豚鼠形觉剥夺性近视视网膜形态学研究

目的:建立豚鼠形觉剥夺性近视动物模型,研究在豚鼠形觉剥夺性近视眼中视网膜组织病理学改变,探讨其发病机制。方法:出生3wk的三色豚鼠随机分为3组:未遮盖组、单眼遮盖2wk组、单眼遮盖3wk组。对各组进行视网膜检影和A超测眼轴,眼底视网膜光镜及电镜检查以及视网膜各层厚度分析。结果:豚鼠形觉剥夺后近视形成,眼轴延长;视网膜各层变薄,光镜及电镜下均有病理性改变。结论:对豚鼠进行无创性眼罩遮盖可建立有效的形觉剥夺性近视模型。视网膜内层在近视发病机制中起重要作用。     

形觉剥夺时限对豚鼠近视形成的影响

目的　研究不同形觉剥夺时限对豚鼠实验性近视度数的影响。方法　将 2 0只 4周龄豚鼠分为 4组 ,Ⅰ组为对照 ,不做任何处理。Ⅱ～Ⅳ组单眼遮盖 4周 ,其中Ⅱ组持续遮盖 ,Ⅲ～Ⅳ组每天定时去除遮盖 ,时间分别为 1、4h ,实验前、后分别用检影镜和A超测眼屈光度数及眼轴长度。结果　 4周后 ,Ⅱ、Ⅲ组遮盖眼均发生轴性近视 ,近视度数的差异有显著意义 (P <0 .0 5 )。与对照组相比 ,Ⅱ组遮盖眼形成 - 5 .4 9D近视 ,并伴有眼轴的明显增长 ,非遮盖眼呈 0 .76D的相对远视。每天定时去除遮盖者近视度数明显降低 ,去遮盖 1h可使近视度数降低 5 0 % ,4h者不形成近视。去遮盖组眼轴长度较持续遮盖组短。结论　短时间去遮盖可逆转长期遮盖形成的形觉剥夺性近视。     

豚鼠形觉剥夺性近视形成的影响因素

近视的发病机制为异常的视觉刺激作用于视网膜引起视网膜信号因子的改变,随后通过视网膜色素上皮层-脉络膜途径传导至巩膜,诱导细胞外基质重构,导致巩膜重塑.豚鼠形觉剥夺性近视(form-deprived myopia,FDM)是研究近视的常用模型之一,对豚鼠FDM的研究主要集中在使用不同的药物如一氧化氮合酶、褪黑素、M受体阻...     

幼年期豚鼠形觉剥夺性近视的动态变化

目的评价幼年期豚鼠在形觉剥夺性近视进展过程中眼球各项参数的动态变化。方法将48只幼年期雄性花色豚鼠(出生后3周)随机分为2组:实验组(单眼眼罩遮盖,n=24)和对照组(n=24)。每组又分为 4个亚组(n=6),分别在形觉遮盖开始前及开始后2、4、6和8周进行实验眼和对侧眼的生物学测量(屈光力、角膜曲率、眼轴长度、后巩膜干重)。使用线形相关分析遮盖时间与各测量参数之间的相关性。结果 (1)单眼面罩遮盖动物眼2周组实验眼较对侧眼增加(-1．79±0．58)D的近视(mean±SE;P<0．05;配对t检验;表1),遮盖8周组可达(-4．71±0．74)D(实验眼与对侧眼比较,所有时间段P<0．05);玻璃体腔长度较对侧眼延长,自遮盖2周组的(0．14±0．01)mm到遮盖8周组的(0．29±0．02)mm(试验眼与对侧眼比较,所有时间段P<0．05)。后巩膜干重较对侧眼减轻,自遮盖2周后的(-0．17±0．02)mg至遮盖8周后的(-0．35±0．04)mg(实验眼与对侧眼比较, 所有时间段P<0．05);(2)4组实验眼角膜曲率、前房深度、晶状体厚度与对侧眼之间无显著性差异(P>0．05)。 (3)对比实验眼与对侧眼之间屈光力、玻璃体腔长度、后巩膜干重的差异,面罩组和对照组之间存在显著性差异(所有时间段P<0．05)。(4)面罩组实验眼与对侧眼之间屈光力、玻璃体腔长度、后巩膜干重的差异与遮盖时间呈正相关关系。结论随时间的延长,遮盖豚鼠眼可诱导更多的近视度数,而后巩膜进一步变薄,干重减轻。     

消旋山莨菪碱对豚鼠形觉剥夺性近视的作用和安全性

目的探讨10%消旋山莨菪碱对豚鼠形觉剥夺性近视的作用及安全性。方法 2～3周龄英国短毛花色豚鼠30只,随机分为3组,每组10只,采用右眼遮盖半透膜建造形觉剥夺模型。左眼为自身对照;A组:形觉剥夺+10%消旋山莨菪碱20μL玻璃体腔注射1次;B组:形觉剥夺+生理盐水20μL玻璃体腔注射1次;C组:单纯形觉剥夺组。所有动物饲养于500 lx白光照明环境中,照明周期12 h。干预前后用A超测量眼轴长度、前房深度和晶状体厚度,计算玻璃体腔长度;带状光检影法测量屈光度;右眼与左眼的差异作为评价指标以消除饲养过程中的组间差异。2周后实验结束,每组随机选取2只豚鼠处死后立即摘取眼球,行苏木素-伊红(HE)染色,观察眼部组织结构。结果各组基线左右眼眼轴长度、前房深度、晶状体厚度、玻璃体腔长度、屈光度差异均无统计学意义(P>0.05)。干预后2周复测,A组左右眼眼轴长度和玻璃体腔长度差异小于B组及C组,差异有统计学意义(P<0.01),玻璃体腔长度差异与眼轴长度差异显著相关(r=0.904,P<0.001)。各组间左右眼屈光度、晶状体厚度、前房深度差异均无统计学意义(P>0.05)。HE染色后显微镜下观察:给药组视网膜、巩膜、脉络膜均未见毒性改变。结论 10%消旋山莨菪碱可抑制豚鼠形觉剥夺性近视眼轴的增长,主要抑制玻璃体腔长度。10%消旋山莨菪碱玻璃体腔注射未发现组织学毒性改变。     

YS310对豚鼠形觉剥夺性近视作用的实验研究

目的探讨氮氧化酶抑制剂YS310对豚鼠形觉剥夺性近视的治疗作用。设计实验性研究。研究对象豚鼠。方法3￣4周龄三色豚鼠45只,右眼不透明眼罩遮盖,左眼不遮盖,随机分为5组(每组9只):阳性对照组滴用0.1%阿托品,低、中、高浓度用药组分别滴用0.03%、0.1%、0.3%的YS310滴眼液,阴性对照组滴用YS310溶媒,均为右眼给药,每日3次,连续4周。实验前后分别用检影镜和A型超声波测眼屈光度数及眼轴长度。主要指标屈光度数、眼轴长度。结果遮盖4周后,在屈光度数方面,阴性对照组增加了-6.33D。其余各组与阴性对照组相比,阿托品组(增加-4.13D)差异有显著性意义(P=0.011);低浓度组(增加-4.97D)差异无显著性(P=0.066);中浓度组(增加-4.81D)、高浓度组(增加-4.53D)差异有显著性(P=0.041、0.017)。在眼轴方面,阴性对照组增加了0.30mm,阿托品组及低、中、高浓度用药组分别增加了0.22mm、0.29mm、0.27mm、0.26mm,与阴性对照组相比均无显著性差别(P均>0.05)。结论0.1%￣0.3%YS310对豚鼠形觉剥夺性近视的屈光改变有一定的抑制效果,但不能有效地抑制眼轴的增长。(眼科,2006,15:195-197)     

左旋多巴对豚鼠形觉剥夺性近视形成的影响

目的研究腹腔注射左旋多巴（L-dopa）对豚鼠形觉剥夺性近视眼屈光状态及视网膜多巴胺含量的影响。方法眼罩遮盖建立豚鼠形觉剥夺性近视眼模型,分为正常对照组、L—dopa组（10mg／kg）、生理盐水组、遮盖组、遮盖＋L-dopa组、遮盖＋生理盐水组6个组。遮盖10d后,测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度,高效液相色谱检测视网膜多巴胺含量。结果眼罩遮盖10d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长、近视形成,视网膜多巴胺含量降低（P〈0．05）,但角膜曲率半径无明显变化。腹腔注射L-dopa引起遮盖眼视网膜多巴胺含量增加、近视程度减轻（P〈0．05）,但对正常豚鼠眼球的屈光发育无明显影响（P〉0．05）。腹腔注射生理盐水后,豚鼠眼球屈光状态和视网膜多巴胺含量无明显变化（P〉0．05）。结论腹腔注射L—dopa能通过补充遮盖眼视网膜多巴胺含量,抑制豚鼠形觉剥夺性近视的形成。     

视网膜神经递质系统在形觉剥夺性近视中的调控作用

形觉剥夺可诱导实验性近视动物模型，形成形觉剥夺性近视（form-deprivation myopia,FDM)，FDM的变化主要表现在眼球局部，有关调控眼球生长的神经递质主要分布于眼后极部，神经递质的变化可能与FDM的形成有关，视网膜神经递质单独或相互作用，通过多种途径，传递视觉信号，调控眼球的生长，我们就视网膜神经递质系统在FDM中调控作用的研究进展作一综述。     

转化生长因子-β2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达

目的 观察形觉剥夺性近视（FDM）形成中视网膜转化生长因子-β2（TGF-β2）水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨.方法 出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达.结果 形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义（P＜0.01）,遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少（P＜0.01）,TGF-β2 mRNA的表达下调.结论 TGF-β2参与调控FDM形成.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜蛋白激酶C的变化

摘 要：目的 研究豚鼠形觉剥夺性近视眼形成过程中视网膜蛋白激酶C（PKC）的变化.方法 选取3周龄雄性三色豚鼠48只,用半透明眼罩遮盖豚鼠右眼建立近视眼模型,分为遮盖3、7、14 d组,每组16只豚鼠.每组中8只豚鼠遮盖右眼作为实验眼.以对侧未遮盖眼作为自身对照,剩余8只豚鼠作为正常对照.按预定时间观察豚鼠角膜曲率半径、屈光度和眼轴长度的变化,然后处死豚鼠,取视网膜,采用非放射性方法测定视网膜PKC活性,免疫组化染色定位分析PKC蛋白在视网膜的表达情况.各组间角膜曲率半径、屈光度、眼轴长度、视网膜PKC活性及免疫反应强度比较,采用单因素方差分析;组内左、右眼之间的比较采用t检验：视网膜PKC活性与PKC蛋白免疫反应强度的关系采用相关分析.结果 眼罩遮盖能诱导豚鼠遮盖跟眼轴延长、近视形成,且近视程度随遮盖时间的延长而加深.与对照组比较,各组遮盖眼视网膜PKC活性均升高（P〈0.05）.眼罩遮盖3 d后,遮盖眼视网膜PKC活性升高至（0.28±0.08）units/ml,遮盖7 d时PKC活性进一步升高至（0.43±0.10）units/ml,遮盖14 d时降低为（0.32±0.07）units/ml.免疫组化染色结果显示,PKC蛋白表达于视网膜神经节细胞和内核层细胞,呈棕黄色或棕褐色颗粒.与正常对照眼及自身对照眼比较,遮盖眼视网膜内核层细胞PKC蛋白表达上调（P〈0.05）,神经节细胞PKC蛋白表达无变化.遮盖眼视网膜内核层细胞PKC蛋白表达的变化趋势与PKC活性一致,两者之间有明显的相关关系（r=0.994,P=0.000）.结论 视网膜PKC活性升高参与了豚鼠形觉剥夺性近视的形成.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜、脉络膜多巴胺代谢的变化

目的研究形觉剥夺对豚鼠神经视网膜、视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）／脉络膜复合体多巴胺（dopamine,DA）代谢的影响。方法28日龄豚鼠36只,分为3组：正常对照组、遮盖组、遮盖＋去遮盖组,每组12只。遮盖组用半透明眼罩遮盖豚鼠右眼14d,遮盖＋去遮盖纽在遮盖11d后去遮盖3d。14d后测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度。处死豚鼠,取眼后极部视网膜、脉络膜组织,用免疫组化染色和Western blotting法检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）蛋白在神经视网膜、RPE／脉络膜复合体的表达情况,用高效液相色谱检测神经视网膜、RPE／脉络膜复合体的DA、二羟基苯乙酸（3,4-dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC）的含量。结果TH蛋白阳性表达于视网膜神经节细胞和内核层部分细胞,RPE／脉络膜复合体中表达阴性。遮盖14d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长,近视形成,神经视网膜TH蛋白表达量和DA、DOPAC含量降低（P〈0．05）。遮盖＋去遮盖纽的遮盖眼近视程度低于遮盖组．其神经视网膜TH蛋白表达量和DA、DOPAC含量升高（P〈O．05）,但仍低于正常对照组（P〈O．05）。各纽豚鼠RPE／脉络膜复合体的DA、DOPAC含量比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论形觉剥夺能调控豚鼠神经视网膜DA代谢,但不影响RPE／脉络膜复合体的DA代谢。     

哌仑西平抑制豚鼠形觉剥夺性近视的效果与机制研究

目的观察哌仑西平滴眼液对豚鼠形觉剥夺性近视的抑制作用,并探讨其作用机制。方法健康1周龄豚鼠40只,随机分为:正常组(I)、单纯遮盖组(II)、含透明质酸钠的哌仑西平滴眼液组(III)、含氮酮的哌仑西平滴眼液组(IV)。II、III、IV组豚鼠的右眼均用半透明眼罩遮盖,III、IV组豚鼠的实验眼分别每日早晚滴用含透明质酸钠的哌仑西平滴眼液和含氮酮的哌仑西平滴眼液;7周后检测4组豚鼠的双眼屈光度、眼轴长度,免疫组化法检测视网膜酪氨酸羟化酶(TH)表达水平。结果4组实验眼间屈光度两两比较II、III组无显著性差异(t=-1.580,P>0.05),余有显著性差异(P<0.05);眼轴长度两两比较I、IV组无显著性差异(t=-0.420,P>0.05),余有显著性差异(P<0.05);视网膜TH阳性细胞数两两比较I、IV组无显著性差异(t=0.323,P>0.05),余有显著性差异(P<0.05)。TH阳性细胞数与相应屈光度呈直线相关(r=0.809,P<0.01)。结论2种哌仑西平滴眼液均能抑制豚鼠形觉剥夺性近视的发展,氮酮组作用效果显著;且均能阻止形觉剥夺性近视视网膜TH表达水平的下降。     

Adenosine receptor protein changes in guinea pigs with form deprivation myopia

Acta Ophthalmol. 2010: 88: 759–765

Abstract.

Purpose: Recent results have shown that treatment with the non‐selective adenosine antagonist 7‐methylxanthine (7‐MX) reduces the development of form deprivation myopia (FDM) in guinea pigs. The aims of this study were to identify the presence of adenosine receptors (AdoRs) in the eye wall of the guinea pig and to determine their possible changes during form deprivation. Methods: Three‐week‐old guinea pigs were monocularly treated with a translucent lens to induce FDM. After 21 days, samples were taken from the posterior eye wall and examined with immunofluorescence confocal microscopy for the presence of AdoRA1, AdoRA2A, AdoRA2B and AdoRA3 proteins. Western blot analysis was used to quantitate AdoRs in samples from the retina, choroids and sclera. Results: All four subtypes of AdoR were expressed in the posterior wall of the guinea pig eye, although AdoRA3 only weakly. Twenty‐one days after the induction of myopia, we observed a significant decrease in protein expression for AdoRA1 (? 25.5%) and an increase in protein expression for AdoRA2B (+ 66.7%) in the retina of FDM eyes. Conclusions: AdoRs of all subtypes are expressed in the retina, choroids and sclera in guinea pigs and may play a role in the regulation of eye growth. The changed pattern of AdoR expression during form deprivation confirms that pharmaceutical intervention targeting AdoRs may reduce myopia progression.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体1在形觉剥夺性近视豚鼠视网膜上的表达

目的对豚鼠行形觉剥夺建立近视动物模型，观察离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1（N—methyl—D—aspartate receptor 1．NMDAR1）在近视豚鼠视网膜上的动态表达．探讨其在近视发病机制中的作用。方法60只三色豚鼠随机分为3组：未遮盖组（Ⅰ）、单眼遮盖2周组（Ⅱ）、单眼遮盖3周组（Ⅲ），其中右眼遮盖为实验眼，左眼为自身对照眼。对各组进行视网膜检影和A超测眼轴。分别运用免疫组化及Western Blotting法检测各组豚鼠视网膜NMDAR1蛋白表达。结果Ⅰ组双眼呈轻度远视状态．双眼眼轴差异无显著性（P〉0．05）；Ⅱ组实验眼呈轻度近视（-1.583±1.478）D，自身对照眼呈轻度远视（2.500±1.017）D：实验眼眼轴较自身对照眼轻度延长（P〈0．05）；Ⅲ组实验眼呈中度近视（-3．417±l.169）D，自身对照眼呈轻度远视（1.813±1．072）D；实验眼眼轴较自身对照眼明显延长（P〈0．05）。免疫组化显示NMDAR1主要表达在豚鼠视网膜的内核层细胞及神经节细胞。Ⅰ组实验眼视网膜上NMDAR1蛋白含量为0．338±0．314．Ⅱ组实验眼NMDAB1蛋白含量升高为0．464±0．280．Ⅲ组实验眼视网膜NMDAR1蛋白含量明显上调为0．635±0．037;实验眼视网膜上NMDAR1蛋白含量随遮盖时间延长明显上调．与自身对照眼比较差异有显著性（P〈0．05）。结论形觉剥夺可明显上调豚鼠视网膜NMDAR1的蛋白表达，形觉剥夺产生的异常视觉信号可能通过刺激谷氨酸的释放、NMDAR1过度生成，参与近视的调控。     

Axial myopia induced by a monocularly-deprived facemask in guinea pigs: A non-invasive and effective model

This study evaluated the efficacy of a facemask, a non-invasive and potentially more reliable method, in inducing axial myopia in guinea pigs. Thirty-six animals were randomly assigned to 3 groups: MDF (monocularly-deprived facemask, n=6), lid-suture (eyelids sutured monocularly, n=24) and normal control (free of form deprivation, n=6). All the groups underwent biometric measurement (refraction, corneal curvature and axial length) prior to the experiment. All animals in the MDF group underwent biometric measurement at each of the 4 timepoints (2, 4, 6 and 8 weeks of form deprivation). In the lid-sutured group, the animals were randomly assigned to 4 subgroups (n=6 each) and each subgroup underwent biometric measurement at one of the timepoints matching those of the MDF group. In the normal control group, all animals underwent biometric measurement at each of the timepoints matching those of the 2 experimental groups. Placement of a facemask on an animal took approximately 10 sec and all the facemasks remained in place at all timepoints. The procedure of lid-suture took at least 20 min for an animal and rupture of the sutures occurred in 50% of the animals after 4 weeks. The MDF eyes developed myopia from −2.21±2.11D (Mean±s.d.) at 2 weeks to −4.38±2.14 at 8 weeks (p<0.05 at all timepoints, compared to the contralateral eyes) with a lengthening of the vitreous chamber from 0.17±0.05 mm at 2 weeks to 0.29±0.12 mm at 8 weeks (p<0.01 at all timepoints, compared to the contralateral eyes). The lid-sutured eyes developed myopia from −2.38±1.21D at 2 weeks to −4.75±1.39D at 8 weeks (p<0.05 at all timepoints, compared to the contralateral eyes) with a lengthening of the vitreous chamber from 0.13±0.02 mm at 2 weeks to 0.30±0.10 mm at 8 weeks (p<0.05 at 2, 4, 8 weeks, but >0.05 at 6 weeks, compared to the contralateral eyes) and an increase in the radius of the corneal curvature (0.20±0.07 mm at 4 weeks, p<0.01; 0.17±0.05 mm at 8 weeks, p<0.05; compared to the contralateral eyes). Both the MDF and lid-sutured groups had a similar development in myopia and vitreous length (MDF vs lid-suturing: p>0.05 at all timepoints, one-way ANOVA with Bonferroni correction). This development was significantly faster than in the normal control group (MDF or lid-suture vs normal control: p<0.05 to <0.01 from 2 to 8 weeks, one-way ANOVA with Bonferroni correction). The radius of corneal curvature in the lid-sutured group was significantly greater than in either the MDF group or the normal control group since 4 weeks of form deprivation (p<0.05, one-way ANOVA with Bonferroni correction). Treatment with MDFs is as effective as the lid-suture in inducing axial myopia in guinea pigs. This method is non-invasive and allows evaluation of the same group of animals at different timepoints so that the number of animals required could be minimized without affecting the accuracy of the results.     

豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的原代培养

目的研究豚鼠近视眼视网膜Müller细胞原代培养的方法。方法用半透明眼罩遮盖法建立豚鼠的近视眼模型。采用酶消化法培养豚鼠近视眼视网膜Müller细胞,用倒置相差显微镜观察Müller细胞的生长状况,以GFAP、Vimentin免疫组化染色进行细胞鉴定。结果半透明眼罩遮盖豚鼠右眼2周后,遮盖眼眼轴延长,近视形成。原代培养的视网膜Müller细胞贴壁生长,胞体较大、扁平,GFAP、Vimentin免疫组化染色呈阳性。结论酶消化法是培养豚鼠近视眼视网膜Müller细胞的一种有效方法。     

形觉剥夺性近视中巩膜变化的生物学机制

近视眼的发病机制不明，形觉剥夺可以诱导典型的近视动物模型，形成形觉剥夺性近视眼(form—deprivationmyopia，FDM)。通过细胞和分子水平的研究发现，FDM的变化主要表现在眼球局部，形觉剥夺可诱导巩膜软骨细胞增殖，细胞外基质(extracellularmaterial，ECM)基因表达异常，ECM增加，巩膜胶原纤维改变等引起巩膜重塑，导致眼轴延长，近视屈光度增加。本文就FDM巩膜变化生物学机制的研究进展作一综述。