皮质酮诱导青春期大鼠睾丸间质细胞凋亡的研究

本研究目的旨在观察皮质酮能否诱导青春期大鼠睾丸间质细胞凋亡,用皮质酮分别经体内、外途径处理大鼠睾丸间质细胞。凋亡细胞经碘化丙碇（ＰＩ）标记后用流式细胞仪检测。体外研究结果表明,经１００ｎＭ皮质酮处理２４小时后的睾丸间质细胞,其凋亡量（３６．５％）显著高于对照组（１２．７％。Ｐ〈０．０１）。在体研究得到类似结果,经皮质酮（２．５ｍｇ／１００ｇ体重）处理２４小时后的大鼠,其纯化的睾丸间质细胞调亡量（２     

大鼠内源性糖皮质激素对间质细胞功能的影响

本文旨在评价大鼠体内糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）对间质细胞中睾酮合成和１１－β羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）活性的影响。为观察内源性皮质酮对间质细胞中睾酮合成的影响，本文测定了切除肾上腺雄性大鼠（４５天龄）血清皮质酮、睾酮，ＬＨ含量和经ＬＨ刺激的纯化间质细胞中睾酮生成量及纯化间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性水平。结果表明，切除肾上腺后大鼠血清睾酮水平高于手术对照组及切除后补充皮质酮大鼠。切除肾上腺后大鼠和切除后补充皮质酮大鼠血清ＬＨ水平均无明显变化，表明在上述二实验组中，由于内源性皮质酮变化而导致的间质细胞中睾酮生成的变化不依赖ＬＨ的存在。切除肾上腺后大鼠其纯化的间质细胞睾酮生成量比对照组增加一倍。但经补充皮质酮后睾酮生成量被抑制到对照组水平以下，表明给切除肾上腺后大鼠补充皮质酮能明显地抑制睾酮生成。切除肾上腺后大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性降低，并且这一降低可经补充皮质酮得到恢复。上述结果表明生理性浓度皮质酮对间质细胞中睾酮合成行使直接的负性控制，同时诱导细胞内１１β－ＨＳＤ活性，由此保护间质细胞中睾酮合成免于受到糖皮质激素的过度抑制。     

激素调节大鼠间质细胞中11β—羟类固醇脱氢酶活性

糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）抑制睾丸间质细胞中睾酮合成。１１β－羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）通过控制细胞内糖皮质激素浓度调节睾酮合成,并且其活性又能被大鼠内源性皮质酮诱导,由此保护了间质细胞中睾酮的生物合成,使之免于受到糖皮质激素的过度抑制。本研究旨在观察大鼠间质细胞中受１１β－ＨＳＤ调节的两种激素———皮质酮和睾酮是否对培养的大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性及其ｍＲＮＡ表达具有调节作用。结果表明,皮质酮能增加切除肾上腺大鼠培养的间质细胞中１１β－ＨＳＤ氧化酶活性及其ｍＲＮＡ表达。睾酮则明显抑制培养的大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤ氧化酶活性及其ｍＲＮＡ表达。     

皮质酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡是一经caspase-3激活的过程

目的 超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)能诱导大鼠Leydig细胞凋亡。但有关皮质酮诱导Leydig细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚。本研究旨在观察皮质酮是否经caspase-3激活的途径诱导大鼠Leydig细胞凋亡。方法 采用Western Blot方法检测不同时间点上经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-3酶原及裂解的caspase-3酶表达情况。运用荧光发光法检测不同时间点上经皮质酮处理的人鼠Leydig细胞中caspase-3酶活性。结果 caspase-3酶原表达水平在皮质酮处理6h时开始上升，12h及24h时表达量下降，而具生物活性的、裂解的caspase-3酶于12h时开始出现，24h时的表达水平最为显著。caspase-3酶活性在皮质酮处理12h时明显升高，以24h时最为显著。Caspase-3抑制剂DEVD-CHO对经皮质酮处理12、24及48h的Leydig细胞中的caspase-3酶活性均具有明显的抑制作用，加caspase-3抑制剂的处理组其细胞基因组DNA电泳未见有凋亡特征性的梯状条带。结论 皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡是一经caspase-3激活的过程。     

大鼠间质细胞中11β-羟类固醇脱氢酶mRNA的表达

间质细胞中１１β－羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）通过控制细胞内糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）浓度调节睾酮合成。大鼠出生后２６天内，其未成熟间质细胞不含１１β－ＨＳＤ，随着间质细胞成熟，１１β－ＨＳＤ逐渐产生，成年大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性最高。１１β－ＨＳＤ控制着间质细胞中糖皮质激素浓度，生理浓度糖皮质激素同样调节着１１β－ＨＳＤ活性水平。本研究观察了三个不同年龄组大鼠和切除肾上腺后及切除后补充皮质酮大鼠，间质细胞中１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达情况，发现：出生２１天大鼠间质细胞中无１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ的表达，４５天大鼠有１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达，９０天大鼠表达量最大，切除肾上腺后大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达降低，切除后经皮质酮补充大鼠１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达量回复到对照组水平。结果表明三个不同年龄组大鼠间质细胞中１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达情况和以往采用免疫组织化学及生物化学方法测定抗原含量或酶活性的结果是一致的。内源性及生理浓度的皮质酮对１１β－ＨＳＤｍＲＮＡ表达的调节也表现出类似的一致性     

大鼠内源性糖皮质激素对间质细胞功能的影响

本文旨在评价大鼠体内糖皮质激素（大鼠体内是皮质酮）对间质细胞中睾酮合成和１１－β羟类固醇脱氢酶（１１β－ＨＳＤ）活性的影响，为观察内源性皮质酮对间质细胞中睾酮合成的影响，本文测定了切除肾上腺雄性大鼠（４５天龄）血清皮质酮睾酮，ＬＨ含量和经ＬＨ刺激的纯化间质细胞中质酮生成量及纯化间质细胞中１１β－ＨＳＤ活性水平，结果表明，切除肾上腺后大鼠血清睾酮水平高于手术对照组及切除后补充皮质酮大鼠。切除肾上腺后     

Egr在高浓度皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中的表达及作用

目的 观察在高浓度皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中Egr mRNA的表达量,并评价Egr在高浓度皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡的作用.方法 采用RT-PCR方法检测经高浓度皮质酮以及高浓度皮质酮加环孢菌素A (CsA)处理的Leydig细胞中早期生长反应因子(early growth response factor,Egr) Egr-2及Egr-3的mRNA表达水平:用Annexin-V -FITC和Pl双标法检测Egr-2和Egr-3表达载体对经高浓度皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡率的影响.结果 经高浓度皮质酮处理的Leydig细胞其Egr-2及Egr-3mRNA的表达量均显著升高,而皮质酮的这一作用能被钙调神经磷酸酶(CaN)的抑制剂环孢菌素A(CsA)所抑制.Leydig细胞中过量表达的Egr-2及Egr-3均可促进皮质酮诱导细胞凋亡,并以Egr-3的作用较为显著.结论 高浓度的皮质酮可能通过活化CaN来诱导Leydig细胞中Egr-2和Egr-3的表达,由此促进了Leydig细胞的凋亡过程.     

皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中caspase-3活化途径的研究

目的我们新近的研究表明，超生理剂量的皮质酮（大鼠体内的糖皮质激素）可通过激活caspase-3诱导大鼠Leydig细胞凋亡。本研究拟评价在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡过程中，caspase-3的激活是否有其上游的caspase-8平和 caspase-9的参与。方法采用荧光分光光度法榆测经皮质酮处理的大鼠Leydig细胞中caspase-8活性，以DNA梯状电泳条带作为评价细胞凋亡的指标，观察caspase-8抑制剂是否能够抑制细胞凋亡，采用RTPCR枪测皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中caspase-9的mRNA水平。结果在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中出现caspase-8活性增高，以12h最为址著，升高的caspase-8的活性可被caspase-8抑制剂抑制，并导致Leydig细胞的凋亡过程被阻断。Leydig细胞中caspase-9的mRNA水平在皮质酮作用下上升，同样以12h最为显著。结论皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞调亡与caspase-8和caspase-9有关。     

未羧化骨钙素对老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成功能的影响

目的:通过建立老年大鼠模型,探究未羧化骨钙素对老年雄性大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响。方法:30只3月龄成年雄性大鼠,随机对半分为正常对照组和实验组,实验组颈背部皮下注射D-半乳糖溶液300 mg·kg~(-1)·d~(-1),对照组颈背部皮下注射等剂量生理盐水,注射时间为8周。验证衰老模型构建成功后,取大鼠的睾丸间质细胞,分别用不同质量浓度0(等量PBS溶液)、1、3 ng/mL的非羧化骨钙素刺激大鼠睾丸间质细胞,24 h后收取培养液采用睾酮ELISA检测试剂盒进行睾酮浓度检测;并在24 h后收集细胞提取RNA,然后采用荧光定量PCR法检测睾丸间质细胞睾酮合成关键酶StAR、Cyp11a、Cyp17的表达。结果:同加入等量PBS溶液的对照组大鼠睾丸间质细胞相比,加入等量PBS溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平下降(P0.05);对模型组大鼠睾丸间质细胞分别进行1、3 ng/mL未羧化骨钙素处理,相较于模型组加入等量PBS溶液处理的睾丸间质细胞,骨钙素处理组睾丸间质细胞培养液上清中睾酮水平均升高(P0.05);与加入等量PBS溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞相比,经过1 ng/mL未羧化骨钙素处理后的模型组大鼠睾丸间质细胞的StAR、Cyp11a、Cyp17基因的表达有明显的上升;经过3 ng/mL未羧化骨钙素处理后的模型组大鼠睾丸间质细胞的StAR、Cyp11a、Cyp17基因的表达有显著上升。结论:本研究成功的构建了D-半乳糖诱导的衰老大鼠模型,证明了未羧化的骨钙素可以促进D-半乳糖诱导的老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成,并且该作用可能是由于未羧化骨钙素促进其睾酮合成关键酶的表达引起的。     

DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞凋亡Caspase通路的影响

目的:通过对原代培养的大鼠睾丸间质细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸间质细胞凋亡通路Caspase-3和Caspase-9表达以及细胞凋亡的影响。方法:体外分离和原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的DEHP(10、50、100 nmol/L)染毒24 h。荧光定量PCR法检测间质细胞Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,Western印迹检测间质细胞Caspase-3和Caspase-9蛋白表达,流式细胞术检测间质细胞凋亡率。结果:与对照组相比,DEHP各组睾丸间质细胞Caspase-3 mRNA(1.69±0.38 vs3.82±0.39、6.91±0.40、15.47±0.40)和蛋白(0.18±0.09 vs 0.32±0.10、0.61±0.08、0.89±0.09)表达显著增加(P均<0.05),Caspase-9 mRNA(2.24±0.41 vs 5.16±0.43、9.61±0.45、19.22±0.43)和蛋白(0.26±0.07 vs0.40±0.08、0.68±0.09、0.96±0.08)表达也显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率(4.36±1.11 vs 7.52±1.09、12.72±1.10、24.59±1.11)也显著增加(P均<0.05),呈浓度依赖关系。结论:DEHP可通过激活细胞凋亡Caspase通路而诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡,进而影响间质细胞功能。     

人类精子超微结构形态特征研究

目的 :研究男性精子超微结构形态特征。　方法 :4例正常生育男性 ,7例不育男性 ,年龄 2 8～ 37岁 ,精子标本常规电镜制片 ,透射电镜观察。　结果 :1.正常精子 ,顶体结构完整 ,核、尾部形态和细胞器结构正常。 2 .不育男性异常精子有以下几种类型 :(1)顶体异常精子 :包括顶体脱落精子 ,顶体内形成包涵体精子 ,顶体内寄生支原体精子。 (2 )头部异常精子 :包括尖头精子、无头精子、双头精子、头部含空泡精子。 (3)颈部膨大精子。 (4 )尾部异常精子 :①尾部形态异常精子 ,包括无尾精子、尾部分叉精子、双尾精子 ;②尾部结构异常精子 ,包括线粒体缺失精子、线粒体畸形精子、线粒体重叠精子、微管非 9+ 2结构精子。 (5 )凋亡精子。　结论 :不育男性精子存在顶体、头部、尾部线粒体、微管多种形态和结构异常 ,并可形成多形态的凋亡     

不同剂量的十一酸睾酮对大鼠生精功能影响

目的 :进一步了解睾丸内睾酮和生精功能的关系。　方法 :大鼠给予不同剂量的十一酸睾酮 (TU)后测定大鼠血清、睾丸间质液和睾网液内睾酮水平 ,以及附睾精子的数量、活力 ,以观察二者之间关系。结果 :大鼠给予不同剂量的十一酸睾酮后 ,睾丸内睾酮水平发生不同的变化 ,随之睾丸内生精功能也发生变化。低剂量十一酸睾酮(8mg/kg)不影响睾丸内睾酮水平 ,也不影响睾丸内的生精过程。附睾精子的数量、活动力与对照组无显著性差异。但给予超生理剂量 (30mg/kg) ,则抑制睾丸内睾酮的产生 ,睾丸内睾酮水平显著下降 ,使精子的发生明显受到抑制。而给予超大剂量的外源性睾酮 (6 2 5mg/kg) ,尽管抑制了睾丸内睾酮的产生 ,但由于补充了大量外源性睾酮 ,使睾丸内睾酮维持在正常水平。精子的发生能维持在正常水平。附睾精子的数量与活动力与对照组无显著性差异。　结论 :进一步论证了睾丸内高浓度的睾酮对维持生精过程起到决定性的作用     

药物注射联合α受体拮抗剂治疗慢性前列腺炎

目的 :探讨药物治疗慢性前列腺炎的有效方法。　方法 :采用经会阴前列腺局部药物注射联合应用α受体拮抗剂 ,治疗 73例慢性前列腺炎病人。治疗期间连续做尿常规和前列腺分泌物检查。　结果 :48例 (6 5 8% )病人在注射治疗 1～ 2次后治愈 ;17例 (2 3 3% )病人治疗几次后症状得到缓解。　结论 :使用抗菌素前列腺局部注射联合应用α受体拮抗剂治疗慢性前列腺炎是一种有效方法。为获得满意的评价 ,还需要进行更长时间的随访研究     

人精浆中铁蛋白与β_2-微球蛋白测定及临床意义

目的 :探讨精浆中铁蛋白 (Fer)和 β2 微球蛋白 (β2 MG)含量与不育症的关系。　方法 :用放射免疫分析方法对 2 2例正常生育者和 12 5例不育者精浆中Fer和 β2 MG进行了检测。　结果 :不育男性精浆中Fer含量明显高于正常生育组 ,β2 MG含量明显低于生育组 ,不育与生育者之间存在高度显著性差异 (P <0 0 1) ,并且精浆中Fer与 β2 MG含量与精子密度之间存在密切的相关关系。　结论 :测定精浆中Fer与 β2 MG含量可以帮助判断男性不育者的状态 ,指导临床对其进行有效的治疗     

前列腺素E_1乳膏治疗勃起功能障碍

目的 :探讨前列腺素E1(PGE1)乳膏尿道口给药治疗勃起功能障碍的疗效。　方法 :采用随机、双盲 /开放、多中心的方法观察其安全性、有效性。在双盲组中 6 4例病人 ,每位随机给予PGE1乳膏和安慰剂乳膏各 1支 ,尿道口给药。在开放试验组中 ,79例病人各 1支PGE1乳膏尿道口给药。　结果 :双盲试验PGE1乳膏组有效 5 6例(87.5 % ) ,安慰剂乳膏组有效 3例 (4 .7% ) ,两者有显著性差异 (P <0 .0 1) ;开放试验组有效 5 1例 (6 4.6 % )。结论 :PGE1乳膏尿道口给药治疗勃起功能障碍是安全、有效的。     

前列腺素E_1尿道给药的应用剂量研究

目的 :探索经尿道给予前列腺素E1治疗勃起功能障碍的可行性、安全性及剂量与效果的关系。　方法 :采用单盲、安慰剂及自身逐级增量给药 (15 0～ 12 0 0 μg)对照观察 2 4例勃起障碍病人的剂量与效果 (阴茎勃起角度、周径、长度变化及持续时间 )的关系。　结果 :发现 6 0 0 μg以内剂量与反应呈直线正相关 ,随剂量增大而阴茎勃起质量增加 ,约 80 %以上病人可达最佳效果 ;6 0 0 μg以上仅有 2 0 %以下的病人有进一步反应 ,且副作用增多。 结论 :PGE1尿道给药疗效确实、安全可靠 ,单独使用剂量应控制在 6 0 0 μg以下。     

前列安栓在大鼠体内的药代动力学研究

目的 :研究前列安栓在大鼠体内的吸收及分布 ,探讨中药复方药代动力学研究的方法 ,并为该药在临床上的合理使用提供依据。　方法 :雄性大鼠直肠给药 ,剂量为 5g生药 (2 0 0 μCi) /kg,于规定时间分批取血、前列腺、直肠及相关脏器测定放射性。　结果 :药后 5min即可从血液中测到放射性 ,血液药 时曲线符合开放型二室模型 ;药后 5min从靶器官 (前列腺 )中也测到放射性 ,药物放射性在前列腺中的富集浓度高于其它器官 (直肠、肝、肾除外 ) ,至 2 4h仍维持一定水平 ;除直肠外 ,药物放射性在肝、肾中的水平最高。　结论 :该药自直肠吸收迅速 ,并迅速到达靶器官 (前列腺 ) ,易于前列腺中富集 ,这对前列腺炎及前列腺增生的治疗有特殊意义 ;肝、肾可能是该药代谢和排泄的主要场所     

精液中丙型肝炎病毒的研究

目的 :检测精液中是否存在丙型肝炎病毒 (HepatitisCviruse,HCV) ,探讨HCV性传播途径的可能性。　方法 :用双抗体夹心ELISA法检测 147例精浆HCV抗原 ;HCV抗原阳性者检测其夫妻双方血清中抗HCV IgM和抗HCV IgG ;同时采用 90 %和 45 % 2层Percoll梯度离心 ,分离HCV抗原阳性病人的精子 ,用RT PCR分别检测其精浆(组分 1)、90 %Percoll层精子 (组分 2 )、45 %Percoll层精子 (组分 3)及最上层圆形细胞 (组分 4)中的HCV RNA。　结果 :147例精浆中HCV抗原阳性的 4例 (2 7% ) ;4例HCV抗原阳性病人夫妻双方血清抗HCV抗体均为阴性 ;4例HCV抗原阳性病人有 2例精浆中检测出HCV RNA ,而Percoll分离后 3个组分中HCV RNA均为阴性。　结论 :①HCV感染存在性传播途径 ;②人工授精中供精者HCV的检测必不可少 ;③采用Percoll梯度离心分离精子 ,可大大降低感染HCV的风险。     

Percoll梯度离心前后精子功能指标分析

目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。　方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。　结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。　结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。     

已婚男性计划生育知识状况调查

目的 :了解已婚男性对计划生育及生殖健康的认识和需求。　方法 :以统一调查表 ,由男女调查员用询问法分别对丈夫和妻子进行调查。调查内容包括个人情况、避孕和生殖保健知识、避孕经验、参与计划生育项目的态度等。　结果 :5 0 0对夫妇调查结果表明 :丈夫的文化程度高于妻子 ,但男女双方均缺乏男性避孕节育知识 ;多数妇女没把男性作为避孕节育的参与者 ,愿意自己使用避孕方法而不愿男性使用 ;对目前使用的避孕方法的知识不够了解 ;对目前使用的避孕方法基本满意 ,但满意程度主要受配偶的影响。　结论 :在促进生殖健康的发展、推动男性参与生殖健康的过程中 ,应从政策、社会、家庭等多方面 ,鼓励和推动男性参与计划生育。