Westgard方法决定图在检测系统分析性能评价中的应用

目的探讨Westgard方法决定图在检测系统分析性能评价中的应用。方法按NCCLS的文件要求对检测系统检测常规18个生化项目的不精密度和不准确度试验进行测定,采用Westgard方法决定图判断拜耳检测系统分析性能的可接受性。结果除GGT外,检测系统检测17个生化常规项目的总不精密度均小于1/4CLIA’88 TEa（允许总误差）,偏倚均小于1/2CLIA’88 TEa（允许总误差）,分析性能均优秀。重新改进检测系统和方法后,GGT分析性能亦达优秀。结论采用Westgard方法决定图可直接判断检测系统的分析性能,判断结果清晰直观,适合临床实验室对检测系统分析性能进行评价。     

Westgard方法决定图在检测系统分析性能评价中的应用

目的探讨Westgard方法决定图在检测系统分析性能评价中的应用。方法按NCCLS的文件要求对检测系统检测常规18个生化项目的不精密度和不准确度试验进行测定,采用Westgard方法决定图判断拜耳检测系统分析性能的可接受性。结果除GGT外,检测系统检测17个生化常规项目的总不精密度均小于1/4CLIA’88 TEa(允许总误差),偏倚均小于1/2CLIA’88 TEa(允许总误差),分析性能均优秀。重新改进检测系统和方法后,GGT分析性能亦达优秀。结论采用Westgard方法决定图可直接判断检测系统的分析性能,判断结果清晰直观,适合临床实验室对检测系统分析性能进行评价。     

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的检测方法及临床价值。方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的50例胸水、46例腹水、47例肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。结果 1)胸水:结核性胸膜炎组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(27.36±6.41)%、Th细胞占T淋巴细胞的(67.98±7.41)%、Th/Ts比值为2.60±0.64,肺部恶性肿瘤组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(67.97±4.20)%、Th细胞占T淋巴细胞的(37.61±4.80)%、Th/Ts比值为0.47±0.10,与结核性胸膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P0.01)而Ts显著升高(P0.01);2)肺泡灌洗液:肺良性疾病组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%、Th细胞占T淋巴细胞的(49.28±12.88)%、Th/Ts比值为1.13±0.29,肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%、Th细胞占T淋巴细胞的(34.57±6.65)%、Th/Ts比值为0.54±0.19,与良性病变组比较,恶性组Th下降(P0.05),Th/Ts比值显著下降(P0.01),而Ts显著升高(P0.01)。3)腹水:结核性腹膜炎组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(33.11±3.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(66.69±3.78)%、Th/Ts比值为2.03±0.28,恶性组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(56.64±9.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(35.86±3.30)%、Th/Ts比值为0.65±0.10,与结核性腹膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P0.01),而Ts显著升高(P0.01)。结论胸腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。     

流式细胞术计数淋巴细胞亚群的全血质控品的研究

目的 研究流式细胞术（FCM）计数血液淋巴细胞亚群的全血质控品。方法 流式细胞术多色分析方法计数不同保存剂处理后、不同时间内血液中淋巴细胞亚群。结果 成功研制出FCM计数血液淋巴细胞亚群的全血质控品。在2～8℃冰箱内保存72d内，各种白细胞的光散射特点及CD45保持稳定，淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞群与细胞碎片分离良好，可通过光散射或荧光／光散射两种方式设门分析淋巴细胞亚群。本质控品在不同保存时间的变异较小，FCM计数血液淋巴细胞亚群的室内批间变异系数〈6．5％，全国56个实验室的室间质评变异系数〈13％。结论 本全血质控品可用于临床FCM计数血液淋巴细胞亚群全过程的室内质量控制和室间质量评价，对提高淋巴细胞亚群计数的质量，保证结果的准确性有重要意义。     

流式细胞术检测淋巴细胞亚群抗体用量的探讨

目的探讨应用流式细胞术（FCM）检测人淋巴细胞数绝对值在正常范围（0.8～4）×10^9／L时，荧光抗体的最佳用量。方法：取30例标本，淋巴细胞数量在（O.8～4）×10^9／L不等，用流式细胞术检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞，根据荧光抗体用量分为4组，分别为20、10、5、2．5μL，统计分析4组间差异。结果所测白细胞分化抗原（CD）3＋、CD4＋、CD8＋、CD9＋及自然杀伤细胞（NK），结果4组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论对于淋巴细胞数绝对值在正常范围（O.8～4）×10^9／L的全血标本，减少荧光抗体量至2、5μL对CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞检测结果无影响，比常用量可减少8倍，对于临床实验室节约试剂成本、减少浪费等有一定参考价值。     

应用Westgard方法评价决定图判断Sysmex XE5000全血细胞分析仪性能

目的应用Westgard方法评价决定图判断Sysmex XE5000型全血细胞分析仪系统性能的可接受性。方法以实验室室内质控结果的变异系数(CV%)反应方法的不精密度,以实验室参加卫生部临床检验中心2012年室间质评的偏倚(Bias%)反映方法的不准确度,在Westgard方法评价决定图上绘制操作点,并判断各项目的方法性能的可接受性。结果WBC、RBC、HGB、HCT、MCH、MCV、MCHC和PLT的CV%值分别为:1.89、0.6、0.6、0.79、0.9、0.92、1.3和3.2,偏倚分别为-5.71、-2.55、-1.46、-0.27、2.23、0.46、0.27和-6.97。结论采用Westgard方法评价决定图能方便地评价检测仪器的检测性能,Sysmex XE5000全血细胞分析仪主要检测指标性能优秀。     

应用Westgard标准化决定图评价检测方法的性能

目的应用Westgard标准化决定图判断常规生化项目在日立7170A检测系统上分析性能的可接受性。方法测定各个项目的不精密度和不准确度,应用Westgard标准化决定图判断各个项目检测方法的可接受性。结果日立7170A型生化分析仪检测47个项目,检测方法性能评价其中32项"优",7项"良",总二氧化碳(TCO2)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、抗链球菌溶血素(ASO)方法性能"差",总补体溶血活性(CH50)、血氨(NH3)、类风湿因子(RF)方法性能为"临界",无满足质量要求的质控方法 ,需查找原因进行质量改进。结论标准化决定图可简单、直观、准确地判断检测方法性能,从而达到质量目标提供改进依据。     

流式细胞术分析实体瘤T-淋巴细胞亚群

目的为了研究良性和恶性肿瘤T-淋巴细胞亚群变化关系及其对诊断、治疗和预后的价值.方法采用流式细胞术对92例良性和恶性肿瘤的患者进行测定、比较,并求出相关性.结果良性肿瘤患者CD3、CD4和CD8虽然比较恶性肿瘤患者均有增高,但增高的程度不同;虽然较正常人均有不同程度的降低,但降低的程度有所不同,相互之间无显著性差异.结论恶性肿瘤T-细胞亚群的各项检测指标对良、恶性肿瘤诊断以及指导治疗及评价预后有重要实用价值,尤其对恶性肿瘤转归有更加重要的意义,适于测定体内免疫活性.     

标准化6δ方法性能决定图对生化项目性能的评价

目的：采用标准化6δ方法性能决定图评价生化项目的分析性能。方法以室间质评的能力比对检验（PT ）结果计算项目的偏倚百分比（bias％）,以室内质控的变异结果计算项目的变异百分比（CV％）,采用标准化6δ方法性能决定图评价17项生化指标的检测性能,并结合质量目标指数（QGI）分析不符合3δ要求的原因。结果17个项目中82％的项目性能符合3δ要求,钠离子（Na＋）、氯离子（Cl－）性能较差,直接胆红素（DBil）性能为不可接受。结论标准化6δ方法性能决定图评价检测项目性能简便易行,值得在生化质量管理工作中使用。     

流式细胞术检测肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的改变。方法采用先进的流式细胞术分别测定了29例结核菌阴性及49例结核菌阳性的初治活动性肺结核患者血清T淋巴细胞亚群计数。结果初治活动性肺结核患者血清中CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋降低，而CD3^＋、CD8^＋升高，与正常对照组比较，CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋差异有显著性（P〈0．05）；老年结核患者的CD3^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋均较青年结核病患者低，其中CD4^＋／CD8^＋差异有显著性；病变范围广泛者的CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋较病变范围小者低，CD3^＋差异有显著性；痰菌阳性者与阴性者比较，CD4^＋／CD8^＋下降，CD8^＋升高，但差异无显著性。结论初治活动性肺结核患者的T细胞亚群变化存在其自身特点。对肺结核患者T淋巴细胞亚群的检测有助于判断病情、了解抗结核治疗效果及预后。     

流式细胞术分析实体瘤T-淋巴细胞亚群

目的 为了研究良性和恶性肿瘤T-淋巴细胞亚群变化关系及其对诊断、治疗和预后的价值。方法采用流式细胞术对92例良性和恶性肿瘤的患者进行测定、比较，并求出相关性。结果良性肿瘤患者CD3、CD4和CD8虽然比较恶性肿瘤患者均有增高。但增高的程度不同；虽然较正常人均有不同程度的降低．但降低的程度有所不同，相互之间无显著性差异。结论恶性肿瘤T-细胞亚群的各项检测指标对良、恶性肿瘤诊断以及指导治疗及评价预后有重要实用价值．尤其对恶性肿瘤转归有更加重要的意义，适于测定体内免疫活性。     

流式细胞术检测细胞亚群存活率的应用研究

目的 采用流式细胞术直接检测小鼠脾细胞中T细胞与Treg细胞存活率,探讨流式细胞术测定混合细胞中细胞亚群存活率的可行性.方法 荧光抗体及碘化丙锭联合使用,测定小鼠脾细胞中T细胞与调节性T细胞的存活率.结果 使用流式细胞术测定脾细胞中T细胞存活率时,r2=0.992 5,斜率为1.012;测定调节性T细胞存活率时,r2=0.983 1,斜率为0.982 3.结论 流式细胞术可以应用于测定混合细胞中细胞亚群的存活率,为药物筛选提供新的选择.     

流式细胞术检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值

目的评估流式细胞术(FCM)检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值。方法应用FCM检测62例发热患儿外周血淋巴细胞免疫表型(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16/56+),同时进行外周血常规检查,独立和联合判断患儿可能感染的病原体,并进行比较。结果 FCM检测发热患儿淋巴细胞亚群的异常率为89%,显著高于血常规法的66%,差异有统计学意义(P<0.01),两种方法联合判断时为95%;FCM、血常规法和两种方法联合判断发热患儿的病原体感染情况时,FCM能较多地发现病毒或胞内菌感染,但病原体倾向不明显,血常规法可能更容易提示为细菌感染,而联合判断能提高病原体的诊断率。单独采用FCM和血常规法判断病原体的正确率分别为82%和73%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。单独采用FCM和血常规法对62例发热患儿感染病原体的正确判断率分别为74%和66%,联合判断时升至90%。结论 FCM淋巴细胞亚群检测联合血常规可提高对发热患儿病原体判断的准确率,有利于指导临床合理用药。     

不同流式细胞分析系统对外周血淋巴细胞亚群分析结果的影响

目的 探讨部分临床实验室FCM淋巴细胞亚群分析参考范围应用的合理性及不同生产厂家的流式细胞仪和试剂组合对淋巴细胞亚群分析结果的影响.方法 根据国内临床实验室常用的3个流式细胞仪型号(Beckman Coulter Epics XL、Beckman Coulter Cytomics FC500、BD FACS Calibur),分别选取3家北京地区临床流式细胞室(A、B、c室),按照各室的实际检测方案分别测定50份健康人静脉血标本,以验证各室淋巴细胞亚群分析参考范围是否合理.调查3家实验室室内全血质控品使用情况,并将商品化全血质控品分发各室,按照各自的实际实验方案在20个工作日内与常规标本平行处理、检测和分析.针对不同生产厂家的试剂,在同一流式细胞仪(型号为Beckman Coulter Epics XL)上用a、b、c、d 4种不同的试剂组合对20份患者标本进行检测,其中试剂组合a为美国Beckman Coulter公司同厂配套试剂和仪器,试剂组合b、c、d的检测结果分别与试剂组合a比较,计算b、c、d试剂组合偏倚>10%的概率.采用相同试剂和溶血素(美国Beckman Coulter公司)对24份患者标本进行前处理,分别在2台不同厂家和型号的流式细胞仪(型号为Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur)上检测,比较相同试剂处理标本后不同仪器对淋巴细胞亚群分析结果的影响.采用同厂配套试剂和仪器,比较Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur两个流式细胞检测系统对20份患者标本检测结果的影响.结果 A室的自然杀伤(NK)细胞及CD+4 T淋巴细胞/CD+8 T淋巴细胞(T4/T8),B、c两室的T4均有大于10%的结果落在相应的参考范围之外,超出相应参考范围的概率分别为16%(9/50)、24%(12/50)、22%(11/50)、12%(6/50).3家实验室20个工作日内的室内质控均在参考范围内.与试剂组合a比较,试剂组合b、c的所有项目偏倚均较大,其中偏倚>10%的概率最低为试剂组合b的T8,为70%(14/20);最高为试剂组合b、c的T淋巴细胞(T3)、T4,均达到100%(20/20).试剂组合d的T3、T8和B淋巴细胞(B)偏倚较大,偏倚>10%的概率分别为35%(7/20)、85%(17/20)、75%(15/20).不同生产厂家的试剂、仪器处理和分析标本的结果,与采用同一生产厂家的试剂、仪器处理和分析的结果相比,T3、T4、T8、B、NK均存在较大偏倚,偏倚>10%的概率分别为71%(17/24)、80%(19/24)、38%(9/24)、33%(8/24)、92%(22/24).Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur两个流式细胞检测系统相比较,T8、NK和B的偏倚均较大,偏倚>10%的概率分别为55%(11/20)、70%(14/20)、55%(11/20).结论 流式细胞实验室需要建立自己的参考范围并定期验证,以便合理进行调整.建议定期采用全血质控品,并累计质控数据.各实验室应选择同厂配套试剂处理标本.

Abstract：

Objective To investigate the appropriate setting up of normal reference ranges of lymphocyte subsets in some flow cytometry laboratories and to study the effects of different flow cytometers and various reagents by different manufacturers on the analysis of peripheral blood lymphocyte subsets. Methods Three FCM labs (named A, B and C) in Beijing region were selected representing 3 commonly used flow cytometers (Beckman Coulter Epics XL, Beckman Coulter Cytomics FC500, BD FACS Calibur). 50 samples from healthy donors were distributed to 3 labs and tested according to individual lab's standard operating procedure to verify whether the normal reference ranges of peripheral blood lymphocyte subsets established were appropriate. The application of internal quality control was also investigated. Commercial blood quality control reagents were given to the 3 FCM labs and tested within 20 working days paralleled with routine samples. In addition, 20 patients' samples were prepared using 4 different combinations of reagents ( a , b , c and d). The results from combination a, which used the Beckman Coulter reagents and instrument, were compared to the results from combination b, c and d, which used reagents from different manufacturers. Then the prepared samples were tested on Beckman Coulter Epics XL to evaluate the effects of different combinations of reagents on the results of peripheral blood lymphocyte subsets analyzed by the same instrument. Furthermore, 24 patients' samples prepared by same reagents from Beckman Coulter company were tested on both Beckman Coulter Epics XL and BD FACS Calibur respectively to assess the effects of different instruments on peripheral blood lymphocyte subsets. 20 patients' samples prepared by same reagents and instruments were analyzed by Beckman Coulter Epics XL analytic system and BD FACS Calibur analytic system respectively to assess the effects of the two analytic systems on the lymphocyte subsets. Results Over 10% of the results for NK and T4/T8 in lab A as well as T4 in labs B and C fell outside of their normal reference ranges. The probabilities exceeding corresponding normal reference ranges were 16% ( 9/50 ), 24% ( 12/50 ), 22% (11/50) and 12% ( 6/50 ), respectively. The results using internal blood quality control in 3 FCM labs within 20 working days were all within the reference ranges of the quality control provided by the kit. The biases from b and c reagent combinations were substantial compared with that of reagent a combination. Among the biases from b and c reagent combinations, the lowest probability of bias exceeding 10% was T8 of combination b, which had probability of 70% (14/20). The highest probabilities of hias exceeding 10% were T3 and T4 of b and c reagent combinations, which reached 100% (20/20) . Furthermore, the biases of T3, T8 and B of d reagent combination compared with that of reagent a combination were also substantial. The probabilities of bias exceeding 10% were 35% (7/20) ,85% (17/20) and 75% (15/20), respectively. Comparing the results of samples prepared and analyzed by reagents and instruments from different manufacturers to that of samples prepared and analyzed by the same company's reagents and instruments showed that there were great discrepancies in T3, T4 , T8 , B and NK. The probabilities of bias exceeding 10% were 71% ( 17/24), 80% (19/24) ,38% (9/24), 33% (8/24) and 92% (22/24), respectively. The biases of T8, NK and B were substantial when compared the results from Beckman Coulter Epics XL analytic systems and BD FACS Calibur analytic systems. The probabilities of bias exceeding 10% were 55% (11/20 ), 70% ( 14/20 ) and 55% (11/20), respectively. Conclusions FCM labs should set up their own normal reference range for peripheral blood lymphocyte subsets. The normal reference range should be verified periodically. It is important to apply internal blood quality control regularly and accumulate the quality control results. The reagents and instrument for preparing peripheral blood samples should be from the same manufacturers.     

标本前处理因素对流式细胞术检测淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨抗凝剂、保存时间和保存温度等分析前因素对流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的影响。方法:随机采集健康人全血10份,分别用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)和肝素钠2种抗凝剂抗凝,4℃及室温(18℃~22℃)保存,在不同时间点(0.05)。结论:在检测总淋巴细胞亚群比例及绝对计数时,肝素钠抗凝的全血标本应保存在室温下,并在48 h内完成检测;EDTA-K2抗凝全血标本则可在4℃及室温下保存,在48 h内完成检测。     

流式细胞术测定T淋巴细胞亚群不同商家试剂的比较

T淋巴细胞亚群的测定在临床医学中越来越受到重视。应用流式细胞分析技术来检测人外周血T淋巴细胞亚群 ,具有简便、快速 ,计数细胞量大 ,相对精度好等优点。但是 ,由于流式细胞技术进入临床应用时间短 ,在操作技术规范、试剂质量指标等诸多方面还无严格标准可循 ,因而造成测定结果差异较大 ,可比性差。本文用国外的 3个商家试剂在流式细胞仪上测定T淋巴细胞亚群进行比较 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　仪器　美国B D公司FASCCalibur流式细胞仪。1 2　试剂　试剂① :B D公司三色标记T亚群试剂CD4FITC/CD8PE/CD3Percp、阴…     

流式细胞术测定儿童淋巴细胞亚群多色荧光标记的比较

目的：本文比较了采用双色、三色和四色荧光标记分析淋巴细胞亚群的结果，调查了正常儿童淋巴细胞亚群分布。方法：采用双色、三色和四色荧光标记流式细胞术，测定89例儿童淋巴细胞亚群（T＋B＋NK）。结果：双色、四色法结果除T细胞值p〉0．0．5外，均有差异（p〈0．05）．两者spearman相关系数除NK细胞（相对数为0．83，绝对数为0．80）较低外，其他均有0．85以上，大多数在0．90以上。双色、三色和四色荧光标记测定CD4／CD8比值有差异（ANOVAP〈0．01）。结论：三种方法相关，但有差异（除T细胞外），需建立各自的参考范围。     

基于流式细胞术的低值血小板检测方法的性能评价

目的 对流式平台检测低值血小板的方法进行性能评价.方法 在流式平台上用绝对计数管检测不同浓度的低值血小板,并分析其在各个不同浓度下的精密度和正确度.同时用所得结果与人工镜检法进行比较.在巨核细胞体外培养实验操作中进行验证,通过检测巨核细胞培养体系内的血小板浓度,分析其与体系内巨核细胞数量的相关性.结果 流式法检测低值血...     

流式细胞术检测胃癌切除术患者围手术期淋巴细胞亚群的变化

目的 检测胃癌患者围手术期外周血CD4、CD8、CD3、CD19、自然杀伤细胞(NK)及CD28、CD80细胞的变化.方法 采用流式细胞术对20例胃癌患者术前、术毕及术后1d的外周血CD4、CD8、CD3、CD19、自然杀伤细胞(NK)及CD28、CD80细胞进行检测.结果 显示胃癌患者CD8+、CD28+、CD28+ CD8+、CD28-CD8+、CD80+均比正常对照组减低,CD4+/CD8+比正常对照组增高;患者术毕外周血CD3+、CD4+、CD28+、CD28+ CD4+、CD28+ CD8+、CD19+细胞比率较术前降低,CD4+/CD8+降低,NK细胞比率升高;术后1d CD3+细胞依然低于术前水平,CD4+、CD28+、CD28+ CD4+细胞升高但尚未完全恢复至术前水平,CD8+细胞低于术前;CD28+ CD8+细胞及CD4+/CD8+恢复至术前水平,CD19+细胞比率升高且高于术前,NK细胞恢复至术前状态.结论 认为胃癌惠者免疫功能较正常对照组明显减低,围手术期特异性免疫受抑,而非特异性免疫处于相对优势;术后1d患者的免疫状态尚未完全恢复至术前水平.