乳腺癌干细胞富集与鉴定的初步研究

目的:通过从MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231乳腺癌细胞系中培养富集及鉴定乳腺癌干细胞(breast cancer stem cell,BCSC),寻找培养与富集乳腺癌干细胞的方法。方法:贴壁培养MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系,倒置显微镜观察各细胞形态;流式细胞仪分别分选收集CD44-CD24-、CD44-CD24+、CD44+CD24-及 CD44+CD24+ 细胞,其中CD44+CD24-为乳腺癌干细胞,其余三类为对照组;MTT法计数细胞,绘制MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231细胞系生长曲线;MCF-7细胞系进行无血清悬浮培养1个周期,流式细胞仪检测分子表面标记物CD44+CD24-含量,贴壁培养的CD44+CD24-乳腺癌干细胞为对照组;将分选的MCF-7（CD44+CD24-）和分选的其余MCF-7细胞（非CD44+CD24-）进行干性成球实验,鉴定CD44+CD24-干性表达。结果:MCF-7、MDA-MB-231细胞系富含表面标志物CD44-CD24-的乳腺癌细胞;ZR-75-1细胞系富含分子表面标志物CD44+CD24+的乳腺癌细胞;生长曲线显示MCF-7、ZR-75-1、MDA-MB-231均呈持续增长,MDA-MB-231细胞生长较MCF-7、ZR-75-1细胞快;通过无血清悬浮培养CD44+CD24-乳腺癌干细胞由19.4%富集到88.9%;成球实验中CD44+CD24-表型细胞成球数量较分选的其余MCF-7细胞（非CD44+CD24-表型）明显增多,成球率分别为（36.5±1.7）%,（1.1±0.5）%。结论:流式细胞仪可成功分选出分子表面标志物为CD44+CD24-的乳腺癌干细胞;CD44+CD24-可能不是乳腺癌干细胞唯一的表面标志物;MDA-MB-231细胞系较MCF-7、ZR-75-1细胞系生长快;无血清悬浮培养法可简便、高效地富集乳腺癌干细胞;CD44+CD24-乳腺癌干细胞干性表达较强。     

CD44+CD24-/low在基底样乳腺癌中过表达与其恶性预后的相关性研究

目的探讨乳腺癌干细胞样标志物CD44⁺CD24^-/low在基底样乳腺癌(basal-like breast carcinoma, BLBC)中过表达与BLBC恶性预后的相关性。方法 在乳腺癌基因表达分型的基础上, 根据雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(Her-2)免疫表型的表达选取乳腺癌组织四组:管腔A组、管腔B/C组、Her-2高表达组及三阴性组;对三阴性组检测CK5/6、EGFR, 分为正常乳腺样型和BLBC型两组;对上述5组进行免疫组化Envision法染色, 选用抗体为CD44、CD24, 观察CD44⁺CD24^-/low表型表达并比较BLBC组与其它各组的差异。结果 (1)三阴性组共60例, CK5/6和或EGFR阳性者41例(68.3%), 确定为BLBC;CK5/6、EGFR阴性者19例(31.7%), 确定为正常乳腺样组;(2)CD44⁺CD24^-/low表型在BLBC组中占78.0%(32/41), 相对于管腔A组37.9%(11/29)、管腔B组25.9%(7/27)、Her-2高表达组17.2%(5/29)、正常乳腺样组26.3%(5/21), 表达增高并具有显著性(P＜0.05);(3)所有150例乳腺癌中(可评价145例)具有CD44⁺CD24^-/low免疫表型者其Ki-67指数增高相对于非CD44⁺CD24^-/low表型具有统计学差异(P＜0.001)。结论 BLBC型乳腺癌表达乳腺癌干细胞样标志物CD44⁺CD24^-/low显著高于其它各型乳腺癌, CD44⁺CD24^-/low与BLBC独特的恶性生物学行为相关。     

不同乳腺癌干细胞亚群的自我更新和致瘤能力差异

目的 分析原代培养乳腺癌细胞中不同乳腺癌干细胞亚群的自我更新、致瘤能力差异。方法 采用流式细胞术和免疫荧光实验,从乳腺癌原代培养细胞中分选、鉴定CD44⁺CD24^-/low、ALDH1⁺和ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low细胞亚群,分析各分选细胞占总肿瘤细胞的比例;通过克隆形成实验观察各组细胞的自我更新能力;通过裸鼠致瘤实验观察各组细胞的致瘤能力。结果 CD44+CD24^-/low细胞占总细胞比例的7.2%,ALDH1⁺细胞所占比例为4.6%,ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low细胞所占比例为1.5%。三组细胞自我更新和致瘤能力由强至弱依次为ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low、ALDH1⁺、CD44⁺CD24^-/low细胞,各组细胞间比较差异均存在统计学意义（P<0.05）。 结论 乳腺癌组织中CD44+CD24-/low、ALDH1⁺和ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low三组乳腺癌干细胞亚群之间的自我更新和致瘤能力有明显差异,ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low亚群细胞具有最强的自我更新和致瘤能力,提示ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low可能是更具有特异性的乳腺癌干细胞标志物。     

CD44和CD24标记的宫颈癌细胞亚群特性

目的 考察Siha细胞系中的CD44^+/CD24⁺能否富集宫颈癌干细胞。方法 用流式细胞仪分选出CD44⁺/CD24⁺Siha细胞,用无血清悬浮培养观察成球能力、裸鼠移植瘤实验观察成瘤能力、透射电子显微镜观察辐射前后两组细胞形态变化,并通过Transwell侵袭实验比较细胞侵袭能力的差异。结果 耐放疗细胞中CD44^+/CD24⁺Siha细胞比例明显高于其在亲代Siha细胞中的比例;无血清培养CD44⁺/CD24⁺Siha细胞组可以形成致密且体积较大的细胞球,CD44^+/CD24⁺Siha细胞组致瘤时间早,成瘤率高;辐射后CD44⁺/CD24⁺Siha细胞较亲代Siha细胞更抗凋亡;CD44⁺/CD24⁺Siha细胞组的迁移细胞数明显高于亲代Siha细胞组,所有数据均具有统计学意义。结论 CD44⁺/CD24⁺Siha具备部分干细胞特性,CD44⁺/CD24⁺可能成为宫颈癌干细胞特异性表面标志物。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

化疗对三阴性乳腺癌CD44+CD24-/low细胞亚群的影响

目的:观察化疗对三阴性乳腺癌CD44+CD24-/low细胞亚群的影响。方法:用0.2、1、5倍药物血浆峰浓度(peak plasma concentration,PPC)的紫杉醇、多西紫杉醇、氟尿嘧啶、表柔比星、长春瑞滨和吉西他滨分别作用人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48和72h后,MTT法检测细胞生长情况;FCM法检测1倍PPC的各药物作用48h以及细胞复苏后CD44+CD24-/low细胞含量的变化;另外,FCM法检测10例转移性三阴性乳腺癌患者在化疗前后,外周血中CD44+CD24-/low细胞的含量变化。结果:6种药物均可抑制MDA-MB-231细胞增殖。1倍PPC的各药作用后,CD44+CD24-/low细胞含量未明显升高,以氟尿嘧啶组含量降低最为明显(P<0.05)。转移性三阴性乳腺癌患者在化疗后,外周血中CD44+CD24-/low细胞含量降低(P<0.05)。结论:化疗药物紫杉醇、多西紫杉醇、氟尿嘧啶和表柔比星可降低MDA-MB-231细胞株中CD44+CD24-/low细胞亚群的含量。化疗可使转移性三阴性乳腺癌患者外周血中CD44+CD24-/low细胞含量降低。     

CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞分选鉴定及其多药耐药性研究

目的:观察MACS免疫磁珠法分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞活性,并检测其与多药耐药的关系。方法:运用MACS免疫磁珠法从多药耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,流式细胞术测定分选前后CD44+CD24-/low细胞比例,微球体培养法检测分选细胞自我更新能力,流式检测CD44+CD24-/low细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达水平,Real-time PCR检测多药耐药相关基因MDR1表达水平。结果:MACS免疫磁珠法分选后,CD44+CD24-/low细胞比例为93.85%,其成球能力明显强于non-CD44+CD24-/low细胞亚群。MCF-7/ADR细胞株和CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞P-gp表达强度分别为101 177.10±2 171.86和114 906.70±2 560.19,P<0.05。CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞MDR1基因表达水平为MCF-7/ADR细胞株的(1.07±0.02)倍,P<0.05。结论:经MACS免疫磁珠法分选所得CD44+CD24-/low细胞亚群有更强的自我更新能力,高表达P-gp蛋白和MDR1基因可能是引起乳腺癌多药耐药的重要原因。     

无血清悬浮法培养MCF-7细胞系并筛选该细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的：研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法：应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其接种于含血清培养基,观察分化。应用单克隆形成实验、表面标志检测、HOECHST33342染色检测来确定培养出的细胞中肿瘤干细胞的比例及其培养后肿瘤干细胞含量的变化。结果：乳腺癌MCF-7细胞系中有约2.12%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的MCF-7无明显差别。流式细胞仪表面标志检测,细胞球中约含83.13%表达CD24^-CD44^＋的细胞,HOECHST33342染色提示细胞球中约含10.06%的侧亚群（sidepopulation）细胞。结论：MCF-7细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有比例较低的具有增殖和分化能力的乳腺癌干细胞相关亚群。表面标志以及HOECHST33342检测差异提示细胞球中仅约1/8细胞具有干细胞的功能。     

HOXD3在乳腺癌细胞干性和化疗耐药性中的作用及机制研究

  目的  探讨HOXD3表达对乳腺癌细胞干性的影响,并研究HOXD3表达与乳腺癌细胞化疗耐药的关系。  方法  收集2006年1月至2008年12月哈尔滨医科大学附属肿瘤医院87例乳腺癌患者组织标本。采用免疫组织化学染色法检测乳腺癌细胞和组织中HOXD3表达;采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色法检测HOXD3在顺铂或阿霉素耐药细胞系MDA-MB-231和MDAMB-435中的表达水平,分析HOXD3过表达对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435的干细胞生物标志物表达水平的影响;采用MTT法和集落形成实验分析HOXD3在乳腺癌细胞化疗耐药中的作用。  结果  乳腺癌组织中HOXD3 mRNA相对表达量显著高于癌旁正常组织,乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435和MCF-7的HOXD3 mRNA相对表达量均高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A（均P < 0.05）。顺铂或阿霉素耐药的细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC₅₀）分别为（20.82±0.05）μmol/L和（19.69±0.47）μmol/L,或（32.26±0.23）mmol/L和（26.08±0.55）mmol/L,均高于对应原始细胞系（均P < 0.05）;耐药倍数分别为2.47和3.10倍,或1.86和2.08倍。HOXD3过表达MDA-MB-231、MDA-MB-435的肿瘤球体数目、干细胞生物标志物的表达水平均明显增加（均P < 0.05）。  结论  HOXD3过表达对乳腺癌细胞干性的维持及化疗耐药性的发生发挥重要的作用,为制定针对肿瘤干细胞的分子靶向治疗提供理论参考。      

克隆柱法提取MCF-7乳腺癌细胞系中癌干细胞

目的通过克隆柱法提取MCF-7乳腺癌细胞中的乳腺癌干细胞,并进行鉴定。方法采用单细胞克隆加低密度干细胞培养基筛选获得呈“球样”生长的乳腺癌干细胞,行CD44、CD24免疫荧光细胞化学染色及诱导分化实验。结果CD44＋CD24^-/Low细胞的比例为12．1％,且在全克隆中富含CD44＋CD24^-/Low细胞。在形成的细胞球中富含CD44＋CD24^-/Low细胞,并且在诱导分化时可见明显类管腔样结构形成,并表达CK18及CK14。结论克隆柱法是提取细胞系中癌干细胞的简单有效方法。     

hCLP46基因在不同侵袭转移潜能乳腺癌细胞表达中的差异及其意义

目的 探讨hCLP46基因在MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中表达的差异性及其意义。方法 采用RT-PCR的方法检测2个细胞系(乳腺癌低度侵袭转移细胞系MCF-7、中度侵袭转移细胞系MDA-MB-231)中hCLP46 mRNA的表达差异。取MCF-7和MDA-MB-231细胞株进行培养,分别加入100 μmol/L的转化生长因子-β(TGF-β)并设对照组,培养72 h,用Western-blot方法分析P15蛋白表达。结果 RT-PCR检测hCLP46结果显示,在MCF-7和MDA-MB-231细胞系中,内参基因GAPDH的表达量相近,hCLP46基因在两个细胞系中均表达,其中MDA-MB-231细胞系中的表达高于MCF-7细胞系。两个细胞系分别加入TGF-β培养72 h后,与相应的对照细胞系相比,P15的表达均有降低,hCLP46基因高表达的MDA-MB-231细胞中P15表达较MCF-7细胞显著降低。结论 hCLP46基因过表达可能抑制TGF-β对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞P15基因的上调,hCLP46可能在乳腺癌的发病中起到一定作用。     

五味子对乳腺癌细胞抑制作用的体外研究

目的:评估中药五味子抗癌有效成分木酚素及其代谢产物对雌激素受体阳性以及阴性的乳腺癌细胞株的体外作用,并评价五味子对于乳腺癌的体外杀伤作用。方法:利用ATP 生物荧光药物敏感性检测技术(ATP-TCA),检测五味子木酚素对50例乳腺癌的体外杀伤作用,并检测不同浓度五味子木酚素及其代谢物（END、ENL）对于ER（＋）的MCF-7、T47D和ER（－）的MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞株的杀伤作用。评价五味子的体外作用有效率及其与雌激素受体表型是否相关。结果:五味子对乳腺癌患者的乳腺癌细胞具有明显的体外杀伤作用,体外有效率为34.0%(17/50);五味子木酚素以浓度依赖的方式,显著降低乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-435、MDA-MB-231的存活率,且该抑制作用和细胞雌激素受体的关系并不明显（P＞0.05）,五味子木酚素在较低浓度（0.1-30μmol/L）下对雌激素受体阳性乳腺癌细胞株MCF-7、T47D表现出促进增殖的作用,当浓度提高至100μmol/L后,五味子木酚素对MCF-7、T47D增殖表现出显著的抑制作用,并呈剂量-效应关系。木酚素的低浓度促进乳腺癌细胞增殖作用在雌激素受体阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435、MDA-MB-231中并不明显,当浓度提高至100μmol/L后,五味子木酚素对MDA-MB-435、MDA-MB-231增殖表现出显著的抑制作用,并呈剂量-效应关系。ENL、END(3-1000μmol/L)在体外对乳腺癌细胞株存在显著抑制作用（P＜0.05）,并有剂量依赖效应,未发现其与细胞雌激素受体表型有关联（P＞0.05）。木酚素在较低浓度区间（0.1-30μmol/L）促进ER(＋)细胞株的增殖,但对ER(－)细胞株作用不显著。结论:五味子对乳腺癌细胞系以及乳腺癌患者细胞均具有较强的杀伤作用,值得进一步临床研究和应用。     

Human breast cancer cell lines contain stem-like cells that self-renew, give rise to phenotypically diverse progeny and survive chemotherapy

Introduction

The phenotypic and functional differences between cells that initiate human breast tumors (cancer stem cells) and those that comprise the tumor bulk are difficult to study using only primary tumor tissue. We embarked on this study hypothesizing that breast cancer cell lines would contain analogous hierarchical differentiation programs to those found in primary breast tumors.

Methods

Eight human breast cell lines (human mammary epithelial cells, and MCF10A, MCF7, SUM149, SUM159, SUM1315 and MDA.MB.231 cells) were analyzed using flow cytometry for CD44, CD24, and epithelial-specific antigen (ESA) expression. Limiting dilution orthotopic injections were used to evaluate tumor initiation, while serial colony-forming unit, reconstitution and tumorsphere assays were performed to assess self-renewal and differentiation. Pulse-chase bromodeoxyuridine (5-bromo-2-deoxyuridine [BrdU]) labeling was used to examine cell cycle and label-retention of cancer stem cells. Cells were treated with paclitaxol and 5-fluorouracil to test selective resistance to chemotherapy, and gene expression profile after chemotherapy were examined.

Results

The percentage of CD44⁺/CD24^- cells within cell lines does not correlate with tumorigenicity, but as few as 100 cells can form tumors when sorted for CD44⁺/CD24^-/low/ESA⁺. Furthermore, CD44⁺/CD24^-/ESA⁺ cells can self-renew, reconstitute the parental cell line, retain BrdU label, and preferentially survive chemotherapy.

Conclusion

These data validate the use of cancer cell lines as models for the development and testing of novel therapeutics aimed at eradicating cancer stem cells.     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法：流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK（P-ERK）及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果：MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论：ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

环氧化酶-2抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2抑制剂nimesulide(NIM)对雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB．231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响。方法 应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率，透射电镜观察细胞形态与超微结构，AnnexinV法检测细胞的凋亡。结果 NIM以时间、剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231(COX-2阳性)、MCF-7(COX-2阴性)细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞的凋亡，MDA—MB-231细胞对NIM的作用更为敏感。NIM对COX-2表达阴性的MCF-7细胞同样具有抑制增生、诱导凋亡的作用。结论 NIM对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生、诱导凋亡的作用。NIM的抗肿瘤作用存在环氧化酶．2依赖性与非依赖性两种途径。     

细胞周期相关因子与乳腺细胞的癌变及生物学特性的相关性研究

目的：研究正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞之间以及不同恶性程度的乳腺癌细胞之间的细胞周期相关因子的表达异同。方法：采用Western印迹法检测正常乳腺细胞株AG11132A、ER阳性和乳腺癌细胞株MCF－7及ER阴性的乳腺癌细胞株MDA－MB－231之间细胞周期蛋白D1、E及P21蛋白表达的异同及与其生物学特性的关系。结果：（1）正常乳腺上皮细胞株高表达P21蛋白,低表达周期蛋白E。与正常细胞相比,乳腺癌细胞株MCF－7、MDA－MB－231细胞高表达周期蛋白E,其中表达的周期蛋白E中存在异常的你分子量周期蛋白E成分,而正常乳腺上皮细胞不表达这种异常 的周期蛋白E。（2）在乳腺癌细胞株之间,相对ER阳性的MCF－7细胞,ER阴性的MDA－MB－231细胞则高表达周期蛋白E,基本无表达P21蛋白。结论L（1）正常细胞与这间、相对低恶性程度的民相对高恶性和蔼的癌细胞之间的差别是多环节的、质和量异常导致的结果;（2）周期蛋白E及P21均可反映乳腺癌细胞的增殖活性和恶性程度,可能是乳腺癌的临床预后指标。     

乳腺癌干细胞通过上调Twist表达的上皮—间叶转化参与肿瘤转移

[目的]乳腺癌CD44^＋/CD24^-具有干细胞肿瘤浸润的特点。CD44^＋/CD24^-肿瘤干细胞是否可调节Twist而增加肿瘤转移的风险尚不明确。[方法]培养人类乳腺细胞系MCF7,并注射到裸鼠;同时收集92例乳腺癌患者的标本。用免疫组织化学双染色分析CD44和CD24阳性表达,RT-PCR检测转移标本的Twist表达。[结果]在MCF7细胞系存在CD44^＋/CD24^-细胞。在动物体内,转移组织的CD44^＋/CD24^-细胞更多,Twist高表达。在人类标本,20.7%（19/92）的标本存在CD44^＋/CD24^-细胞,与ER、PR及Her-2的表达无明显联系（r=0.452）。在人体转移癌组织,CD44^＋/CD24^-细胞与原发肿瘤无明显差异,但Twist高表达。[结论]MCF7细胞和人乳腺癌存在CD44^＋/CD24^-细胞。在动物模型中,乳腺癌干细胞可能通过上调Twist表达从而参与肿瘤转移。     

人乳腺癌细胞株WAF1/CIP1/p21基因的表达及其与细胞生物学特性的关系

目的研究人乳腺癌细胞株ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因的ＤＮＡ状况、ｍＲＮＡ和蛋白的表达水平及其意义。方法应用细胞培养、分子生物学Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交以及免疫组化染色等技术，检测人乳腺癌表达野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）的ＭＣＦ７细胞和表达突变型ｐ５３（ｍｔｐ５３）的ＭＤＡＭＢ２３１细胞中ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因ＤＮＡ状况、ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平，研究其与ｍｄｍ２、ｐ５３蛋白的表达和细胞生物学特性的关系。结果比较ＭＣＦ７细胞与ＭＤＡＭＢ２３１细胞：（１）两者ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因ＤＮＡ状况无明显差异，前者ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平明显高于后者（Ｐ＜０．０５）；（２）两者ｐ５３蛋白的性质和分布不同，前者ｍｄｍ２蛋白的表达水平明显高于后者（Ｐ＜０．０５）；（３）前者生物学特性好于后者。结论人乳腺癌细胞株ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平与ｐ５３基因表型和细胞生物学特性有关。     

HYAL1 overexpression is correlated with the malignant behavior of human breast cancer

Extracellular matrix (ECM) is closely correlated with tumor cell growth, proliferation, metastasis and angiogenesis, etc. Hyaluronic acid (HA) is a component of the ECM, and hyaluronidase (HAase) is a HA‐degrading endoglycosidase. Levels of HAase are elevated in many cancers. Hyaluronidase‐1 (HYAL1) is the major tumor‐derived HAase. In this study, we detected HYAL1 expression levels in breast cancer cells and tissues, and measured the amount HAase activity in breast cancer cells. Compared with nonmalignant breast cell line HBL‐100 and normal breast tissues, HYAL1 were overexpressed in breast cancer cell lines MDA‐MB‐231, MCF‐7, invasive duct cancer tissues and metastatic lymph nodes, respectively. Accordingly, the amount HAase activity in MDA‐MB‐231 and MCF‐7 was higher than that in HBL‐100. In addition, knockdown of HYAL1 expression in MDA‐MB‐231 and MCF‐7 cells resulted in decreased cell growth, adhesion, invasion and angiogenesis potential. Meantime, the HYAL1 knockdown markedly inhibited breast cancer cell xenograft tumor growth and microvessel density. Further studies showed that the HYAL1, HYAL2 and HA were elevated in breast cancer, and HYAL1 could downregulate HA expression. In conclusion, HYAL1 may be a potential prognostic marker and therapeutic target in breast cancer.