Th17 细胞及Treg细胞在非小细胞肺癌的免疫调节作用

CD4+T淋巴细胞是一类重要的免疫细胞,在不同细胞因子的诱导下,可分化为Th1 细胞、Th2 细胞、Th17 细胞和Treg 细胞等。Th17 细胞及Treg 细胞不仅具有多种生物免疫学效应,而且能够分泌不同的细胞因子,各种免疫细胞与细胞因子之间形成复杂网络,介导免疫反应,进行免疫调节,参与免疫相关性疾病的发生发展,如肿瘤、炎症、自身免疫性疾病等。近年来肺癌的发病率呈进行性升高,其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）占肺癌的比例最高。因此,本文将对Th17 细胞和Treg 细胞的分化及特点及在NSCLC中的免疫调节作用作一综述。     

PAGE5对非小细胞肺癌细胞生长、凋亡和侵袭能力的影响

目的：探讨前列腺相关基因5（PAGE5）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。方法：采用实时定量PCR和Western blot方法检测37例NSCLC及其癌旁组织中PAGE5的表达;采用MTT法、流式细胞术、Transwell以及Western blot法检测转染PAGE5 siRNA对A549和H1299细胞生长、凋亡、侵袭以及Bax、Bcl－2和MMP－2表达的影响。结果：在37．84％（14／37）的肺癌组织样本中PAGE5基因表达上调。转染PAGE5 siRNA的A549和H1299细胞生长无明显变化、细胞凋亡显著增加、侵袭能力显著下降（P＜0．05）,Bax蛋白表达显著上调,Bcl－2和MMP－2蛋白表达显著下调（P＜0．05）。结论：PAGE5可能通过调控Bax、Bcl－2及MMP－2蛋白的表达影响NSCLC细胞的生长、凋亡与侵袭,有望成为肺癌诊断标志物及潜在的治疗靶点。     

非小细胞肺癌患者外周血Treg和Th17水平及意义

摘 要：［目的］ 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中Treg和Th17细胞的变化及其意义。［方法］ 收集40例NSCLC患者和20名健康对照的外周血样本,采用流式细胞术检测外周血中Treg和Th17细胞占CD4+T细胞的比例,酶联免疫吸附实验法检测TGF-β和IL-17水平。［结果］ 肺癌患者外周血中Treg细胞和Th17细胞比例均显著性高于健康对照组(分别为6.65%±3.70% vs 4.06%±1.23%和1.20%±1.19% vs 0.44%±0.13%,P<0.05)。外周血Treg和Th17细胞表达与NSCLC患者分期等无相关性(P>0．05)。肺癌患者外周血TGF-β和IL-17水平明显高于对照组(分别为25.05±3.19 vs 15.96±3.65 和4.36±2.79 vs 2.01±1.83,P<0.05)。［结论］ NSCLC患者外周血中Treg和Th17细胞以及相关细胞因子均高表达,Treg细胞以及Th17细胞参与了肺癌的发生和发展。     

miR-211通过靶向下调SATB2表达促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-211及SATB2基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达情况,探究miR-211在NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用及其相关机制.方法:双荧光素酶报告系统验证miR-211和SATB2的相互作用机制;qRT-PCR检测miR-2...     

miR-103通过抑制MED26的表达促进小细胞肺癌细胞的增殖

目的:研究miR-103对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法:Real-time PCR法检测miR-103在人小细胞肺癌组织和细胞中的表达.将miR-103 inhibitor转染到人小细胞肺癌细胞中,通过CCK8实验检测小细胞肺癌细胞的增殖活性.Real-time PCR和Western blotting检测转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞中MED26 mRNA和蛋白的表达变化.通过双萤光素酶报告基因验证miR-103与MED26的作用机制.结果:miR-103在小细胞肺癌组织和人小细胞肺癌细胞系NCI-H1688中的表达均高于癌旁组织和对照细胞系.转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞的增殖活性显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Real-time PCR和Western blotting结果显示,转染miR-103 inhibitor后小细胞肺癌细胞中MED26的mRNA表达水平高于对照组.双萤光素酶报告基因实验结果显示,与对照组相比,转染miR-103 mimics的实验组中MED26 3’-UTR报告基因活性显著降低(P＜0.05).转染MED26后能显著抑制小细胞肺癌细胞增殖活性.结论:miR-103可以通过抑制MED26的表达来促进小细胞肺癌细胞的增殖.     

miR-93 通过靶向EphA4 激活ERK通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的：探讨miR-93/Eph受体A4（EphA4）分子轴通过细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）通路对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）H460 和H1299 细胞增殖和迁移的影响。方法：用qPCR 检测H460 和H1299 细胞中miR-93 表达水平。分别在H460 细胞中转染miR-93 模拟物（mimics）和EphA4 过表达质粒、在H1299 细胞中转染miR-93 抑制剂（inhibitor）后,用MTT、Transwell 实验检测miR-93 对转染细胞增殖和迁移的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93 与EphA4 之间的靶向调控关系。用Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、EphA4、ERK和p-ERK 蛋白的表达水平,用MTT、Transwell 实验检测同时过表达miR-93 和EphA4 对H460 细胞增殖和迁移的影响。结果：miR-93 在H1299 细胞中表达水平高于H460 细胞（P<0.01）。过表达miR-93 促进H460 细胞增殖和迁移（均P<0.01）,敲低miR-93 抑制H1299 细胞增殖和迁移（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-93靶向调控EphA4,过表达miR-93明显下调H460细胞中EphA4 mRNA和蛋白表达水平（均P<0.05）,过表达miR-93 通过靶向EphA4 并激活ERK通路促进H460 细胞的增殖和迁移（均P<0.01）。结论：miR-93 促进NSCLC细胞增殖和迁移,其机制可能与靶向调控EphA4 并激活ERK通路有关。     

葫芦素E对非小细胞肺癌细胞的生长抑制作用

目的:体外观察葫芦素E（cucurbitacin E,CuE）对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的影响及分子作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度 CuE（0、1、10、100以及1000nmol/L）处理A549细胞24、48和72小时后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测CuE对A549细胞凋亡的影响。 Western blot法检测被处理细胞中p-STAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Fas蛋白表达水平的变化。结果:CuE可显著抑制A549细胞的增殖（P＜0.05）,且呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测显示随着CuE作用浓度的逐渐升高（0、100、200、400nmol/L）,A549细胞凋亡率由（4.63±0.70）%分别提高到（6.80±0.10）%、（20.53±0.49）%、（24.57±0.55）%,差异有统计学意义（P均<0.05）。Western blot结果显示CuE处理A549细胞,可降低p-STAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达水平,增强Fas蛋白表达水平,且上述作用随CuE浓度升高而增强。结论:CuE可显著抑制A549细胞的增殖并诱导凋亡,其作用机制与阻断STAT3和Raf/MEK/ERK信号通路,同时激活Fas信号通路有关。     

长链非编码RNA HOTTIP 通过调控细胞凋亡水平促进非小细胞肺癌增殖

背景与目的：探索非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)有效的早期诊断及预后标志物具有重要的科学意义和临床价值。长链非编码RNA(lncRNA)在肿瘤中的作用逐渐引起研究者的关注。本研究拟分析lncRNA HOTTIP在NSCLC中的表达情况及对NSCLC细胞增殖水平的影响和机制。方法：采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测方法检测54例NSCLC组织及其对应癌旁组织的HOTTIP表达情况,分析NSCLC组织HOTTIP表达与临床病理参数的相关性;MTT方法检测肺癌细胞增殖水平,流式细胞术检测凋亡率的改变;蛋白［质］印迹法(Western blot)检测目的基因的蛋白表达变化。结果：与癌旁组织比较,HOTTIP在肺癌组织中的表达率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。HOTTIP表达与患者淋巴结转移和TNM分期相关。转染HOTTIP siRNA至A549肺癌细胞后,结果显示,与未转染组和阴性质粒转染组相比,转染siRNA-HOTTIP 的A549细胞HOTTIP 表达明显降低;HOTTIP表达下调后细胞增殖速度减慢,凋亡率增加,凋亡相关蛋白Bax的表达增加,Bcl-2表达减少。结论：HOTTIP是一种新的NSCLC生物标志物,可作为潜在的治疗新靶点。     

早期非小细胞肺癌预后相关因素分析

早期非小细胞肺癌患者首选手术治疗后，仍有部分出现了局部复发和／或远处转移。筛选出预后差的患者辅以综合治疗显得尤为重要。本文分析了近年来研究的一些早期非小细胞肺癌的预后因素。     

miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的：探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A（PDE7A）调节人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞糖酵解过程的机制。方法：常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5p mimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒（PDE7A-oe）和PDE7A对照质粒（PDE7ANC）转染A549细胞,记为miR-218-5p mimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7A mRNA在肺癌组织中的表达水平。结果：在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p（P<0.01）。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达（均P<0.01）、葡萄糖摄取量和乳酸生成量（均P<0.01）。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达（均P<0.01）,以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量（均P<0.01）。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7A mRNA的3′-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7A mRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达（P<0.01）。结论： miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。     

244-MPT overcomes gefitinib resistance in non-small cell lung cancer cells

The epidermal growth factor receptor (EGFR) is known to play a critical role in non-small cell lung cancer(NSCLC). Several EGFR tyrosine kinase inhibitors(TKIs), such as gefitinib, have been used as effective clinical therapies for patients with NSCLC. Unfortunately, acquired resistance to gefitinib commonly occurs after 6–12 months of treatment. The resistance is associated with the appearance of the L858R/T790M double mutation of the EGFR. In our present study, we discovered a compound,referred to as 244-MPT, which could suppress either gefitinib-sensitive or -resistant lung cancer cell growth and colony formation, and also suppressed the kinase activity of both wildtype and double mutant (L858R/T790M) EGFR. The underlying mechanism reveals that 244-MPT could interact with either the wildtype or double-mutant EGFR in an ATP-competitive manner and inhibit activity. Treatment with 244-MPT could substantially reduce the phosphorylation of EGFR and its downstream signaling pathways, including Akt and ERK1/2 in gefitinib-sensitive and -resistant cell lines. It was equally effective in suppressing EGFR phosphorylation and downstream signaling in NL20 cells transfected with wildtype, single-mutant (L858R) or mutant (L858R/T790M) EGFR. 244-MPT could also induce apoptosis in a gefitinib-resistant cell line and strongly suppress gefitinib-resistant NSCLC tumor growth in a xenograft mouse model. In addition, 244-MPT could effectively reduce the size of tumors in a gefitinib-resistant NSCLC patient-derived xenograft (PDX) SCID mouse model. Overall, 244-MPT could overcome gefitinib-resistance by directly targeting the EGFR.     

非小细胞肺癌免疫治疗疗效预测的研究进展

近年来,免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICI)治疗晚期非小细胞肺癌进入了一个新纪元,但不同于靶向治疗,免疫治疗没有明确的疗效预测因子以指导临床。目前应用较多的是程序性死亡受体配体(programmed cell death ligand 1,PD-L1)表达的检测,然而多项临床试验结果提示只有约20%的NSCLC患者能从中获益。而肿瘤突变负荷(tumor mutation burden,TMB)也逐渐兴起,还有许多检测因子尚在发现中。本综述旨在探讨非小细胞肺癌中免疫治疗的疗效预测因子以更好地指导临床。     

外泌体非编码RNA在非小细胞肺癌获得性耐药中的研究进展

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中最常见的类型,对化疗及靶向药物的获得性耐药严重影响NSCLC患者的生存期,NSCLC获得性耐药机制复杂,确切机制仍不清楚.肿瘤来源或与肿瘤相关的外泌体是参与调控NSCLC获得性耐药的重要机制,可以通过传递核酸、蛋白质等赋予敏感细胞耐...     

非小细胞肺癌中miRNA-141的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-141在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用real time-PCR法对54例非小细胞患者,肺癌组织及正常肺组织的miRNA-141表达水平进行定量分析,结果由2-△△CT处理,并分析与临床病理资料的关系。结果:在NSCLC患者肿瘤组织中miRNA-141表达水平明显升高,其表达与临床分期、病理类型显著相关(P<0.05)。而在不同年龄、性别、肿瘤大小、吸烟史患者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MiRNA-141高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型密切相关,miRNA-141有可能作为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。     

非小细胞肺癌中基质金属蛋白酶-13表达及与预后的关系研究

Objective: To investigate the expression of MMP-13 in non-small cell lung cancer (NSCLC), so as to analyze its correlation with prognosis of NSCLC. Methods: MMP-13 expression was detected in 99 NSCLC tissues and 32 normal lung tissues by immunohistochemical method. Results: (1) Expression of MMP-13 (51.5%, 51/99) in cancer tissues was significantly higher than that in normal tissues 0% (P ＜ 0.05). Expression level of MMP-13 was significantly related to lymph node metastasis and clinical stage (P＜0.01). (2) Kaplan-Meier analysis showed that expression level of MMP-13 was closely correlate with the prognosis of NSCLC. Multivariate Cox model analysis suggested that the survival time was significantly related to clinical stage and the expression of MMP-13. Conclusion: MMP-13 is an independent factor that affect prognosis.