录)对颅内电极记录适应证进行分类，了解此方法可靠性及并发症。方法：1998～2003年间，对27例药物难治性颞叶癫痫患者进行颅内电极植人．方法包括：双侧颞叶纵向深部电极植人、双侧硬膜下颞底条状电极植人、颞外条状电极植人。结果：术前进行广泛的无创检查之后仍不能定位致痫灶的24例患者，通过颅内电极记录确定了手术。结论：对于一些难以决定是否适合手术的癫痫患者，颅内电极记录是一种有效、安全的检查方法。     

同步EEG-功能性MRI对颞叶癫痫致痫灶的定位作用

目的 探讨同步EEG-功能性MRI(fMRI)对颞叶癫痫致痫灶的定位作用.方法 对17例症状性颞叶癫痫患者进行同步EEG-fMRI检查.对EEG出现痫样放电时的fMRI数据进行分析,将痫样放电导致的脑组织血氧水平依赖信号改变区域叠加在MRI图像上,确定癫痫灶的位置;并与手术中脑皮质电极和深部电极EEG确定的致痫灶位置进行比较.结果 10例患者同步EEG-fMRI与皮质电极和深部电极EEG确定的致痫灶的位置和范围完全相同;另外7例患者同步EEG-fMRI确定的致痫灶中心位置与皮质电极和深部电极EEG相同,但范围比后者显示的扩大.癫痫灶切除术后14例发作控制,3例发作频率明显降低.结论 同步EEG-fMRI对颞叶癫痫致痫灶的定位准确,无创伤性;对手术定位具有可靠的指导作用.     

大鼠海人酸致痫模型的症状表现、致痫机制的研究进展

海人酸是天然提取的谷氨酸类似物 ,它可以与突触后海人酸受体结合 ,产生兴奋性突触后电流。全身或大脑局部注射海人酸可以导致动物癫痫发作 ,这就是癫痫的海人酸模型。海人酸模型应用广泛 ,具有理想的颞叶癫痫模型所应具备的条件 :①在症状学上 ,海马、杏仁核和其它边缘结构占有中心地位 ;②病理上特异的海马损伤与颞叶癫痫的海马硬化相关 ;③有自发抽搐 ;④与人类颞叶癫痫一样 ,对大部分抗癫痫药物耐受。本文就该模型症状表现、致痫机制的有关研究进展进行综述。     

前颞叶和海马切除治疗难治性颞叶癫痫对认知功能影响的研究

目的 探讨前颞叶和海马切除治疗难治性颞叶癫痫对认知功能的影响.方法 19例难治性颞叶癫痫患者接受前颞叶和海马切除手术,手术前和手术后3、6月进行认知神经心理学测评以了解认知功能的变化.结果 19例难治件颞叶癫痫患者接受了前颞叶和海马切除术后取得了良好的疗效,术后1例有-过性的言语障碍,2例有-过性的欣快等精神症状.难治性颞叶癫痫患者存在严重的认知功能障碍(特别是智力、注意力、记忆功能障碍),前颞叶和海马切除手术没有加重认知功能障碍.在手术后6月一些认知功能反而有改善的趋势.结论 难治性颞叶癫痫患者存在认知功能障碍,采用前颞叶和海马切除能治愈或减少颞叶癫痫发作,并且对认知功能障碍有一定的改善作用.     

TLR9、MyD88在颞叶癫痫大鼠海马组织中表达的动态变化

目的观察氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠各期海马中Toll-样受体9(TLR9)、髓样分化因子(MyD88)表达的变化,探讨其是否与颞叶癫痫发生有关。方法 SD雄性大鼠120只,随机分为对照组(30只)和模型组(90只),腹腔注射氯化锂。18 h~20 h后模型组腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE);对照组予等量生理盐水取代匹罗卡品腹腔注射。对照组和造模成功的模型组依据腹腔注射后时间随机分为10个亚组:急性模型组(SE后3 h、6 h、9 h、12 h、1 d、3 d、7 d);潜伏模型组(SE后14 d、28 d);慢自发发作组(SE后56 d)。每亚组动物模型组9只,对照组3只。免疫组化、蛋白印迹、RT-PCR技术测定各亚组癫痫大鼠海马内TLR9、MyD88的表达。结果TLR9、MyD88在模型组海马内表达明显增多,与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。模型亚组内,TLR9、MyD88在急性期和慢性期表达明显增高,而潜伏期无明显表达变化。其中急性期内的增高多集中在癫痫发作后6 h;3组比较差异有显著性(P0.05)。结论大鼠海马内TLR9、MyD88表达增多可能与颞叶癫痫发病有关,探讨其机制可能为颞叶癫痫的治疗提供新的靶点。     

托吡酯对颞叶癫痫大鼠海马神经细胞粘附分子表达的影响

目的观察托吡酯对红藻氨酸(KA)诱导颞叶癫痫大鼠海马突触重建标记物神经细胞粘附分子(NCAM)表达的影响,进一步探讨托吡酯的抗痫作用机制。方法采用免疫组织化学染色观察KA诱导癫痫大鼠及托吡酯给药大鼠海马神经细胞粘附分子表达水平,并对两组NCAM表达进行比较。结果KA组NCAM表达水平各时间点平均NCAM阳性密度OD率均明显高于N S组和KA TPM组(P<0.01)。结论本研究提示托吡酯可能通过抑制突触重建的形成,减少痫性放电,从而控制癫痫发作。     

Mitochondrial involvement in temporal lobe epilepsy

Mitochondrial dysfunction has been identified as a potential cause of epileptic seizures and therapy-resistant forms of severe epilepsy. Thus, a broad variety of mutation in mitochondrial DNA or nuclear genes leading to the impairment of mitochondrial respiratory chain or of mitochondrial ATP synthesis has been associated with epileptic phenotypes. Additionally, with a variety of different methods impaired mitochondrial function has been reported for the seizure focus of patients with temporal lobe epilepsy and Ammon's horn sclerosis and of animal models of temporal lobe epilepsy. Since mitochondrial oxidative phosphorylation provides the major source of ATP in neurons and mitochondria participate in cellular Ca²⁺ homeostasis, their dysfunction strongly affects neuronal excitability and synaptic transmission, which is proposed to be highly relevant for seizure generation. Additionally, mitochondrial dysfunction is known to trigger neuronal cell death, which is a prominent feature of therapy-resistant temporal lobe epilepsy. Therefore, mitochondria have to be considered as promising targets for neuroprotective strategies in epilepsy.     

海马硬化与颞叶癫痫术前定位探讨(附12例报告)

目的　探讨对顽固性颞叶癫痫的术前定位方法。方法　将 Ｍ Ｒ 对海马硬化的诊断作为一重要参考指标与 Ｅ Ｅ Ｇ 检查相结合,对１２ 例顽固性颞叶癫痫进行术前定位诊断,并与术中皮层 Ｅ Ｅ Ｇ 检查结果和术后随访结果比较。结果　 Ｍ Ｒ 检查发现９ 例海马硬化,皮层 Ｅ Ｅ Ｇ 证实有同侧颞叶内侧放电,行选择性海马杏仁核切除术后病理证实海马硬化;未发现海马硬化改变３ 例行前颞叶切除术。随访０５ ～２ 年,疗效满意。结论　 Ｅ Ｅ Ｇ 是诊断颞叶癫痫的最重要手段, Ｍ Ｒ 发现海马硬化对致痫灶定位有重要意义。     

Efficacy of temporal lobe surgery for epilepsy in patients with negative MRI for mesial temporal lobe sclerosis

Epilepsy surgery is a successful treatment for refractory temporal lobe epilepsy (TLE). Reports suggest fewer seizure-free outcomes for patients with TLE and who have a negative brain MRI (nMRI) for mesial temporal sclerosis. Data were collected prospectively from patients with nMRI who underwent temporal lobe surgery for TLE characterized by unilateral ictal temporal lobe seizure onset based on a scalp video electroencephalogram or invasive subdural electrode recordings. A total of 86 patients were followed for at least 24 months after surgery. Outcome was evaluated using the Engel classification. Seizure control was obtained by 55% (47/86) of patients (Class [CL]-I), 27% (23/86) showed significant improvement (CL-II) and 19% (16/86) were deemed surgical failures. Shorter duration of epilepsy, later onset of seizures, and ictal theta rhythm (5-7 Hz) were the most significant predictors of postoperative seizure control. Although hypometabolism on positron emission tomography scan and significant memory disparity (>2.5/8) were not significant prognosticators independently, cumulatively they were predictors for favorable outcome.     

GAD65‐Ab encephalitis and subtle focal status epilepticus

Aims. To delineate common epilepsy features associated with the presence of glutamic acid decarboxylase autoantibodies (GAD65‐Ab). Methods. Three consecutive cases of GAD65‐Ab encephalitis patients, followed in our neurological department, were investigated with regards to clinical semiology and EEG. Results. These patients presented new‐onset subtle ictal clinical features. Patients 1 and 2 described prolonged and transitory feelings of “déjà vu ‐ déjà vécu” and a “dreamy state”. Patient 3 was admitted for subsequent transient aphasia events followed by paroxysmal behavioural disturbances. Epileptic origin of the symptoms was confirmed using either a standard EEG (observation of temporal status epilepticus in one case) or a prolonged EEG (focal epileptiform activity during an asymptomatic period for two patients). All patients suffered from clinical focal status epilepticus. Patients 1 and 2 presented with temporo‐mesial seizures in agreement with the definition for limbic encephalitis, whereas Patient 3 presented with neocortical (lateral temporal and frontal lobe) seizures arguing for a non‐limbic encephalitis. A high level of GAD65‐Ab was found in cerebral spinal fluid, confirming a diagnosis of epilepsy associated with GAD65‐Ab encephalitis. Conclusion. Encephalitis seems to be a frequent neurological syndrome associated with GAD65‐Ab disorders. Epilepsy may be more frequent and severe than currently suggested, as ictal semiology may be subtle for these outpatients in whom standard EEG is commonly falsely reassuring. Subtle focal status epilepticus is a particular semiology of the GAD65‐Ab encephalitis spectrum.     

颞叶癫痫患者海马苔藓纤维发芽的实验研究

目的观察颞叶癫痫病人海马齿状回和CA3区苔藓纤维出芽情况。方法癫痫组样本来自12例颞叶癫痫病例的手术切除标本包含海马齿状回和CA3区的脑组织，对照组脑组织样本来自4例非癫痫病的尸检脑组织。应用Timm组织化学染色方法在光镜和电镜水平进行海马结构苔藓纤维发芽的研究。结果光镜下癫痫组可见苔藓纤维穿越海马齿状回颗粒细胞层到达内分子层．CA3区也可见明显的苔藓纤维发芽。癫痫组CA3区和齿状回内分子层苔藓纤维发芽评分高于对照组．统计学上差异有显著性意义。电子显微镜下观察显示癫痫组患者齿状回内分子层可见到银标记的突触末端，主要和树突形成突触连接，所形成的突触为非对称性突触。结论颞叶癫痫可致海马齿状回和CA3区苔藓纤维发芽增加，这可能是难治性癫痫形成的重要机制。