苦豆子生物碱抗结肠腺癌细胞株SW620的作用筛选

目的：对苦豆子提取物中的总生物碱（TBSA）、苦参碱（MT）、氧化苦参碱（OMT）、槐果碱（SC）、槐定碱（SRI）等进行初步抗结肠癌的体外筛选实验。方法：应用MTT法测定各生物碱对SW620细胞株增殖活性的影响，药物终浓度从0～2mg／ml作用于细胞，检测其抑制SW620的剂量效应关系；应用光学显微镜、荧光显微镜进行细胞形态学观察，流式细胞仪检测生物碱对SW620细胞凋亡的作用，检测细胞凋亡率。结果：5种生物碱对结肠癌SW620细胞株具有不同程度的增殖抑制作用，其作用TBSA〈OMT〈SC〈MT〈SRI；深入研究表明苦参碱、槐定碱对结肠腺癌细胞株SW620有显著的生长抑制及促进凋亡作用，其作用呈时间-剂量依赖性；其中以槐定碱促进凋亡作用最为明显。结论：苦参碱和槐定碱对结肠腺癌细胞株SW620的增殖显著抑制并诱导细胞凋亡，为进一步开展抗结肠癌苦豆子生物碱有效成分的开发和研发中药治疗结肠癌的靶向新药提供实验依据。     

氧化槐定碱对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究氧化槐定碱对原代培养新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤后细胞调亡的影响。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象建立氧糖剥夺再灌注损伤模型。Hoechst 33342和TUNEL染色法检测海马神经细胞凋亡,透射电子显微镜术观察凋亡细胞形态学变化,化学比色法测定海马神经细胞Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性,免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测凋亡相关因子Cytochrome C、Caspase-3、Bcl-2、Bax和PARP-1的蛋白和mRNA的表达。结果:与正常组比较,损伤组Hoechst 33342和TUNEL染色法显示神经细胞凋亡率明显升高;Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8活性显著提高;Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA水平明显上调,Bcl-2蛋白和mRNA水平明显下调,Bcl-2/Bax比率也明显下调。与损伤组比较,氧化槐定碱治疗组(20、5、1.25mg/L)可显著改善氧糖剥夺再灌注损伤所致的神经细胞凋亡的形态学变化,并降低神经细胞凋亡率;明显抑制Caspase-3、Caspase-9和Caspase-8的活性。氧化槐定碱治疗组(20mg/L)可明显抑制Cytochrome C、Caspase-3、Bax和PARP-1蛋白和mRNA表达,增强Bcl-2蛋白和mRNA的表达,使Bcl-2/Bax比率上升。结论:氧化槐定碱通过抗凋亡作用对氧糖剥夺再灌注损伤的大鼠海马神经细胞发挥保护作用。     

槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞大鼠脑细胞的作用及机制研究

目的探究槐定碱对永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)大鼠脑细胞的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和槐定碱低、中、高剂量(2.5、5.0、10.0mg/kg)组,给予槐定碱5d后,建立p MCAO大鼠模型。考察槐定碱对pMCAO大鼠神经功能评分的影响;考察槐定碱对pMCAO大鼠脑梗死率的影响;采用流式细胞术检测各组大鼠缺血半暗带区细胞凋亡率;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠脑组织病理变化;采用Western blotting法考察各组大鼠脑组织B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated Xprotein,Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果与模型组比较,槐定碱组大鼠神经缺陷症状改善,脑梗死率显著降低(P0.05、0.01),缺血半暗带细胞凋亡率明显降低(P0.05、0.01),脑组织损伤有所改善,脑组织Caspase-3和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05、0.01)。结论槐定碱对pMCAO大鼠脑细胞具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2及下调Bax、Caspase-3蛋白表达水平,进而抑制细胞凋亡有关。     

苦参碱调节Bax和Bcl-2蛋白表达诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的:探讨Bax和Bcl-2蛋白在苦参碱诱导A549细胞凋亡中的作用。方法:MTT法检测苦参碱对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况。结果:不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关。苦参碱随时间进行性降低Bcl-2蛋白的表达,相应地稳步提高Bax蛋白的表达,同时促进Bax从胞浆内向线粒体移位,紧接着降解Caspase-3蛋白。结论:苦参碱通过调节细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达经线粒体信号转导途径诱导A549细胞的凋亡。     

黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的：研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果：与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3和Caspase-8活性增强（P<0.05或P<0.01）,并呈量效依赖关系。结论：黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。     

苦豆子总碱及其单体对白色念珠菌抑制作用的研究

目的对比观察苦豆子总碱及其苦参碱(matrine)、槐定碱(sophoridine)单用和联用对白色念珠菌的抑制作用。方法通过对白色念珠菌的培养,观察真菌菌丝形成;并进行抑菌圈实验测定药物的敏感性;再用噻唑蓝微量稀释(MTT)法检测最低抑菌浓度;通过磷钼酸比色法测定吸光度,判断白色念珠菌细胞外液磷含量,推测药物对白念珠菌细胞膜通透性的影响;最后用薄层色谱法观察药物对白色念珠菌细胞膜成分麦角甾醇等合成有无抑制作用。结果药物对白色念珠菌菌丝形成能力的影响由强到弱依次为:苦豆子总碱组、混合组(苦参碱∶槐定碱8∶5)、苦参碱组、槐定碱组、氟康唑组;白色念珠菌对苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱具有较强敏感性且最低抑菌浓度分别是:2.500 mg/mL、3.125 mg/mL、6.25 mg/mL;苦豆子总碱组细胞外磷含量(0.175 2μg/mL),混合组(0.147 3μg/mL),苦参碱(0.110 1μg/mL),槐定碱(0.103 9μg/mL),氟康唑组(0.181 4μg/mL);由薄层色谱法可知麦角甾醇的斑点由小到大依次为苦豆子总碱组、混合组、苦参碱组、槐定碱组。结论苦豆子总碱、苦参碱、槐定碱均对白色念珠菌有明显抑菌作用;混合组对白色念珠菌细胞膜成分麦角甾醇合成有明显抑制作用;苦参碱和槐定碱单用时对麦角甾醇合成和细胞膜通透性影响效果没有两药联用效果好。     

苦豆子总碱对PC12细胞的毒性

目的研究苦豆子总碱对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的毒性。方法 PC12细胞与0. 5、1. 0、2. 0 g/L苦豆子总碱分别孵育24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,PI染色法检测细胞周期,FCM法检测细胞内Ca2+浓度。结果随着苦豆子总碱质量浓度增加,PC12细胞收缩、变小变圆、破裂脱落现象越明显。与对照组比较,苦豆子总碱组PC细胞存活率及G0/G1期、G2/M期细胞比例显著降低(P 0. 01),细胞LDH漏出率、早凋细胞及S期细胞比例、Ca2+浓度显著增加(P 0. 01)。结论苦豆子总碱对PC12细胞有明显毒性,其机制可能是通过诱导细胞凋亡、抑制细胞内DNA合成、阻滞细胞周期、引起细胞内Ca2+超载来导致细胞死亡。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

天然脑活素对Aβ1-40诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用研究

目的：探讨天然脑活素对Aβ1-40诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法：采用Aβ1-40处理PC12细胞复制AD细胞模型,不同剂量的天然脑活素孵育细胞,镜下观察细胞形态学变化,免疫细胞化学染色法观察细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax,Caspase-3）的表达水平。结果：天然脑活素处理组细胞突起生长明显,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达较模型组显著上调,同时细胞凋亡促进蛋白Bax及介导细胞凋亡的蛋白Caspase-3的表达明显下调（P〈0.05或P〈0.01）。结论：天然脑活素可通过调节细胞凋亡相关蛋白的表达水平,对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显拮抗作用。     

重楼皂苷Ⅰ对结肠癌HCT116细胞凋亡及Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ,PPⅠ)对结肠癌HCT116细胞凋亡及凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax),B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2),半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨重楼皂苷Ⅰ抑制结直肠癌转移的可能作用机制。方法:Cell counting kit-8(CCK-8)法检测12,24,48 h的细胞生长抑制作用,流式细胞术检测不同浓度的重楼皂苷Ⅰ对HCT116细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关因子Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白的表达。结果:重楼皂苷Ⅰ可抑制对HCT116细胞生长,呈一定的浓度、时间依赖性;可促进HCT116细胞凋亡,呈一定的浓度依赖性。与空白组、重楼皂苷Ⅰ低浓度组比较,重楼皂苷Ⅰ高浓度组Bax,剪切的半胱天冬酶-3蛋白(cleaved Caspase-3)蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P0.05),未剪切的半胱天冬酶-3(pro-Caspase-3)蛋白表达无明显变化。结论:重楼皂苷Ⅰ可抑制HCT116细胞生长,诱导HCT116细胞凋亡,且其诱导HCT116细胞凋亡的机制可能与其降低线粒体途径相关的细胞凋亡因子Bcl-2表达,升高Bax表达,并上调线粒体通路下游的Caspase-3蛋白相关。     

两面针中生物碱的分离

目的：研究两面针的化学成分。方法：采用硅胶柱层析及重结晶的方法分离和纯化化合物，根据理化性质和波谱方法鉴定结构。结果：从两面针的酸水提取氯仿萃取部分分离得到8个化合物，其中7个生物碱，分别为oxyavicine(1)，氧化两面针碱(oxynitidine，2)，二氢白屈菜红碱(dihydrochelerythrine，3)，去-Ⅳ-甲基白屈菜红碱(N-norchelerythrine，4)和茵芋碱(skimmianine，5)，haplopine(6)，liriodenine(7)，1个木脂素L-芝麻素(L-sesamin，8)。结论：化合物1、3和6为首次从该植物中分得。     

Alkaloids from Delphinium staphisagria

Three new diterpenoid alkaloids, isoazitine (1), 19-oxodihydroatisine (2), and 22-O-acetyl-19-oxodihydroatisine (3), and eight known alkaloids-azitine (4), dihydroatisine (5), delphinine, neoline, bullatine C (14-acetylneoline), chasmanine, 14-acetylchasmanine, and the quaternary base atisinium chloride (7)-were isolated from the aerial parts of Delphinium staphisagria. Structures of the new alkaloids were established mainly by 1D and 2D NMR spectroscopy, including (1)H COSY, HMQC, HMBC, and ROESY. The (1)H and (13)C NMR data for alkaloids 4 and 5 are also reported.     

地不容块茎中的生物碱

目的:研究地不容Stephania epigaea Lo中具有细胞毒活性的化学成分。方法:利用反复硅胶色谱柱进行分离纯化,通过理化性质和光谱数据分析鉴定化合物结构。结果:分离得到6个生物碱,分别鉴定为千金藤素( )-cepharan-thine(1),轮环藤宁cycleanine(2),(-)-norcycleanine(3),isochondodendrine(4),delavaine(5)和runanine(6)。结论:生物碱3～6为首次从该植物中分得,1～4体外有肿瘤细胞毒活性。     

Alkaloids from Daphniphyllum longeracemosum

Four new Daphniphyllum alkaloids, daphnilongeranins A-D (1-4), along with four known ones, daphniphylline, longistylumphylline A, deoxyisocalyciphylline B, and daphnicyclidin D, were isolated from the leaves and stems of Daphniphyllum longeracemosum. Daphnilongeranin A (1) is the first seco-10,17-longistylumphylline A type Daphniphyllum alkaloid, and daphnilongeranin B (2) is a new C-22 nor-Daphniphyllum alkaloid based on a new C21 skeleton. Their structures and stereochemistry were determined using spectroscopic data and chemical methods.     

尖山橙中生物碱类成分的研究

目的 研究尖山橙中的生物碱类成分.方法 干燥粉碎尖山橙全草用盐酸冷浸,浸液通过强酸型离子树脂后,用氨水碱化,晾干,再用95％乙醇洗脱浓缩得浸膏.应用硅胶、Sephadex LH-20、Rp-18柱色谱进行分离、纯化,根据理化性质和光谱分析鉴定化合物结构.结果 从尖山橙中分离鉴定了9个生物碱类成分,分别为tabersonine(Ⅰ),11-hydroxytabersonine(Ⅱ),venalstonidine(Ⅲ),pachysiphine(Ⅳ),venalstonine (Ⅴ),scandine(Ⅵ),10-hydroxyscandine (Ⅶ),scandine Nb-oxide(Ⅷ)和5-methoxystrictamine(Ⅸ).结论 化合物Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ为首次从尖山橙中分离鉴定,其中化合物Ⅸ是首次从山橙属植物中分离鉴定.     

Alkaloids from Gelsemium elegans

Three new alkaloids, gelsebanine (1), 14alpha-hydroxyelegansamine (2), and 14alpha-hydroxygelsamydine (3), and a new extraction artifact , gelsebamine (4), together with 12 known alkaloids, were isolated from the stems and leaves of Gelsemium elegans. The structures of 1-4 were determined by spectroscopic methods, especially 2D NMR techniques. Compounds 1-4 were evaluated for cytotoxic activity against four tumor cell lines, and gelsebamine (4) selectively inhibited the A-549 human lung adenocarcinoma cell line.     

Alkaloids from Consolida oliveriana

Four new diterpenoid alkaloids, olivimine (1), olividine (2), 8-O-methylcolumbianine (3), and 7alpha-hydroxycossonidine (4), were isolated from the aerial parts of Consolida oliveriana. Compounds 1 and 2, 3, and 4 belong to the lycoctonine-azomethine, aconitine, and hetisine types, respectively, and their structures were elucidated by spectral data interpretation.     

雷打果中生物碱成分的研究

目的研究雷打果的生物碱类成分。方法运用多种层析方法进行分离及纯化,并根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从雷打果茎皮中分离得到6个化合物,分别为:meloscandonine(I),scandine(Ⅱ),tabersonine(Ⅲ),11-hydroxytabersonine(IV),19S-vindolinine(V),vincadifformine(VI)。结论 6个化合物均为首次从该植物中分离得到。     

博落回的生物碱成分

目的:研究博落回Macleaya cordata的生物碱成分.方法:应用多种柱色谱法结合重结晶进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物结构.结果:从博落回中分离并鉴定出13种生物碱,分别鉴定为6-甲氧基二氢血根碱(6-methoxy-dihydrosanguinarine,1),去甲血根碱(norsanguinarine,2),6-丙酮基二氢白屈菜红碱(6-acetonyldihyrochelerythrine,3),6-丙酮基二氢血根碱(6-acetonyldihyrosanguinnarine,4),sanguidimerine(5),chelidimerine(6),(±)-bocconarborine A(7),(±)-bocconarborine B(8),隐品碱(cryptopine,9),二氢血根碱(dihydrosanguinarine,10),二氢白屈菜红碱(dihydrochelerythrine,11),原阿片碱(protopine,12),α-别隐品碱(α-allocryptopine,13).结论:化合物1为首次从博落回中分得,化合物2,3,5～9均为首次从博落回属植物中分得.     

Alkaloids from Daphniphyllum oldhami

Four new Daphniphyllum alkaloids, daphnioldhanines H-K ( 1- 4), along with 34 known alkaloids, were isolated from Daphniphyllum oldhami. The known alkaloid dehydrodaphnigraciline ( 5) is now reported as a natural product. Their structures were elucidated by spectroscopic methods, especially 2D NMR techniques. The effects against platelet aggregation of compounds 1, 3, and 5 were evaluated, and 3 showed stronger activity against platelet aggregation induced by PAF. This is the first report of quinolizidine alkaloids from the genus Daphniphyllum.