黄芪、水蛭、大黄及其复方含药血清影响大鼠MC产生FN及Col-Ⅳ的研究

目的:研究黄芪、水蛭、大黄及其复方抑制大鼠系膜细胞(mesangial cells,MC)产生纤维连接蛋白(fibronec-tin,FN)及Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Col-Ⅳ)的强弱。方法:在大鼠MC体外培养的基础上,将脂多苷糖(lipopolysac-charide,LPS)刺激的MC增生模型分为9组:控制组、模型组、对照组、黄芪组、水蛭组、大黄组、雷公藤多苷组、复方组、复方+雷公藤多苷组。采用ELISA法检测黄芪、水蛭、大黄及其复方等含药血清对MC表达FN及Col-Ⅳ的影响。结果:各含药血清组均能明显降低经LPS刺激后的大鼠MC产生FN及Col-Ⅳ的量,以复方+雷公藤组作用最佳,水蛭组、大黄组抑制作用较强,优于黄芪组。结论:证实了化瘀、泄浊中药水蛭、大黄在抑制MC产生FN及Col-Ⅳ方面优于益气类中药黄芪,复方+雷公藤组作用效果最佳。     

黄芪、水蛭及其不同比例配方含药血清对大鼠系膜细胞外纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的影响

在肾小球疾病中,随着病变的进展,肾小球系膜细胞(GMCs)增生,细胞外基质(ECM)增加,作为ECM主要成分的Ⅳ胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)含量也明显增加,肾小球内Col-Ⅳ、FN的含量可直接反映肾小球硬化的程度[1]。抑制GMCs增殖,进而抑制ECM的产生和积聚,可能是中药治疗肾病的重要     

黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞生长周期及凋亡的影响

目的:比较黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生长周期、凋亡的影响及凋亡的形态学观察。方法:应用流式细胞仪检测GMCs生长周期与凋亡;用瑞氏染色,显微镜观察凋亡细胞的形态。结果:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能使大量GMCs处于G0/G1期,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);均能提高GMCs凋亡率,水蛭、水蛭黄芪配方与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能阻止GMCs进入S期从而达到抑制增生的目的,且能提高GMCs的凋亡率,水蛭黄芪配方效果最优,水蛭次之。     

黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖诱导增生的大鼠GMCs中NF-κB?p65、MMP-2?mRNA表达的影响

目的:观察黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖(LPS)诱导增生大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)表达核转录因子p65(NF-κB p65)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(MMP-2)的影响,探索益气化瘀药物及其配方含药血清治疗系膜增生性肾小球肾炎的可能机制。方法:LPS诱导大鼠GMCs(HBEH)增殖,分别采用黄芪高剂量血清、水蛭高剂量血清、黄芪高剂量水蛭高剂量血清、黄芪低剂量水蛭高剂量血清进行干预,24h后收集细胞,用CCK-8法观察含药血清对GMCs增殖的影响,Real time PCR法测定NF-κB p65、MMP-2因子的表达变化。结果:LPS诱导系膜细胞增殖后,NF-κB p65mRNA表达较正常组明显升高(P0.01),表达量达到正常细胞的2.07倍,各含药血清组NF-κB p65mRNA表达量与LPS组比较均显著下降(P0.01)。LPS诱导GMCs增殖后,MMP-2 mRNA表达较正常组明显升高(P0.01),表达量达到正常细胞的2.0倍,而各含药血清组MMP-2 mRNA表达量与LPS组比较均显著下降(P0.01)。上述指标各含药血清组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:黄芪、水蛭及其配方含药血清能够通过影响NF-κB65、MMP-2的表达减少GMCs的增殖及细胞外基质的沉积,益气化瘀含药血清的应用有利于缓解系膜增生性肾小球肾炎的进展。     

醉鱼草苷Ⅳ对大鼠肝星状细胞增殖、活化的影响

目的:观察醉鱼草苷Ⅳ对大鼠贮脂细胞株(HSC-T6)增殖及活化的影响。方法:用不同质量浓度的醉鱼草苷Ⅳ处理HSC-T6,采用噻唑蓝(MTT)法测定醉鱼草苷Ⅳ对HSC-T6增殖的影响。采用20,14,9.8,6.86 mg.L-1醉鱼草苷Ⅳ干预细胞24 h,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA的表达;Annexin V/PI双染色法结合流式细胞术检测醉鱼草苷Ⅳ对HSC-T6凋亡的影响。结果:醉鱼草苷Ⅳ可显著抑制HSC-T6的增殖,且呈明显的量效关系。醉鱼草苷Ⅳ(6.86 mg.L-1)对HSC-T6 Col-ⅢmRNA表达具有显著的抑制作用(P<0.05);醉鱼草苷Ⅳ(9.8 mg.L-1)对细胞分泌羟脯氨酸(Hyp)和HSC-T6 Col-ⅠmRNA表达具有显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01)及对HSC-T6具有显著的诱导凋亡作用(P<0.01),从而达到抗肝纤维化的作用。结论:醉鱼草苷Ⅳ可体外抑制HSC-T6的增殖和活化,对肝纤维化有潜在的干预作用,其机制可能与抑制贮脂细胞增殖及细胞外基质的合成有关。     

鳖甲煎丸对人肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:探讨鳖甲煎丸对人肾小球系膜细胞(HMC)增殖及细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用。方法:应用细胞培养技术,进行人HMC培养,采取血清药理学方法,制备鳖甲煎丸药物血清,利用脂多糖(LPS)为刺激因子,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组系膜细胞的增殖情况,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ECM中层黏连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量。结果:LPS刺激后MC增殖和系膜基质中LN及Col-Ⅳ的分泌增多,与空白组比较有明显差异(P<0.01)。鳖甲煎丸能抑制正常条件及LPS刺激条件下MC增殖,并对ECM中LN、Col-Ⅳ的表达有抑制作用。结论:鳖甲煎丸能够抑制系膜细胞的增殖,抑制肾小球系膜基质中LN及Col-Ⅳ的表达,减少ECM的积聚,这可能是其防治肾小球疾病,延缓肾小球硬化的部分作用机制。     

黄芪卫矛合剂对糖尿病肾病大鼠血清LN和Ⅳ型胶原含量影响

目的:观察黄芪卫矛合剂对实验性糖尿病肾病大鼠血清Ⅳ型胶原和LN含量的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分4组,假手术组、模型组、中药组和西药组,后3组选用左肾摘除及尾静脉注射链脲佐菌素方法造成糖尿病肾病大鼠模型。中药组应用黄芪卫矛合剂灌胃,西药组予氯沙坦灌胃,假手术组和模型组予等量纯净水灌胃,共进行12周。实验结束,检测各组大鼠血清LN和Ⅳ型胶原含量。结果:黄芪卫矛合剂组可降低大鼠血清Ⅳ型胶原,且优于西药对照组,两组均能降低LN含量,无显著差异。结论:黄芪卫矛合剂能减少肾小球合成和分泌LN和Ⅳ型胶原是其防治DN的作用机制之一。     

谊肾颗粒对腺嘌呤致肾衰竭大鼠细胞外基质的影响

目的:观察谊肾颗粒对腺嘌呤致肾衰竭大鼠血清及肾小球细胞外基质含量的影响。方法:腺嘌呤灌服制作大鼠肾衰竭模型,随机将动物分为正常对照组,模型组及谊肾颗粒高、低剂量组,两用药组给谊肾颗粒灌胃。治疗6周后检测大鼠血清纤维联接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)含量,图像分析肾组织Col-Ⅳ、FN的表达量。结果:谊肾颗粒能降低血LN、Col-Ⅳ、PC-Ⅲ,提高血FN含量;减少肾衰竭大鼠肾小球细胞外基质FN、Col-Ⅳ的病理性聚集,降低肾小球硬化指数。结论:谊肾颗粒能通过减少肾小球细胞外基质的增生,减轻肾小球硬化程度。     

药物血清内黄芪甲苷含量测定及其抑制HSCs活化增殖的实验研究

目的:探讨黄芪经正常、肝纤维化机体代谢后血清内黄芪甲苷含量差别,及其对肝纤维化发生中HSCs活化增殖的影响。方法:40%CCl4,皮下注射9周制备大鼠肝纤维化模型。正常、肝纤维化大鼠分别灌服黄芪,提取正常、肝纤维大鼠药物血清,HPLC检测药物血清内黄芪甲苷含量。CCK-8法检测黄芪甲苷对HSCs增殖影响,3-Pro掺入-胶原酶消化法检测黄芪甲苷对HSCs胶原分泌的影响。结果:正常、病理药物血清内均可检出黄芪甲苷。病理药物血清内黄芪甲苷含量高于正常药物血清(0.1140 vs0.0851,P<0.05)。黄芪甲苷可抑制HSCs增殖及I型胶原分泌。结论:机体状态可影响黄芪内有效成分黄芪甲苷的代谢,可能与肝脏不同状态、口服药物首过效应及分解代谢有关。HPLC可用于检测中药体内有效成分含量,评估机体代谢对于中药有效成分含量的影响及临床药效。黄芪甲苷可有效抑制HSCs增殖、活化,为抗肝纤维化有效作用成分之一。     

黄芪抑制大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌的研究

目的：观察黄芪抑制大鼠肝星状细胞增殖及胶原分泌。方法：分离培养大鼠肝星状细胞,传一代后加入不同浓度的黄芪48h后,以MTT比色法检测对细胞增殖的作用,传一代细胞以2mg/ml作用48h后,以ELISA法检测I,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白分泌的变化。结果：0．75－50mg/ml黄芪（经0．45um滤膜过滤）可使MTT转化率下降,细胞增殖受抑,呈明显的剂量依赖性,2mg/ml黄芪可使Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原分泌量下降,结论：黄芪抗纤维化的部分机理在于抑制了活化肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成,从而减少了胶原纤维在肝脏内的沉积。     

解聚复肾宁对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨解聚复肾宁(黄芪、地黄、黄连、丹参、姜黄、葛根等)(JJFSN)治疗早期糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法:高糖诱导系膜细胞(MC)增殖以及细胞外基质(ECM)分泌,制备不同浓度JJFSN含药血清作用于体外培养的MC,用MTT法检测细胞增殖,放射免疫技术(RIA)检测细胞培养上清中Ⅳ型胶原(ColⅣ)及层黏连蛋白(Ln)的含量。结果:JJFSN含药血清可抑制高糖诱导的MC过度增殖(P0.05),并且这种作用具有药物剂量和时间依赖关系。同时,JJFSN可逆转高糖对ColⅣ和Ln分泌的影响,降低MC培养上清中ColⅣ和Ln的含量(P0.05),并且这种作用随着JJFSN剂量的增加而增强。结论:JJFSN抑制高糖诱导的MC过度增殖并减少ECM的过量分泌,可能是其防治DN早期的作用机制。     

肝长春口服液保肝抗纤维化作用的实验研究

目的:观察中药肝长春(鳖甲、人参、水蛭、黄芪等)的保肝抗肝纤维化作用.方法:用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,观察肝长春对大鼠肝功能、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘蛋白(LN)及肝组织病理学影响.结果:肝长春能显著降低肝纤维化大鼠血清转氨酶、HA、LN及Ⅳ-C(P＜0.05),并减轻肝脏的纤维增生程度(P＜0.01).结论:肝长春对大鼠实验性肝纤维化具有预防和治疗作用.     

五苓散含药血清对大鼠系膜细胞增殖性及细胞外基质的影响

目的:观察五苓散含药血清是否能够抑制内皮素刺激下,体外培养的大鼠系膜细胞的增生及纤维连接蛋白(fibronection,FN)、层粘连蛋白(lam in in,LN)和Ⅳ型胶原(Ⅳtype collagen,ColⅣ)的分泌。方法:采用常规血清药理学方法,以内皮素(endothelin,ET)-1为刺激因子,用MTT法检测五苓散含药血清对细胞增殖性的影响;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质中FN、LN及ColⅣ的含量。结果:五苓散含药血清可以抑制内皮素刺激下体外培养的大鼠系膜细胞的增生及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)的分泌。结论:系膜细胞是五苓散治疗肾病的重要靶细胞,五苓散可以拮抗内皮素对系膜细胞的作用,这是其发挥疗效的作用机理之一。     

黄芪水蛭制剂对糖尿病肾病大鼠肾组织中C-Ⅳ、FN及IL-1β表达的实验研究

目的:研究黄芪水蛭制剂对糖尿病肾病大鼠IL-1β及C-Ⅳ、FN表达的影响,进而探讨其在糖尿病肾病大鼠肾保护中的作用机制。方法:采用高脂饲料喂养+STZ腹腔注射制作糖尿病肾病大鼠模型。分为正常对照组、模型对照组、中药治疗组(黄芪水蛭制剂组)、西药治疗组(洛汀新组)、雷公藤治疗组(雷公藤组)、中西药治疗组(黄芪水蛭制剂+洛汀新组),测定大鼠24 h尿蛋白定量、尿视黄醇结合蛋白、尿微量白蛋白,放射免疫方法测定大鼠血清中IL-β1及免疫组化方法测定大鼠肾脏组织中的C-Ⅳ、FN表达。结果:经黄芪水蛭制剂治疗2个月后,24 h尿蛋白定量、尿视黄醇结合蛋白、尿微量白蛋白、IL-1β各治疗组均明显低于模型组(P<0.05);大鼠模型组的C-Ⅳ、FN分别呈现高阳性表达,明显高于各治疗组(P<0.05)。结论:黄芪水蛭制剂对糖尿病肾病大鼠有一定的治疗效果,可以改善肾功能,延缓糖尿病的肾脏损伤,其可能机制是抑制了大鼠的炎症反应及肾纤维化的进展,与抑制了C-Ⅳ、FN在大鼠肾组织中的表达有关。     

水蛭素抑制体外模拟增生性瘢痕模型的实验研究

目的:研究水蛭素对体外人增生性瘢痕模型的收缩能力,成纤维细胞的增殖、胶原分泌等功能的影响。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),建立含增生性瘢痕成纤维细胞的胶原网架系统(FPCL),用1、10、50U/ml的水蛭素溶液干预该模型,测定凝胶块收缩指数,利用MTT染色计数活细胞,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达。结果:浓度为10U/ml和50U/ml水蛭素溶液能够抑制HSFB的活力,使FPCL收缩指数降低,抑制FPCL中HSFBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达(P<0.05)。结论:水蛭素溶液可抑制体外人增生性瘢痕三维模型的收缩功能和成纤维细胞增殖、分泌胶原功能。     

益气化瘀清热方及其拆方影响体外培养大鼠MsC增殖、产生Col-Ⅰ的实验研究

目的观察益气化瘀清热方及拆方的含药血清对脂多糖刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Ms C)增殖、生成Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)的影响。方法 MTT法检测Ms C增殖;ELISA法检测Col-Ⅰ的含量。结果各类含药血清均能抑制Ms C增殖、减少Col-Ⅰ的生成,化瘀组与清热组作用强于益气组,中药复方组作用强于雷公藤组。结论益气化瘀清热方及拆方后的各类中药均能抑制Ms C增殖、减少Col-Ⅰ的生成。     

白背叶根水提物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的保护作用研究

目的:研究白背叶根水提物对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的保护作用及其作用机制。方法:用四氯化碳建立大鼠肝纤维化模型,成模大鼠分为模型组、秋水仙碱(0.2 mg/kg)阳性对照组及白背叶根水提物高(5 g/kg)、中(2.5 g/kg)、低(1.25 g/kg)剂量组,同批未给四氯化碳的大鼠作为正常对照组。给药8 w后,全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST、ALB、TP水平;HE和Masson胶原染色观察肝脏病理学改变;夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肝组织中PC-Ⅲ、Col-Ⅳ、HA、LN含量;q-PCR法测定肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TNF-α mRNA的表达。结果:与模型组比较,白背叶水提物能显著降低血清ALT、AST水平,提高ALB、TP水平,明显减轻肝脏炎症损伤;显著降低肝组织中PC-Ⅲ、Col-Ⅳ、HA、LN含量及Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TNF-α mRNA的表达。结论:白背叶根水提物对肝纤维化有保护作用,其机制可能与调节胶原合成异常、减轻机体炎症反应有关。     

中药复方对DMN诱导的肝纤维化大鼠Ⅳ型胶原和TGF-β1蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方对二甲基亚硝胺(DNM)诱导大鼠肝纤维化后Ⅳ型胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:采用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,实验分为正常组、模型组和治疗组,观察肝组织羟脯氨酸含量,肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平及肝组织病理变化.结果:补肾柔肝方对肝纤维化有明显的治疗作用,治疗组羟脯氨酸含量要显著低于模型组,同时能使肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平下调.结论:补肾柔肝方可用于治疗肝纤维化.其机制可能与下调TGF-β1表达,抑制Ⅳ型胶原表达有关.     

当归补血汤有效组分配伍对肝星状细胞Ⅲ型胶原分泌及转化生长因子β1受体的影响

目的观察当归补血汤有效组分及其配伍对大鼠肝星状细胞HSC-T6Ⅲ型胶原分泌和转化生长因子β1(TGF-β1)Ⅰ型和Ⅱ型受体表达的影响。方法当归的有效成分阿魏酸和黄芪的有效成分黄芪甲苷单独及联合处理HSC-T6细胞24 h,ELISA检测培养上清液中Ⅲ型胶原含量,Western blot检测HSC-T6细胞Ⅰ和Ⅱ型TGF-β受体蛋白表达,实时定量PCR检测HSC-T6细胞Ⅰ型TGF-β受体mRNA表达。结果阿魏酸显著抑制了HSC-T6细胞培养上清液中Ⅲ型胶原含量,下调了Ⅰ和Ⅱ型TGF-β受体蛋白表达和Ⅰ型TGF-β受体mRNA表达(均P0.05),黄芪甲苷对这些指标无显著性影响(均P0.05)。与阿魏酸单独处理组的作用效果比较,联合处理组无显著性提高(均P0.05)。结论当归补血汤的有效组分阿魏酸抑制了肝星状细胞Ⅲ型胶原分泌及TGF-β受体表达。     

红景天苷体外抗肝纤维化的实验研究

目的：观察红景天苷对大鼠肝星状细胞增殖及细胞外基质分泌的影响。方法：用不同浓度的红蒂天苷处理大鼠肝星状细胞；以MTT比色法测定细胞的增殖；放射免疫法测定透明质酸和层粘连蛋白；酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅰ型胶原的水平。结果：红景天苷可剂量依赖性地抑制HSC增殖，不同程度抑制Ⅰ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白分泌。结论：红景天苷在体外有显著的抗肝纤维化作用。