非重症及重症脓毒症患者外周血单核细胞炎性因子分泌及Toll样受体4表达的研究

目的 观察革兰阴性菌感染的非重症及重症脓毒症患者内毒素(LPS)刺激后外周血单核细胞炎性因子分泌及TLR4的表达.方法 以我院ICU革兰阴性菌感染所致脓毒症52例患者为研究对象,28例非重症脓毒症患者,24例重症脓毒症患者,选取30例健康对照者.所有人均晨起空腹采血,分离外周血单核细胞,将细胞加入1 μg/mL细菌LPS培养24 h后流式细胞仪检测单核细胞表面TLR4的表达,同时应用放射免疫法测定外周血单核细胞培养液中TNF-α、IL-10的浓度.结果 ①重症脓毒症患者单核细胞培养上清液中TNF-α的浓度低于非重症脓毒症患者及健康对照组(P<0.05),但IL-10浓度高于其他两组(P<0.05),IL-10/TNF-α比值明显高于非重症脓毒症患者及健康对照组(P<0.01).②三组患者外周血单核细胞LPS刺激后,细胞表面TLR4表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 重症脓毒症患者外周血单核细胞体外给予LPS刺激后,促炎因子表达较非重症脓毒症组下降,且伴有抗炎因子表达的上调,IL-10/TNF-α比值明显升高,显示重症脓毒症患者存在更加严重的免疫抑制现象,但这种现象不能单纯用细胞膜表面TLR4的表达解释,其可能存在更复杂的机制.     

脓毒症小鼠不同组织炎症因子及T细胞亚群动态变化

目的 探讨通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立的脓毒症小鼠在疾病发展过程中,不同脏器炎症浸润程度以及免疫状态的变化特点。方法 对40只小鼠进行CLP建立脓毒症模型(CLP组),在术后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h检测小鼠血液、肺组织及回肠组织中IL-6、IL-10、IL-2、IL-4的含量变化,并用流式细胞技术检测小鼠脾脏中Treg及Th17、回肠黏膜固有层中CD4⁺T及CD8⁺T淋巴细胞比例变化。另选择40只小鼠进行假手术,作为对照(假手术组)。结果 CLP组小鼠肺组织及回肠组织中IL-6含量于术后6 h达峰值,血浆中IL-6含量于术后12 h达峰值,均高于同时间点假手术组小鼠(P<0.01)。CLP组小鼠回肠组织中IL-10含量于术后6 h达峰值,高于假手术组(P<0.01);IL-2含量于术后持续上升,在术后24 h达峰值,高于假手术组(P<0.01)。CLP组小鼠术后6 h及24 h的脾脏淋巴细胞中Th17、Treg比例明显高于同时间点假手术组(P<0.01);回肠黏膜固有层中CD4     

大承气汤对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4表达的影响

目的 探讨不同剂量大承气汤对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 将50只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组及大承气汤低、高剂量组,每组10只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型.大承气汤低、高剂量组分别于术前2 h、术后每日2次灌胃5 ml/kg、10 ml/kg大承气汤;其他3组同时间点灌胃10 ml/kg生理盐水.各组于术后24 h处死5只动物取肝组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TLR4 mRNA表达.另取5只大鼠于术后2、6、12、48 h取血,测定血浆白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 与假手术组比较,模型组大鼠肝组织中TLR4 mRNA表达及血浆IL-6、TNF-α含量均较假手术组升高(均P<0.01).以大承气汤干预后,肝组织中TLR4 mRNA表达及血浆IL-6、TNF-α含量均较模型组下降,且高剂量组降低程度更为显著(P<0.05或P<0.01).结论 大承气汤对脓毒症大鼠肝脏TLR4表达有抑制作用,并存在一定的量效关系.     

大车前苷作用于脂多糖诱导的小鼠脓毒症心肌损伤实验研究

目的 探讨大车前苷在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用。方法 选取8～10周龄的雄性C57/BL6小鼠40只,根据处理方式不同将小鼠随机分为4组：生理盐水+生理盐水组、生理盐水+大车前苷组、脂多糖+生理盐水组、脂多糖+大车前苷组,每组10只。脂多糖+生理盐水组与脂多糖+大车前苷组小鼠接受单次腹腔注射脂多糖(10 mg/kg),以构建小鼠脓毒症模型;生理盐水+生理盐水组与生理盐水+大车前苷组小鼠接受同等体积生理盐水腹腔注射。生理盐水+大车前苷组与脂多糖+大车前苷组小鼠给予连续5 d的大车前苷50 mg/(kg·d)灌胃干预,生理盐水+生理盐水组与脂多糖+生理盐水组进行同等体积生理盐水灌胃。实验第1天,先给予小鼠连续5 d大车前苷50 mg/(kg·d)或生理盐水灌胃,第5天给予小鼠单次腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)或者等体积生理盐水,饲养12 h后检测心功能并取材。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶2 (SOD-2)、谷胱甘肽过氧化物酶-1 (GPX-1)和过氧化氢酶(CAT)和相关炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF...     

盐酸氯胺酮注射液对脓毒症大鼠炎症介质及生存率的影响

目的 探讨氯胺酮在盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症大鼠中对炎性介质及生存率的影响.方法 将132只雄性SD大鼠随机分为3组:①正常对照组,②对照组,③氯胺酮组.每组各分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ等4个亚组.对照组和氯胺酮组建立CLP脓毒症模型.术毕30 min开始给药,氯胺酮组经肌肉注射氨胺酮50 mg/kg,q12h;正常对照组与对照组则给予等容积的生理盐水,直至大鼠死亡或5 d观察期结束.每组的Ⅰ亚组大鼠观察5 d的生存情况;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亚组的大鼠分别手术前0 h,术后4 h以及对照组的Ⅳ亚组各只大鼠的临终时刻为观察时间,分别处死每组中一个亚组的大鼠测定血中肿瘤坏死因子(TNF-α)白介素-6(IL-6)的水平.结果 与对照组相比,氯胺酮组的5 d生存率明显为高(P＜0.01),且氯胺酮组TNF-α和IL-6的血清水平在CLP术后4h及临终时点均较对照组明显降低(P＜0.01).结论 氯胺酮能够抑制CLP脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-6水平,从而提高大鼠的生存率.     

霉酚酸酯对小鼠肾脏缺血再灌注损伤早期单核细胞TLR4信号传导途径的影响

目的探讨在小鼠肾脏缺血再灌注免疫损伤早期过程中霉酚酸酯对单核细胞TLR4信号传导途径的影响。方法采用雄性Bal B/C小鼠,随机分为2组。肾脏缺血再灌注损伤(IRI)组:采用双肾蒂阻断,缺血时间为45 min,分别于6 h、12 h、24 h、48 h再灌注。每个时间点6只小鼠;霉酚酸酯(MMF)药物组:缺血前2 d开始灌胃给MMF 40 mg?kg-1?d-1,其余同肾脏缺血再灌注损伤组。两组均设假手术对照各6只;观察不同时间点各组动物肾功能、肾组织学变化;流式细胞学检测单核细胞表面TLR4的表达及CBA法检测血浆细胞因子(IL-6、MCP-1、TNF-α)浓度;ELISA法检测血浆中TLR4配体HMGB-1的浓度。结果 MMF组较IRI组血肌酐水平明显降低(再灌注6 h、12 h、24 h、48 h,均P<0.05),病理组织学观察提示MMF组肾脏损伤程度较轻;而血浆中TLR4配体HMGB-1浓度无显著性差异(P>0.05),单核细胞表面TLR4表达及血浆细胞因子(IL-6、MCP-1、TNF-α)浓度均明显降低(P<0.05)。结论霉酚酸酯可减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾功能和肾组织的损伤,可抑制小鼠肾脏缺血再灌注损伤早期过程中单核细胞TLR4信号转导途径的活化。提示单核细胞TLR4信号转导途径在小鼠肾脏缺血再灌注损伤早期过程中起着重要的调控作用,而霉酚酸酯可以通过抑制该途径对肾脏起到保护作用。     

异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4~+CD25~+T细胞及IL-6、IL-10的影响

目的观察异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4+CD25+T细胞数量以及炎症因子IL-6与IL-10浓度的影响,探讨异丙酚与脓毒症时调节性T细胞(Treg)及炎症反应的关系。方法 SPF级SD雄性大鼠48只,10～12周龄,体重230～300g,以盲肠结扎穿孔术法(CLP)制作脓毒症模型。采用随机数字表法,将其随机分为三组(n=16):异丙酚干预组(CLP+异丙酚,Pro组,n=16)、赋型剂对照组(CLP+10%脂肪乳剂,FE组,n=16)和脓毒症对照组(CLP+生理盐水,CLP组,n=16)。Pro组和FE组术毕分别经股静脉泵注射异丙酚50μg·kg-1·min-1和与异丙酚等容量的10%脂肪乳注射液,注射时间持续1h,CLP组同法注射等时等容量生理盐水。分别于术后6、12、24h经尾静脉采血,流式细胞仪检测血中CD4+CD25+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定血清IL-6、IL-10的含量;计算各组大鼠24h生存率。结果 Pro组24h生存率绝对值高于CLP组和FE组,但差异无统计学意义(χ2=2.133,P=0.344)。三组大鼠术后外周血CD4+CD25+T细胞计数均随时间延长而上升,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05);三组间比较,术后6h组间无统计学差异(P>0.05),12、24hPro组和FE组均明显低于CLP组(P<0.05),同时Pro组又显著低于FE组(P<0.05);三组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比随时间变化不一致,Pro组逐渐下降而CLP组和FE组均逐渐升高,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05),组间比较与细胞计数组间比较结果类似。三组大鼠术后血清IL-6和IL-10浓度均显著升高,组内比较差异有统计学意义(P<0.05);不同的是CLP组和FE组术后6hIL-6即达到高峰,随后渐降,Pro组则高峰推迟到12h;而术后IL-10均呈持续升高改变;组间比较,Pro组术后6、12、24h血清IL-6和IL-10水平均低于CLP组和FE组(P<0.05);但FE组仅术后6h低于CLP组(P<0.05),12、24h时两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚不能显著降低脓毒症大鼠模型24h病死率,但具有抑制急性脓毒症模型外周血中CD4+CD25+T细胞增加、降低血清炎症因子浓度的效应,从而对机体炎症反应失衡有调节作用。     

脓毒症大鼠血小板受体CD62P的表达及替格瑞洛的心脏保护作用

目的探讨脓毒症大鼠血小板受体CD62P表达情况以及替格瑞洛的抗炎作用及其对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用。方法采用SD雄性大鼠32只, 以随机数字表法将大鼠分为4组:假手术组(sham)、脓毒症组(cecal ligation and puncture, CLP)、低剂量给药组(low dose, LD):给药剂量为10 mg/kg、高剂量给药组(high dose, HD):给药剂量为50 mg/kg, 每组8只。假手术组大鼠仅进行开关腹并剥离盲肠处理, 脓毒症组、低剂量给药组和高剂量给药组的大鼠采用CLP法构建脓毒症大鼠模型, 给药组分别按照10 mg/kg及50 mg/kg用量进行替格瑞洛灌胃给药, 假手术组及脓毒症组则按照1 mL/kg进行生理盐水灌胃处理。分别于手术前12 h及手术后12 h两次对大鼠进行灌胃给药。各组大鼠造模后24 h经腹主动脉取血并采集病理标本。应用流式细胞术检测各组大鼠血小板表面受体CD62P的表达情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-6、TNF-α水平;检测心肌损伤标志物:CKMB、LDH水平;并检测转氨酶、肌酐、白细胞水平;对心肌组织进行...     

β受体阻滞剂阻断TLR4炎症通路减轻脓毒症心肌损伤的研究

目的探讨β受体阻滞剂(艾司洛尔)对脓毒症大鼠的心肌保护作用及对Toll样受体4(Toll-like receptor4, TLR4)炎症通路的影响。方法选取雄性Wistar大鼠60只, 采用随机数字法随机分为假手术组(Shame组)、脓毒症组(CLP组)、艾司洛尔组(CLP+ES组)、TLR4抑制剂组(CLP+TAK-242组)每组15只。Shame组实施盲肠探查术, CLP组、CLP+ES组与CLP+TAK-242组通过盲肠结扎穿孔法(CLP法)建立脓毒症模型;CLP+ES组于CLP术后12 h给予腹腔注射艾司洛尔稀释液20 mg/kg;CLP+TAK-242组于上述相同时间点给予腹腔注射TAK-242 3 mg/kg;Shame组与CLP组给予等量生理盐水。各组均于术后24 h处死大鼠, 采集并处理标本。取心肌组织行苏木精-伊红染色观察大鼠心肌病理学变化;采用免疫组织化学法观察心肌组织中TLR4、髓样分化蛋白88(myeloid differentiation factor88, MyD88)及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达;采用马松染色(...     

脓毒症小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+T细胞变化及其意义

目的观察脓毒症小鼠血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的变化特点,探讨它与脓毒症病程发展间的关系。方法选择清洁级KM雄性小鼠,用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症小鼠模型(CLP组),分别于2h、6h、12h、24h、48h、72h采血处死12只,并留取远端回肠HE染色光镜检查;流式细胞仪检测血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达水平,全自动生化分析仪检测AST、ALT、BUN、Cr等肝肾功能生化指标。以假手术组(Control组)作为对照,标本采集时间点、检测方法同CLP组。结果 CLP组血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞百分比持续增高,12h后即高于假手术组,随病程进展增高更为显著(P<0.01)。CLP2h后TNF-α水平升高即超过假手术组(P<0.01),12h到达顶峰,随后开始下降,但至CLP后72h仍高于假手术组;IL-6水平于CLP后6h出现快速升高,12h达到峰值,与假手术组相比增幅有统计学差异(P<0.01),随后下降,72h与假手术组比较无统计学差异(P>0.05);CLP2h后IL-10水平即已高于假手术组(P<0.01),12h出现快速上升改变,并持续攀升,至72h未见下降拐点。CLP后ALT、AST升高早于BUN、Cr,前者术后24h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),而后者术后48h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),随着时间的延长,ALT、AST、BUN、Cr均进一步升高,假手术组指标则回落到基线水平。结论 CLP小鼠模型CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例增加与脓毒症严重程度成正比,这种变化可能是机体逃避过度的炎症反应引发严重的组织器官损伤的自身调节反应,但有一定限度,调控Treg或将为脓毒症免疫调节治疗提供新的思路。     

自血疗法对寻常型痤疮患者外周血中CD14^+单核细胞TLR2的表达及血清IL-8、TNF-α浓度的影响

目的观察自血疗法对寻常型痤疮患者外周血中CD14^+单核细胞TLR2的表达及血清IL-8、TNF-α浓度的影响,初步探讨自血疗法治疗寻常型痤疮的部分抗炎机制。方法选取30例寻常型痤疮患者为治疗组,另在本院招募健康志愿者20例作为对照组。分析治疗组采用自血疗法前、后外周血CD14^+单核细胞TLR2的表达及血清IL-8、TNF-α浓度,并与对照组比较。结果治疗组患者TLR2表达与血清IL-8、TNF-α浓度呈正相关(P<0.05)。治疗组干预前的外周血中CD14^+单核细胞TLR2表达及血清IL-8、TNF-α浓度均高于对照组及干预后(P=0.000)。结论TLR2的表达及血清IL-8、TNF-α浓度与寻常型痤疮的发病相关。自血疗法可通过下调寻常型痤疮患者外周血CD14^+单核细胞TLR2的表达,减少血清IL-8、TNF-α的分泌,从而抑制炎症反应的发生。     

铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)对脓毒症致急性肺损伤的影响及可能机制。方法以盲肠结扎穿孔法(CLP)复制大鼠脓毒症模型。按随机数字法将120只健康SD大鼠分为假手术对照组(SC组)、脓毒症组(CLP组)、术前治疗组(Pre T组)和术后治疗组(Pos T组),每组各30只。于制模后12、24、36 h分别采集外周血测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)浓度并计算肺损伤病理评分。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)m RNA表达,并作肺组织TLR4 m RNA表达与病理学评分的Pearson相关性分析。结果 SC组各时间点血清细胞因子浓度无明显变化(F=0.04、0.09、1.25、1.77,P均0.05)。与CLP组和Pos T组相比,各时间点Pre T组的血清TNF-α、IL-6浓度明显较低,而IL-10、TGF-β浓度明显较高(P均0.05),而Pos T组仅在术后36 h的IL-10高于CLP组(P0.05)。四组大鼠间的肺组织TLR4 m RNA表达水平及四组间各时间点肺组织病理学评分比较,差异均有统计学意义(F=66.01、20.03、71.21、69.02,P均0.05),SC组及Pre T组明显优于CLP组和Pos T组(P均0.05)。同时,肺组织TLR4 m RNA表达与病理学评分存在明显的相关性(r=0.732,P0.05)。结论术前给予PA-MSHA可减轻脓毒症大鼠肺病理损伤,其机制可能与调节外周血单核细胞TLR4表达水平、调控细胞因子平衡、减轻炎症级联放大效应有关。     

抑制CD18减轻脓毒症小鼠肠损伤的研究

目的:研究CD18在脓毒症肠损伤中的作用及机制。方法:将36只小鼠随机分为对照组、脓毒症组、抗CD18组，腹腔注射LPS建立脓毒症小鼠模型；抗CD18组先尾静脉注射CD18抗体，30 min后腹腔注射LPS;造模24 h后检测血清中β2整合素、D-乳酸、肝素结合蛋白(HBP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；检测小肠组织中炎症因子(IL-6、IL-10)、紧密连接蛋白(ZO-1、Claudin-1)、Rho信号通路蛋白(ROCK1、mDia1)的表达水平及RhoA活性；采用苏木精-伊红染色评估小肠病理损伤，透射电镜观察小肠组织超微结构改变。结果:(1)CD18抗体提高了脓毒症小鼠24 h存活率。(2)CD18抗体减轻了脓毒症小鼠小肠损伤(小肠病理损伤减轻、上皮间紧密连接破坏减轻、紧密连接蛋白表达增多),改善了肠道通透性(D-乳酸水平下降)。(3)CD18抗体抑制了Rho信号通路(RhoA活性下降、ROCK1和mDia1表达减少)。结论:抑制CD18可以减轻脓毒症肠损伤，改善肠道通透性；CD18可能是通过Rho信号通路参与了脓毒症的肠损伤。     

胸腺五肽对脓毒症大鼠肾损伤保护作用的实验研究

目的观察胸腺五肽(TP-5)对脓毒症大鼠肾损伤的影响。方法采用脓毒症大鼠模型,选用雄性SD大鼠90只,按随机数字表法随机分为3组:对照组,脓毒症组,胸腺五肽处理组。于造模腹壁缝合后1 h、6 h、12 h、24 h和48 h分别测定各组血清中尿素氮(Bun)和肌苷(Cr)浓度;光镜下观察肾组织损伤情况;再分别测定各组血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)浓度和CD4+/CD8+的变化。结果脓毒症组和胸腺五肽处理组大鼠6 h及以后时点Bun、Cr的浓度明显高于对照组(P<0.05);胸腺五肽处理组6 h、12 h、24 h、48 h与脓毒症组比较Bun、Cr明显降低(P<0.05)。与对照组比较,从1 h时点开始脓毒症组和胸腺五肽处理组大鼠TNF-α、IL-10浓度开始升高,并且脓毒症组和胸腺五肽处理组TNF-α、IL-10浓度在各时点均明显高于对照组(P<0.05);胸腺五肽处理组与脓毒症组比较,各时点TNF-α、IL-10的浓度明显降低(P<0.05)。脓毒症组和胸腺五肽处理组大鼠CD4+/CD8+比值从6 h开始下降,24 h达最低,48 h升高,且明显低于对照组(P<0.05);胸腺五肽处理组1 h以后各时点与脓毒症组比较CD4+/CD8+比值明显升高(P<0.05)。结论胸腺五肽可抑制脓毒症大鼠肾损伤。     

Toll样受体4单克隆抗体预处理对脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨预先使用Toll样受体4单克隆抗体(TLR4mAb)对LPS诱发的小鼠脓毒症肺损伤的保护作用.方法 45只健康清洁级雄性BALB/c小鼠以随机数字法分为对照组(C 组)、脓毒症组(S组)、预处理组(P组),每组15只.P组小鼠在造模前1h预先腹腔注射TLR4mAb 5 μg/g.S组、P组均腹腔注射LPS 10 mg/kg以制备脓毒症急性肺损伤模型,C组经腹腔注射等量生理盐水.各组分别于注射后6,12,24h,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-a和IL-6浓度;取肺脏组织,分别检测TLR4 mRNA的表达、肺组织含水量、病理学改变.组内比较采用双因素方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 与C组比较,S组、P组肺组织含水量在12,24h时均显著性升高;与S组比较,P组肺组织含水量在12,24h时均显著性降低.与C组比较,S组、P组血清IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性升高;与S组比较,P组IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性降低.与C组比较,S组、P组TLR4 mRNA在各时点时均显著性升高;与S组比较,P组TLR4mRNA在各时点均显著性降低.与S组比较,P组病理改变程度均明显减弱.结论 预先使用TLR4mAb可以减轻LPS所诱发的急性肺损伤程度,可抑制炎性因子的过度表达;调控TLR4通路可能是治疗脓毒症及其肺损伤的有效靶点.     

外源性粒-巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症树突状细胞的生物效应

目的 探讨粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)用于重度脓毒症治疗对于脾脏树突状细胞(DCs)的生物学效应及对预后影响.方法 选取160只雄性昆明鼠,随机(随机数字法)分为4组:健康对照组(n=50,不予特殊处理,正常喂养),CLP组(n=42,盲肠结扎穿孔),常规治疗组(n=34,CLP术后12、24、36、48、60、72、84h腹腔注射头孢曲松5 mg/kg),GM-CSF治疗组(n=34,CLP术后除常规治疗外另于12、36、60、84h皮下注射GM-CSF 20 μg/kg).于CLP术后0、12、24、48、72 h分批处死,用流式细胞仪测定各组脾脏DCs数量及凋亡率,用ELISA法检测各组血清IL-12质量浓度.并观察96h生存预后.结果 重度脓毒症时所有时间点脾脏DCs凋亡增加、数量明显减少(P＜0.05),IL-12血清浓度单向曲线型增高(P＜0.05);头孢曲松治疗可以加剧DCs的丢失(P＜0.05),而对IL-12质量浓度无影响(P＞0.05).GM-CSF治疗可增加DCs的数量(P＜0.05),降低IL-12质量浓度(P＜0.05).Logistic回归分析GM-CSF的OR值为0.079.结论 GM-CSF治疗重度脓毒症可以增加脾脏DCs数量,降低血清IL-12质量浓度,改善预后.     

柚皮素对过敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜组织TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的 探究柚皮素对过敏性鼻炎(AR)模型大鼠鼻黏膜组织Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子α(TNF-α)信号通路的影响。方法 建立AR大鼠模型，48只大鼠以随机数字表法平均分为4组：模型组、柚皮素低(100 mg/kg)剂量组、柚皮素高(200 mg/kg)剂量组、柚皮素高(200 mg/kg)剂量+脂多糖(LPS)(TLR4通路激活剂，0.4 mg/kg)组，另取12只SD大鼠设为对照组。以药物分组干预治疗后，观察大鼠鼻炎症状并进行评分；苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠鼻黏膜组织病理形态改变；试剂盒测定大鼠血清IgE及炎性因子白细胞介素(IL)-17、IL-18水平；免疫组织化学染色检测大鼠鼻黏膜组织CD19、CD23表达；免疫印迹法检测大鼠鼻黏膜组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达。结果 与对照组相比，模型组大鼠鼻黏膜组织发生严重病理损伤，鼻炎症状评分、血清IgE、IL-17及IL-18水平、鼻黏膜组织CD19、CD23阳性细胞比例、鼻黏膜组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型...     

抗IL-6R单克隆抗体对脓毒症大鼠的保护机制研究

目的 观察抗IL-6受体单克隆抗体(抗IL-6R单抗)干预盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症大鼠的作用,并探讨可能的作用机制.方法 50只Wistar大鼠随机分为五组:假手术组(A组)、CLP+兔IgG 200 μg/kg组(B组)、CLP+IL-6R单抗50 μg/kg组(C组)、CLP+IL-6R单抗100 μg/kg组(D组)、CLP+IL-6R单抗200 μg/kg组(E组),每组10只.观察各组脓毒症大鼠存活率的变化,并使用酶联免疫吸附技术分析各组血清TNF-α、IL-6、IL-17A及IL-21浓度.结果 与B组比较,C、D、E组7 d存活率显著增加(P<0.05),血清TNF-α和IL-6浓度差异无统计学意义,而IL-17A和IL-21浓度则显著减少(P<0.05).结论 抗IL-6R单抗对CLP脓毒症大鼠具有保护作用,该作用可能与Th17细胞受到抑制有关.     

内皮抑制素对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用

[目的]研究内皮抑制素(Endostatin,ES)对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用及其可能机制.[方法]雄性昆明小鼠(20~22g)150只随机分为假手术组、脓毒症模型组、内皮抑制素干预组,通过盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症模型.术后用内皮抑制素(2mg/kg,ip)干预,假手术组及模型组于同时间点给予等量生理盐水.在术后6h、12h留取标本,检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,同时行肺组织微血管渗漏实验、测肺湿干重比值(W/D),取部分肺组织进行组织病理学分析,并检测肺组织p38MAPK信号通路活化情况.[结果]与脓毒症模型组比较,内皮抑制素能提高脓毒症CLP模型存活率,降低血清TNF-α、IL-6、VEGFc水平,减轻肺组织的微血管渗漏、湿干重比和病理改变,同时抑制脓毒症CLP模型诱导的肺组织p38MAPK的磷酸化.[结论]内皮抑制素对脓毒症小鼠急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与内皮抑制素能抑制过度的炎症反应、改善血管通透性及调节p38MAPK信号通路有关.     

槲皮素和姜黄素对脓毒症大鼠炎症因子的影响

目的 探讨槲皮素和姜黄素预处理对脓毒症大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)白细胞介素-6 (IL-6 )及核转录因子-κB(NF-κB)的影响.方法 将120 只Wistar 大鼠按随机数字表法分为假手、术组(A 组)模型组(B 组)槲皮素预处理组(C1 组100 mg/kg 、C2 组50 mg/kg)姜黄素预处理组(D1 组100 mg/kg 、D2 组、50 mg/kg)、槲皮素、+姜黄素预处理组(E1 组槲皮素50 mg/kg +姜黄素、100 mg/kg,E2 组槲皮素50 mg/kg +姜黄素50 mg/kg,E3 组槲皮素100 mg/kg +姜黄素50 mg/kg,E4 组槲皮素100 mg/kg +姜黄素100 mg/kg).采用盲肠结扎穿孔术(CLP )复制脓毒症模型;A 组仅开腹分离盲肠而不结扎.各组于制模前灌胃相应药物,A 组和B 组仅灌胃0.1% 二甲基亚砜(DMSO)均每日1 次,连用3d.各组取6 只大鼠记录制模后脓毒症严重程度评分及生存时间;余大鼠于制模后24 h 处死,用,酶联免疫吸附试验(ELISA )测定血清TNF-α、IL-6 水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR )测定肝组织核转录因子-κB(NF-κB)mRNA 表达,并分析脓毒症严重程度评分、NF-κB 与TNF-α、IL-6 的相关性.结果 ①B 组术后24 h 脓毒症严重程度评分(分)明显高于A 组(P＜0.05)半数生存时间较C、D、E 组明显缩短(P＜0.05);各药物预处理组术后脓毒症严重程度评分均较B 组明显下降(均,P＜ 0.05),其中E4 组(13.83±1.33 )下降更显著.②B 组TNF-α、IL-6 、NF-κB mRNA 表达均较A 组明显升高(均P＜0.05);与B 组比较,药物预处理组能明显降低TNF-α、IL-6 的浓度和NF-κB mRNA 的表达水平,且各组组内比较差异有统计学意义(均P＜0.05)其中以E4 组下降更显著.③脓毒症严重程度评分与血清TNF-α、IL-6 水平均呈正相关(r 值分别为0.852 、8,均P＜0.01);NF-κB mRNA 与血清TNF-α、IL-6 水平呈正相关(r 值分别为0.852 、0.848,均P＜0.01).结论 槲皮素和姜黄素预处理能明显抑制脓毒症时NF-κB 的表达和炎症反应,随槲皮素及姜黄素剂量增加作用更为显著;且二药合用较单药效果更佳.