慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血CD8~+ T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3水平升高

目的观察慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染处于不同自然史患者外周血T淋巴细胞表面淋巴细胞活化基因3(LAG-3)表达的变化,探讨抑制性受体LAG-3在T细胞的表达变化与处于不同自然史慢性HBV感染者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎病毒(HBV)e抗原(HBe Ag)和HBV DNA水平的关系。方法选取处于慢性HBV感染自然史为免疫耐受期(IT)患者24例、免疫清除期(IC)32例和非活动或低复制期(LR)患者31例,健康体检者30例为正常对照(HC)。应用流式细胞术检测外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞表达LAG-3的比例;免疫分析法、生化分析法和PCR分别检测患者肝脏功能、HBV血清学标志物和HBV DNA水平。采用Mann-Whitney U检验分析各组间T细胞LAG-3表达率的差异;Spearman等级相关性分析各期慢性HBV感染患者外周血T细胞LAG-3表达阳性率与血清ALT、HBV DNA和HBe Ag水平的相关性。结果慢性HBV感染者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例较HC组显著增高,且处于IT期的患者外周血LAG-3+CD8+T细胞的比例明显高于IC期或LR期患者及HC组。处于IC期患者外周血LAG-3+CD8+T细胞和LAG-3+CD4+T细胞比例与患者血清中ALT水平呈显著负相关;IT组患者外周血LAG-3+CD8+T细胞和LAG-3+CD4+T细胞比例与血清中HBe Ag呈正相关。然而,不同自然史慢性HBV感染患者外周血LAG-3+CD4+T细胞比例和LAG-3+CD8+T细胞比例与血清HBV DNA水平无相关性。结论 LAG-3在慢性HBV感染患者外周血CD8+T细胞高表达,尤其是IT期患者CD8+T细胞高表达,可能是造成CD8+T细胞功能低下、HBV在肝脏长期复制的重要因素之一。     

淋巴细胞的活化和抗核抗体的生成

抗核抗体 (ANA )是系统性风湿性疾病的标志性抗体。然而 ,有关ANA产生的启动原目前尚不完全清楚。我们自 90年代初开始了ANA启动原的研究 ,获得了一系列研究结果 ,从而提出以下ANA生成的启动原的新观点 :(1 )自身核抗原的改变是驱动ANA生成的启动原 ;(2 )活化淋巴细胞的核抗原发生量与性质的改变 ,是引起ANA生成的最主要原因 ;(3 )系统性红斑狼疮 (SLE )患者外周血B和T淋巴细胞已被活化 ;(4)在一定条件下活化淋巴细胞才能诱导ANA生成 ;(5 )ANA生成是有规律的 ,先出现少数ANA ,后陆续出现众多ANA ,即表位扩展 ;(6 )SLE反应 (自身免疫性 )在一定条件下可发展成SLE样病 (自身免疫病 )。此观点对临床免疫学和基础免疫学的研究将有重要意义     

抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应

目的　通过体外实验探讨抗CD71人 鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响 ,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较。方法　以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞 (PBMC)为靶细胞 ,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率 ;在新鲜补体存在下 ,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(CDC)。以EBV转化的B细胞为刺激细胞 ,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率 ;以同种异体的PBMC为刺激细胞 ,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养 (MLC)中的增殖抑制率。结果　嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应 ,且二者抑制率差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,其抑制作用随抗体浓度增加而增强 ,PBMC和丝裂原共同孵育 12h后加入抗体的增殖抑制效应最明显 ;在新鲜补体存在下 ,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有CDC作用 ,而鼠源性单抗CDC作用较弱 ;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用 ,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组 (P <0 .0 5 )。结论　抗CD71人 鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应 ,其作用明显强于抗CD71鼠源性单克隆抗体。     

血清幽门螺杆菌抗体定量检测的临床价值

目的:分析体检人群幽门螺杆菌(HP)感染情况,并依据评价血清HP抗体定量检测的临床价值。方法:选取2019-10—2019-11于湖北省人民医院体检的405例体检者为研究对象,并根据尿素~(14)C呼气试验结果分为阳性组(n=223)和阴性组(n=182)。采用聚胶免疫比浊法法检测血清中HP抗体含量,以尿素~(14)C呼气试验结果为标准,评价血清HP抗体定量检测的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果:体检人群中尿素~(14)C呼气试验的阳性率为55.6%,与阴性组相比,阳性组中血清HP抗体含量显著升高(P<0.01)。在尿素~(14)C呼气试验阳性的223例受试者中,其血清HP抗体定量检测阳性的例数为193,该检测敏感度为86.55%;在尿素~(14)C呼气试验阴性的182例受试者中,血清HP抗体定量检测阴性的例数为138,该检测的特异度为75.82%。血清HP抗体定量检测阳性预测值为81.43%,阴性预测值为82.14%。结论:血清抗体定量检测与尿素~(14)C呼气试验结果一致性较好,或可补充尿素~(14)C呼气试验的不足,更好地辅助临床诊断。     

雌二醇对小鼠正常淋巴细胞和致敏淋巴细胞活化的调节

为探讨雌二醇(E2)对正常和致敏淋巴细胞活化的调节作用,并分析了E2对ConA活化的小鼠正常和致敏淋巴细胞增值、抗体产生及TGF-β生成的影响。结果显示生理水平尤其是相当于小鼠动情间期水平的E2对致敏脾淋巴细胞增殖具有明显促进作用;对初始脾淋巴细胞增殖没有影响。较高水平E2诱导活化的脾细胞生成TGF-β,促进免疫鼠脾细胞生成特异性抗体;较低水平E2抑制特异性抗体生成,且抑制程度与脾细胞活化状态相关。     

9.1C3单克隆抗体可溶性单链抗体基因的表达及其初步鉴定

用噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＢＡ５Ｅ构建含９．１Ｃ３单链抗体基因片段的重组表达载体，经ＩＰＴＧ诱导后可表达一分子量约为３０ｋＤａ的可溶性融合蛋白。体外生物学实验表明，诱导表达的９．１Ｃ３单链抗体，可阻断ＮＫ细胞对靶细胞Ｋ５６２的杀伤。此结果为临床应用９．１Ｃ３单链抗体治疗自身免疫性疾病和预防移植排异反应提供了基础。     

小鼠CXCR3胞外N末端的可溶性表达及其抗体制备

目的 克隆小鼠CXCR3基因,将其胞外N末端在大肠杆菌中进行可溶性表达并用于抗体制备。方法采用RT-PCR技术,从Balb／c小鼠脾细胞中扩增出编码CXCR3的全长序列,将胞外N末端亚克隆人DsbA融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达后进行分离纯化,然后免疫家兔制备多克隆抗体,并用趋化小室法检测抗体对IP-10趋化小鼠T细胞作用的影响。结果获得编码小鼠CXCR3的cDNA序列,其胞外N末端与DsbA融合后能在大肠杆菌中可溶性表达,表达量达40％,其抗体可显著抑制IP-10对小鼠T细胞的趋化作用。结论获得小鼠趋化因子受体CXCR3胞外N末端融合蛋白及其抗体,抗体具有在体外抑制T细胞趋化的作用。     

抗登革3型病毒单链抗体的可溶性表达和鉴定

目的为解决鼠源性单克隆抗体用於临床会引起变态反应等负作用问题，试图从基因水平上对登革３型病毒鼠源性单抗进行人源化改造以减少其鼠源性。方法选用对登革病毒４个血清型及部分黄病毒具有中和活性的抗登革３型病毒单克隆抗体３Ｄ３的轻重链可变区基因，通过反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩，扩增后的轻重链可变区ＰＣＲ产物通过连接引物连接成单链抗体基因，然后与噬菌体载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ连接，转化大肠杆菌ＨＢ２１５１，使单链抗体以可溶性的形式表达在上清液中。结果通过免疫荧光和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，可溶性表达的单链抗体能与登革３型病毒抗原发生特异性结合，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中在２８ｋＤ处有一条带和单链抗体的分子量大小一致。结论表达产物与原单抗３Ｄ３一样，具有与登革３型病毒抗原结合的特性。     

类风湿关节炎患者检测血清14-3-3浊蛋白和自身抗体的临床意义

目的:探讨血清14-3-3浊蛋白与自身抗体检测对类风湿关节炎(RA)诊断的临床价值。方法:收集134 例RA患者、90 例非RA 关节病变患者及同期40 例健康体检者血清样本,采用ELISA 和速率比浊法分别检测14-3-3浊蛋白、抗CCP抗体(anti-CCP)、抗RA33 抗体(anti-RA33)、抗Sa 抗体(anti-Sa)和类风湿因子(RF)含量,并分析其对RA 的诊断价值。结果:血清14-3-3浊蛋白、anti-CCP、anti-RA33、anti-Sa、RF 水平在RA 组均显著高于非RA 组和对照组,组间差异都具有统计学意义;于绘制各指标ROC 曲线,14-3-3浊蛋白、anti-CCP、anti-RA33、anti-Sa、RF 曲线下面积(AUC)分别0.831、0.852、0.615、0.706和0.739,均P<0.01;其中14-3-3浊蛋白和anti-CCP 达到中等以上诊断价值,对应cutoff 值分别为2.59 ng/ ml 和24.0 U/ ml; 所有指标中anti-Sa 特异度最强为97.69%,RF 灵敏度最高为83.58%;14-3-3浊诊断RA 的特异度为91.54% 仅稍次于anti-Sa和anti-RA33 抗体,但其敏感度较anti-Sa 和anti-RA33 均高。结论:14-3-3浊蛋白、anti-CCP、anti-RA33、anti-Sa 和RF 在RA 中均显著升高,对RA 的诊断都有一定的价值。同时,14-3-3浊诊断RA 的敏感度和特异度相比自身抗体更有一定优势,可以作为辅助诊断RA 的指标。     

血清胃功能3项检测对于幽门螺杆菌感染相关胃癌早期诊断价值研究

目的 探讨血清胃功能3项指标检测对于幽门螺杆菌(Hp)感染相关胃癌早期诊断价值。方法 选择2021年2月至2023年4月消化内科病房接收的病理确诊胃癌患者80例为胃癌组,同期接收的80例慢性胃炎患者为胃炎组。胃癌组同时根据分期分为早期胃癌组与进展期胃癌组。在胃癌组和胃炎组中对PG I、PG II和PG I/PGII 3项指标进行比较,同时对早期胃癌与进展期胃癌检测结果进行比对。经¹⁴C尿素呼气试验判定胃癌组Hp感染阳性情况,对Hp阳性与阴性患者胃功能3项测定结果进行比较。结果 胃癌组PG I、PG I/PG II低于胃炎组PG II高于胃炎组(P<0.05);早期胃癌PG I、PG I/PG II高于进展期胃癌(P<0.05),早期与进展期胃癌的PG II差异无统计意义(P>0.05);¹⁴C尿素呼气试验证实Hp阳性47例(58.75%),胃癌组Hp阳性患者PG I、PG I/PG II低于Hp阴性患者,PG II高于Hp阴性患者(P<0.05)。结论 血清PG I、PG II、PG I/PG II联合检测,能够早期识...     

血清PDCD4、ZEB1、G-17联合检测对早期胃癌的诊断价值

目的 探究血清程序性细胞死亡因子4(PDCD4)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)、胃泌素-17(G-17)联合检测对早期胃癌（GC）的诊断价值。方法 将本院收治的136例GC患者、82例萎缩性胃炎患者分别设为GC组、萎缩性胃炎组,另选取同期136例体检健康者设为对照组。比较各组血清PDCD4 mRNA、ZEB1 mRNA及G-17、糖类抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原（CEA）水平。根据GC患者病情进展程度将其分为早期GC组（80例）和进展期GC组（56例）,比较早期GC组、进展期GC组患者血清PDCD4 mRNA、ZEB1 mRNA及G-17、CA19-9、CEA水平;分析血清PDCD4 mRNA、ZEB1 mRNA、G-17、CA19-9、CEA单独或联合检测对早期GC的诊断价值。结果 与对照组相比,萎缩性胃炎组、GC组患者血清PDCD4 mRNA表达水平降低（P<0.05）,ZEB1 mRNA、G-17水平升高（P<0.05）;与萎缩性胃炎组相比,GC组患者血清PDCD4 mRNA表达水平降低（P<0.05）,ZEB1 mRNA、G-17、CA19-9、C...     

血清p53抗体检测对肺癌诊断价值的探讨

p53基因突变是人类多种恶性肿瘤中最常发生的基因改变。近年研究发现,突变型p53蛋白作为免疫系统的靶抗原在细胞内积聚,使得机体免疫耐受丧失,而产生p53抗体。已有资料显示,血清p53抗体与p53基因突变在许多方面具有一致性,它的表达与肿瘤的发生、发展、疗效、肿瘤的复发及预后等密切相关。肺癌的死亡率居恶性肿瘤之首,肺癌组织p53基因突变率较高。本文通过对肺癌患者血清p53抗体的定量检测,探讨p53抗体对肺癌临床的应用价值。     

血清三叶因子3水平对结直肠癌诊断的价值

目的 探究血清三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)水平在结直肠癌诊断中的价值.方法 收集180例受试者(89例结直肠癌患者,44例结直肠息肉患者和47例健康对照者)血清,采用酶联免疫吸附法测定血清TFF3水平.将结直肠癌组血清TFF3水平与对照组作对比,绘制ROC曲线,评估血清TFF3作为肿瘤标志物对结直肠癌的诊断价值.结果 结直肠癌患者血清TFF3水平[12.35(9.72～13.92)ng/mL]显著高于结直肠息肉组(3.18±0.18ng/mL,P<0.05)和健康对照组(3.14±0.11ng/mL,P<0.05);与健康对照组相比,结直肠息肉组患者血清TFF3水平的升高差异无统计学意义(P>0.05).血清TFF3诊断结直肠癌的ROC曲线下面积为0.889,在cut-off值为4.6149ng/mL时,血清TFF3对结直肠癌的诊断灵敏度和特异性分别为73.7％和91.8％.淋巴结转移和分化程度低的结直肠癌患者,其血清TFF3水平显著升高(P<0.05).结论 本研究显示血清TFF3是一个能够有效诊断结直肠癌的血清标志物,具有一定的临床诊断价值.     

幽门螺杆菌基因hp0231和hp0410的克隆表达及生物信息学分析

目的获取幽门螺杆菌hp0231和hp0410基因的序列,预测其编码蛋白HP0231和HP0410作为候选疫苗的可行性,在大肠杆菌表达系统中表达hp0231和hp0410。方法提取幽门螺杆菌标准株NCTC11639的基因组DNA,按照GenBank中幽门螺杆菌标准株22695的序列设计引物PCR,扩增hp0231和hp0410基因,克隆入pMD18-T载体中测序,进行生物信息学分析。将hp0231和hp0410克隆入表达载体pGEX-4T-1中,诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定。结果生物信息学分析表明HP0231和HP0410均为外膜蛋白,具良好的抗原性,并且与其他生物的同源性较低,其作为Hp疫苗不易产生交叉反应以及自身免疫性反应,构建的重组菌可高水平表达可溶性重组蛋白。结论HP0231和HP0410是有良好应用前景的Hp候选疫苗。     

诱骗受体3γ-干扰素和抗环瓜氨酸肽抗体在风湿性关节炎患者血清中的表达

目的 分析在风湿性关节炎患者中抗环瓜氨酸肽抗体、血清诱骗受体3γ-干扰素检验有效性。方法 选择2018年1月~12月我院收治的风湿性关节炎患者50例作为观察组,另选同期体检健康人群40例作为对照组,检测并比较两组血清抗环瓜氨酸肽抗体、血清诱骗受体3γ-干扰素水平。结果 观察组抗环瓜氨酸肽抗体、风湿因子检测结果高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组单一抗环瓜氨酸肽抗体检测阳性率、单一风湿因子检测阳性率均高于对照组,观察组抗环瓜氨酸肽抗体联合风湿因子检测阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;观察组抗环瓜氨酸肽抗体、血清诱骗受体3γ-干扰素含量比对照组高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 在风湿性关节炎患者中抗环瓜氨酸肽抗体、血清诱骗受体3γ-干扰素检验,能够明确患者临床指标情况,对于临床治疗有参考价值,值得应用。     

可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用.方法:选择有效剂量为500 μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响.结果:Jagged 1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3 细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化.结论:这些结果提示500 μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于GO/G1期,阻止其进入S期.     

幽门螺杆菌对大鼠胃上皮细胞环氧合酶-2表达的影响

目的： 探讨幽门螺杆菌（Hp）水提取物对大鼠胃上皮细胞环氧合酶-2（COX-2）表达及前列腺素E₂（PGE₂）合成的影响。方法：大鼠胃上皮细胞株RGM1体外常规培养，Hp组细胞培养液内Hp水提取物终浓度为2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，大肠埃希菌组大肠埃希菌水提取物终浓度10 mg/L。培养 24 h 后收集细胞和上清液分别用于Western blotting分析COX-1、COX-2表达和酶免疫方法测定前列腺素E₂（PGE₂）含量。结果：Hp水提取物剂量依赖地增加RGM1细胞COX-2表达但不影响COX-1表达，而大肠埃希菌水提取物对COX-1和COX-2表达均无明显影响。RGM1细胞培养上清液中PGE₂水平在Hp组（2.5、5、10 mg/L）和大肠埃希菌组分别为（230.70±48.55）ng/g protein、（291.82±33.49）ng/g protein、（342.94±28.70）ng/g protein和（130.54±42.81）ng/g protein。结论：Hp体外诱导大鼠胃上皮细胞COX-2表达而增加PGE₂合成，Hp感染的致癌机制可能与其诱导的COX-2表达有关。     

抗GPI抗体和抗CCP抗体对RA诊断价值的比较分析

目的:评价抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定RA患者42例、其他风湿病患者32例以及健康对照者30例血清中的抗CCP抗体和抗GPI抗体,并应用R0C曲线比较两者对RA的诊断价值.结果:RA组血清抗CCP抗体水...     

血清CYFRA21-1和EBV相关抗体联合检测对鼻咽癌的诊断价值

目的:探讨血清细胞角蛋白19片段(Cytokeratin-19-fragment,CYFRA21-1)和和EB病毒壳抗原免疫球蛋白A抗体(Epstein-barr viral capsid antigen immunoglobulin A,EB-VCA-IgA)联合检测对鼻咽癌的诊断价值。方法:选取2016年5月至2018年6月期间我院收治的27例鼻咽癌患者(研究组)和同期在我院进行健康体检的27例健康者(对照组)为研究对象。分别采用电化学发光免疫分析技术和免疫酶技术对血清中的CYFRA21-1和EB-VCA-IgA水平进行测定。结果:研究组患者血清CYFRA21-1水平和阳性率、EB-VCA-IgA滴度测量值和阳性率均高于对照组(P0.05);CYFRA21-1和EB-VCA-IgA联合检测的敏感性和特异性分别为98.3%和95.6%,高于CYFRA21-1单独检测(48.1%、76.5%)和EB-VCA-IgA单独检测(77.3%、69.6%)(P0.05)。结论:联合CYFRA21-1和EB-VCA-IgA作为辅助检查检测诊断鼻咽癌的特异性和敏感性都较高,有助于提高鼻咽癌的临床确诊率。