IL-18诱导的肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭作用的影响

目的 探讨外源性IL-18对单核细胞(THP-1)的活化作用以及白介素18(IL-18)激活诱导的肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)对肺癌A549细胞增殖、转移和侵袭作用的影响。方法 外源性IL-18刺激THP-1细胞后检测M1、M2型TAMs的比例;IL-18激活诱导的TAMs和肺癌细胞A549共培养,平板克隆形成实验检测共培养后A549细胞增殖作用的变化;细胞划痕实验检测共培养后A549细胞迁移作用的变化;细胞侵袭实验观察共培养后A549细胞体外侵袭作用的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT-PCR和western blot检测共培养后A549细胞EMT标志蛋白E-cadherin和N-cadherin、 Snail以及Slug的表达。结果 外源性IL-18刺激THP-1细胞表型由M2向TAMs方向分化;IL-18诱导TAMs促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜观察发现TAMs促进A549细胞尾足生长;qRT-PCR和western blot检测结果表明TAMs抑制A549细胞E-cadherin的表达,促进了N-cadherin、 Snail以及Slug的表达,说明TAMs激活了A549细胞发生EMT。结论 在肺癌中,IL-18可以激活诱导TAMs并促进其活化,活化后的TAMs通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭作用。     

健脾消癌方调控巨噬细胞M2极化对结直肠癌细胞侵袭作用的研究

目的 探讨健脾消癌方调控巨噬细胞M2极化对结直肠癌HCT116细胞侵袭转移能力的影响。方法 使用佛波酯诱导THP-1细胞成M0型巨噬细胞,通过Transwell法构建HCT116细胞与M0型巨噬细胞共培养体系,设立空白血清对照组、健脾消癌方含药血清组、IL-4+空白血清组、IL-4+健脾消癌方含药血清组。RT-PCR法检测巨噬细胞M2极化相关基因C-C基序趋化因子22(C-C motif chemokine22, CCL22)、精氨酸酶-1(arginase-1, Arg-1)表达,Transwell法检测HCT116侵袭转移能力,Western blot法检测HCT116中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase, MMP-9)蛋白表达水平。结果 与空白血清对照组比较,IL-4+空白血清组能上调CCL22、Arg-1表达（P<0.01）,下调HCT116细胞E-cadherin表达、上调Vimentin、MMP-9表达（P<0.01）,增加结直肠癌HCT116细胞侵袭数（P<...     

没食子酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的:体外建立M1型巨噬细胞极化模型,探讨没食子酸(GA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法:选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,取腹腔巨噬细胞进行体外原代培养,通过对细胞培养基进行不同的处理,将实验分为对照组(不做处理)、M1极化模型组[加入脂多糖(LPS,100μg·L-1)和干扰素γ(IFN-γ,20μg·L-1)诱...     

双酚 A 对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究

目的：探讨体外实验条件下,双酚 A（BPA）对小鼠腹腔巨噬细胞极化的影响。方法提取 C57BL/6J 雄性小鼠腹腔巨噬细胞,用（10 ng/ ml）干扰素-γ（IFN-γ）和（500 ng/ ml）细菌脂多糖（LPS）诱导其向 M1型极化;用（10 ng/ ml）白介素-4（IL-4）诱导其向 M2型极化;同时加入0.1、1、10μmol/ L BPA 处理细胞,并设立空白对照组和溶剂对照组。流式细胞术检测 M1型和 M2型巨噬细胞比例,ELISA 法检测 M1型和M2型巨噬细胞各自分泌的诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）和精氨酸酶（Arg-1）活性。结果不同浓度 BPA 促进 IFN-γ和LPS 诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,1、10μmol/ L BPA 组 M1型巨噬细胞比例较空白对照组分别升高11.3%和17.4%,M1型巨噬细胞分泌的 iNOS 活性分别升高1.95和2.29倍,差异均有统计学意义。不同浓度 BPA 抑制 IL-4诱导的小鼠腹腔巨噬细胞向 M2型极化,1、10μmol/ L BPA组 M2型巨噬细胞比例分别较空白对照组降低9.0%和14.3%,M2型巨噬细胞分泌的 Arg-1活性分别下降0.37和0.49倍,差异均有统计学意义。结论体外条件下,低剂量BPA 促进小鼠腹腔巨噬细胞向 M1型极化,抑制其向 M2型极化。     

热疗对人肝癌细胞株HepG2生长影响的体外研究

目的:探讨热疗对人肝癌细胞株HepG2生长的影响.方法:人肝癌细胞株HepG2细胞常规方法培养,采用水浴加热法(43.0℃)分别加热0.5h、1h和1.5h.处理后继续培养48h、72h、96h、120h和144h,绘制生长曲线;处理后分别培养0h、3h、6h、12h和24h,倒置显微镜观察细胞的形态变化.结果:随着加热时间的延长HepG2细胞数明显减少(P＜0.05,P＜0.01),细胞的形态也发生明显病理变化.结论:热疗对人肝癌细胞株具有细胞毒性作用,加热时间对癌细胞的生长有重要影响,热疗作为治疗肝癌的一种辅助疗法,值得进一步研究.     

全反式维甲酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的 利用M1型巨噬细胞极化模型,探讨全反式维甲酸(ATRA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法 选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,提取并纯化腹腔巨噬细胞,随机分为M组、M1组、DMSO组和ATRA组.脂多糖(LPS,100 ng/mL)联合干扰素-γ(IFN-γ,20 ng/mL)诱导巨噬细胞构建M1型巨噬细胞极化模型...     

circRNA-1565促进肿瘤相关巨噬细胞极化而诱导宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的 研究circRNA-1565对巨噬细胞极化所介导的宫颈癌迁移和侵袭的影响及机制。方法 将circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control转染至M2型巨噬细胞(circRNA-1565组和Vector组),qRT-PCR检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD16、TLR2、CD206和CD14表达,流式细胞术检测circRNA-1565组和Vector组巨噬细胞CD163和CD11B表达,Western blot检测各组细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。将分别转染circRNA-1565过表达质粒以及Negative Control的M0型巨噬细胞与宫颈癌细胞HeLa共孵育(M0+Vector组和M0+circRNA-1565组),细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力,使用Transwell法检测细胞迁移和侵袭。结果 相比于Vector组,circRNA-1565组巨噬细胞CD206和CD14表达显著上调(P<0.001),CD163⁺CD11B⁺细胞比例显著增加(P<...     

左旋聚乳酸对单核细胞来源巨噬细胞M1/M2极化的影响及姜黄素的干预作用

目的观察可降解生物医学材料左旋聚乳酸(poly-L-lactic acid,PLLA)对巨噬细胞极化的体外影响,并探讨姜黄素改善PLLA植入后生物相容性的作用。方法采用PLLA(PLLA组)、姜黄素(姜黄素组)及其两者共同作用(PLLA+姜黄素组)于人类THP-1单核细胞分化而来的巨噬细胞,通过CCK8试剂盒检测PLLA和姜黄素对巨噬细胞的细胞毒性,通过ELISA和RT-qPCR检测各组巨噬细胞M1和M2的细胞因子[白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10]的表达水平和基因转录水平检测。结果与对照组比较,PLLA组巨噬细胞炎症型M1细胞因子TNF-α、IL-6表达和转录水平显著升高,修复抗炎型M2细胞因子IL-10的表达水平升高但转录水平下降;与PLLA组比较,PLLA+姜黄素组的M1型细胞因子TNF-α、IL-6表达和转录水平下降,M2型细胞因子IL-10表达和转录水平上升。结论 PLLA促使体外培养的巨噬细胞向炎症型M1转化为主,且姜黄素促使PLLA作用下的巨噬细胞向M2型转化。     

热疗增强顺铂对子宫颈癌细胞化疗作用的体外实验研究

探讨热疗增强顺铂对子宫颈癌细胞的作用。方法以体外培养的子宫颈癌Ｈｅｌａ细胞株为研究对象，采用组内分组设计方法，以恒温水浴热疗，藉ＭＴＴ法观测不同热疗温度、时间、序贯对ＤＤＰ化疗增效作用。结论热疗增强ＤＤＰ对Ｈｅｌａ细胞的毒性作用，以４３℃１５ｍｉｎ以上热疗与ＤＤＰ同时应用效果最佳。     

50℃热疗对肿瘤细胞热休克蛋白70表达作用的实验研究

目的观察50℃时不同热疗时间对体外培养各种肿瘤细胞热休克蛋白(heat shock protein,HSP)表达的影响。方法①选择4种不同的肿瘤细胞株:慢性髓系白血病敏感型细胞株(K562/S细胞)、人胃癌AGS细胞株(AGS细胞)、BALB/c小鼠来源的结肠癌细胞CT-26株(CT-26细胞)、乳腺癌药物敏感细胞株MCF(MCF细胞)。②选取对数生长期的各肿瘤细胞制成细胞爬片,将细胞爬片分为实验组和对照组。③实验组:将爬片水浴加热各时间段(5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、50分钟),后置于37℃、5%CO2的培养箱中继续培养24小时。对照组:将各细胞爬片37℃水浴放置各时间段。免疫组织化学法(immuno-histochemistry,IH)检测热疗后各肿瘤细胞HSP70的表达情况。结果 IH发现,热疗后HSP70的表达量明显提高,在加热到20分钟时各肿瘤细胞中HSP-70强阳性表达,但在加热30分钟后随着细胞大量坏死,HSP-70阳性表达逐渐减弱,在50分钟时HSP-70阳性表达基本消失。结论 HSP70的阳性表达率随时间的延长而提高,直至细胞死亡而停止表达。     

巨噬细胞外泌体lncRNA HULC对肝癌细胞迁移、侵袭和转移的影响及其机制

目的：探讨巨噬细胞外泌体长链非编码RNA (lncRNA)肝癌高表达转录本（HULC）在肝细胞癌（HCC）转移中的作用,并阐明其作用机制。方法：分离小鼠骨髓单核细胞,采用佛波酯诱导分化为骨髓源巨噬细胞（BMDM）,并用白细胞介素4 (IL-4)将BMDM诱导分化为M2巨噬细胞,即肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。差速离心法收集M2巨噬细胞外泌体（TAM-exos）。在TAM中分别转染lncRNA HULC-siRNA或NC质粒后提取各组TAM分泌的外泌体（lncRNA HULC-siRNA-exos或NC-exos）。将HepG2细胞按照实验目的分为对照组和TAM-exos组;NC-exos组和lncRNA HULCsiRNA-exos组;lncRNA HULC-siRNA-exos组和lncRNA HULC-siRNA-exos+SKL2001组。给予相应处理后,Transwell小室实验检测HepG2细胞的迁移和侵袭细胞数,实时荧光定量PCR (RTqPCR)法检测HepG2细胞中lncRNAHULC表达水平,Westernblotting法检测HepG2细胞中Wnt3A、β-连环蛋白（...     

趋化因子CCL22对肺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的观察趋化因子CCL22对肺癌SBC-5细胞迁移和侵袭能力的影响。方法取肺癌细胞系SBC-5细胞,RPMI-1640培养基培养,5%CO2培养箱孵育,清洗消化后传代培养。予100ng/m L的CCL22诱导肺癌SBC-5细胞,设Control组、CCL22组(100ng/m L)、MIX组(CCL22 100ng/m L+蛋白激酶抑制剂U0126 10μmol),观察细胞迁移及侵袭能力的变化;加入蛋白激酶抑制剂(U0126)后细胞迁移及侵袭能力的变化。结果 CCL22诱导肺癌SBC-5细胞后,CCL22组细胞迁移距离(351.9±16.4)μm,明显大于Control组的(112.6±27.2)μm和MIX组的(145.1±29.6)μm(P0.05),MIX组和Control组比较差异无统计学意义(P0.05)。CCL22组平均侵袭细胞数(505.5±66.3)个,显著高于Control组的(199.2±32.8)个和MIX组的(95.7±19.1)个(P0.05),MIX组明显低于Control组(P0.05)。结论趋化因子CCL22可在体外诱导肺癌SBC-5细胞迁移和侵袭,而蛋白激酶抑制剂(U0126)可抑制CCL22诱导肺癌细胞的迁移及侵袭。     

黄芪甲苷促M2型巨噬细胞极化的作用研究

目的 探讨黄芪甲苷对M2型巨噬细胞极化的影响.方法 黄芪甲苷体外作用小鼠原代巨噬细胞,用流式细胞仪检测其表面分子(CD206、MHCⅡ和CD80/86)表达,Real time-PCR检测M1/M2型巨噬细胞特征基因(iNOS、YM1和Arg1)的表达,ELISA测定炎症相关细胞因子(TNF-α、IL-6、TGF-β)的表达.结果 黄芪甲苷单独处理未能诱导M2型巨噬细胞生成,但其与IL-13联合处理可明显上调M2型巨噬细胞标志CD206、YM1和Arg1的表达,下调抗原提呈相关分子MHCⅡ和CD80/86的表达,促进抑炎细胞因子TGF-β的分泌.结论 黄芪甲苷通过协同作用方式促进M2型巨噬细胞极化.     

M2亚型巨噬细胞对胃癌细胞迁移及上皮-间质转化的影响

目的 探讨M2亚型巨噬细胞对胃癌细胞迁移及上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 磁性活化细胞分选法(MACS法)分离获得临床胃癌患者肿瘤组织与外周血来源巨噬细胞.采用流式细胞和RT-qPCR分析并评价胃癌微环境中浸润的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的亚型.Transwell小室迁移实验检测胃癌组织来源巨噬细胞(GC-TAMs)对肿瘤细胞迁移能力的影响.Western blot和RT-qPCR评价GC-TAMs对肿瘤细胞EMT的调节作用.结果 GC-TAMs中CD204+细胞的比例明显高于癌旁组织;GC-TAMs中CD163、CD204、CD206、IL-10和CCL-22等M2亚型相关基因的转录水平明显高于癌旁组织,而M1亚型相关基因IL-23(p19)的转录水平则明显降低.胃癌患者外周血来源巨噬细胞的表面标记蛋白及亚型相关基因表达情况与GC-TAMs相似.体外共培养实验显示,M2亚型GC-TAMs对肿瘤细胞的迁移能力具有明显促进作用,镜下可见胃癌细胞形态发生明显间质细胞样改变,且细胞中EMT相关基因和蛋白fibronectin、vimentin和snail2的表达明显上调.结论 胃癌微环境中浸润TAMs以M2亚型为主,且可通过诱导肿瘤细胞发生EMT而对其迁移能力发挥促进作用.     

腹腔巨噬细胞的获取、提纯及体外培养的研究

用昆明种小鼠按Wasley's法快速获取腹腔巨噬细胞。以贴壁法提纯(9～12℃),体外培养的细胞呈单层生长,可存活2～3周。对提纯的细胞用形态学、细胞化学、吞噬及抗胰蛋白酶消化试验等法鉴定。结果:体外培养的细胞具有巨噬细胞的典型特征,属高纯度的巨噬细胞,纯度达97%以上。使用高纯度的细胞必将提高实验研究的质量。     

lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用及其机制

目的：探讨lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用,并阐明其可能的作用机制。方法：体外培养THP-1细胞,将过表达（LV-MIAT）与下调lncRNA-MIAT表达（LVshMIAT）的慢病毒颗粒及空载体（LV-Vector）转染入THP-1细胞中,将THP-1细胞诱导活化为巨噬细胞,并采用Transwell共培养体系将活化后的巨噬细胞与骨肉瘤（OS） MG63细胞共培养,将上述共培养体系分为MG63+LV-Vector组（阳性对照组）、 MG63+LV-shMIAT组、 MG63+LVMIAT组和IL-4+LV-Vector组。检测各组THP-1细胞中lncRNA-MIAT表达水平,流式细胞术检测各组细胞中M2型巨噬细胞百分率,ELISA法检测各组THP-1细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、、白细胞介素4 (IL-10)和转化生长因子β1 (TGF-β1)水平,检测各组HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2 (VEGFR2)、Notch1和δ样蛋白4 (DLL4)表达水平。取各培养体系中的巨噬细胞与人脐静脉内皮血管细胞（HUVEC）共培养,EDU染色法检测各组...     

LPS诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响

目的 研究脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响。方法 将Balb/c雌性小鼠随机分为对照组和实验组。Renca细胞皮下建模,待肿瘤体积生长至50mm3时瘤旁注射生理盐水（100μl/只, 1次/2d）或LPS（100μg/只,1次/2d）,采用流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞M1型极化水平。将小鼠肿瘤细胞系（ML-1、MC38、Renca）分成三组：空白组（完全培养基加入50%DMEM基础培养基）、对照组（完全培养基加入50%巨噬细胞培养基上清液）和实验组（完全培养基加入50%LPS预处理的巨噬细胞培养基上清液）。采用细胞计数试剂-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测肿瘤细胞增殖情况;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。 结果 经LPS处理后肿瘤相关巨噬细胞M1型比例增多（P<0.001）,从而增强其抗肿瘤功能;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可显著抑制肿瘤细胞的增殖（Renca：P=0.023;ML-1：P=0.045）;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞周期G0/G1（MC38：P=0.011;ML-1：P=0.022）或S期（Renca：P=0.022）阻滞,进而抑制细胞分裂;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞凋亡（Renca：P=0.04;ML-1：P=0.007）。结论 LPS可通过诱导巨噬细胞M1型极化发挥抗肿瘤功能。