复合神经营养因子对大鼠视神经损伤后轴突数的影响

目的观察玻璃体腔注射复合神经营养因子[睫状神经营养因子(CNTF)+脑源性神经营养因子(BDNF)]对大鼠视神经损伤后轴突的形态和纤维数目变化的作用。方法60只雌性健康成年SD大鼠、体重200~225 g,随机分为对照组、CNTF治疗组、BDNF治疗组及复合神经营养因子(CNTF+BDNF)治疗组。各组又分为7、14、21 d 3个时间组,每组5只大鼠,每只动物进行单眼实验,另外一眼为正常对照。四组制成视神经损伤模型后分别向玻璃体腔内注射生理盐水、CNTF、BDNF、CNTF+BDNF。按视神经损伤后不同时间点,分别将动物灌注固定。完整取下视神经,固定,包埋,切片处理后进行图像分析,对正常大鼠视神经内的轴突数和夹伤后大鼠视神经内的轴突数的变化规律进行观察和分析。结果视神经轴突计数结果显示各组轴突数随时间推移逐渐减少。与对照组相比CNTF治疗组、BDNF治疗组及CNTF+BDNF治疗组7、14、21 d各组轴突数均明显多于对照组(P<0.01),且CNTF+BDNF治疗组轴突数亦明显多于单独应用CNTF治疗组、BDNF治疗组(P<0.01)。结论在对大鼠视神经损伤的治疗中,应用CNTF+BDNF明显优于单独应用CNTF或BDNF。     

睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压视神经损害的保护作用

目的观察睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对大鼠急性高眼压视神经损害的保护作用。方法用平衡盐液前房加压灌注制成大鼠急性高眼压模型,造模前2 d玻璃体内注入CNTF,利用计算机图像分析技术,造模后不同时期观察视神经轴突面积占视神经横截面积百分比。结果CNTF治疗组较对照组视神经轴突面积占视神经横截面积百分比明显增加(P<0.01)。结论CNTF能对急性高眼压视神经损伤提供保护作用。     

CNTF与NGF对视神经损伤模型大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:本实验通过给视神经不全损伤模型大鼠玻璃体腔内注射外源性神经生长因子(NGF)及外源性睫状神经营养因子(CNTF),观察两种神经营养因子对视网膜神经节细胞是否具有一定的保护作用.方法:将30只Wistar大鼠随机分组,利用无创血管钳造成大鼠左眼视神经的不全损伤,右眼不予任何处理,作为正常对照组.并在造模成功后分别给予大鼠左眼玻璃体腔内注射NGF及CNTF各2μL,作为两组实验治疗组,实验对照组在相同时间给予大鼠左眼玻璃体腔内注射平衡盐溶液2μL.在大鼠视神经不全损伤后5d、10d时分别做RGC计数、光镜组织学观察及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)免疫组织化学检测.结果:光镜下,伤后5d-10d光镜下观察实验组视网膜及视网膜神经节细胞均有不同程度水肿及肿胀,RGC数量明显比正常对照组下降,有明显的统计学差异(P＜0.01),两组实验治疗组视网膜神经节细胞数目明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).免疫组织化学染色结果,伤后5d实验组GCL层GAP-43表达均呈阳性,实验治疗组GAP-43的表达量明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).10d后实验治疗组GAP-43表达量达高峰,实验对照组GAP-43表达量明显减少,具有明显统计学差异(P＜0.05).结论:在视神经受损后NGF与CNTF能提高视网膜神经节细胞的存活率,延长GAP-43的表达时间并增加其表达量,对视网膜神经节细胞具有一定的保护作用.     

大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子受体mRNA的表达

目的探讨大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子受体(CNTFR)mRNA在视神经上的表达及意义。方法135只健康雄性斯普拉-道来(SD)大鼠,随机取45只作为正常对照组;另两组为视神经单纯切断组和视神经-坐骨神经吻合组,每组各45只大鼠。建立大鼠视神经单纯切断和视神经-坐骨神经吻合模型,分别于建立模型后3、7、14 d取视神经组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法观察正常大鼠及各模型大鼠视神经上CNTFR mRNA的表达情况。结果正常大鼠视神经内CNTFR mRNA有少量表达。视神经单纯切断组,与正常对照组比较,其表达增加,有显著性差异。视神经剪断后桥接坐骨神经组,表达增加更明显,有显著性差异。结论视神经损伤后,可通过提高内源性CNTFR来应答轴索损伤,促进轴突再生,为外源性睫状神经营养因子(CNTF)的应用提供理论依据。     

大鼠视神经夹伤后视网膜形态变化的实验研究

目的 探讨大鼠视神经夹伤后视网膜病变的时序性变化.方法 建立大鼠视神经夹伤模型.分别于伤后1、3、7、15、30 d光镜下计数视网膜神经节细胞(RGCs)数目的变化.结果 大鼠视神经夹伤诱导RGCs较正常眼明显减少.结论 应用40 g力视神经夹建立的定量视神经损伤动物模型是可行的,并可应用于视神经损伤修复的研究中.     

地佐环平对兔视神经损伤后视网膜神经节细胞调节作用的研究

目的探讨地佐环平（Dizoclipine,MK-801）对兔视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用。方法30只健康雄性日本大耳白家兔随机分为5组,双眼制作视神经损伤模型。5组动物左眼为治疗组,于玻璃体腔内注入MK-801溶液;右眼为对照组,同法注入等量0．9％氯化钠溶液。于1、3、7、14、28d各处死1组家兔,摘取双眼进行视网膜末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）,光镜下记数对应部位存活视网膜神经节细胞数及TUNEL染色阳性细胞数。结果治疗组各时段治疗组存活视网膜神经节细胞数与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;除视神经损伤1d外,余时间点治疗组TUNEL阳性细胞数与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MK-801对兔视神经损伤后视网膜神经节细胞具有一定保护作用。     

神经胶质成熟因子-β诱导糖尿病大鼠视网膜Müller细胞炎症反应的机制研究

目的 研究神经胶质成熟因子-β(GMFB)对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的作用及相关机制。方法SPF级雄性SD大鼠60只，采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ,55 mg/kg)制备糖尿病模型后分为STZ组、STZ+AAVGMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组，每组15只。另取15只正常大鼠作为CON组。STZ+AAV-GMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组大鼠于成模8周后玻璃体腔单次注射AAV-GMFB腺病毒载体5μL。STZ+AAV-GMFB+K252a组在注射腺病毒基础上给予腹腔注射25μg/（kg·d）的K252a。12周后，免疫荧光检测GMFB在Müller细胞中的表达，免疫组织化学染色检测视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，酶联免疫吸附试验检测视网膜炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达，Western blot检测GMFB、脑源性神经营养因子（BDNF）及磷酸化酪氨酸激酶受体B(p-TrkB)蛋白相对表达水平。HE染色检测视网膜病理改变。结果 GMFB在Müller细胞中大量表达。与CON组比较，S...     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子治疗视神经损伤的药理学研究

目的：研究重组牛碱性成纤维细胞生长因子（rbFGF)在视神经损伤修复中的作用。方法：视神经部分损伤后，球后分别注射生理盐水、维生素B12、bFGF，伤后4周测量闪光视神经诱发电位（F－VEP），进行轴突定量、视网膜神经节细胞（RGCs)定量以及RGCs凋亡的检测，观察视神经损伤修复情况。结果：伤后4周时生理盐水维生素B12组对照刺激无反应，bFGF组F－VEP接近正常，800U、1600U和2400UbFGF对RGCs挽救率分别为24．5％、27．3％、28．5％，800U、1600U和2400UbEGF组未发生演变的轴突数分别是损伤末治疗组的2．03、2．43、2．31倍。流式细胞仪检测结果显示，bFGF治疗7d后，RGCs凋亡率显著减少。结论：bFGF可挽救视网膜神经节细胞的存活，减少轴突溃变，有抗凋亡作用，对视神经损伤有显著地促功能修复作用。     

色素上皮衍生因子对大鼠视神经夹伤模型视网膜组织中Caspase-3和Bax表达的影响

目的 探讨色素上皮衍生因子对大鼠视神经夹伤模型视网膜组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax表达的影响.方法 90只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、色素上皮衍生因子(PEDF)组,每组30只.除空白对照组外,均建立视神经夹伤大鼠模型,均取左侧眼球为标本,造模成功后,模型组玻璃体腔内注射平衡盐溶液5μl,PEDF组玻璃体内注射PEDF 5μl(浓度0.2μg/μl),模型组和PEDF组1周、2周再分2次分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μl和PEDF 5μl.3组大鼠均在第3周时取视网膜组织,电镜下观察视网膜组织超微结构的改变,采用免疫组化染色法观察Caspase-3、Bax表达情况,以及视网膜神经节细胞凋亡情况.结果 透射电镜观察模型组与PEDF组同空白对照组相比,均存在线粒体水肿、胞质浓缩轴突肿胀.同模型组相比,PEDF组胞质浓缩轴突肿胀轻,线粒体结构较完整.TUNEL法细胞凋亡监测:空白对照组染色阴性,模型组和PEDF组均可检测到染色阳性的RGCs,PEDF组TUNEL染色阳性的RGCs表达较模型组显著降低(P<0.05).PEDF组Caspase-3呈弱阳性表达,模型组呈强阳性表达,PEDF组Caspase-3光密度值显著低于模型组(P<0.05);模型组、PEDF组Bax表达高于空白对照组(P<0.05),PEDF组Bax表达又低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Caspase-3、Bax是诱导RGCs细胞凋亡的重要因子,采用PEDF干预治疗能够降低Caspase-3、Bax表达,减轻RGCs损伤.     

黄体酮对视神经损伤大鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响

目的：观察并探讨黄体酮对视神经损伤早期视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响,以期为黄体酮在视神经保护方面的作用提供实验依据。方法60只大鼠随机分为3组,每组20只。正常对照组不做任何处理,损伤1组制作右眼视神经夹伤模型,给予0)．9％氯化钠溶液腹腔注射,损伤2组制作右眼视神经夹伤模型,给予黄体酮腹腔注射。分别于损伤后1、3、7、14、28 d将3组大鼠右眼球摘除,取视网膜组织, HE染色光学显微镜观察视网膜形态学变化,并计数视网膜神经节细胞存活数量,免疫组织化学染色观察视网膜组织中MAP-1B在视网膜神经节细胞的表达情况。结果视神经损伤后损伤1组视网膜神经纤维层明显水肿,视网膜神经节细胞数目迅速减少,经黄体酮治疗的损伤2组视网膜形态改变轻微,视网膜神经纤维层轻度水肿,视网膜神经节细胞数目减少缓慢。损伤2组各时间段视网膜MAP-1B平均光密度值较损伤1组高,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论黄体酮可以通过增加细胞骨架蛋白MAP-1B减轻视神经损伤早期视网膜神经节细胞的损害,对视神经及视网膜有保护作用。     

大鼠外伤性视神经损伤后促凋亡基因P53、Bax和Caspase 3蛋白的表达

目的：观察大鼠外伤性视神经损伤后不同时间点的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)病理形态学改变,及P53、Bax和Caspase3蛋白表达变化规律,探讨外伤性视神经损伤发生机制及促凋亡基因的作用。方法：应用液压颅脑损伤仪建立大鼠视神经损伤动物模型,伤后1,3,5,7,9,14,28天处死,病理学观察RGCs的改变,免疫组化方法分析P53、Bax和Caspase 3在视网膜中的表达变化。结果：视神经损伤后l天RGCs开始减少,7天内呈快速减少,14天后减少速度减慢,28天后趋于稳定;P53、Bax、Caspase 3伤后表达明显增加,与对照组表达水平相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：视神经损伤后RGCs数目减少是其视功能下降的重要病理基础,凋亡是RGCs的死亡机制之一,促凋亡基因P53、Bax和Caspase3在RGCs凋亡发生中起重要作用。     

BDNF and NT-3 but not CNTF counteract the Ca2+ ionophore-induced apoptosis of cultured cortical neurons: involvement of dual pathways

The effect of neurotrophic factors on apoptosis induced by ionomycin, a potent Ca2+ ionophore, was investigated using cultured cortical neurons from embryonic rats. Brain-derived neurotophic factor (BDNF) and neurotrophin-3 (NT-3) prevented the ionomycin-mediated cell death in a dose-dependent manner. In contrast to the neurotrophins, cilliary neurotrophic factor (CNTF) did not rescue neurons from cell death induced by ionomycin. The protective effect of BDNF was partially blocked by wortmannin, a phosphatidylinositol 3-kinase inhibitor, and by PD98059, a MAP kinase kinase inhibitor. However, the addition of both compounds together completely inhibited the survival promoting effect of BDNF. These results suggest that the neuroprotective effect of BDNF requires activation of both phosphatidylinositol-3 kinase and the Ras/MAP kinase cascade and that CNTF signaling through other pathways is without an effect in this system.     

睫状神经营养因子对周围神经损伤后功能恢复的影响

目的：研究睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对受损周围神经功能恢复的影响。方法：将８０只大鼠左侧坐骨神经切断后行神经外膜吻合,随机分为两组。实验组腹腔内注入基因重组人ＣＮＴＦ,对照组注入等量生理盐水（ＮＳ）。术后行坐骨神经功能指数（ＳＦＩ）测定、电生理检测、轴突图像分析及霍乱毒素－辣根过氧化物酶（ＣＢ－ＨＲＰ）逆行追踪。结果：ＣＮＴＦ组ＳＦＩ恢复率、各项电生理及轴突图像分析指标、ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓前     

大鼠视神经损伤致视网膜病变的病理形态学定量分析

目的研究视神经损伤后视网膜的病理形态学变化。方法利用大鼠视神经钳夹伤模型,运用图像分析和形态计量技术对视神经损伤后视网膜中视神经神经元胞体的节细胞(RGCs)核体积密度进行了定量分析,对视网膜各层厚度进行了测量比较。结果①光镜下观察见正常对照组视网膜各层排列整齐而致密,RGC层胞核清晰,各层界限较为清楚,内核层和外核层细胞排列紧密而整齐。损伤后1d可见节细胞层有出血,损伤7d后,节细胞核明显稀疏,外核层及内核层细胞明显减少,核排列不整齐,内网状层亦变薄,视网膜总厚度变薄;②图像分析显示:视神经损伤后7、14、28d视网膜RGCs核体积密度明显下降(P<0.01),分别下降了27.5%、39.8%、49.0%;伤后28d视网膜节细胞层和内网状层厚度明显减少(P<0.05)结论视神经不全损伤导致了视网膜形态结构的变化,伤后7d节细胞明显丢失,28d视网膜出现了萎缩厚度变薄。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征老年患者神经营养因子水平与认知功能的相关性

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血清神经营养因子水平的变化及其与认知功能间的相关性。方法 按顺序纳入该院2013年5月至2014年9月收治的患者77例,参照呼吸暂停低通气指数(AHI)标准分为轻度OSAHS组25例、中度OSAHS组25例和重度OSAHS组27例;同时选择25例体检者作为健康对照组;分别进行多导睡眠图(PSG)监测;采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和简易智能状态量表(MMSE)对各组的认知功能进行评价;并检测血清神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)水平。分析以上参数间的相关性。结果与对照组比较,轻、中和重度OSAHS组患者的AHI、氧减指数(ODI)、呼吸相关微觉醒指数(RI)和脉氧饱和度低于90％的时间占总睡眠时间的百分比(TS90％)均明显升高(P＜0.01),且重度组较轻和中度组升高更明显(P＜0.01);而重度组患者的最低脉氧饱和度(LSaO₂)和平均脉氧饱和度(MSaO₂)较对照组明显降低(P＜0.01);与对照组比较,重度OSAHS组患者的MoCA、MMSE评分显著降低(P＜0.01);与轻、中度OSAHS组相比,重度OSAHS组MoCA评分显著降低(P＜0.01)。与对照组比较,轻、中和重度OSAHS组患者血清神经营养因子水平均减少;而重度OSAHS组患者血清营养因子较对照组、轻和中度OSAHS组患者明显减少,比较差异有统计学意义(P＜0.01)。血清营养因子水平与睡眠呼吸记录指标AHI、ODI、RI 和TS90％呈负相关,而与最低SaO₂和平均SaO₂呈正相关。血清营养因子水平与认知功能指标MoCA 和MMSE均呈正相关。结论 血清神经营养因子水平是反映OSAHS患者的重要指标,且与其认知功能障碍密切相关。     

注射用血栓通（冻干）对糖尿病大鼠海马损伤保护作用的研究

目的 研究注射用血栓通（冻干）（XST）减轻糖尿病大鼠海马神经损伤的作用。方法 ip链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和XST（50 mg/kg）组,每组10只,另随机取10只SD大鼠为对照组。ip给药,每天给药1次,于屏障环境中连续给药60 d,对照组和模型组大鼠ip等量生理盐水。常规HE染色观察大鼠海马CA1区细胞的形态;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对海马Bax、Bcl-2、Bcl-xl、脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、神经突触素（Syn）mRNA水平进行检测;采用Western blotting法对3种紧密连接蛋白——海马闭锁小带蛋白1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）、封闭蛋白5（Claudin-5）和BDNF蛋白表达水平进行检测。结果 与模型组比较,XST减轻糖尿病引起的海马神经细胞形态改变,显著增加细胞数目（P<0.05） ;显著升高抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-xlmRNA的表达,降低促凋亡基因Bax mRNA的表达（P<0.05） ;XST组3种紧密连接蛋白的表达量均不同程度的升高,其中Occludin、Claudin-5差异有统计学意义（P<0.05、0.01）;XST组GDNF、BDNF mRNA表达、BDNF蛋白表达均显著升高（P<0.05）。结论 XST可以减轻糖尿病大鼠海马神经损伤,其机制可能与提高紧密连接蛋白及神经营养因子表达有关。