快速胶体金免疫层析法的建立及其对血吸虫病的诊断效果

目的建立一种快速、简便的血吸虫病免疫诊断方法。方法用金颗粒标记羊抗人多克隆抗体,建立快速胶体金IgG层析法(GICA-IgG),以此检测患者血清中的抗血吸虫抗体,并与常规间接血凝(IHA)抗体检测试剂进行比较。结果GICA-IgG和IHA两种方法对急性血吸虫病患者的检出率分别为95.24%(40/42)和100.00%(50/50);慢性血吸虫病患者的检出率分别为92.86%(130/140)和94.64%(106/112);正常人的阳性率分别为6.40%(8/125)和6.45%(8/124);与肝吸虫、肺吸虫和乙型肝炎患者的交叉反应率分别为3.13%(1/32)、14.81%(4/27)、12.00%(3/25)和6.25%(2/32)、51.61%(16/31)、4.00%(1/25)。对33例治疗前、治疗后0.5年和治疗后1年的同一患者进行疗效考核追踪观察,其血清0.5年和1年的阴转率GICA-IgG分别为50.01%、60.00%,IHA分别为16.13%、19.35%,两种方法的考核效果差异有显著性(P<0.01)。结论胶体金IgG层析法具有敏感、特异、简便和快速的特点,有一定的疗效考核价值。     

检测狂犬病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的 建立一种简易快速、适用于野外的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测动物脑或唾液中的狂犬病街毒抗原。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗狂犬病毒单抗。制成免疫层析测试条。样品中的狂犬病毒抗原与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果 GICA测试条只与狂犬病毒抗原有特异性反应，与乙型脑炎病毒、正常小鼠脑组织等无交叉反应。GICA与EIA比较检测了48份可疑狂犬病犬唾液样品，两法的符合率为88．2％。结论 GICA检测样品中的狂犬病毒抗原特异性强、灵敏度高、简便快速、无需仪器设备，对基层单位开展初步鉴定狂犬病毒样品工作而言。不失为一种有效的方法。     

免疫层析法快速诊断登革病毒感染

免疫层析法 (ＩｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃＴｅｓｔ,ＩＣＴ)是近年刚刚建立的病原微生物快速诊断技术〔1〕,作者将其与斑点免疫结合试验 (ＤｏｔＩｍｍｕｎｏｂｉｎｄｉｎｇＡｓｓａｙ ,ＤＩＢＡ)进行了比较 ,报告如下。1　材料与方法1 1　ＩＣＴ试剂盒购自澳大利亚ＰａｎＢｉｏ公司 ,ＤＩＢＡ(ＤＥＮＧＵＥＢＬＯＴ)试剂盒购自新加坡诊断技术公司。1 2　血清标本　共 76份 ,其中 38份是 1998年 1～ 12月广州市登革热监测时收集的登革热可疑患者血清。另外 38份是 1998年秋末广东省佛山、南海地区登革热暴发流行时采集的登革…     

胶体金免疫层析法快速诊断牛布鲁氏菌病的研究

目的研发一种牛布鲁氏菌病快速诊断试剂。方法应用胶体金免疫层析法(GICA),经布鲁氏菌病病牛和健康牛不同血清用量的测试,选择最佳血清用量,建立快速诊断牛布鲁氏菌病的新方法。结果GICA快速诊断牛布鲁氏菌病最佳血清用量为10μl,检测敏感性和特异性分别达到91.3%和97.3%,youden指数为0.886;GICA、DIGFA及SAT检测结果比较三者无统计学意义(P>0.05)。结论应用GICA快速诊断牛布鲁氏菌病,不仅具有试剂敏感、特异,且血清用量少,操作简便,更适合于布鲁氏菌病的诊断、流行病学调查及现场应用。     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。     

双抗原夹心胶体金免疫层析法快速检测结核分枝杆菌抗体的研究

目的 建立一种简易、快速和准确的双抗原夹心胶体金免疫层析法,用于检测结核病患者血清中的抗MTB抗体.方法 采用胶体金标记相对分子质量分别为6000、16 000和38 000的重组MTB早期分泌抗原靶蛋白(ESAT),成为重组MTB融合蛋白ESAT-16-38,研制出双抗原胶体金免疫层析检测卡,对浙江省德清县疾病预防控制中心2007-2009年临床确诊的结核病患者血清163份(其中肺结核痰MTB阳性57份、痰MTB阴性64份和肺外结核42份)和对照血清573份(其中体检者血清224份、急性肺炎和支气管炎患者血清217份、肺吸虫患者血清132份)样本进行检测,并与MTB蛋向芯片抗体法的检测结果进行比较.检出率的比较采用χ2检验.结果 双抗原法和蛋白芯片法检测结核病患者血清的阳性符合率分别为73.0%(120/163)和72.4%(118/163),差异无统计学意义(χ2=0.062,P＞0.05);检测对照血清的阴性检出率分别为93.9%(538/573)和92.0%(527/573),差异无统计学意义(χ2=0.635,P＞0.05);未见与肺吸虫患者血清有交叉反应,双抗原法对痰MTB阳性血清的检出率高达87.7%(50/57).结论 重组ESAT-6和ESAT-16双抗原胶体金免疫层析检测卡具有较高的敏感度和特异度,与蛋白芯片法的检测结果相似,且方法简便、快速,有很好的重现性和稳定性.

Abstract：

Objective To establish a simple,fast and accurate double antigen colloidal gold immunochromatographic technique for detecting Mycobacterium tuberculosis antibody from tuberculosis patients.Methods The fusion protein ESAT-6-16-38 was constructed by using gene cloning technique for the 6,16 and 38 kDa early secreted antigenic target from Mycobacterium tuberculosis.The ESAT-6-16-38 fusion protein was marked to colloidal gold to eatablish the double antigen colloidal gold immunochromatographie assay.Serum samples from 163 patients with tuberculosis,including 57 sputumpositive cases,64 sputum-negative cases,and 42 cases with extrapulmonary tuberculosis,were collected during 2007and 2009 from the Disease Prevention and Control Center of Deqing County.In addition,573 controls(224 healthy volunteers,217 patients with acute pneumonia and bronchitis,132 patients with paragonimiasis)were recruited for comparison.Mycobacterium tuberculosis specific antibodies were detected by using immunochromatographic and protein chip technique.Detection rate was compared with Chi-square test. Results Among the 163 tuberculosis patients,the positive rates of immunochmmatographic detection and protein chip were 73.0%(120/163)and 72.4%(118/163)respectively;the difference was not statistically significant(χ2=0.062,P＞0.05).Among the 573 controls,the negative rates of immunochromatographic detection and protein chip were 93.9%(538/573)and 92.0%(527/573)respectively;the difference was not statistically significant(χ2=0.635,P＞0.05).There was no cross reaction in the paragonimiasis patients.The positive rate of the immunoehromatographie assay was as high as 87.7%(50/57)in the sputmn-positive patients.Conclusions The double antigen immunoehromatographie technique is an easy to operate, rapid,highly sensitive, specific, and reproducible method for the detection of Mycobacterium tuberculosis antibodies.     

胶体金免疫层析法与化学发光法在心肌梗死诊断中的价值比较

目的比较胶体金免疫层析法与化学发光法检测心肌标志物在诊断心肌梗死(MI)中的应用价值。方法收集MI住院患者98例,采用化学发光法与胶体金免疫层析法检测患者心肌标志物肌钙蛋白(c Tn)I、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,计算胶体金免疫层析法灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确指数。结果胶体金免疫层析法与化学发光法相关性分析,c Tn I、Mb、CK-MB的相关系数依次为0.607、0.647、0.481(P<0.05)。c Tn I、Mb、CK-MB阳性率在两种检测方法中无统计学差异(P>0.05)。胶体金免疫层析法检测c Tn I、Mb、CK-MB灵敏度依次为88.16%、88.41%、83.78%,特异度依次为77.27%、79.31%、66.67%。结论胶体金免疫层析法检测心肌标志物方便快捷,灵敏度高。     

应用胶体金免疫层析法检测囊虫病患者血清循环抗原的研究

为探讨应用胶体金免疫层析法检测囊虫病患者血清循环抗原（CAg）诊断囊虫病的价值，应用胶体金免疫层析法检测囊虫病人及非囊虫病人血清中的CAg，并将该方法与ELISA作了比较。检测78份囊虫病患者血清，56例显示为阳性，阳性率为71．79％。其中52份活动型脑囊虫病人血清的阳性率为80．77％；20份非活动型脑囊虫病人血清的阳性率为55％；6份单纯皮肌型囊虫病血清的阳性率为50％。检测40份健康人血清，阴性符合率为87．5％。检测10份包虫病患者血清、10份吸虫病患者血清的交叉反应率分别为20．00％和10％。10份毕支睾吸虫病人血清均为阴性反应。23例其他脑疾患（脑肿瘤、脑脓肿、脑结核、脑外伤）患者血清的交叉胍应率为11．32％。本方法的敏感性和特异性与ELISA相似。应用胶体金免疫层析法检测囊虫病人血清CAg具有较高的敏感性和特异性，操作简便快速，无需特殊仪器设备，具有较好的应用前景，值得进一步研究。     

胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究

目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(GICA).方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4mm/条切割制成免疫层析检测试条.分别用粗制F1抗原和EV菌对该试纸条的敏感性进行测定,同时用44株鼠疫近缘菌及昆明小鼠、黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠的正常血清等标本进行特异性检测.结果本试纸条可在15min之内完成实验,检测粗制F1抗原的浓度可达0.5ng/mL,最小检出EV菌菌量为10万个;本方法的特异性为100%.结论 GICA检测鼠疫F1抗原特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值.     

胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值

目的 评价胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体在结核病诊断中的应用价值。方法 收集结核病患者和健康人的血清样本共332份及其背景资料,采用胶体金法检测血清中特异性结核抗体IgG/IgM,与临床诊断和细菌学检测结果比较,使用SPSS 22.0统计软件对结果进行比较分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果 胶体金免疫层析法检测结核病患者中特异性结核抗体IgG/IgM的灵敏度为41.15%、特异性为91.67%,检测菌阳和菌阴结核病患者的敏感性分别为51.38%和33.77%。在全部结核病患者中,特异性结核抗体IgG/IgM检测检出率(41.15%)显著高于痰涂片法(18.84%)和痰菌培养法(36.15%)(P<0.05)。结核抗体检测、痰涂片法和痰培养法三种方法联合检测阳性率为61.54%,高于单种方法检测或其中两种方法联合检测。结论 胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌抗体具有灵敏、特异、快速和简便等优点,可用于结核病的筛查,同时该方法也具有一定的局限性,敏感度和特异度有待进一步的提高,因此不可单独用于诊断结核病,可配合痰细菌学、影像学和临床表现等进行辅助诊断。     

胶体金免疫层析快速诊断法在羊鼠疫疫情处理中的应用

目的评价胶体金免疫层析快速诊断试剂盒在动物鼠疫疫情处理中的应用价值。方法采集病羊血清,用胶体金免疫层析法(GICA)、检测鼠疫FI抗体,并与间接血凝法(IHA)检测结果比较。死亡羊尸检取脏器作细菌分离和培养,并做GICA和反应间接血凝(RIHA),检测FI抗原。结果检测藏系绵羊、西藏山羊血清1 073份,GICA与IHA法结果一致,抗体阳性率均为6.15%;检测脏器标本的阳性率分别为35.71%和50.00%,差异有显著性(P<0.05)。结论GICA方法简便,诊断快速,适合现场应用。     

胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫应用研究

目的观察胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫的效果。方法用胶体金免疫层析抗体(抗原)测试条与鼠疫间接血凝试验(IHA)/反向间接血凝试验(RIHA)两种方法平行检测鼠疫的抗体(或抗原)。结果通过对实验感染动物、青海鼠疫疫源地内鼠疫患者(尸体)及染疫动物等396份样品的检测,两种方法符合率为100%。结论胶体金免疫层析法操作简单、方便、快速,适用于现场应用和鼠疫的快速诊断。     

诊断家畜日本血吸虫感染胶体金免疫层析试纸条的研制

目的 目的 研制一种可用于疫区现场快速诊断家畜日本血吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条。方法 方法 设计重组蛋 白G并在大肠杆菌中表达, 得到重组蛋白。对重组蛋白G进行胶体金标记并制备金标垫, 分别用可溶性虫卵抗原 （SEA） 和重组蛋白G划线, 作为检测线和质控线。采用组装的试纸条检测标准阴、 阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清, 以及粪 检阴、 阳性的绵羊与水牛血清, 评估其灵敏度和特异度; 利用组装的试纸条检测前后盘吸虫病病牛血清, 评价其交叉反应 性。结果 结果 成功构建了重组蛋白G的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达。以重组蛋白G制备的试纸条可用于检测日本 血吸虫感染BALB/c鼠、 新西兰大白兔、 水牛、 绵羊血清抗体。该试纸条检测日本血吸虫感染小鼠与兔血清的灵敏度、 特 异度均为100%; 检测绵羊血清的灵敏度为100%, 特异度为88.46%; 检测水牛血清的灵敏度为94.44%, 特异度为100%; 其与前后盘吸虫交叉反应率为5.88%。结论 结论 成功研制能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条, 其检测家 畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高。     

A rapid immunochromatographic assay for hepatitis B virus screening

Summary. Simple, rapid and accurate assays for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and hepatitis B e antigen (HBeAg) are helpful for clinical diagnosis and field epidemiological surveys. A commercially developed, rapid immunochromatographic test for simultaneous detection of HBsAg and HBeAg was evaluated using a total of 2463 selected samples (827 frozen sera, 1011 fresh sera, and 625 whole blood samples). Results of the rapid test were compared with standard enzyme immunoassay (EIA) methods for HBsAg and HBeAg detection. The accuracy of the rapid test was excellent and was similar for frozen sera, fresh sera and whole blood. The overall sensitivity and specificity for the detection of HBsAg were 95 and 100%, and the corresponding positive and negative predictive values were 100 and 99.7%, respectively. The sensitivity and specificity for the detection of HBeAg were slightly less than that for HBsAg, and were 80 and 98%, with positive and negative predictive values of 91 and 94%, respectively. Thus, compared with the EIA method, the rapid test was highly sensitive and accurate for the detection of HBsAg although somewhat less sensitive and specific for detection of HBeAg. Because of its speed, simplicity and flexibility, the rapid test is ideally suited for HBsAg and HBeAg screening in population-based epidemiological studies and in low risk populations, particularly in regions of the world where hepatitis B is endemic.     

Predicting late-onset preeclampsia by detecting ELABELA content using an immunochromatographic colloidal gold test strip

Preeclampsia is a pregnancy disorder that seriously affects the outcome of mothers and infants and lacks effective prediction and diagnosis methods. ELABELA is the second endogenous ligand of the apelin receptor (APJ) and is associated with the pathogenesis of preeclampsia. In a previous study, the authors found that the downregulation of ELABELA expression is closely related to late-onset preeclampsia, which may be a marker for the clinical diagnosis of late-onset preeclampsia. In this study, the authors again collected 120 maternal blood samples, including 60 pregnant women with a medical diagnosis of late-onset preeclampsia. ELISA results showed that the serum ELABELA concentration in late-onset preeclampsia pregnant women (12.57 ± 7.77 ng/mL) was significantly lower than that in normal pregnant women (36.99 ± 23.58 ng/mL), which was consistent with previously reported results. Therefore, the authors used an ELABELA monoclonal antibody to label four colloidal gold nanoparticles with different diameters (15, 30, 55, and 150 nm) and developed a transverse-flow immunochromatographic band for the rapid and accurate detection of serum ELABELA levels. The strip test shows that colloidal gold with a diameter of 30 nm can be used as a good ELABELA detection marker and had more than 90% positive detection effect. Therefore, the authors hope that the colloidal gold strip with ELABELA as the diagnostic index developed by us will be popularized and applied in clinical diagnosis.     

布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析法快速检测技术的建立

目的建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法。方法利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性。结果以粒径为40nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.2,SPA蛋白最适标记量为6μg/ml。交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高。试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92%。结论制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用。     

快速检测猪囊虫抗体的金免疫层析法的建立及应用

目的　研制一种简便快速检测囊虫抗体的新方法 ,提供基层单位使用。方法　应用胶体金和免疫层析合成技术进行研究 ,建立检测囊虫抗体的金免疫层析法 ;以ELISA为对照 ,观察GICA法敏感性、特异性和稳定性。结果　每ml胶体金中兔抗猪IgG最适标记量为 30 8μg ,最佳抗原包被浓度为 1mg/ml。建立的GICA法检测囊虫病猪血清均为阳性 ,正常猪及其他疾病猪血清 ,结果均为阴性 ;整个实验仅一步操作 ,检测时间 5～ 15min。同ELISA法比较 ,两种方法检测囊虫抗体的相符率达 96 8% (P >0 0 5 )。GICA试纸条分别在 4℃和室温下保存 10 5d及 37℃保存 4 5d ,检测结果均未发现改变。结论　检测囊虫抗体的GICA法简便、快速、敏感、特异、稳定。