聚合酶链反应检测肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的比较聚合酶链反应酶免法（ＰＣＲＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲＰＡＧＥ）方法检测白血病细胞端粒酶活性的临床应用价值。方法ＰＣＲＥＬＩＳＡ以地高辛标记对端粒重复片段特异的探针与ＰＣＲ变性产物杂交，通过ＥＬＩＳＡ系统检；ＰＣＲＰＡＧＥ方法直接用电泳法分离ＰＣＲ扩增端粒酶的合成产物，经溴乙啶染色，分析端粒酶活性。结果ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法能准确特异地检测白血病细胞的端粒酶活性，检测灵敏度可达１×１０２细胞数。经ＰＡＧＥ分离显示，端粒酶的ＰＣＲ产物有含５０ｂｐ等６条梯带。结论两种方法均可用于临床检测。ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法似更简单、方便一些。     

端粒重复序列扩增聚合酶链反应检测肺刷落细胞端粒酶活性

用端粒酶聚合酶链反应（ＰＣＲ）酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法，联合聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和银染色法，检测肺刷落细胞中端粒酶活性，并探讨了其在肺癌诊断中的价值。一、方法ＴＲＡＰＰＣＲＥＬＩＳＡ测定具体操作如下：将肺刷落细胞加裂解液１０～５...     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

聚合酶链反应检测结核杆菌的临床应用价值

５８例结核病患者与２８例非结核病呼吸系统疾病患者的痰中胸水标本，分别进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测结核杆菌及直接涂片找抗酸杆菌，同时用酶联法（ＥＬＩＳＡ）查血清结核抗体。对照研究表达ＰＣＲ检测结核杆菌特异性好，敏感性强，临床应用前景好。     

＂套式＂PCR检测丙型肝炎病毒

取临床上检测乙肝ＨＢｓＡｇ阳性之血清标本，用＂套式＂ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ分别检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染情况，结果显示，２０份血清标本用ＥＬＬＳＡ检测仅１例阳性，而用＂套式＂ＰＣＲ有６例阳性。     

血浆可溶性白细胞介素6受体β糖蛋白链检测试剂盒的研制

目的研制血浆或细胞培养上清可溶性白细胞介素６受体糖蛋白１３０（ｓｇｐ１３０）的酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）检测国产试剂盒，为ｓｇｐ１３０ＥＬＩＳＡ的检测提供便利条件。方法单克隆抗体（单抗）经生物素标记后，采用双抗体夹心法，显色系统选用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）亲和素／邻苯二胺（ＯＰＤ）溶液，对７株小鼠抗人ｓｇｐ１３０单抗进行不同的组合配对，选择最佳配对用以检测ｓｇｐ１３０。结果以单抗ＢＴ１２包被，二抗为生物素标记的ＢＴ２。这一配对可用于血浆或细胞培养上清ｓｇｐ１３０水平的检测，检测灵敏度为３．１２ｎｇ／ｍｌ。结论利用识别ｓｇｐ１３０不同表位的２株单抗可建立其ＥＬＩＳＡ检测方法。本法灵敏度高，方法简便，适合临床使用。     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最     

液相放大酶免疫法检测血清总免疫球蛋白

我们用液相放大酶免疫分析法（ＬＢＡＥＩＡ）［１］检测血清总ＩｇＥ,并与传统ＢＡ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法进行了比较。一、材料和方法（１）总ＩｇＥ工作标准：标准液浓度为：０,１０,２５,１００,２５０和５００ＩＵ／ｍｌ（ＷＨＯ７５／５０２）...     

抗组蛋白 Ｈ２ Ａ 抗体间接 ＥＬＩＳＡ 法的建立和临床初步 应用

目的 建立检测血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 技术，探讨抗 Ｈ２Ａ 抗体对类风湿关节炎（ ＲＡ） 的临床意义。 方法 ＲＴ?ＰＣＲ扩增 Ｈ２Ａ 基因，将其克隆到原核表达载体 ｐＥＴ２８ａ，对重组质粒 Ｈ２Ａ ／ ｐＥＴ２８ａ 进行原核表达，经 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测后，利 用 Ｈ２Ａ 重组蛋白建立检测人血清中抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 方法。 用建立的间接 ＥＬＩＳＡ 方法检测 ５０ 例 ＲＡ 患者和 ５０ 例健 康人对照组血清抗 Ｈ２Ａ 抗体水平。 结果 表达的 Ｈ２Ａ 蛋白相对分子量约为 １５ ０００，与预期大小相符，ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明组 蛋白 Ｈ２Ａ 与抗 Ｈ２Ａ 抗体阳性血清具有良好的反应原性。 经方法学评估，建立的 ＥＬＩＳＡ 法在特异性、可重复性方面均达到检 测要求。 ＲＡ 组抗 Ｈ２Ａ 抗体水平高于健康人对照组（Ｐ＜０．０１）。 当 ｃｕｔ?ｏｆｆ 值设为 ０．４９４ 时，ＲＡ 患者血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的阳性率 为 ８４％（４２ ／ ５０），明显高于健康人对照组 ２０％（１０ ／ ５０），差异具有统计学意义（χ２ ＝ ４１．０２６， Ｐ＜０．０１）。 结论 成功建立了检测 血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 技术。 ＲＡ 患者血清中抗 Ｈ２Ａ 抗体水平明显高于健康人对照组。 抗 Ｈ２Ａ 抗体在 ＲＡ 患者血清 中出现可能具有重要的致病意义。     

PCR和巢式PCR直接检测血清中HIV核酸序列

采用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法对５３例ＨＩＶ抗体阳性和阴性标本进行了检测，以扩增ＨＩＶ特异性ＤＮＡ序列，结果美国ＡｂｂｏｔｔＨＩＶ阳性血清２份，新加坡阳性血清２份，国内阳性血清２份及ＨＩＶ－１病毒培养物１份，两套ＰＣＲ扩增反应物均为阳性，对其中一套ＰＣＲ扩增的ｇａｇ基因序列进行巢式ＰＣＲ也为阳性。采自西南边境地区的２３份ＥＬＩＳＡ和ＷＢ阳性血清，各种ＰＣＲ反应均为阳性；１１份ＥＬＩＳＡ可疑阳性、ＷＢ阴性标本中，有两例血清呈ＰＣＲ阳性，探针杂交亦为阳性。而１２例ＳＩＶ、ＳＲＶ及猴血清标本ＰＣＲ反应均为阴性。上述结果表明，采用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＩＶ核酸序列是一种很有前途的ＨＩＶ感染诊断方法。